药对山银花和青风藤抗RA核心成分和靶点的筛选方法及应用

本发明涉及医药，尤其涉及药对山银花和青风藤抗ra核心成分和靶点的筛选方法及应用。

背景技术：

1、类风湿关节炎(ra)是一种常见的全身性自身免疫性炎症疾病，其临床特点主要表现为关节疼痛、肿胀，可严重损害患者身体功能和生活质量，属中医“痹病”范畴，毒热痹阻是ra的重要病机。

2、本病多因正气不足，腠理不密，卫外不固，外感风、寒、湿、热之邪，致使肌肉、筋骨、关节、经络痹阻，不通则痛。风湿痹阻证主要见于早期类风湿性关节炎，临床治疗以祛风散寒，温经通络为主。“山银花-青风藤”两药合用所成药对，可发挥清热除湿、祛风通络的作用，两药联合使用由来已久，《外科启玄》卷十二风藤散中治疗结毒，《外科大成》卷二药酒方中治疗鹤膝风，现代用法中金藤清痹颗粒、追风壮骨膏等中均有使用，为金藤清痹颗粒中的君药。其中青风藤具有祛风除湿、通经活络等功效，可用于风湿痹痛、关节肿胀，常用于治疗类风湿关节炎。山银花具有清热解毒、疏散风热之功效，基于数据挖掘分析与总结发现在治疗湿热痹阻证类风湿关节炎中使用频率较高。

3、因此本发明拟建立一种基于网络药理学和分子对接的方法分析山银花和青风藤抗类风湿关节炎药效物质基础和作用机制的方法，筛选出抗ra关键靶点。为临床治疗类风湿关节炎新药的研发和病因病机的研究奠定基础。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种药对山银花和青风藤抗ra核心成分和靶点的筛选方法。

2、本发明的另一目的在于提供一种筛选药对山银花和青风藤抗ra核心成分在用于制备治疗抗类风湿性关节炎药物制剂中的应用。

3、本发明另还有一目的在于提供药对山银花和青风藤抗ra核心成分和靶点的筛选方法筛选所得的核心成分，通过提取优势骨架和药效团，获得黄酮、异喹啉生物碱优势骨架，进一步基于民族医药配伍理论进行药效团配伍获得全新配伍衍生物库i和衍生物库ii。

4、本发明是通过采用以下技术方案实现的：

5、本发明所述的一种药对山银花和青风藤抗ra核心成分和靶点的筛选方法，包括如下步骤：

6、(1)使用中药系统药理学数据库与分析平台tcmsp以及在线数据库对山银花-青风藤进行活性成分的筛选与靶点预测；

7、(2)使用数据库进行疾病相关靶点的筛选：使用genecards、omim、drugbank、pharmgkb、ttd数据库检索关键词为“rheumatoid arthritis”，根据得分值进行筛选获得疾病基因，整合5个数据库的查询结果，去除重复项后得到ra相关靶点；

8、(3)利用韦恩图获取药物和类风湿性关节炎的共同靶点，对药物与疾病靶点基因预测：将药物、疾病靶点导入韦恩图venny 2.1在线制作平台，利用韦恩图获取药物和类风湿性关节炎的共同靶点；

9、(4)使用string数据库对交集靶点进行分析，构建蛋白质-蛋白质相互作用ppi网络图；

10、(5)将“山银花-青风藤”治疗ra的核心靶点导入david数据库，进行go和kegg信号通路分析；

11、(6)对ppi网络中的参数进行筛选得到关键靶点与其相对应的化合物进行分子对接，获得治疗抗ra的核心成分和关键靶点。

12、本发明所述步骤(1)使用中药系统药理学数据库与分析平台tcmsp以及在线数据库对山银花-青风藤进行活性成分的筛选与靶点预测，具体为：使用中药系统药理学数据库与分析平台tcmsp，以“山银花”“青风藤”为关键词检索其化学成分，设置口服生物利用度≥30％、类药性≥0.18，同时检索pubmed、维普数据库和中国知网等数据库，检索“山银花-青风藤”中对应药物化学成分研究的相关文献，对tcmsp数据库中的化学成分予以补充；通过tcmsp、swiss targetpredictio、pharmmapper、ctd数据库寻找与化合物相关的潜在靶点，最后使用uniprot数据库查询相应的基因名。

13、本发明所述步骤(4)使用string数据库对交集靶点进行分析，构建蛋白质-蛋白质相互作用ppi网络图，具体为：使用string数据库对交集靶点进行分析，物种设置为"homosapiens"，构建ppi网络模型，将模型预测网络结果导入cytoscape3.9.1软件，运用cytoscape 3.9.1软件进行拓扑分析，选择节点连接度≥50的靶点作为核心靶点。

14、本发明所述步骤(5)将“山银花-青风藤”治疗ra的核心靶点导入david数据库，进行go和kegg信号通路分析，具体为：将“山银花-青风藤”治疗ra的核心靶点导入david数据库，identifier选择"official＿gene＿symbol"，物种选择"homo sapiens"，列表类型设置为"gene list"，按照p＜0.05进行go和kegg信号通路分析，分别导出生物过程bp、分子功能mf、细胞成分cc与kegg通路富集分析结果，利用微生信网络平台作图，选择bp、cc、mf前10个结果和前30条kegg通路作图。

15、本发明所述步骤(6)对ppi网络中的参数进行筛选得到关键靶点与其相对应的化合物进行分子对接，获得治疗抗ra的核心成分和关键靶点，具体为：对ppi网络中的参数进行筛选得到关键靶点与其相对应的化合物进行分子对接。从pubchem数据库中获得化合物的sdf格式文件，蛋白质结构通过rcsb pdb数据库筛选获得，schrodinger软件对蛋白受体进行去水、加氢等操作，并进行分子对接计算结果，受体-配体的结合程度可以通过分子对接结果中的结合能水平来判断，如果结合能小于-5k j/mol，说明目标物与化合物有一定的结合活性，结合能越低，对接效果越好，用py mol对结果进行可视化，获得治疗抗ra的核心成分和关键靶点。

16、本发明所述获得治疗抗ra的核心成分为槲皮素、山奈酚、青风藤碱、双青藤碱。

17、本发明所述的筛选方法筛选所得的核心成分槲皮素、山奈酚、青风藤碱、双青藤碱在用于药效团配伍先导化合物的应用。

18、本发明所述优势骨架为黄酮和异喹啉生物碱，基于民族医药配伍理论进行药效团配伍获得全新配伍衍生物库i、衍生物库ii。

19、本发明所述的筛选方法筛选所得的核心成分槲皮素、山奈酚、青风藤碱、双青藤碱在用于制备治疗抗ra药物制剂中的应用。

20、本发明所述制剂为固体制剂和液体制剂，其中所述固体制剂为颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂，所述液体制剂为口服液，还可为注射剂。

21、本发明具有以下优点：

22、1.本发明方法筛选所得核心成分为槲皮素、山奈酚、青风藤碱、双青藤碱，具有抗类风湿性关节炎的作用。

23、2.本发明方法可筛选出抗ra的核心成分和关键靶点。通过分子对接，结果表明：槲皮素、山奈酚、青风藤碱、双青藤碱与mapk/erk、pi3k/akt关键靶点具有较好的结合活性，这四种成分协同作用可减轻炎性反应，从而发挥对类风湿性关节炎的治疗作用。

24、3.本发明方法在基于苗医药“以藤治通”以及“冷病热治、热病冷治”两大治则基础上，将传统苗医药理论中的配伍规律转化为分子层面的药效团配伍，从而获得全新配伍衍生物库。