本发明涉及医疗美容,具体涉及一种成体干细胞来源的细胞内纳米囊泡在皮肤和/或皮肤附属器的抗衰老、修复和再生中的应用,特别是间充质干细胞源的细胞内纳米囊泡在皮肤的抗衰老、毛囊再生中的应用。
背景技术:
1、皮肤衰老是一个由基因和外界环境等因素共同作用下的结果。皮肤老化根据影响因素的不同分为内源性老化和外源性老化。内源性老化是指基因层面的随着时间推移产生的自然老化。外源性老化是指环境因素如紫外线辐射、吸烟、毒害化学品等影响下产生的皮肤损害积累。皮肤光老化是最主要的外源性老化,表现为皮肤粗糙、增厚、松弛、皱纹增加,局部有过度的色素沉着或毛细血管扩张,甚至可能出现各种良性或恶性肿瘤(如日光角化病、鳞状细胞癌、恶性黑素瘤等)。
2、皮肤的衰老在很大程度上影响了人们对“美”的追求,现代研究表明,皮肤衰老不仅仅对各层皮肤的结构和功能产生影响,也会促使身体其他器官的衰老。因此,研究抗皮肤衰老的重要性不言而喻。抗皮肤衰老的研究不仅有助于恢复衰老肌肤的青春活力,改善衰老个体的心理状态和生活品质,还可以延缓整体机体衰老进程,减少潜在的健康风险。
3、脱发也是一种临床皮肤科常见病及多发病,包括老年性脱发、斑秃、化疗性脱发以及脂溢性脱发等,其中大多数患者属于斑秃或脂溢性脱发。目前临床常用的脱发治疗药物包括维a酸、阿托品、糖皮质激素等,但患者若长期使用西药进行治疗毒副作用较大。
4、外泌体是一种由细胞分泌的直径为40-150nm的具有双层磷脂膜结构的小细胞外囊泡。然而,与其他治疗方法相比,外泌体的生产和提取成本较高,且存在一定的技术难题,限制了其大规模应用的可行性。实际上,在细胞内还存在大量纳米囊泡,游离在各种富有膜的细胞器之间,介导细胞内物质运输及细胞的分泌途径。其中构成型分泌囊泡是细胞内囊泡(intracellular vesicle,ivs)的主要类型,由内质网产生,与高尔基体、溶酶体和细胞膜等进行物质交换,介导了细胞内各种分泌蛋白的产生、运输及分泌。其内容物丰富,含有大量的分泌型蛋白、脂质和核酸分子。除此之外,我们前期结果中发现相较于evs,这些细胞内纳米囊泡较外泌体粒径更小,产量更高,含有的蛋白、脂质和核酸更丰富。因此,使用细胞内纳米囊泡进行抗衰老、毛囊再生研究,并寻找新型抗衰老、毛囊再生药物具有很大的应用前景。
技术实现思路
1、为克服现有技术的不足,本发明提供一种成体干细胞(特别是间充质干细胞)源的细胞内纳米囊泡在皮肤和/或皮肤附属器的抗衰老、修复和再生中的应用。
2、在本发明第一方面,提供一种成体干细胞(特别是间充质干细胞)源的细胞内纳米囊泡在制备抗衰老、光老化皮肤修复产品中的应用。
3、具体地,所述囊泡为细胞内纳米囊泡(small intracellular vesicles, sivs)。
4、具体地,所述囊泡呈圆形。
5、具体地,所述囊泡的平均粒径为50-100nm(例如50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100nm),特别是65-85nm。
6、具体地,所述囊泡低表达外泌体标志物,高表达细胞内富膜细胞器的标志蛋白和clathrin蛋白家族。
7、具体地,所述囊泡在-80℃至37℃(例如-80、-50、-20、-10、0、5、25、37℃)下均较稳定。
8、具体地,所述囊泡通过包含超声处理步骤的方法制得。更具体地,所述囊泡通过包含超声处理、离心处理、超速离心处理步骤(依次进行)的方法制得。
9、在本发明的一个优选实施方式中,所述囊泡通过包含以下步骤的方法制得:
10、(1)取间充质干细胞分散在悬浮溶剂中,进行超声处理;
11、(2)将步骤(1)所得液体进行一次或多次离心处理,取上清液;
12、(3)将步骤(2)所得上清液进行超速离心处理,取沉淀;
13、任选地,(4)将步骤(3)所得沉淀重悬。
14、具体地,步骤(1)中所述细胞为经过培养、消化、洗涤后所得分离的细胞(其经过弃去细胞培养基、消化、洗涤等步骤,可排除分离获得细胞外囊泡的可能性)。
15、具体地,所述方法还可以细胞消化、计数步骤;在本发明的一些实施例中,所述细胞消化步骤包括:培养细胞生长至90%融合,弃去细胞培养基,洗涤细胞,加入胰酶消化细胞,然后中和并清洗细胞。
16、具体地,所述细胞在悬浮溶剂中的细胞密度为1-4×106个/ml,例如1×106个/ml、2×106个/ml、3×106个/ml、4×106个/ml。在本发明的一些实施方案中,所述细胞密度为1×106个/ml。
17、具体地,所述悬浮溶剂为任何适于培养细胞的缓冲液,例如pbs、tris缓冲液、甘氨酸缓冲液。在本发明的一些实施例中,所述溶剂为pbs。
18、具体地,所述成体干细胞是指存在于一种已经分化组织中的未分化细胞,这种细胞能够自我更新并且能够特化形成组成该类型组织的细胞,在特定条件下,成体干细胞或者产生新的干细胞,或者按一定的程序分化,形成新的功能细胞,从而使组织和器官保持生长和衰退的动态平衡。例如,间充质干细胞(msc)、造血干细胞(hsc)、神经干细胞(nsc)等,特别是间充质干细胞。
19、具体地,所述成体干细胞(特别是间充质干细胞)来源于哺乳动物,特别是人类。
20、具体地,所述间充质干细胞包括但不限于:脐带间充质干细胞(uc-msc)、骨髓间充质干细胞(bm-msc)、脂肪间充质干细胞(ad-msc)、牙髓间充质干细胞、胎盘和羊水以及羊膜间充质干细胞,特别是脐带间充质干细胞(uc-msc)。
21、具体地,步骤(1)中所述超声处理的振幅为20%-35%(例如20%、22%、24%、25%、30%、35%);在本发明的一些实施方案中,所述超声处理的振幅为20%。
22、具体地,步骤(1)中所述超声处理的时间为15-60s(例如15、20、25、30、40、50、60s),优选为15s;在本发明的一些实施方案中,所述超声处理的时间为15s,on 2s,off 2s。
23、在本发明的一些实施方案中,步骤(2)中所述离心处理的次数为两次,其各自参数分别为:
24、1000-3000g(例如1000、1500、2000、2500、3000g),5-20分钟(例如5、8、10、12、15、20分钟);
25、10000-30000g(例如10000、15000、20000、25000、30000g),20-40分钟(例如20、25、28、30、32、35、40分钟)。
26、在本发明的一个实施方案中,第一次离心在2000g下进行10分钟。
27、在本发明的一个实施方案中,第二次离心在20000g下进行30分钟。
28、具体地,步骤(3)中所述超速离心处理的参数包括100000-180000g(例如100000、120000、140000、150000、160000、180000g),50-100分钟(例如50、60、65、70、75、80、90、100分钟)。
29、在本发明的一个实施方案中,所述超速离心在150000g下进行70分钟。
30、具体地,步骤(4)中所述重悬溶剂为任何适于培养细胞的缓冲液,例如pbs、tris缓冲液、甘氨酸缓冲液。在本发明的一些实施方案中,所述重悬溶剂为pbs。
31、具体地,所述超声处理、离心处理、超速离心处理中的一种或多种在低温下操作,例如0-5℃(例如0、1、2、3、4、5℃)下;特别是,所述超声处理、离心处理、超速离心处理均在4℃或在冰上进行。
32、在本发明的一些实施方案中,所述囊泡通过包含以下步骤的方法制得:取1×106个/ml密度的细胞悬液,将超声探头放入液面中央,超声振幅参数范围是20%,时间参数范围是15s,on 2s,off 2s,进行超声处理;然后将该液体转移至离心管进行离心,离心参数是2000g×10min,20000g×30min,收集上清液;将该上清液转移至超速离心管进行离心,离心参数是150000g×70min。
33、在本发明的一些实施方案中,所述产品为化妆品或医美用品,其用于皮肤或皮肤附属器。
34、具体地,所述皮肤为表皮、真皮或皮下组织,特别是表皮。
35、具体地,所述皮肤位于受试者的面部(例如前额、脸颊、眼睛周围)、颈部、手部、手臂、背部、腿部、腹部或其任意组合。
36、具体地,所述受试者为人类。
37、具体地,所述皮肤附属器为毛发、头发、汗腺、皮脂腺、指甲或趾甲。
38、具体地,所述衰老包括内源性衰老(时间性老化)和外源性衰老,特别是光老化。
39、在本发明的一个实施方案中,所述修复为晒后修复。
40、具体地,所述抗衰老可以为,例如,减轻时间性老化、光老化、和/或激素老化的皮肤病学迹象;预防和/或减轻细纹和/或皱纹的外观;减轻面部细纹和皱纹、面颊、前额上的面部皱纹、两眼之间的垂直皱纹、眼上方和口周围的水平皱纹、木偶纹且特别是深度皱纹或皱褶的引人注目性;预防、减轻和/或减少细纹和/或皱纹的外观和/或深度;改善眼眶下细纹和/或眼眶周围细纹的外观;减轻鱼尾纹外观;使皮肤,特别是老化皮肤恢复年轻和/或恢复活力;减轻皮肤脆性;预防和/或逆转糖胺聚糖类和/或胶原蛋白丧失;改善雌激素失衡效应;预防皮肤萎缩;预防、减轻和/或治疗色素沉着过度;将皮肤色素减退减轻到最低限度;改善皮肤色调、光亮度、清透度和/或紧致度;预防、减轻和/或改善皮肤松垂;改善皮肤紧实度、丰满度、柔韧性和/或柔软性;改善前胶原蛋白和/或胶原蛋白产生;改善皮肤肌理和/或促进再肌理化;改善皮肤屏障修复和/或功能;改善皮肤轮廓的外观;恢复皮肤光泽和/或亮度;将疲劳和/或紧张状态的皮肤病学迹象减轻到最低限度;抵抗环境压力;补充因衰老和/或更年期而减少的皮肤中的成分;改善皮肤细胞间通讯;增加细胞增殖和/或繁殖;增加因衰老和/或更年期而减少的皮肤细胞代谢;延缓细胞老化;改善皮肤保湿性;增加皮肤厚度;增加皮肤的弹性和/或回弹力;增强表皮脱落;改善微循环;减少和/或防止脂肪团形成;及其任何组合。
41、具体地,所述时间性老化、光老化、激素老化的皮肤病学迹象包括,例如,皮肤松弛、皱纹、萎缩、红血丝、毛孔粗大、肤色晦暗、色斑等。
42、具体地,所述产品可以为液体、固体剂或半固体等制剂形式。
43、在本发明的一些实施方案中,所述产品可以为适用于经皮使用的制剂,如溶液剂、洗剂、膏剂、糊剂、贴剂、凝胶剂、膜剂、喷雾剂、粉剂等。
44、在本发明另一些实施方案中,所述产品可以为适用于注射使用的制剂,如溶液剂、粉针剂等。
45、具体地,所述产品还包含化妆品或医美用品领域可接受的辅料,例如乳化剂、润肤剂、保湿剂、增稠剂、增溶剂、表面活性剂、柔软剂、防腐剂、抗氧化剂、香料、着色剂、ph调节剂、渗透压调节剂、溶剂(如注射用水)、缓冲剂、抗过敏剂、抗炎剂等中的一种或多种。
46、在本发明的一些实施方案中,所述产品为医美用品,其为注射剂,还包含无菌溶剂如注射用水或氯化钠注射液,或无菌缓冲液如pbs、tris-hcl缓冲液、hepes缓冲液、氨基酸缓冲液等。
47、在本发明的一些实施方案中,所述医美用品还包含第二(美容)活性成分,例如透明质酸(玻尿酸)或其盐、聚乳酸、聚己内酯、胶原蛋白等的一种或多种,实现联合效果(例如收缩毛孔、提亮肤色等)。
48、在本发明的一些实施方案中,所述医美用品还包含局部麻醉剂,例如利多卡因、布比卡因、罗哌卡因、丁卡因等。
49、具体地,所述医美用品可通过注射、局部、经皮给与受试者;所述注射可以为皮内注射、肌肉注射、或皮下注射;所述局部或经皮给与可通过离子导入、超声导入、电穿孔、机械压力、渗透压梯度、包扎疗法、显微注射、高压无针注射、微电子贴剂、或其任何组合来完成。
50、在本发明的一些实施方案中,所述产品为化妆品,例如,洗面奶、香皂、柔肤水、爽肤水、护肤乳、凝露、面霜、精华液、面膜、防晒霜、防晒喷雾、凝胶、粉底液、颈霜、身体乳。
51、具体地,所述产品可以被结合于以下容器中:胶囊、小瓶、注射器、预装注射器、无纺织物。
52、具体地,所述产品中还可包含其他活性剂,例如,环单磷酸腺苷合成刺激剂、弹性蛋白酶抑制剂、基质金属蛋白酶抑制剂、黑色素合成刺激或抑制剂、增白剂或脱色剂、no合成酶抑制剂、5α还原酶抑制剂、赖氨酰和/或脯氨酰羟化酶抑制剂、抗氧化剂、自由基清除剂和/或抗大气污染剂、活性羰基类清除剂、抗糖化剂、抗组胺剂、抗病毒药、抗寄生虫药、α-羟基酸、β-羟基酸、表皮水解酶、维生素、减轻或治疗眼下眼袋的药剂、去角质剂(exfoliatingagent)、抗微生物剂、抗真菌药、抑真菌剂、杀菌剂、抑菌剂、刺激真皮或表皮大分子合成和/或能够阻止它们降解的药剂、胶原蛋白合成刺激剂、弹性蛋白合成刺激剂、核心蛋白聚糖合成刺激剂、层粘连蛋白合成刺激剂、防御素合成刺激剂、伴侣分子合成刺激剂、水通道蛋白合成刺激剂、透明质酸合成刺激剂、纤维连接蛋白合成刺激剂、去乙酰化酶合成刺激剂、刺激脂质和角质层成分的合成的药剂、刺激神经酰胺合成的药剂、抑制胶原蛋白降解的药剂、抑制弹性蛋白降解的药剂、抑制丝氨酸蛋白酶(如组织蛋白酶g)的药剂、刺激成纤维细胞增殖的药剂、刺激角质形成细胞增殖的药剂、刺激脂肪细胞增殖的药剂、刺激黑色素细胞增殖的药剂、刺激角质形成细胞分化的药剂、刺激脂肪细胞分化的药剂、抑制乙酰胆碱酯酶的药剂、皮肤松弛剂、抑制乙酰胆碱受体聚集的药剂、抑制肌肉收缩的药剂、糖胺聚糖合 成刺激剂、抗角化过度剂、粉刺溶解剂(comedolytic agent)、抗银屑病药、dna修复剂、dna保护剂、稳定剂、止痒剂、用于治疗和/或护理敏感性皮肤的药剂、固化剂、抗妊娠纹剂、调节皮脂生成的药剂、脂解剂或刺激脂解 的药剂、溶脂剂(anti cellulite agent)、止汗剂、刺激愈合的药剂、愈合剂辅佐剂、刺激表皮细胞再生的药剂、表皮细胞再生剂辅佐剂、细胞因子生长因子、 镇静剂(calming agent)、抗炎剂、麻醉剂、作用于毛细血管循环和/或微循环的药剂、刺激激血管生成的药剂、抑制血管通透性的药剂、静脉紧张剂(venotonic agent)、作用于细胞新陈代谢的药剂、改善真皮表皮连接的药剂、诱导毛发生长的药剂、毛发生长抑制或阻滞剂等,及其混合物,其条件是它们在物理上和化学上与该组合物的其他成分相容。另外的实例可以见于化妆品、盥洗用品和香水工业协会(ctfa)国际化妆品成分辞典和手册(international cosmetic ingredient dictionary& handbook),第12版(2008)。
53、在本发明第二方面,提供一种抗衰老、光老化皮肤修复产品,其包含本发明第一方面中所述的细胞内纳米囊泡。
54、具体地,所述产品为化妆品或医美用品,其具有本发明第一方面中所述定义。
55、在本发明第三方面,提供一种改善皮肤的状况或外观美感的方法,其包含向所述皮肤施用本发明第一方面中所述的间充质干细胞源的细胞内纳米囊泡或本发明第二方面中所述的产品的步骤。
56、具体地,所述施用途径可以为注射或经皮施用。
57、在本发明另一些实施方案中,所述方法为非疾病预防或治疗性方法(例如美容方法)。
58、具体地,所述皮肤的状况或外观美感的改善可以为,例如,减轻时间性老化、光老化、激素老化和/或光化性老化的皮肤病学迹象;预防和/或减轻细纹和/或皱纹的外观;减轻面部细纹和皱纹、面颊、前额上的面部皱纹、两眼之间的垂直皱纹、眼上方和口周围的水平皱纹、木偶纹且特别是深度皱纹或皱褶的引人注目性;预防、减轻和/或减少细纹和/或皱纹的外观和/或深度;改善眼眶下细纹和/或眼眶周围细纹的外观;减轻鱼尾纹外观;使皮肤,特别是老化皮肤恢复年轻和/或恢复活力;减轻皮肤脆性;预防和/或逆转糖胺聚糖类和/或胶原蛋白丧失;改善雌激素失衡效应;预防皮肤萎缩;预防、减轻和/或治疗色素沉着过度;将皮肤色素减退减轻到最低限度;改善皮肤色调、光亮度、清透度和/或紧致度;预防、减轻和/或改善皮肤松垂;改善皮肤紧实度、丰满度、柔韧性和/或柔软性;改善前胶原蛋白和/或胶原蛋白产生;改善皮肤肌理和/或促进再肌理化;改善皮肤屏障修复和/或功能;改善皮肤轮廓的外观;恢复皮肤光泽和/或亮度;将疲劳和/或紧张状态的皮肤病学迹象减轻到最低限度;抵抗环境压力;补充因衰老和/或更年期而减少的皮肤中的成分;改善皮肤细胞间通讯;增加细胞增殖和/或繁殖;增加因衰老和/或更年期而减少的皮肤细胞代谢;延缓细胞老化;改善皮肤保湿性;增加皮肤厚度;增加皮肤的弹性和/或回弹力;增强表皮脱落;改善微循环;减少和/或防止脂肪团形成;及其任何组合。
59、具体地,所述时间性老化的皮肤病学迹象包括,例如色斑、松弛、皱纹、红血丝、毛孔粗大、肤色晦暗等。
60、在本发明第四方面,提供一种成体干细胞(例如间充质干细胞)源的细胞内纳米囊泡在制备预防和/或治疗光老化引起的疾病的药物中的应用。
61、具体地,所述细胞内纳米囊泡为本发明第一方面所述的那些。
62、在本发明的一个实施方案中,所述应用为间充质干细胞源的细胞内纳米囊泡在制备预防光老化引起的疾病的药物中的应用。
63、具体地,所述疾病包括,但不限于,日光性皮炎、光敏性皮炎、光线性弹力纤维病(例如菱形皮肤、播散性弹性纤维瘤、结节性弹性纤维病、柠檬色皮肤、手足胶原斑和耳部弹性纤维性结节)、脂溢性角化、光线性肉芽肿、胶样粟丘疹、星状假性瘢痕、色素沉着过度、黑斑病、日光性着色斑、日光性角化病、皮肤日射病、皮肤癌(例如鳞状细胞癌、基底细胞癌、恶性黑素瘤、恶性淋巴瘤、鲍温病、湿疹样癌、纤维肉瘤、汗腺癌、隆突性皮肤纤维肉瘤、血管肉瘤、默克尔细胞癌)等。
64、具体地,所述药物还包含一种或多种药学上可接受的辅料。
65、具体地,所述药学上可接受的辅料可选自:崩解剂、粘结剂、润滑剂、悬浮剂、稳定剂、填充剂、吸收促进剂、表面活性剂、矫味剂、抗氧化剂、防腐剂、增稠剂、增溶剂、表面活性剂、防腐剂、抗氧化剂、香料、着色剂、ph调节剂、渗透压调节剂、溶剂(如注射用水)、缓冲剂、抗过敏剂、抗炎剂等中的一种或多种。
66、具体地,所述药物可以采用任何合适的给药途径,例如胃肠道给药或非胃肠道给药(例如,静脉内、肌内、皮下、器官内、鼻内、皮内、滴注、脑内、直肠内等)途径,特别是注射给药途径。
67、具体地,所述药物可以为任何合适的剂型,例如经胃肠道给药剂型,例如,包括,但不限于,片剂、丸剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂、锭剂、糖浆剂、液体、乳剂、混悬剂等;非经胃肠道给药剂型,例如,注射给药剂型:如注射剂(例如,用于皮下注射、皮内注射、静脉注射、肌内注射、腹膜内注射),呼吸道给药剂型:如喷雾剂、气雾剂、粉雾剂等,皮肤给药剂型,如外用溶液剂、洗剂、软膏剂、硬膏剂、糊剂、贴剂等,粘膜给药剂型:如滴眼剂、眼用软膏剂、滴鼻剂、含漱剂、舌下片剂等,腔道给药剂型:如栓剂、气雾剂、泡腾片、滴剂、滴丸剂等,用于直肠、阴道、尿道、鼻腔、耳道等。
68、在本发明的一些实施方案中,所述药物为注射剂,例如皮下注射剂、皮内注射剂。
69、在本发明另一些实施方案中,所述药物为经皮给药制剂,例如溶液剂、洗剂、膏剂、糊剂、贴剂、凝胶剂、膜剂等。
70、具体地,所述药物的各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。例如使活性成分与一种或多种药学上可接受的辅料混合,然后将其制成所需的剂型。
71、在本发明第五方面,提供一种预防和/或治疗光老化引起的疾病的方法,其包括向有此需要的受试者施用本发明第一方面中所述间充质干细胞源的细胞内纳米囊泡或第四方面中所述的药物的步骤。
72、具体地,所述施用途径可以为任意合适的途径,特别是注射,例如皮下注射、皮内注射。
73、具体地,所述受试者为人类。
74、在本发明第六方面,提供一种成体干细胞(特别是间充质干细胞)源的细胞内纳米囊泡在制备促进毛囊再生的产品中的应用。
75、具体地,所述细胞内纳米囊泡为本发明第一方面所述的那些。
76、在本发明的一些实施方案中,所述产品为化妆品或医美用品。
77、具体地,所述产品可以为液体、固体剂或半固体等制剂形式。
78、具体地,所述产品还包含化妆品或医美用品领域可接受的辅料,例如乳化剂、润肤剂、保湿剂、增稠剂、增溶剂、表面活性剂、柔软剂、防腐剂、抗氧化剂、香料、着色剂、ph调节剂、渗透压调节剂、溶剂(如注射用水)、缓冲剂、抗过敏剂、抗炎剂等中的一种或多种。
79、在本发明的一些实施方案中,所述产品为医美用品,其为注射剂或皮肤外用剂如凝胶。
80、在本发明的一些实施方案中,所述产品为化妆品,例如,生发油、润发精、亮发素、发乳液、毛发营养乳液、洗发水、护发素、焗油膏、发乳、毛发营养霜、毛发保湿霜、毛发按摩霜、发蜡、毛发气雾剂、发膜、毛发营养膜、洗发皂、洗发奶、毛发干燥剂、毛发保存处理剂、染发剂、毛发用波浪发剂、漂毛膏、发胶、发釉、美发剂、粘发剂、毛发保湿剂、毛发摩丝、喷发剂。
81、具体地,所述产品可以被结合于以下容器中:小瓶、注射器、预装注射器等。
82、在本发明第七方面,提供一种促进毛囊再生的产品,其包含本发明第一方面所述的细胞内纳米囊泡。
83、具体地,所述产品为化妆品或医美用品,其具有本发明第五方面中所述定义。
84、在本发明第八方面,提供一种促进毛囊再生的方法,其包括向所述皮肤施用本发明第一方面中所述的细胞内纳米囊泡或本发明第七方面中所述的产品的步骤。
85、具体地,所述施用途径可以为注射或经皮施用。
86、在本发明的一些实施方案中,所述方法为非疾病预防或治疗性方法(美容方法)。
87、在本发明第九方面,提供一种成体干细胞(例如间充质干细胞)源的细胞内纳米囊泡在制备预防和/或治疗脱发的药物中的应用。
88、具体地,所述细胞内纳米囊泡为本发明第一方面所述的那些。
89、具体地,所述脱发包括老年性脱发、斑秃、化疗性脱发、脂溢性脱发。
90、在本发明第十方面,提供一种预防和/或治疗脱发的方法,其包括向所述皮肤施用本发明第一方面中所述的细胞内纳米囊泡的步骤。
91、本发明提供了一种成体干细胞(例如间充质干细胞)来源的细胞内纳米囊泡(sivs)在皮肤和/或皮肤附属器的抗衰老、修复和再生中的应用。发明人通过制备了间充质干细胞来源的细胞内纳米囊泡(sivs),并且通过实验发现,sivs可降低uv照射后的ros水平增加,减少衰老相关分子(例如p21、p53、mmp-1、mmp-3)表达,提高i型胶原(col-i)分子表达,提高人皮肤成纤维细胞增殖活力,提高sod活性,有效改善细胞衰老(包括内源性老化(自然衰老)和外源性老化(如光老化)),还可有效改善动物模型的衰老。预期sivs可有效改善因衰老导致的皮肤松弛、干燥、粗糙、皱纹加深、色素沉着等皮肤状况,还可用于预防因外源性老化导致的疾病如日光角化病、皮肤癌等。另外,sivs还可促进毛囊发育和再生,有助于再生出更多的毛发,预期可用于脱发的预防和治疗。综上,本发明所制备的sivs具有非常好的应用前景和研究价值。