一种乌发生发组合物及包含其的洗发制剂和制备方法与流程

本发明属于干细胞。更具体地，涉及包含补骨脂定处理培养的间充质干细胞的分泌组，并由此获得的一种乌发生发组合物及包含其的洗发制剂和制备方法。

背景技术：

1、头发根部的黑素细胞减慢了生成色素的速度，当黑素细胞完全停止生成色素后，长出来的就是白头发。而人体黑素细胞中黑素的合成是受酪氨酸酶(tyr)、酪氨酸酶相关蛋白1(tyrp1)和酪氨酸酶相关蛋白2(tyrp2)这三种酶单独或协同作用的结果。酪氨酸酶是生成黑素主要的限速酶，其表达和活性决定着黑素合成的速度及产量。因此能激活酪氨酸酶活性的药物很大比例也能激活黑素的合成，通过激活或者抑制酪氨酸酶的活性可调控毛发黑色素的形成，达到乌发的目的。

2、间充质干细胞(msc)分泌产生的营养和免疫调节因子，被统称为msc分泌组，目前已有将间充质干细胞分泌组用于促进毛囊修复和/或毛发再生的用途，如cn 110540958 a、cn 115537393 a，但是并未涉及对酪氨酸酶活性的研究。

3、补骨脂定(psoralidin)属于香豆素类化合物，cas号18642-23-4，分子式为c20h16o5，结构式如下式所示。补骨脂定来源于补骨脂(psoralea corylifolia linn)的种子，已知，补骨脂定具有具有抗癌、抗氧化、抗菌、抗抑郁、抗炎、调节胰岛素信号等多种生物活性，此外，补骨脂定被认为是治疗绝经后骨质疏松症的潜在候选药物[1]；再者，补骨脂定对sars-covplpro表现出较强的抑制活性(ic50＝4.2μmol/l)，是一个很有前景的抗病毒候选药物[2]。但目前未见将补骨脂处理间充质干细胞获得的分泌组用于乌发生发的报道，有鉴于此，特提出本发明。

4、

5、参考文献1：cao h j，li c r，wang l y，et al.effect and mechani sm ofpsoralidin on promoting osteogenesis and inhibiting adipogenesis[j].phytomedicine，2019，61:152860.

6、参考文献2：kim d w，seo k h，curtis-long m j，et al.phenolicphytochemical displaying sars-cov papain-like protease inhibition from the seeds of psoralea corylifolia[j].j enzyme inhib med chem，2014，29(1):59.

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明提供了一种酪氨酸酶激活剂、一种乌发生发组合物及其制备方法和含有该组合物的洗发水。

2、一方面，本发明涉及一种酪氨酸酶激活剂，其特别之处在于，包含在添加有补骨脂定的培养基中培养间充质干细胞获得的分泌组。

3、在申请日之前，间充质干细胞分泌组用于促进毛囊修复和/或毛发再生的用途已有报道，如cn 110540958 a、cn 115537393 a，但是并未涉及对酪氨酸酶活性的研究。

4、本发明中所述补骨脂定具有如下式所示的化学结构：

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6、在作为酪氨酸酶活性剂的用途中，在获得间充质干细胞分泌组的过程中，所述培养基中，补骨脂定的浓度为1～10nmol/l，例如最好是1nmol/l或者10nmol/l。研究1结果显示，不同浓度的补骨脂定对脐带间充质干细胞的增殖活性表现出较大的差异，补骨脂定浓度在1～10nmol/l范围内，其对hucmscs表现出促进增殖的作用，峰值出现在10nmol/l时，此时细胞活性率高达120.37％，与对照组(不加药)相比，促进作用显著。而当补骨脂定浓度继续增加至1×103nmol/l以上时，其表现出抑制hucmscs的作用，且随着补骨脂定浓度的增加，抑制作用越明显。

7、试验结果显示，经1nmol/l和10nmol/l补骨脂定处理的hucmscs分泌组对酪氨酸酶的激活率最高，分别为259.82％和363.41％，比不加入补骨脂定处理的分泌组相比，对酪氨酸酶活性的激活率提高了2至3倍。

8、在发明其中一个较为优选的实施方式中，所述间充质干细胞在添加有补骨脂定的培养基中培养12～36h，最好是24h。

9、如前所述，酪氨酸酶是生成黑素主要的限速酶，其表达和活性决定着黑素合成的速度及产量，通过激活酪氨酸酶的活性可调控毛发黑色素的形成，达到乌发的目的。故，另一方面，本发明涉及所述激活剂在制备乌发生发组合物中的用途。

10、试验结果显示，对酪氨酸酶活性具有较高激活率的1nmol/l和10nmol/l补骨脂定处理的hucmscs分泌组对黑素细胞同样表现出较高的促增殖活性(121.75％和134.28％，空白组为100.00％)，预示了两组hucmscs分泌组具备理想的乌发效果。

11、本文中所述“乌发”是指使头发黑色素增多，白发减少，预防白发生成，并加速黑发形成。

12、另一方面，本发明涉及一种乌发生发组合物，该组合物包含在添加有补骨脂定的培养基中培养间充质干细胞获得的分泌组。

13、在申请之前，并未涉及将补骨脂定或其处理干细胞获得的分泌组用于乌发生发的报道。经试验证明(研究2和4)可看出，相比补骨脂定，添加补骨脂定处理细胞获得的hucmscs分泌组具备更强的促进黑素细胞增殖和头发生长的作用，这是本领域的技术人员所无法预期的。

14、在发明其中一个较为优选的实施方式中，所述培养基中，补骨脂定的浓度为1～10nmol/l，例如最好是1nmol/l或者10nmol/l。

15、在发明其中一个较为优选的实施方式中，所述间充质干细胞在添加有补骨脂定的培养基中养12～36h，最好是24h。

16、在发明其中一个较为优选的实施方式中，所述间充质干细胞为脐带间充质干细胞或脂肪间充质干细胞，优选为脐带间充质干细胞。

17、在发明其中一个较为优选的实施方式中，所述分泌组由以下具体步骤制备而成：

18、获得符合要求的间充质干细胞；采用添加有1～10nmol/l的补骨脂定的培养基培养上述间充质干细胞12～36h；收集培养液，离心，过滤，得到分泌组。

19、在另一方面，本发明所述乌发生发组合物可以以洗发水、头皮护理液、护发精华素、发膜、乌发生发药物的形式剂型化。

20、优选地，所述乌发生发组合物可以被制成洗发水的形式，当其被制成洗发水时理论上可包含所述的组合物及本领域可接受的添加剂或者其他具有乌发生发作用的活性成分。所述添加剂可以例举如保湿剂、表面活性剂、增稠剂、螯合剂、防腐剂、香精等。

21、所述的保湿剂可以列举如甘油、丁二醇、角鲨烷、透明质酸钠、海藻糖等；所述的表面活性剂列举如月桂醇聚醚硫酸酯钠、椰油酰胺丙基甜菜碱、椰油酰胺丙基羟磺基甜菜碱、甲基椰油酰基牛磺酸钠；所述的增稠剂可以列举如羟乙基纤维素、卡波姆、丙烯酸(酯)类/c10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物、黄原胶、丙烯酸钠/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物；所述的螯合剂可以例举如edta-2na、谷氨酸二乙酸四钠、乙二胺二琥珀酸三钠；所述的防腐剂可以例举如苯氧乙醇、甲基异噻唑啉酮、羟苯甲酯、羟苯乙酯、乙基己基甘油、苯甲酸钠。

22、最重要的，所述组合物在洗发水中可以以0.1～99.0％或1～55％或1～32％或1～25％或1～15％或1～10％的重量比存在。

23、本发明有益效果：

24、本发明涉及一种经psoralidin处理间充质干细胞获得的分泌组，该分泌组表现出明显的乌发生发的特性：较高的酪氨酸酶活性激活率；较高的黑素细胞促增殖能力；较强的促进毛发生长的作用，可以作为理想的乌发生发活性成分。