一种串联提取纯化桑黄子实体酚类的方法及其在尿酸调节中的应用

本发明属于食用菌深加工，具体而言，涉及一种采用串联提取纯化方法从桑黄子实体中提取酚类活性物质的方法及其在尿酸调节中的应用。

背景技术：

1、桑黄是一类珍贵的药用真菌，因其子实体颜色鲜黄而称桑黄，其味微苦、性寒，药用历史悠久，被誉为“森林黄金”。在分类学上，桑黄隶属于担子菌门(basidiomycota)伞菌纲(agaricomycetes)锈革菌目(hymenochaetales)锈革菌科(hymenochaetaceae)桑黄属(sanghuangporus)。现代研究发现，桑黄中含有多糖、多酚类、黄酮、三萜等多种活性物质。近年来，随着桑黄药理作用研究的不断深入及其天然抗癌产品属性的深入人心，桑黄已经成为国内外医药制剂和保健品行业研究开发的热点。

2、桑黄中黄酮类活性物质提取技术方面已经公开了较多专利，主要包括：cn112138030a公开了一种利用乙醇提取、大孔吸附树脂纯化的桑黄黄酮提取方法及其在防治痛风方面的应用。cn115554322a公开了一种利用55％～85％的乙醇溶液提取桑黄菌丝体中黄酮的方法。cn 111096983a公开了一种采用超声波乙醇水溶液辅助提取、乙酸乙酯萃取桑黄子实体中黄酮的方法。cn102078339a公开了一种利用间歇蒸馏-树脂吸附耦合法富集纯化桑黄黄酮的方法。上述专利技术从不同角度公开了桑黄黄酮类化合物的制备方法，然而由于黄酮和多酚的化学结构及物理性质存在较大不同，因此多酚类物质的提取纯化方法与黄酮提取纯化方法必然存在较大差异。目前，有关桑黄中多酚类化合物制备的相关文献报道较少，主要包括：cn112656820a公开了利用氯化胆碱和苹果酸组成的深共熔溶剂提取桑黄深层发酵菌丝中桑黄多酚的方法。cn114832022b公开了利用有机溶剂分步萃取桑黄子实体多酚类物质的方法(本发明人申报的专利)。上述专利技术存在有机溶剂多、试剂成本高、多酚提取率低等诸多问题。

3、多酚类物质是桑黄中最主要的生物活性物质之一，也是桑黄精深加工产品开发的关键物质基础，桑黄多酚类物质的生物活性备受关注。专利cn112791108a公开了利用有机溶剂从桑黄菌株发酵液中萃取活性物质的方法；cn101474211a和cn111096983a分别公开了一种从桑黄子实体中制备乙醇提取物的方法及其具有降血糖活性。cn108379305a和cn112189505a分别公开了桑黄水提物和醇提物具有降尿酸效果；cn110693921b公开了桑黄子实体醇提物在制备痛风和高尿酸血症的预防和治疗的药物中的应用。虽然这些提取物都具有一些生物活性，但是降血糖、降尿酸活性究竟是哪种、哪些或者是哪一类主要成分在起作用，本领域技术人员无从得知，因此不利于药物的质量检测。此外，在降尿酸活性(痛风)研究中，所提到的都是醇提物，并没有考虑不同活性物质在不同溶剂中的溶解性问题。

4、综上所述，亟需开发一种高效、廉价制备桑黄多酚类活性物质的制备方法并明确其主要成分及其生物活性。

技术实现思路

1、针对目前桑黄子实体中多酚类活性物质的提取率低、有机溶剂使用多、试剂成本高、功能成分混杂等问题，本发明的第一个目的在于提供一种多酚含量高达80％以上的高纯度桑黄子实体酚类活性物质的制备方法。

2、为了实现上述技术目的，本发明人结合多年来的提取分离经验，并通过大量试验研究并不懈探索，最终获得了如下技术方案：一种串联提取纯化桑黄子实体多酚的方法，该方法包括如下步骤：

3、(1)取栽培年限1～3年的杨树桑黄子实体，烘干后粉碎，将得到的子实体粉末加入5～20倍量的体积百分数30％～80％丙酮溶液浸泡0.5～3h后，采用多频超声装置提取1～3次，所述多频超声装置的提取条件为：超声频率40khz和80khz交替使用，每次使用8～12min，超声功率为450～600w，提取温度为25～35℃；提取结束后离心，收集上清液，旋转蒸发浓缩后得到丙酮粗提物；

4、(2)将步骤(1)得到的丙酮粗提物用体积百分数70％-90％乙醇溶液溶解后，使用hpd-826大孔树脂填料进行静态吸附2～12h，吸附完成后分离出大孔树脂填料，剩下的乙醇溶液用lx-17大孔树脂填料再吸附2～12h，吸附完成后将两种大孔树脂分别装柱；

5、(3)先用0.5～2个柱体积的纯水分别对两个柱子进行冲洗，然后用体积百分数30％～90％乙醇溶液对hpd-826大孔树脂填料柱进行洗脱，洗脱体积为2～5个柱体积，收集洗脱液，然后用所述洗脱液对lx-17大孔树脂填料进行洗脱，收集洗脱液，旋转蒸发浓缩后得到桑黄多酚提取物纯品。

6、进一步优选地，如上所述串联提取纯化桑黄子实体多酚的方法，其步骤(1)中所述桑黄子实体烘干后粉碎过20-80目筛。

7、进一步优选地，如上所述串联提取纯化桑黄子实体多酚的方法，其步骤(1)中所述丙酮溶液的体积百分数为60％～80％。

8、进一步优选地，如上所述串联提取纯化桑黄子实体多酚的方法，其步骤(1)中超声功率为450～500w。

9、进一步优选地，如上所述串联提取纯化桑黄子实体多酚的方法，其步骤(1)中提取温度为28～32℃。

10、进一步优选地，如上所述串联提取纯化桑黄子实体多酚的方法，其步骤(3)中用体积百分数70％～90％乙醇溶液对hpd-826大孔树脂填料柱进行洗脱。

11、本发明的第二个目的在于提供上述制备方法得到的桑黄子实体多酚的主要成分。通过hplc和标准品定量分析技术，鉴定了上述桑黄多酚纯化物中的主要物质组成并通过标准品对照进行了确认。桑黄多酚提取物纯品主要物质是原儿茶酸、原儿茶醛、咖啡酸、对香豆酸、二氢槲皮素、hispidin等。

12、本发明的第三个目的在于提供上述制备方法得到的桑黄子实体多酚在制备调节肠道菌群结构或/和调节尿酸代谢的药品、食品或保健品中的应用。所述调节尿酸代谢为体外显著抑制黄嘌呤氧化酶活性；体内降低血清和肝脏中黄嘌呤氧化酶活性，降低血清中尿酸的浓度，增加尿液中尿酸含量。所述调节肠道菌群结构为选择性降低约氏乳杆菌(lactobacillus_johnsonii)、罗伊氏乳杆菌(lactobacillus_reuteri)等菌的丰度，增加muri菌(muribaculaceae)、普通拟杆菌(bacteroides_vulgatus)、毛螺菌属(lachnospiraceae_nk4a136)等菌群丰度。

13、与现有技术相比，本发明制备的桑黄子实体酚类活性物质中多酚含量高达80％以上，并且主要活性物质组成比较清晰，且具有如下的有益效果：

14、(1)体外黄嘌呤氧化酶抑制实验显示，本发明制备的桑黄子实体多酚具有显著的黄嘌呤氧化酶抑制活性，且其ic50值较低，为38.6μg/ml。

15、(2)小鼠模型试验显示，喂食本发明制备的桑黄子实体酚类活性物质降低了模型小鼠血清和肝脏中黄嘌呤氧化酶浓度以及血清中尿酸含量，增加了小鼠尿液中尿酸的排泄量。

16、(3)小鼠模型试验显示，喂食本发明制备的桑黄子实体酚类活性物质能显著降低约氏乳杆菌(lactobacillus_johnsonii)、罗伊氏乳杆菌(lactobacillus_reuteri)等菌的丰度，增加muri菌(muribaculaceae)、普通拟杆菌(bacteroides_vulgatus)、毛螺菌属(lachnospiraceae_nk4a136)等菌群丰度。

17、综上所述，本发明制备方法简便高效，制备了高纯度桑黄子实体多酚，该活性物质具有降低小鼠尿液中尿酸含量、增加肠道有益菌群等尿酸调节有益效果。