榜嘎总生物碱提取物在制备预防和/或治疗心律失常的药物中的应用

本发明涉及生物医药领域，特别是涉及榜嘎总生物碱提取物制备预防和/或治疗心律失常的药物中的应用。

背景技术：

1、榜嘎为藏医常用药材，藏药名榜阿嘎保，来源为毛茛科(ranunculaceae)乌头属植物甘青乌头(aconitumtanguticum(maxim.)stapf)或船盔乌头(aconitumnaviculare(bruhl.)stapf)的干燥全草，夏末秋初花开时采挖，除去杂质，阴干。其块根细小，纺锤形，长2-4cm；表面棕褐色，断面白色。茎圆柱形，长7-50cm，直径1.5-3mm；表面灰绿色至暗绿色，略带光泽，疏被茸毛；质脆，易折断，断面中空；叶柄长3-20cm，叶片多破碎，完整者呈肾形，长1.2-3.5cm，宽1.2-3.8cm，掌状深裂，裂片再浅裂开；总状花序顶生，花蓝绿色至蓝紫色，花梗短，花萼5片，上萼片船形，花瓣2片，雄蕊多数。榜嘎始载于《月王药诊》，性凉、味苦，有小毒，具清热解毒功效，用于治疗传染病发热、肝胆热病，流行性感冒和食物中毒等。

2、榜嘎临床应用广泛，但是药理研究较少，而且已有的药效研究都集中在榜嘎总生物碱。据文献报道，榜嘎总生物碱具有抗炎镇痛、抗菌、抗病毒、抗肿瘤及降血压活性。有关榜嘎单体成分的活性报道很少，构-效关系研究更是匮乏。发明人前期发现从榜嘎中分离鉴定的一个新的双二萜生物碱tanguticurinea对hcv和ev71均有良好的抑制作用，ec50分别为15.5和9.7μμ。发明人前期采用细胞实验考察了从榜嘎中分离鉴定的22个二萜生物碱(包括12个双二萜型、4个c19内酯型、3个c20海替定型、3个c20海替生型二萜生物碱)的抗炎活性，结果发现：①从结构类型上看：抗炎活性由强到弱依次为双二萜型生物碱＞c20海替生型＞c20海替定型＞c19内酯型；②对双二萜型生物碱而言，羟基数目越多，抗炎活性越强；羟基数目相同但位置不同，活性不同；n上连氧或者去掉5-oh活性减弱。

3、榜嘎虽然属于乌头属植物，但它和常用的乌头属药物川乌和附子有很大不同。榜嘎使用全草入药，而川乌、附子和草乌等使用根入药。历代本草记载榜嘎为小毒，而川乌、草乌为大毒。据走访调查，现藏医也普遍认为“榜嘎”无毒或毒性极低。发明人前期发现，单次灌胃给药小鼠榜嘎70％乙醇提取物的ld50为107.47g生药/kg，属于实际无毒级。文献报道，榜嘎总生物碱灌胃给药小鼠的ld50为0.745g/kg，腹腔注射小鼠的ld50为0.336g/kg。

4、心律失常(cardiacarrhythmia)是指心脏起搏和传导功能紊乱而发生的心脏节律、频率或激动顺序异常，主要表现为心动过速、心动过缓、心律不齐和心脏停搏，心室停搏或颤动是心脏骤停的主要表现形式，是心脏性猝死的重要原因。室性心律失常既包括正常人群出现的室性期前收缩和非持续性室性心动过速，也包括伴或不伴器质性心脏病患者发生室性心动过速导致的心脏性猝死。社区动脉粥样硬化风险(atherosclerosis risk incommunities，aric)研究中观察了15792例中年人(45-65岁)，结果发现，2分钟心电图筛查发现6％有室性期前收缩，3％有频发室性期前收缩，0.8％有多形性室性期前收缩。男性室性期前收缩较女性更多见，更常见于器质性心脏病者。室性心律失常在老年心律失常发病中为2/3，70岁以上老年人群约3/4中可见单个室性期前收缩。动态监护发现无症状老年受试者中室性心律失常发生率高达60％-90％；90岁以上受试者中，运动试验诱发室性心律失常发生率高达60％。

5、美国密歇根州tecumseh进行的一项以社区为对象的心血管流行病学研究显示，在心脏结构正常且年龄＜30岁的人群中，室性期前收缩对预后无不良影响，但在心脏结构正常且年龄＞30岁的人群中，室性期前收缩和短阵性非持续性室性心动过速则增加死亡风险。

6、美国心脏性猝死的总发生率为每年每千人中1-2例(0.1％-0.2％)，心脏性猝死的发生率随年龄增长而增加。

7、目前通过采用药物控制心律失常，但抗心律失常药物的存在如下问题：

8、1、钠通道阻滞剂(ⅰ类抗心律失常药物)：

9、ⅰa类(如奎尼丁、普鲁卡因胺)延长动作电位时程，减慢传导速度；ⅰb类(如利多卡因、美西律)对传导速度的影响较小，主要用于室性心律失常；ⅰc类(如普罗帕酮)明显减慢传导速度，用于治疗室上性和室性心律失常。

10、2、β受体阻滞剂(ⅱ类抗心律失常药物)：

11、通过阻断心脏的β受体，减少交感神经对心脏的影响，降低心率，减少室性早搏和室性心动过速的发生。

12、3、钾通道阻滞剂(ⅲ类抗心律失常药物)：

13、如胺碘酮和索他洛尔，通过延长心肌细胞动作电位时程和有效不应期，用于治疗室上性和室性心律失常。

14、4、钙通道阻滞剂(ⅳ类抗心律失常药物)：

15、通过阻断心脏的钙通道，减慢心率和传导速度，用于治疗某些室上性心律失常。

16、奎尼丁属于ia类抗心律失常药物。用于抑制异常自律性的心律失常及控制由折返引起的房性和室性早搏、心房扑动、心房颤动以及室性心动过速等。但奎尼丁的耐受性不佳，高达50％的患者会出现症状性副作用，20-30％的患者出现毒性作用。最常见的副作用是胃肠道问题，通常表现为药物无效的腹泻，而电解质失衡可能会加剧心律失常的发作，此时应终止奎尼丁的治疗。其他与剂量相关且可逆的副作用包括耳鸣、头痛、头晕、视觉障碍、恶心和听力下降。奎尼丁最显著的不良反应是室性促心律失常作用，通常是由于动作电位持续时间延长、传导速度和耐受性改变所致，患者会出现反复发作的扭转型室性心动过速(torsade de pointes，tdp)，伴有反复晕厥，甚至心源性猝死。超过一半人群属于普鲁卡因胺快速乙酰化显型，能迅速将普鲁卡因胺转化为n-乙酰普鲁卡因胺，后者有ⅲ类抗快速心律失常药物的作用。但普鲁卡因胺长期服用可能引起红斑狼疮样综合征，故已少应用。利多卡因口服吸收良好，但生物利用度差，首过效应强。其清除易受肝血流量的影响，代谢产物经肾排泄。利多卡因主要用于快速抑制有症状的室性心律失常。当利多卡因血浆浓度超过治疗浓度时，也会发生颤抖、神志改变和发声困难。普罗帕酮能延长pr间期和qrs间期，用于室上性心动过速患者维持窦性，如房颤等。它也可用于治疗室性心律失常，不过效果中等。其代谢途径个体差异大，在缺乏肝药酶cyp2d6的低代谢患者中，普罗帕酮清除减少，产生活性代谢产物5-羟普罗帕酮减少。普罗帕酮的不良反应包括加快房扑患者的心室反应性，加快室性心动过速发作的严重程度和频率，加重心力衰竭等。胺碘酮阻断钾通道、钠通道和钙通道，同时兼有α和β受体阻断作用。该药为脂溶性，经肝药酶cyp3a4代谢后转化为去乙基胺碘酮，后者的抗快速心律失常作用与胺碘酮相当或更强。胺碘酮的代谢十分缓慢，因此停药后，其不良反应的缓解也很缓慢。临床应用胺碘酮需警惕其不良反应，如窦性心动过缓、传导阻滞，尖端扭转型室速、肝功能损害等，长期应用还需警惕肺纤维化、甲状腺功能异常、角膜色素沉着等，因此用药期间需密切随访。静脉用胺碘酮后有血管扩张及抑制心肌收缩作用，可能出现低血压。索他洛尔有潜在的致心律失常和加重心力衰竭的作用，在心功能不全患者中应从小剂量开始应用，且密切随访qt间期。同时，还需警惕有无心动过缓、支气管痉挛和心力衰竭加重等情况。

17、以上现状说明临床急需开发新的有效安全的抗心律失常药物。

18、目前，抗心律失常药物研发采用的动物模型包括乌头碱诱发大鼠心律失常模型、强心苷类诱发大鼠心律失常模型(离体心脏哇巴因中毒模型和在体心脏哇巴因中毒模型)、cacl2-ach诱发大鼠心律失常模型、bacl2诱发大鼠心律失常模型、氯仿诱发大鼠心律失常模型以及儿茶酚胺类诱发小鼠心律失常模型。目前国内外成熟的离体组织器官水平的心律失常模型很少，在langendorff离体心脏灌流的基础上，通过恒定电流/恒定电压刺激发生器或化学物质给予整体心脏刺激，模拟临床因不同原因引起的心律失常，模型稳定、快速、可实现自身对照，经灌流冲洗后，可继续用于不同剂量或不同药物的再次评估，实现高通量。

19、心脏毒性是乌头类中药中毒最显著、最严重的临床特征，其中心律失常、急性心力衰竭是乌头属药物致心脏毒性的主要表现。历代藏医典籍记载榜嘎能解乌头毒。

20、文献报道和前期研究都表明，榜嘎中主要含有二萜生物碱类成分，在目前已经分离报道的76个二萜生物碱中有42个为c20型二萜生物碱，而42个中的22个为c20海替生型二萜生物碱。如果能从榜嘎中找到高效低毒的抗心律失常成分，将有利于发挥榜嘎最大的药用价值，促进藏区经济发展，为心律失常药物的开发带来新的希望，为人类健康做出重要的贡献。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供榜嘎总生物碱提取物制备预防和/或治疗心律失常的药物中的应用，以解决上述现有技术存在的问题。本发明首次发现了榜嘎总生物碱提取物能够预防和治疗心律失常，榜嘎总生物碱提取物抗心律失常活性较高，毒性较低，具有较大的安全窗，显示高效、低毒，有望开发成新的有效安全的抗心律失常药物。

2、为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

3、本发明提供了榜嘎总生物碱提取物在制备预防和/或治疗心律失常的药物中的应用。

4、优选的，所述榜嘎总生物碱提取物的制备方法包括以下步骤：

5、将粉碎的榜嘎药材全草粗粉与乙醇溶液混合，进行回流提取，得到提取液；

6、将所述提取液回收溶剂至无醇味，然后调整其ph为酸性后与二氯甲烷混合，进行第一萃取，得到二氯甲烷层和萃取水层；

7、所述萃取水层调整ph为碱性后，加入二氯甲烷溶剂进行第二萃取，得到榜嘎总生物碱提取物。

8、优选的，所述回流提取的次数为3次，温度为60℃；每次进行回流提取时，所述榜嘎药材全草粗粉和所述乙醇溶液的质量体积比为1kg:7-8l；所述乙醇溶液中乙醇的体积百分含量为70％。

9、优选的，所述第一萃取的次数为3次；每次进行第一萃取时，所述提取液和所述二氯甲烷的体积比为1:1；

10、所述第二萃取的次数为3次；每次进行第二萃取时，所述调整ph后的萃取水层和所述二氯甲烷溶剂的体积比为1:1。

11、本发明提供了榜嘎总生物碱提取物在制备预防和/或治疗室性早搏的药物中的应用。

12、优选的，所述榜嘎总生物碱提取物的制备方法包括以下步骤：

13、将粉碎的榜嘎药材全草粗粉与乙醇溶液混合，进行回流提取，得到提取液；

14、将所述提取液回收溶剂至无醇味，然后调整其ph为酸性后与二氯甲烷混合，进行第一萃取，得到二氯甲烷层和萃取水层；

15、所述萃取水层调整ph为碱性后，加入二氯甲烷溶剂进行第二萃取，得到榜嘎总生物碱提取物。

16、优选的，所述回流提取的次数为3次，温度为60℃；每次进行回流提取时，所述榜嘎药材全草粗粉和所述乙醇溶液的质量体积比为1kg:7-8l；所述乙醇溶液中乙醇的体积百分含量为70％；

17、所述第一萃取的次数为3次；每次进行第一萃取时，所述提取液和所述二氯甲烷的体积比为1:1；

18、所述第二萃取的次数为3次；每次进行第二萃取时，所述调整ph后的萃取水层和所述二氯甲烷溶剂的体积比为1:1。

19、本发明提供了榜嘎总生物碱提取物在制备预防和/或治疗室性心动过速的药物中的应用。

20、优选的，所述榜嘎总生物碱提取物的制备方法包括以下步骤：

21、将粉碎的榜嘎药材全草粗粉与乙醇溶液混合，进行回流提取，得到提取液；

22、将所述提取液回收溶剂至无醇味，然后调整其ph为酸性后与二氯甲烷混合，进行第一萃取，得到二氯甲烷层和萃取水层；

23、所述萃取水层调整ph为碱性后，加入二氯甲烷溶剂进行第二萃取，得到榜嘎总生物碱提取物。

24、优选的，所述回流提取的次数为3次，温度为60℃；每次进行回流提取时，所述榜嘎药材全草粗粉和所述乙醇溶液的质量体积比为1kg:7-8l；所述乙醇溶液中乙醇的体积百分含量为70％；

25、所述第一萃取的次数为3次；每次进行第一萃取时，所述提取液和所述二氯甲烷的体积比为1:1；

26、所述第二萃取的次数为3次；每次进行第二萃取时，所述调整ph后的萃取水层和所述二氯甲烷溶剂的体积比为1:1。

27、本发明公开了以下技术效果：

28、本发明首次发现了榜嘎总生物碱提取物能够预防和治疗心律失常，榜嘎总生物碱提取物可以延长小鼠室性早搏(vpb)潜伏期和降低室性心动过速(vt)发生率，进一步达到抗心律失常的效果，其对乌头碱诱导的小鼠心律失常有明显缓解作用。本发明提供的榜嘎总生物碱提取物可以应用于制备预防和/或治疗室性早搏、室性心动过速、心律失常药物，具有广阔的应用前景。