一种透皮递送一氧化氮的多剂型载体及其制备方法和应用

本发明属于气体脱发治疗，具体涉及一种透皮递送一氧化氮的多剂型载体及其制备方法和应用。

背景技术：

1、气体疗法是一种主要利用气体分子治疗疾病的新型治疗方式，作为一种“绿色”治疗策略在生理和病理过程中起着至关重要的作用，在众多气体分子中，一氧化氮作为一种内源性舒张因子参与血管扩张、免疫应答、神经传递、增殖与凋亡、基因转录调控等生理过程。例如yi(nature communications,10(1),966)等人设计了一种由超支化聚酰胺/l-精氨酸(hla)制成的纳米马达，利用l-精氨酸作为产生no的燃料，既作为驱动力，又提供有益效果，包括促进内皮化和胸腺淋巴细胞的生长。xing(bioactive materials,32,190-205)等人研究发现no可以促进血管扩张，加速血液流动，从而使药物产生高渗透长滞留效应(epr)有效治疗雄激素脱发。然而，no作为一种高活性气体分子，存在稳定性差，负载量低，易泄露等问题，角质层作为主要的皮肤屏障，无法有效地使no气体进入皮肤内部，进一步发挥治疗作用。

2、透明质酸(ha)是一种独特的天然线性多糖，因其结构主链含有大量的羟基而产生强亲水性，提高了皮肤的水合作用，使得皮肤组织膨胀并形成分子运输的通道。其次，ha分子水平上是两亲性多糖，疏水性区域能够参与磷脂的复合，利用磷脂与角质层的脂质相互作用并破坏皮肤的屏障，能提高药物渗透进入皮肤的效率。例如zhang等人设计了一种透明质酸修饰的十一烯酰基苯丙氨酸脂质体(ha-up-lps)，研究发现与传统的阳离子脂质体相比，ha修饰的阳离子脂质体在透皮给药和靶向药物递送方面具有更大的潜力和应用前景。脂质体因其高生物相容性、低毒性、高包裹性、易降解等一系列特性成为受到广泛重视和研究的纳米药物递送系统，例如t yoshikawa等人研究发现脂质体作为no纳米载体能够维持no供体长期稳定，no释放率恒定，可在肿瘤组织中快速持续积累，作为epr增强剂前景广阔。聚乙烯醇(pva)因其良好的生物相容性和可降解性被广泛用作生物材料，将药物加载到聚乙烯醇基质中，从而实现药物的持续释放和皮肤渗透，并通过合适的释放机制，可实现运载药物以不同的剂型储存，能够在长时间内维持局部的高药物浓度，在药物输送领域前景广阔。最近ni等人报道了一种用于治疗黑色素瘤的多级透皮给药系统，将多级靶向脂质体加入到水凝胶基质中，构建了用于黑色素瘤治疗的透皮给药系统，具备良好的穿透性、靶向性以及渗透性。受到ni等人的透皮给药系统的启发以及结合脂质体、透明质酸、聚乙烯醇材料的优势，针对no负载低、释放不稳定、易泄露等问题，构建一种气体递送载体理论可行。

技术实现思路

1、为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的目的在于提供一种no或no供体或可释放no的脂质体在制备治疗雄激素源性脱发的产品中的应用。可释放no的脂质体是具有透皮递送no作用的可释放no的脂质体。

2、本发明还提供一种透皮递送一氧化氮的多剂型载体及其制备方法和应用。

3、本发明的目的通过下述技术方案实现：

4、本发明的技术方案之一：no或no供体或可释放no的脂质体在制备治疗雄激素源性脱发的产品中的应用。

5、优选的，所述的no供体为离子型no供体材料或sno修饰的胆固醇；其中，离子型no供体材料在文献“cn 115400084a、一种可释放no的脂质体及其制备方法和应用”中公开，sno修饰的胆固醇在文献“cn 116966132a、一种治疗脱发的一氧化氮脂质体水凝胶给药系统及其制备方法与应用”中公开。

6、优选的，所述可释放no的脂质体为具有透皮递送no作用的可释放no的脂质体；具体的，所述可释放no的脂质体包括但不限于磷脂，和上述no供体。

7、进一步优选的，所述可释放no的脂质体还可包括透明质酸；即可释放no的透明质酸脂质体。

8、本发明的技术方案之二：一种离子型no供体材料的制备方法，包括以下步骤：

9、(1)将阳离子聚合物溶于有机溶剂a中，加入胆固醇氯甲酸酯及催化剂三乙胺，在0～4℃下反应，之后加热至5～35℃，继续反应，反应完成后浓缩，并向所得浓缩物中加入盐酸复溶，洗涤并沉降、干燥，得到阳离子聚合物修饰的胆固醇，所述阳离子聚合物与胆固醇氯甲酸酯的摩尔比为1：(1～4)；

10、(2)将步骤(1)所得阳离子聚合物修饰的胆固醇溶于有机溶剂b中，之后加入甲醇钠来提供碱性环境从而继续溶解，溶解完成后通入惰性气体，然后再通入no气体反应，得到所述离子型no供体材料。

11、甲醇钠一方面提供碱性环境，另一方面甲醇钠中的钠离子可与负电性的no基团实现电荷平衡。

12、优选的，步骤(1)中，所述阳离子聚合物包括三乙烯二胺、五乙烯六胺、分子量为600～25000的超支化聚乙烯亚胺、树枝状聚酰胺-胺(pamam)和分子量为1000～50000的壳聚糖中的至少一种；所述有机溶剂a包括二氯甲烷；所述胆固醇氯甲酸酯与所述有机溶剂a的质量体积比为(1～4)g：10ml；所述三乙胺与胆固醇氯甲酸酯的摩尔比为1：(0.1～0.5)；所述盐酸的浓度为0.1～0.4m；所述浓缩物与盐酸的质量体积比为(2～4)g：(10～20)ml；所述0～4℃下反应的时间为10～30min，所述继续反应的时间为10～14h；步骤(2)中，所述阳离子聚合物修饰的胆固醇与甲醇钠的质量比为1：(0.1～0.5)；所述有机溶剂b包括甲醇和四氢呋喃按照体积比为1：(0.1～0.5)组成的混合溶液；所述阳离子聚合物修饰的胆固醇与甲醇的质量体积比为(0.5～1)g：10ml；所述通入no气体反应的温度为5～35℃、时间为3～7天。

13、本发明的技术方案之三：一种可释放no的透明质酸脂质体的制备方法，包括以下步骤：将磷脂与离子型no供体材料室温下溶于有机溶剂c中得到溶液d，将透明质酸钠溶于纯水中得到溶液e，之后将溶液e缓慢加入溶液d中，使用高剪切分散乳化机将两者混合均匀，用旋转蒸发仪蒸发除去混合溶剂，得到固体f，最后在固体f中再加入磷酸盐缓冲溶液进行超声水合，最后通过微射流高压工艺得到所述可释放no的透明质酸脂质体悬浮液。

14、优选的，所述磷脂包括大豆卵磷脂，所述磷脂与离子型no供体材料的质量比为(20～30)：1；所述有机溶剂c包括乙醇与氯仿按照体积比为1：(0.5～1)组成的混合溶液；所述大豆卵磷脂与有机溶剂c的质量体积比为10～15mg/ml；所述透明质酸与离子型no供体材料的质量比为1：(2～5)；所述透明质酸钠分子量为0.3～150万(更优选为100～150万)；所述透明质酸钠与水的质量体积比为(0.01～0.05)g：20ml；所述缓慢加入的时间为5ml/min；所述高剪切分散乳化机功率为200～300w，转速为10000rpm，每次时间为25min；所述旋转蒸发的转速为80～120rpm，温度为40～60℃，蒸发瓶的真空度为70～100kpa；所述磷酸盐缓冲溶液的ph为6.5～7.5；所述固体f与磷酸盐缓冲溶液的质量体积比为(0.2～0.3)g：20ml；所述超声时间为20～30min；所述微射流高压的条件为在500～800bar压力下挤压3～5次。

15、本发明的技术方案之四：一种可实现多剂型载体的聚乙烯醇混合溶液的制备方法，包括以下步骤：所述聚乙烯醇混合溶液包括聚乙烯醇、甘油、吐温80 和水；具体，将一定量的聚乙烯醇溶于纯水中，水浴加热至一定温度进行搅拌使其完全溶解得到溶液g，之后加入适量甘油和吐温80，继续加热搅拌使三者完全溶解并在室温条件下冷却后得到聚乙烯醇混合溶液。

16、优选的，所述聚乙烯醇的分子量为30000～50000；

17、优选的，所述水浴加热的温度为80～95℃；所述搅拌速度为500～700rpm；所述纯水与所述甘油的体积比为18～20：1；所述纯水与所述吐温80的体积比为18～20：1；所述甘油与所述吐温80的体积比为1：1。所述加热搅拌下继续反应的时间为10～15min。

18、其中，负载一氧化氮的多剂型载体(即透皮递送一氧化氮的多剂型载体)的剂型包括乳液、凝胶或薄膜。

19、本发明的技术方案之五：一种负载一氧化氮的乳液的制备方法，包括以下步骤：将技术方案之三所得的可释放no的透明质酸脂质体悬浮液加入技术方案之四制备的聚乙烯醇混合溶液中，常温搅拌一段时间后即得到所述负载no的乳液。

20、优选的，所述可释放no的透明质酸脂质体悬浮液与聚乙烯醇混合溶液的体积比为(0.5～1)：10；聚乙烯醇混合溶液中所述聚乙烯醇与所述纯水的质量体积比为(0.1～1)g：10ml(更优选为0.5g：10ml)；所述搅拌的速度为500～700rpm；所述搅拌时间为10～15min；所述搅拌温度为25～30℃。

21、本发明的技术方案之六：一种负载一氧化氮的凝胶的制备方法，包括以下步骤：将技术方案之三所得的可释放no的透明质酸脂质体悬浮液加入技术方案之四制备的聚乙烯醇混合溶液中，常温搅拌一段时间后即得到所述负载no的乳液。

22、优选的，所述可释放no的透明质酸脂质体悬浮液与聚乙烯醇混合溶液的体积比为(0.5～1)：10；聚乙烯醇混合溶液中所述聚乙烯醇与所述纯水的质量体积比为(2～4)g：10ml(更优选为3g：10ml)；所述搅拌的速度为500～700rpm；所述搅拌时间为10～15min；所述搅拌温度为25～30℃。

23、本发明的技术方案之七：一种负载一氧化氮的固体剂型(薄膜)的制备方法，包括如下步骤：将技术方案之三所得的可释放no的透明质酸脂质体悬浮液加入技术方案之四制备的聚乙烯醇混合溶液中，在一定温度下溶液挥发，即可得到负载一氧化氮的固体剂型(薄膜)。

24、优选的，所述可释放no的透明质酸脂质体悬浮液与聚乙烯醇混合溶液的体积比为(0.5～1)：10；聚乙烯醇混合溶液中所述聚乙烯醇与所述纯水的质量体积比为(1～2)g：10ml(更优选为2g：10ml)；所述搅拌的速度为500～700rpm；所述搅拌时间为10～15min；所述溶液挥发温度为30～40℃(更优选为37℃)。

25、本发明的技术方案之八：上述所述可释放no的透明质酸脂质体或透皮递送一氧化氮的多剂型载体在制备提升人真皮毛乳头细胞活力的产品中的应用。

26、本发明的技术方案之九：上述所述可释放no的透明质酸脂质体或透皮递送一氧化氮的多剂型载体在制备促进血管生成方面的产品中的应用。

27、本发明的技术方案之十：上述所述可释放no的透明质酸脂质体或透皮递送一氧化氮的多剂型载体在制备提升no气体透皮的产品中的应用。

28、本发明的技术方案之十一：上述所述可释放no的透明质酸脂质体或透皮递送一氧化氮的多剂型载体在制备治疗雄激素源性脱发的产品中的应用。

29、本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

30、(1)相较于传统的药物治疗雄激素脱发而言，本发明开创性的利用一氧化氮气体分子进行治疗，这种绿色治疗策略可以更好地抗炎、激活真皮毛乳头细胞活性、优化毛乳头细胞新生环境、促进血管生成；

31、(2)相较于传统的药物载体而言，本发明巧妙的开发了一种多剂型气体递送系统，充分提升气体分子的稳定性和透过性，减少给药过程中no供体的泄露，提高no的利用率；

32、(3)本发明的载体可实现一氧化氮活性分子的有效负载及高效透皮，促进一氧化氮在皮肤中的渗透与缓释，防止一氧化氮泄露，满足透皮治疗需求，进一步提升生物利用率。同时一氧化氮作为内源性信号分子，低浓度的no可有效促进真皮毛乳头细胞与血管内皮细胞的增殖与迁移、提升细胞活力、抑制雄性激素对毛囊的损伤、调节细胞通路，从而实现一氧化氮气体高效治疗雄激素源性脱发。

33、(4)相较于传统的药物治疗制剂而言，本发明的递送系统采用脂质体、透明质酸、聚乙烯醇等材料易于涂抹和擦拭，且可以乳液、凝胶、薄膜等多剂型形式存在，成分安全简单，易于清理。避免了市面上现有以乙醇、丙二醇(米诺地尔酊)等为溶剂引起的皮肤过敏、药物易析出结晶、皮肤干燥皱缩等问题，具有更好的安全性。