比较牛黄清心丸治疗抑郁症效果的方法与流程

本发明属于生物医学领域，具体地，涉及一种比较牛黄清心丸治疗抑郁症效果的方法。

背景技术：

1、抑郁症作为临床一类常见精神疾病，患者临床表现思维迟缓、心境低落、认知功能损害、悲观厌世甚至会有自杀行为。随着社会的发展，未来几年抑郁症患者的发病率可能呈增长趋势。据who统计，全球约有3.5亿人正在遭受抑郁症的折磨，且发病率逐年攀升，带来严重的社会经济负担。报告显示，抑郁症已成为人类致残的首要且独立因素，中国的患者人数已超过5400万，位列疾病负担的第二位。控制抑郁症状刻不容缓。抑郁症是一个与遗传、神经生物学及心理社会文化因素等有关、多重机制参与形成的复杂病症。

2、对于抑郁症的治疗，西医仍然以药物治疗为主，抗抑郁药物大致可分为以下几类：单胺氧化酶抑制剂(maoi)、三环和四环类抗抑郁药(tcas)、选择性的5-ht再摄取抑制剂(ssris)、5-ht与ne再摄取抑制剂(snaris)等。但这些药物存在明显的缺陷，如药物不良反应、药物依赖及老人、儿童、孕妇、肝肾功能异常特殊人群的限制应用等。因此，寻找更安全有效、疗效确切、价格低廉的抗抑郁药迫在眉睫。而中药在治疗睡眠障碍、心神失常等方面有着悠久的历史，且中药的安全、低毒在治疗抑郁症过程中显示出了良好的优势。

3、(局方)牛黄清心丸为十大经典名方之一，始载于宋代《太平惠民和剂局方》，该方由29味药物组成(山药、人参、白术、茯苓、甘草、当归、川芎、白芍、阿胶、大枣、干姜、麦冬、白蔹、苦杏仁、桔梗、大豆黄卷、六神曲、肉桂、防风、柴胡、蒲黄、牛黄、羚羊角粉、水牛角粉、麝香、朱砂、雄黄、冰片、黄芩)，该方在汉·张仲景《金匮要略》中记载的薯蓣丸的21味组方重用山药补益气血、滋阴的基础上，去地黄加蒲黄，增加了清热豁痰、定惊开窍、熄风通络之品，形成牛黄清心丸，具有益气养血、镇静安神、化痰熄风、扶正安神的作用。现代研究表明，(局方)牛黄清心丸可减轻失眠多梦、易惊醒、易疲劳、易激动、易发脾气、记忆力减退、思想不集中、抑郁、焦虑、甚至有厌世感等症状，摆脱不良情绪困扰。现代生活、工作、人际带来的各种压力，容易化火，煎熬身心，化生痰热，常见周身疲劳、头痛、情绪低落、肌肉关节酸痛、记忆力减退、烦躁、失眠等，辨证多因心理压力过大导致的五志过极，心火旺盛扰心，日久则耗散心气，导致虚实错杂，症见焦虑抑郁、烦躁、失眠表现，且抑郁患者病史较长，气血已伤，脾虚生痰，血虚肝旺，气血不足，痰火易生；(局方)牛黄清心丸补益气血，滋养脾肝，气血足则痰火不生，既清心祛火，又解郁豁痰，从而病除。(局方)牛黄清心丸抗抑郁临床疗效显著，然而，目前尚未有(局方)牛黄清心丸超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术(uplc-q-tof-ms)化学成分检测方法及分析(局方)牛黄清心丸治疗抑郁症的成分信息及作用机制的相关研究。

4、目前，市面上有多种牛黄清心丸药物，但其成分均不相同，推测不同成分的牛黄清心丸治疗抑郁症的作用机制和作用效果均不同。例如，有的牛黄清心丸的成分包括牛黄、朱砂、黄芪、黄连、栀子和郁金；有的牛黄清心丸的成分包括人工牛黄、人工麝香、水牛角浓缩粉、羚羊角、黄芪、当归、山药、甘草、大枣、茯苓等；(局方)牛黄清心丸与上述药物的区别在于其成分包括：牛黄、麝香、水牛角浓缩粉、羚羊角、黄芪、当归、山药、甘草、大枣、茯苓、雄黄和朱砂等。由于(局方)牛黄清心丸中含有牛黄、麝香、雄黄、朱砂，在实际生活中，抑郁症患者更偏向使用不含雄黄、朱砂的牛黄清心丸。但对于哪一种牛黄清心丸对抑郁症的治疗效果更优，目前还没有统一的评价方法。

5、因此，本领域亟需一种比较牛黄清心丸治疗抑郁症效果的方法。

技术实现思路

1、本发明的目的是利用网络药理学、uplc-q-tof-ms及分子对接技术比较牛黄清心丸治疗抑郁症的效果，由此，完成了本发明。

2、在第一方面，本发明提供了一种比较牛黄清心丸治疗抑郁症效果的方法，所述方法包括以下步骤：

3、s1.制备多个供试品溶液：

4、取多种牛黄清心丸，分别切碎，加入硅藻土研匀至分散均匀，加入甲醇溶液，超声处理，获得多种牛黄清心丸混合物；

5、s2.检测多种牛黄清心丸的成分信息：

6、使用超高效液相色谱联用高分辨飞行时间质谱仪分别确定步骤s1中的所述多种牛黄清心丸混合物的成分信息；

7、s3.筛选多种牛黄清心丸的活性成分：

8、对步骤s2获得的所述成分信息进行去重整理，分别建立多种牛黄清心丸活性成分数据集；

9、s4.预测活性成分靶点、收集疾病靶点：

10、通过pubchem、swiss target prediction数据库检索步骤s3中的多种牛黄清心丸的活性成分对应的作用靶点，通过去重整理后建立活性成分-作用靶点数据集；利用genecards、omim数据库收集抑郁症的作用靶点，获得疾病-作用靶点数据集；

11、s5.构建“活性成分-作用靶点-疾病”网络：

12、利用步骤s4中的活性成分-作用靶点数据集和疾病-作用靶点数据集构建“活性成分-作用靶点-疾病”网络；

13、s6.构建蛋白质相互作用网络：

14、获取步骤s4中的活性成分-作用靶点数据集和疾病-作用靶点数据集的交集基因，利用所述交集基因获得蛋白质相互作用网络；

15、s7.go和kegg富集分析：

16、对步骤s6中的所述交集基因进行go和kegg富集分析；

17、s8.分子对接：

18、取步骤s6中的所述蛋白质相互作用网络中的度最大的5、10、15或20个蛋白质作为受体蛋白质，取步骤s5中的所述“活性成分-作用靶点-疾病”网络中所述受体蛋白质对应的活性成分作为配体分子，获取所述受体蛋白质和所述配体分子的结构，进行分子对接；

19、s9.计算步骤s6中的蛋白质相互作用网络的网络效率，比较多种牛黄清心丸的网络效率，网络效率数值越大，治疗抑郁症效果越好。

20、在一个实施方案中，对步骤s1中的所述混合物分别进行后处理，步骤如下：分别将所述混合物经高速离心，再经过0.22μm微孔滤膜过滤，作为牛黄清心丸甲醇提取液供试品，再以初始流动相稀释1倍。

21、在一个实施方案中，步骤s2中的色谱条件如下：thermo hypersil gold c18色谱柱(2.1*100mm，1.9μm)；柱温：35℃；样品管理器温度：15℃；进样体积：1μl；流速：0.3ml/min；流动相：a相：乙腈，b相：0.1％甲酸水溶液。

22、在一个实施方案中，步骤s2中的梯度洗脱条件如下：0min，1.0％流动相a，99.0％流动相b；1min，1.0％流动相a，99.0％流动相b；4min，10.0％流动相a，90.0％流动相b；9min，22.0％流动相a，78.0％流动相b；15min，33.0％流动相a，67.0％流动相b；20min，50.0％流动相a，50.0％流动相b；27min，55.0％流动相a，45.0％流动相b；32min，90.0％流动相a，10.0％流动相b；34min，90.0％流动相a，10.0％流动相b；35min，1.0％流动相a，99.0％流动相b；38min，1.0％流动相a，99.0％流动相b。

23、在一个实施方案中，步骤s2中的质谱检测条件如下：电喷雾离子源，正、负离子扫描模式，扫描范围100-1200amu，离子源温度120℃，扫描时间0.2s，毛细管电压2500v，脱溶剂温度400℃，脱溶剂气流速1000l/h。

24、在一个实施方案中，步骤s3中还包括：查找相关文献对没入选但有相关活性研究的成分进行补充。

25、在一个实施方案中，步骤s8中使用pdb数据库获取所述受体蛋白质的结构。

26、在第二方面，本发明提出了一种比较牛黄清心丸治疗抑郁症效果的方法，所述方法包括利用第一方面所述的方法比较局方牛黄清心丸与其他牛黄清心丸治疗抑郁症的网络效率。

27、在一个实施方案中，所述局方牛黄清心丸的指纹图谱有7个共有峰，各共有峰的保留时间分别为：

28、1号峰：相对保留时间12.59；

29、2号峰：相对保留时间14.86；

30、3号峰：相对保留时间16.33；

31、4号峰：相对保留时间16.67；

32、5号峰：相对保留时间17.60；

33、6号峰：相对保留时间18.95；

34、7号峰：相对保留时间19.60；

35、本发明的有益效果是：利用网络药理学、uplc-q-tof-ms及分子对接技术分析牛黄清心丸的成分信息以及治疗抑郁症的作用机制，为临床运用(局方)牛黄清心丸治疗抑郁症提供理论依据，并且使用该方法可以比较(局方)牛黄清心丸和现有的其他牛黄清心丸对抑郁症的治疗效果。