粘液玫瑰单胞菌胞外多糖在制备用于缓解和/或治疗过敏性鼻炎的药物上的应用

本发明涉及医药，具体涉及一种粘液玫瑰单胞菌胞外多糖在制备用于缓解和/或治疗过敏性鼻炎的药物中的应用。

背景技术：

1、炎症是宿主对致炎因子刺激产生的一种防御性为主的免疫反应，体内多种细胞被招募到免疫微环境中，产生细胞因子消除外界因素的入侵，恢复机体健康，但持续存在的炎症会对机体器官以及全身反应产生损害，在很多复杂疾病的发生发展进程中扮演着重要角色。

2、过敏性鼻炎是一种上呼吸道疾病，国外的研究已经表明，全世界有10％～25％的普通人群患有过敏性鼻炎，是一个影响着全球约5亿人的全球性的健康问题，对公众健康产生巨大的影响，尽管过敏性鼻炎的病理学和治疗机制已被广泛研究，但过敏性鼻炎的许多方面仍不清楚，需要进一步研究。过敏性鼻炎是一种以th2型免疫反应为主的慢性炎症性疾病，其病理特征包括肥大细胞和杯状细胞的显著变化。具体来说，肥大细胞在过敏性鼻炎中的聚集是其主要特征之一。肥大细胞通过脱颗粒释放多种炎性介质，这些介质参与了过敏性鼻炎的病理生理过程，并且是鼻黏膜病理改变的关键致敏细胞。因此，肥大细胞和杯状细胞在过敏性鼻炎中扮演着重要角色。肥大细胞通过释放炎性介质参与过敏反应，而杯状细胞的增生则反映了鼻粘膜的病理改变。两者共同作用，推动了过敏性鼻炎的发展和持续存在。

3、在大多数情况下，抗组胺药和鼻内皮质类固醇可以减轻过敏性鼻炎症状，常见的新疗法包括高纯度的过敏原提取物和纯化或重组的过敏原、过敏原、肽和用于特异性过敏原免疫治疗的新佐剂，以及用于阻断ige、il-4/il-5和/或其受体作用的特异性单克隆抗体(生物制剂)。尽管对过敏性鼻炎疗法进行了许多研究，但是用于过敏性鼻炎疗法的药物仍然作用有限。

4、卵清蛋白(ovalbumin,ova)是对小鼠进行过敏性鼻炎造模的主要方法，其中氢氧化铝是制备过敏性鼻炎小鼠模型的重要佐剂。过敏性鼻炎产生的过程是机体接触过敏原后，抗原提呈细胞摄取过敏原的信息后导致机体启动适应性免疫应答。在佐剂的辅助下，通过ova腹腔注射，可诱导小鼠全身系统致敏，再在鼻内进行过敏原激发形成局部过敏炎症反应。

5、多糖是由10个以上单糖以糖苷键形式结合而成的高分子碳水化合物，生物活性多糖具有免疫调节、抗肿瘤、降血糖、抗炎和调节肠道微环境等作用。通过开发并利用合适的生物活性多糖有望为过敏性鼻炎提供新的治疗方式。

技术实现思路

1、发明目的：本发明提供了粘液玫瑰单胞菌胞外多糖在制备用于治疗过敏性鼻炎的药物中的新应用。

2、其中，所述粘液玫瑰单胞菌胞外多糖通过如下步骤得到：将活化后的粘液玫瑰单胞菌接种到发酵培养基中培养，将得到的发酵液经除菌、除蛋白、无水乙醇沉淀后，利用deae离心交换树脂分离纯，收集0.2-0.5mol/lnacl洗脱组分后冻干，然后利用凝胶柱分离，流速设置为0.4～0.6ml/min，收集9-15min的流出物得到重均分子量为3000-15000da的胞外多糖，其中，所述粘液玫瑰单胞菌的保藏编号为cgmcc no.25967.

3、所述粘液玫瑰单胞菌(roseomonas mucosa)，菌株号为dl-1，中国普通微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2022年10月26日，保藏编号为cgmccno.25967，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编100101。该菌株是发明人于2021年11月从健康人皮肤筛选得到的皮肤共生菌菌株。

4、具体地，粘液玫瑰单胞菌的发酵液通过如下方法制备得到：将所述粘液玫瑰单胞菌接种于r2a培养基中25-37℃活化12-24h，将活化的粘液玫瑰单胞菌转接于发酵培养基中，30-37℃培养24-36h得到。

5、其中，r2a培养基组分为：酵母浸出粉0.5g/l，蛋白胨0.5g/l，酪蛋白水解物0.5g/l，葡萄糖0.5g/l，可溶性淀粉0.5g/l，磷酸氢二钾0.3g/l，无水硫酸镁0.024g/l，丙酮酸钠0.3g/l，琼脂15.0g/l，ph值7.2。

6、优选地，所述发酵培养基配方如下：碳源10-100g/l，氮源1-30g/l，无机盐0.01-50g/l，ph5.0-9.0，所述溶剂为水。

7、其中，所述碳源为葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、木糖、果糖、乳酸、柠檬酸、甘油、淀粉和糖蜜中的任意一种几种的组合，优选为蔗糖、葡萄糖、乳糖、柠檬酸和淀粉中的任意一种或几种的组合；所述氮源为酵母浸粉、牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、玉米浆、豆饼粉、棉籽饼粉、尿素、(nh4)2so4、nh4cl、(nh4)2hpo4和nh4no3中的任意一种或几种的组合，优选为蛋白胨、酵母浸粉、玉米浆、(nh4)2so4、nh4cl、(nh4)2hpo4和nh4no3中的任意一种或几种的组合；所述无机盐为氯化钠、硫酸盐、磷酸盐、磷酸二氢盐、磷酸氢二盐和盐酸盐中的任意一种或几种的组合。

8、在一个优选的实施方式中，胰蛋白胨15.0-18.0g/l，大豆蛋白胨或大豆木瓜蛋白酶水解物2.0-4.0g/l，氯化钠4.0-6.0g/l，磷酸氢二钾2.0-3.0g/l，葡萄糖2.0-3.0g/l，ph值7.2-7.3，更优选地，发酵培养基组分为胰蛋白胨17.0g/l，大豆蛋白胨或大豆木瓜蛋白酶水解物3.0g/l，氯化钠5.0g/l，磷酸氢二钾2.5g/l，葡萄糖2.5g/l，ph值7.3。

9、在一个具体的实施方式中，粘液玫瑰单胞菌胞外多糖通过如下方法制备得到：将粘液玫瑰单胞菌接种在200ml发酵培养基中32℃培养24h，通过3000-5000rpm离心10min除菌，加入1/2体积的sevage试剂除蛋白3次后，加入1倍体积无水乙醇后在4℃过夜得到胞外多糖粗糖沉淀，利用去离子水复溶后，通过deae-52分离，收集0.2mnacl洗脱组分进行冻干，然后利用凝胶柱分离，流速设置为0.4～0.6ml/min，收集3-9min的流出物，得到重均分子量为50-90kda的胞外多糖，收集9-15min的流出物得到重均分子量为3000-15000da的胞外多糖，其中，所述粘液玫瑰单胞菌的保藏编号为cgmccno.25967。

10、优选地，所述凝胶柱为superdex 75prep grade凝胶柱，收集0.2-0.5mol/lnacl洗脱组分后冻干，然后溶解于纯水后利用所述凝胶住分离，洗脱液为纯水。

11、其中，重均分子量为3000-15000da的胞外多糖的单糖组成包括葡萄糖、甘露糖、鼠李糖，其中，上述单糖的摩尔比为30-60:30-80:1-10。

12、重均分子量为50-90kda的胞外多糖的单糖组成包括甘露糖、鼠李糖和半乳糖，甘露糖、鼠李糖和半乳糖的摩尔比为40-60:10-25:10-25。

13、本发明提供了粘液玫瑰单胞菌胞外多糖在缓解过敏性鼻炎中的作用。

14、其中，所述粘液玫瑰单胞菌胞外多糖缓解ova诱导的过敏性鼻炎。

15、具体地，粘液玫瑰单胞菌胞外多糖减少ova诱导的鼻挠抓次数、鼻黏膜炎性细胞增多、杯状细胞增多和肥大细胞增多，同时，所述粘液玫瑰单胞菌胞外多糖抑制ova诱导的血清中il-4、il-13、il-6和ifn-γ升高。

16、有益效果：(1)本发明通过发酵分离方法制备得到粘液玫瑰单胞菌dl-1高分子量胞外多糖和低分子量胞外多糖，同时验证了两种多糖均具有缓解ova诱导的过敏性皮炎，具体地，粘液玫瑰单胞菌胞外多糖可以减少ova诱导的鼻挠抓次数、鼻黏膜炎性细胞增多、杯状细胞增多和肥大细胞增多，同事缓解ova诱导的balb/c过敏性鼻炎小鼠血清中il-4、il-6和ifn-γ等水平升高，为过敏性鼻炎的治疗提供了一种新的手段。