hsa_circ_0004662的应用

本发明属于肿瘤分子生物学，具体是涉及一种环状rna hsa_circ_0004662在制备膀胱癌顺铂耐药诊断和治疗制剂中的应用和相应的制剂。

背景技术：

1、膀胱癌是一种发生在膀胱黏膜上皮的恶性肿瘤，主要包括尿路上皮癌、鳞状细胞癌和腺癌等。根据2022年国际癌症研究机构的统计数据，膀胱癌在全球恶性肿瘤中发病率排名第九，死亡率排名第十三。近年来，由于人口老龄化、生活方式的改变以及新型诊疗技术的应用，我国膀胱癌的发病率也呈逐年上升趋势。

2、在膀胱癌的治疗中，顺铂（cisplatin）被广泛应用，并被认为是膀胱癌化疗的“金标准”。顺铂通过形成dna加合物，诱导细胞凋亡，显著抑制肿瘤生长。然而，尽管顺铂在治疗膀胱癌中取得了一定的疗效，但大部分患者在使用顺铂化疗一段时间后会出现耐药性，表现为dna修复机制增强、药物外排泵表达增加、细胞凋亡通路失调及微环境免疫抑制等因素，极大限制了治疗效果和预后。因此，深入探究膀胱癌顺铂耐药性的诊断和治疗靶点，对早期鉴别顺铂耐药患者并优化治疗选择具有重要意义。

3、近年来，环状rna（circular rnas，circrnas）作为一种非编码rna，因其特殊的单链内源性特性和稳定的表达而受到广泛关注。circrnas主要由外显子和/或内含子形成，不具有5’端帽子结构和3’端poly a尾，呈现闭合的环状结构，与线性rna分子相比，具有更高的稳定性和不易降解的特性。circrnas主要位于细胞质或细胞外液中，不易受核酸外切酶的影响。因此，寻找和鉴定在顺铂耐药性膀胱癌细胞中特异性升高的circrnas，对后续临床预后预测和治疗靶标的筛选具有重要意义。通过这些综合措施，有望提高顺铂耐药性膀胱癌的疗效和预后，为患者带来新的治疗希望。

技术实现思路

1、本发明的第一个目的是提供一种抑制hsa_circ_0004662表达的试剂在制备膀胱癌顺铂耐药治疗制剂中的应用，所述hsa_circ_0004662核苷酸序列如seq id no.1所示。

2、上述应用为膀胱癌顺铂耐药治疗提供了新的途径。

3、进一步地，所述的抑制hsa_circ_0004662表达的试剂包括：基于hsa_circ_0004662环状拼接位点的核苷酸序列设计而成的小干扰rna或短发夹rna。

4、所述的小干扰rna序列如seq id no.4或seq id no.5所示，短发夹rna序列同小干扰rna序列。

5、进一步，所述的治疗试剂，还包括脂质体转染试剂（市售）、转染专用培养基（市售）

6、上述的抑制hsa_circ_0004662表达的试剂包括但不限于上述基于hsa_circ_0004662环状拼接位点的核苷酸序列设计而成的小干扰rna或短发夹rna。

7、基于hsa_circ_0004662环状拼接位点的核苷酸序列设计而成的小干扰rna包括但不限于上述具体序列。

8、本发明的第二个目的是提供一种膀胱癌顺铂耐药治疗制剂，为抑制hsa_circ_0004662表达的试剂；进一步包括：基于hsa_circ_0004662环状拼接位点的核苷酸序列设计而成的小干扰rna或短发夹rna。

9、所述的小干扰rna序列如seq id no.4或seq id no.5所示。

10、上述的抑制hsa_circ_0004662表达的试剂包括但不限于上述基于hsa_circ_0004662环状拼接位点的核苷酸序列设计而成的小干扰rna或短发夹rna。

11、基于hsa_circ_0004662环状拼接位点的核苷酸序列设计而成的小干扰rna包括但不限于上述具体序列。

12、本发明的第三个目的是提供一种检测全新的circrna——hsa_circ_0004662的试剂在制备膀胱癌顺铂耐药诊断制剂中的应用，所述hsa_circ_0004662核苷酸序列如seq idno.1所示。

13、上述应用为膀胱癌顺铂耐药诊断提供了新的途径。

14、进一步地，所述的检测hsa_circ_0004662的试剂包括检测膀胱癌患者血清、膀胱癌组织或膀胱癌细胞中hsa_circ_0004662表达水平的试剂。

15、进一步地，所述的检测膀胱癌患者血清、膀胱癌组织或膀胱癌细胞中hsa_circ_0004662表达水平的试剂包括pcr检测试剂、或者原位杂交检测试剂。

16、优选所述的pcr检测试剂包括：

17、上游引物如seq id no.2所示，

18、下游引物如seq id no.3所示。

19、进一步地，所述的pcr检测试剂为荧光定量pcr检测试剂，还包括荧光定量pcr酶（市售）、无酶水（市售）。

20、本发明所述的检测膀胱癌患者血清、膀胱癌组织或膀胱癌细胞中hsa_circ_0004662表达水平的试剂包括但不限于上述pcr检测试剂、或者原位杂交检测试剂。

21、pcr检测试剂中的引物包括但不限于上述具体引物序列。

22、本发明的第四个目的是提供一种膀胱癌顺铂耐药诊断制剂，包括检测膀胱癌患者血清、膀胱癌组织或膀胱癌细胞中hsa_circ_0004662表达水平的试剂；所述hsa_circ_0004662核苷酸序列如seq id no.1所示。

23、上述试剂能够用于高效检测膀胱癌顺铂耐药型细胞、组织或患者血清。

24、进一步地，所述的检测膀胱癌患者血清、膀胱癌组织或膀胱癌细胞中hsa_circ_0004662表达水平的试剂包括pcr检测试剂，或者原位杂交检测试剂。

25、优选所述的pcr检测试剂包括：

26、上游引物如seq id no.2所示，

27、下游引物如seq id no.3所示。

28、上述的检测膀胱癌患者血清、膀胱癌组织或膀胱癌细胞中hsa_circ_0004662表达水平的试剂包括但不限于上述pcr检测试剂，或者原位杂交检测试剂。

29、pcr检测试剂中的引物包括但不限于上述具体引物序列。

30、本发明诊断试剂用于膀胱癌患者的组织、血清等检测时，当患者血清或组织中hsa_circ_0004662表达水平显著升高时，提示受试者对顺铂的敏感性显著降低。

31、本发明中膀胱癌细胞t24和5637（购于中国科学院细胞库），通过长期低剂量顺铂处理从而建立的顺铂耐药细胞t24/cr和5637/cr，对应的顺铂敏感的膀胱癌细胞为t24和5637。

32、本发明中使用的的术语“表达水平”、“表达量”，一般指生物学样品中该待测样品的含量，可通过相应的吸光度或者荧光信号的强度来检测，然后通过特定的公式进行换算。

33、附图中，顺铂，英文名称为cisplatin。

34、二甲基亚砜，英文名称为dimethyl sulfoxide，简写为dmso。

35、本发明的优点：

36、本发明首次发现了hsa_circ_0004662在顺铂耐药的膀胱癌细胞和膀胱癌患者血清中表达显著升高。通过检测受试者血清、组织或细胞中hsa_circ_0004662的表达水平，可以判断受试者是否具有顺铂耐药的风险，以早期诊断膀胱癌顺铂耐药。

37、此外，为了弥补现有治疗方法的不足，本发明提供一种与膀胱癌顺铂耐药性hsa_circ_0004662相关治疗试剂，基于hsa_circ_0004662环状拼接位点的核苷酸序列设计而成的小干扰rna（sirna）或短发夹rna（shrna），通过抑制hsa_circ_0004662的表达水平从而有效治疗膀胱癌顺铂化疗耐药性，具有深远的临床意义和重要的推广应用前景。