一种应用于敌草快急性中毒的仿生纳米制剂及其制备方法和应用

本发明涉及医药制剂，尤其涉及一种应用于敌草快急性中毒的仿生纳米制剂及其制备方法和应用。

背景技术：

1、敌草快是一种非选择性除草剂。敌草快在农业种植中被广泛应用，致使临床中敌草快中毒的病例不断增加。敌草快中毒主要表现为广泛黏膜损伤、少尿、血尿、肾小管坏死、呼吸苦难等，死亡率较高，目前尚无特效药。当前，敌草快中毒的主要治疗手段包括：洗胃、血液净化、对症支持治疗等。药物治疗主要是抗氧化药物和激素类来清除自由基和炎症介质。然而，这些治疗手段都无法从根本上治愈敌草快中毒，只能暂缓症状，并且都存在一定的副作用和并发症。

2、近年来，研究发现氧化应激在敌草快中毒的发病过程中发挥了重要作用。当敌草快中毒时，由于氧化还原反应产生大量活性氧导致氧化应激，促使细胞发生脂质过氧化和细胞死亡。因此，抑制氧化应激清除活性氧可能是治疗敌草快中毒的新策略。

3、近年来，研究者已经开始探索通过抗氧化剂来治疗敌草快中毒。例如，一些药用植物的天然化合物在体外实验和动物模型中显示出抑制敌草快造成的氧化应激，减轻器官功能损伤的作用。然而，尽管这些方法可以抑制氧化应激，抗氧化，但却未能解决药物无法持续靶向作用和免疫系统识别的问题。

4、因此，本领域技术人员构建一种制备方法简单、稳定，同时具有强大抗氧化性和生物利用率的仿生纳米制剂，将为敌草快急性中毒提供一种治疗策略。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种应用于敌草快急性中毒的仿生纳米制剂及其制备方法和应用，为敌草快急性中毒提供一种新的治疗策略。

2、为实现上述目的，本发明提供了一种应用于敌草快急性中毒的仿生纳米制剂，为红细胞膜包裹的pva-plga纳米颗粒包载表没食子儿茶素没食子酸酯纳米颗粒。

3、图1是本发明提供的仿生纳米制剂的结构示意图。

4、可选的，所述仿生纳米制剂的粒径为400~600nm。

5、本发明提供的上述仿生纳米制剂可以减少活性氧的生成，减少肾脏中炎性因子的释放，进而有效缓解敌草快中毒患者肾损伤。

6、本发明提供了上述应用于敌草快急性中毒的仿生纳米制剂的制备方法，包括以下步骤：

7、s1）采用水/油/水乳液溶剂蒸发法制备包载表没食子儿茶素没食子酸酯的pva-plga纳米颗粒；

8、s2）将上述包载表没食子儿茶素没食子酸酯的pva-plga纳米颗粒和红细胞膜混合，得到仿生纳米制剂。

9、优选的，所述步骤s1）具体包括以下步骤：

10、将表没食子儿茶素没食子酸酯溶解于第一溶剂得到第一溶液；

11、将上述第一溶液和plga溶液混合，得到初级乳液；

12、将上述初级乳液和pva溶液混合，得到w/o/w乳液；

13、将上述w/o/w乳液除去溶剂并干燥，得到包载表没食子儿茶素没食子酸酯的pva-plga纳米颗粒。

14、优选的，所述第一溶剂选自二氯甲烷。

15、优选的，所述第一溶液中，表没食子儿茶素没食子酸酯的浓度为1~2mg/ml；更优选为1 mg/ml。

16、优选的，所述plga溶液中，溶剂为二氯甲烷。

17、优选的，所述plga溶液中，plga的浓度为1~2mg/ml。

18、优选的，将上述第一溶液和plga溶液混合，通过超声处理得到初级乳液。

19、所述超声处理的功率优选为100w，处理的时间优选为3~7min，更优选为5min。

20、优选的，所述pva溶液中，溶剂为二氯甲烷。

21、优选的，所述pva溶液中，pva的浓度为0.5~1wt%，更优选为0.7wt%。

22、优选的，将上述初级乳液和pva溶液混合，通过超声处理得到w/o/w乳液。

23、所述超声处理的功率优选为100w，处理的时间优选为2~5min，更优选为3min。

24、然后除去上述w/o/w乳液中的溶剂，本发明对除去溶剂的具体方法并无特殊限定，可以为本领域技术人员熟知的除去溶剂的方法，在本发明的一些具体实施例中，采用挥发的方法，将上述w/o/w乳液在室温下稳定挥发除去二氯甲烷溶剂。所述挥发的时间优选为1~3h，更优选为2h。

25、本发明对上述干燥的方法并无特殊限定，可以为本领域技术人员熟知的适用于纳米粒子的干燥方法，在本发明的一些具体实施例中，采用冻干的方法。

26、优选的，除去二氯甲烷溶剂后，将得到的除去溶剂的乳液通过离心机离心处理收集纳米制剂，并通过冻干获得包载表没食子儿茶素没食子酸酯的pva-plga纳米颗粒。

27、上述离心的速度优选为10000~20000rpm，更优选为15000rpm；所述离心的时间优选为10~20min，更优选为15min。

28、然后将上述包载表没食子儿茶素没食子酸酯的pva-plga纳米颗粒和红细胞膜混合，得到仿生纳米制剂。

29、本发明对上述红细胞膜的来源并无特殊限定，可以为一般市售或按照本领域技术人员熟知的一般方法制备。

30、优选的，上述红细胞膜为从动物体内获取。

31、所述获取方法优选为：

32、采集血样，优选采集c57bl/6j雄性小鼠眼眶血。

33、将上述血样离心，去除血浆和灰白色被膜，得到红细胞液。

34、上述离心的转速优选为800~1200rpm，更优选为1000rpm；上述离心的时间优选为3~7min，更优选为5min。

35、将得到的红细胞液用冷的pbs缓冲液清洗至上层清液澄清透明且没有颜色，获得红细胞。

36、将上述红细胞在pbs冰水浴中诱导破裂，用冷的pbs缓冲液清洗至上清液无色，得到红细胞膜。

37、优选的，将上述红细胞重悬于pbs冰浴中0.5~1.5小时，以诱导膜破裂。所述pbs的浓度优选为20%~30%，更优选为25%。

38、本发明优选的，将得到的红细胞膜超声处理后，用微型挤出机依次挤出400和200nm的聚碳酸酯多孔膜。优选的，每种孔径的膜至少挤压9次以获得红细胞膜。

39、本发明优选的，将上述包载表没食子儿茶素没食子酸酯的pva-plga纳米颗粒和红细胞膜混合，磁力搅拌，然后超声处理，得到仿生纳米制剂。

40、所述磁力搅拌的时间优选为30~60min，更优选为45min。

41、所述超声处理的功率优选为50~200w，更优选为100w；所述超声处理的时间优选为3~7min，更优选为5min。

42、优选的，超声处理后，使用微型挤出机将混悬液通过200 nm多孔聚碳酸酯膜反复挤出后，获得仿生纳米制剂。

43、本发明提供了上述应用于敌草快急性中毒的仿生纳米制剂在制备治疗或减轻敌草快急性中毒的药物中的应用。

44、具体的，所述治疗或减轻敌草快急性中毒为治疗或减轻敌草快急性中毒引起的肾损伤。

45、与现有技术相比，本发明提供了一种应用于敌草快急性中毒的仿生纳米制剂，为红细胞膜包裹的pva-plga纳米颗粒包载表没食子儿茶素没食子酸酯纳米颗粒。

46、本发明获得了以下有益效果：

47、①本发明实现了三层复合结构的仿生纳米制剂，既实现了纳米制剂逃逸免疫识别的目的，同时又发挥药物的抗氧化作用；

48、②本发明提供的制备方法简单易行，条件可控，具有良好的重复性，可提高表没食子儿茶素没食子酸酯稳定性。本发明制备的红细胞膜仿生egcg纳米制剂具有良好的稳定性和溶解度，能够在-20℃长期保存，增加了产品的储存和使用寿命；

49、③本发明相较于表没食子儿茶素没食子酸酯原料药，红细胞膜仿生egcg纳米制剂展现出更好的敌草快解毒作用，为敌草快解毒提供了新的药物选择。