用白介素-4拮抗剂进行疫苗接种的制作方法
【专利说明】
[0001] 以交叉引用方式并入
[0002] 本申请要求2012年6月5日提交的澳大利亚临时专利申请号2012902345的优先 权，所述申请的所有内容以交叉引用的方式并入本文中。
技术领域
[0003] 本发明总体上涉及免疫学领域。更确切地说，本发明涉及用于增强抗原特异性免 疫应答的组合物和方法。所述组合物和方法尤其应用于预防和/或治疗包括但不限于传染 病的各种疾病。
[0004] 背景
[0005] 普遍认为有效抗病毒粘膜CD8+细胞毒性T淋巴细胞（CTL)应为病毒疫苗诱导的免 疫应答的主要组分。具体地说，在粘膜表面处局部抗病毒免疫应答的重要性日益明显。还 日益明显的是，不仅抗病毒T细胞应答的强度，而且抗病毒T细胞应答的'质量'或亲合力 在保护免受病毒感染中可为重要的，尤其那些证明对现有免疫接种策略具有抗性的病毒感 染。T细胞应答的质量可以在T细胞对靶细胞上MHC-肽复合物的功能性亲合力中中反映 出。高亲合力CTL可识别低浓度抗原，然而低亲合力CTL在低浓度抗原下在效应子功能方面 无效。已经确立的是，高亲合力CTL相较于低亲合力T细胞具有增大的清除感染的功能性 能力。但是，已发现高亲合力CTL和低亲合力CTL的相对比率随着感染的时程而改变。尽 管如此，公认的是高亲合力CTL具有比低亲合力T细胞更大的清除感染的能力。
[0006] 例如，就人免疫缺陷病毒（HIV)而言，通常首先遭遇HIV的生殖组织和直肠组织中 的局部抗病毒免疫应答是极其重要的。胃肠道中的局部免疫应答也是重要的，因为胃肠道 是HIV复制的主要部位。最初HIV暴露的部位（粘膜）处高亲合力抗病毒T细胞的存在提 供减少粘膜CD4+T细胞消耗和局部控制HIV感染的可能。鉴于疫苗策略识别表达极低水平 病毒抗原的靶细胞的实际能力（例如在细胞的感染之后早期），以及它们在低浓度靶抗原 下更快速地引发靶细胞溶解，引发高亲合力CTL的疫苗策略潜在地可能提供更大保护免受 感染。
[0007] 存现对能够引发高亲合力CTL的抗病毒疫苗的需要。具体地说，需要能够在作为 许多病毒感染的起始点的粘膜表面引发高亲合力CTL的抗病毒疫苗。
[0008] 发明概述
[0009] 本发明已发现，抗病毒疫苗诱导的抗原特异性T淋巴细胞的强度和亲合力可通过 短暂地减小白介素-4(IL_4)的可用性和/或短暂地抑制IL-4功能得以增大。
[0010] 在第一个方面中，本发明提供一种用于诱导受试者中抗原特异性免疫应答的方 法，所述方法包括联合白介素-4受体（IL-4R)拮抗剂向受试者施用抗原。
[0011] 在第二个方面中，本发明提供一种用于增大受试者中免疫细胞对抗原的亲合力的 方法，所述方法包括联合白介素-4受体（IL-4R)拮抗剂向受试者施用抗原。
[0012] 在第三个方面中，本发明提供一种用于增大受试者中对抗原具有特异性的免疫细 胞的数目的方法，所述方法包括联合白介素-4受体（IL-4R)拮抗剂向受试者施用抗原。
[0013] 在上述方面的一个实施方案中，本发明包括向受试者施用初免剂量和加强剂量， 每种所述剂量包括联合白介素-4受体（IL-4R)拮抗剂向受试者施用抗原。
[0014] 在上述方面的一个实施方案中，所述方法包括向受试者施用初免剂量，其中初免 剂量包括抗原和IL-4R拮抗剂。
[0015] 在上述方面的一个实施方案中，所述方法包括向受试者施用加强剂量，其中加强 剂量包括抗原和IL-4R拮抗剂。
[0016] 在上述方面的一个实施方案中，加强剂量的抗原和IL-4R拮抗剂可依次施用或同 时施用。
[0017] 在上述方面的一个实施方案中，施用初次剂量包括施用编码抗原的多核苷酸，编 码IL-4R拮抗剂的多核苷酸，或两者。
[0018] 在上述方面的一个实施方案中，施用加强剂量包括施用编码抗原的多核苷酸，编 码IL-4R拮抗剂的多核苷酸，或两者。
[0019] 在上述方面的一个实施方案中，初次剂量中多核苷酸中的任何一种或多种可为重 组病毒的组分。
[0020] 在上述方面的一个实施方案中，加强剂量中多核苷酸中的任何一种或多种可为重 组病毒的组分。
[0021] 在上述方面的一个实施方案中，初次剂量的重组病毒为痘病毒。
[0022] 在上述方面的一个实施方案中，加强剂量的重组病毒为痘病毒。
[0023] 在上述方面的一个实施方案中，初次剂量的重组病毒为选自由以下组成的组的痘 病毒：牛痘病毒、减毒牛痘病毒（例如NYVAC)、鸡痘病毒、金丝雀痘病毒和修饰的牛痘安卡 拉（MVA)病毒。
[0024] 在上述方面的一个实施方案中，加强剂量的重组病毒为选自由以下组成的组的痘 病毒：牛痘病毒、减毒牛痘病毒（例如NYVAC)、鸡痘病毒、金丝雀痘病毒和修饰的牛痘安卡 拉（MVA)病毒。
[0025] 在上述方面的一个实施方案中，初次剂量的IL-4R拮抗剂为能够与IL-4Ra结合 并且防止IL-4R信号传导的白介素-4受体a链（IL-4R a)拮抗剂。
[0026] 在上述方面的一个实施方案中，加强剂量的IL-4R拮抗剂为能够与IL_4Ra结合 并且防止IL-4R信号传导的白介素-4受体a链（IL-4R a)拮抗剂。
[0027] 在上述方面的一个实施方案中，初次剂量的IL-4R拮抗剂为缺乏信号肽并且包括 选自以下的一种或多种突变的人白介素-4分子：在残基121上的突变、在残基124上的突 变、在位置123之后一个或多个残基缺失、白介素-4基因的外显子2编码的片段缺失，或其 任何组合。
[0028] 在上述方面的一个实施方案中，加强剂量的IL-4R拮抗剂为缺乏信号肽并且包括 选自以下的一种或多种突变的人白介素-4分子：在残基121上的突变、在残基124上的突 变、在位置123之后一个或多个残基缺失、白介素-4基因的外显子2编码的片段缺失，或其 任何组合。
[0029] 在上述方面的一个实施方案中，初次剂量的IL-4R拮抗剂为包括选自以下突变的 人白介素-4分子：R121D、Y124D、白介素-4基因的外显子2编码的片段缺失，或其任何组 合。
[0030] 在上述方面的一个实施方案中，加强剂量的IL-4R拮抗剂为包括选自以下突变的 人白介素-4分子：R121D、Y124D、白介素-4基因的外显子2编码的片段缺失，或其任何组 合。
[0031] 在上述方面的一个实施方案中，施用包括施用编码抗原的多核苷酸、编码白介 素-4受体拮抗剂的多核苷酸，或两者。
[0032] 在上述方面的一个实施方案中，所述多核苷酸中的任何一种或多种为重组病毒的 组分。
[0033] 在上述方面的一个实施方案中，重组病毒为痘病毒。
[0034] 在上述方面的一个实施方案中，重组病毒为选自由以下组成的组的痘病毒：牛痘 病毒、减毒牛痘病毒（例如NYVAC)、鸡痘病毒、金丝雀痘病毒和修饰的牛痘安卡拉病毒。
[0035] 在上述方面的一个实施方案中，重组病毒瞬时表达受试者中白介素-4受体 (IL-4R)拮抗剂。
[0036] 在上述方面的一个实施方案中，联合白介素-4受体（IL-4R)拮抗剂向受试者施用 抗原减Φ#试者中CD103+、b220+、CD8 α +细朐的数目和/或增加#试者中CDllb+、CD103-、 b220_、CD8 α -细胞。CD103+、b220+、CD8 α + 细胞和 / 或 CDllb+、CD103-、b220_、CD8 α -细 胞可对抗原抗原具有特异性。抗原可为HIV抗原（例如HIV gag、p 〇1和/或env抗原）。 [0037] 在第四个方面中，本发明提供抗原和白介素_4受体（IL-4R)拮抗剂在制备用于诱 导受试者中对抗抗原的特异性免疫应答的药物中的用途。
[0038] 在第五个方面中，本发明提供抗原和白介素-4受体（IL-4R)拮抗剂在制备用于提 高受试者中对抗原具有特异性的免疫细胞的亲合力的药物中的用途。
[0039] 在第六个方面中，本发明提供抗原和白介素-4受体（IL-4R)拮抗剂在制备用于提 高受试者中对抗原具有特异性的免疫细胞的数目的药物中的用途。
[0040] 在第七个方面中，本发明提供抗原和白介素-4受体（IL-4R)拮抗剂，其用于诱导 受试者中对抗原具有特异性的免疫应答。
[0041] 在第八个方面中，本发明提供抗原和白介素-4受体（IL-4R)拮抗剂，其用于提高 受试者中对抗原具有特异性的免疫细胞的亲合力。
[0042] 在第九个方面中，本发明提供抗原和白介素_4受体（IL-4R)拮抗剂，其用于提高 受试者中对抗原具有特异性的免疫细胞的数目。
[0043] 在第四个、第五个、第六个、第七个、第八个和第九个方面的一个实施方案中，抗原 以编码抗原的多核苷酸提供。
[0044] 在第四个、第五个、第六个、第七个、第八个和第九个方面的一个实施方案中，白介 素-4受体拮抗剂以编码白介素-4受体拮抗剂的多核苷酸提供。
[0045] 在第四个、第五个、第六个、第七个、第八个和第九个方面的一个实施方案中，所述 多核苷酸中的任何一种或多种为重组病毒的组分。
[0046] 在第四个、第五个、第六个、第七个、第八个和第九个方面的一个实施方案中，重组 病毒为痘病毒。
[0047] 在第四个、第五个、第六个、第七个、第八个和第九个方面的一个实施方案中，重组 病毒为选自由以下组成的组的痘病毒：牛痘病毒、减毒牛痘病毒（例如NYVAC)、鸡痘病毒、 金丝雀痘病毒和修饰的牛痘安卡拉病毒。
[0048] 在第四个、第五个、第六个、第七个、第八个和第九个方面的一个实施方案中，重组 病毒瞬时表达受试者中白介素-4受体（IL-4R)拮抗剂。
[0049] 在第四个、第五个和第六个方面的一个实施方案中，药物为疫苗。
[0050] 在第四个、第五个和第六个方面的一个实施方案中，药物为包含第一组分和第二 组分的疫苗，其中第一组分包含白介素-4受体（IL-4R)拮抗剂并且第二组分包含抗原，并 且其中第一组分和第二组分用于或配制用于同时或依次向受试者施用。
[0051] 在第七个、第八个和第九个方面的一个实施方案中，抗原和白介素_4受体 (IL-4R)拮抗剂为疫苗的组分。
[0052] 在第四个、第五个、第六个、第七个、第八个和第九个方面的一个实施方案中，疫苗 作为初次剂量、加强剂量或两者用于向受试者施用或配制用于向受试者施用。
[0053] 在第四个、第五个、第六个、第七个、第八个和第九个方面的一个实施方案中，疫苗 在向受试者施用之后能够减少受试者中⑶103+、b220+、CD8 α +细胞的数目和/或增加受 试者中 CDllb+、CD103-、b220_、CD8 α -细胞。CD103+、b220+、CD8 α + 细胞和 / 或 CDllb+、 ⑶103-、b220_、⑶8α-细胞可对抗原抗原具有特异性。抗原可为HIV抗原（例如HIV gag、 pol和/或env抗原）。
[0054] 在第一个、第二个、第三个、第五个、第六个、第八个和第九个方面的一个实施方案 中，免疫细胞为T淋巴细胞。
[0055] 在第一个、第二个、第三个、第五个、第六个、第八个和第九个方面的一个实施方案 中，免疫细胞为⑶8+T淋巴细胞。
[0056] 在第一个、第二个、第三个、第五个、第六个、第八个和第九个方面的一个实施方案 中，免疫细胞为细胞毒性CD8+T淋巴细胞。
[0057] 在上述方面的一个实施方案中，抗原为病毒抗原。
[0058] 在上述方面的一个实施方案中，抗原为人免疫缺陷病毒抗原。
[0059] 在上述方面的一个实施方案中，抗原为选自以下的人免疫缺陷病毒抗原： gpl2〇env、gpl40env、gpl6〇env、pi8、gag、pol、vif、vpr、vpu、tat、rev 和 nef 基因产物，和 其组合。
[0060] 在上述方面的一个实施方案中，抗原为选自以下的人免疫缺陷病毒抗原：gag、pol 或env基因产物，或其任何组合。
[0061] 在上述方面的一个实施方案中，抗原为选自组合的gag/pol，或组合的gag/pol/ env基因产物的人免疫缺陷病毒抗原。
[0062] 在上述方面的一个实施方案中，抗原和白介素_4受体拮抗剂依次向受试者施用。
[0063] 在上述方面的一个实施方案中，抗原和白介素_4受体拮抗剂同时向受试者施用。
[0064] 在上述方面的一个实施方案中，抗原和白介素_4受体拮抗剂作为初免剂量向受 试者施用。
[0065] 在上述方面的一个实施方案中，IL-4R拮抗剂为能够与IL-4Ra结合并且防止 IL-4R信号传导的白介素-4受体α链（IL_4Ra)拮抗剂。
[0066] 在上述方面的一个实施方案中，IL-4R拮抗剂为缺乏信号肽并且包括选自以下的 一种或多种突变的人白介素-4分子：在残基121上的突变、在残基124上的突变、在位置 123之后一个或多个残基的缺失、白介素-4基因的外显子2编码的片段的缺失，或其任何组 合。
[0067] 在第十个方面中，本发明提供一种组合物，其包含：
[0068] ⑴抗原和/或编码抗原的多核苷酸；以及
[0069] (ii)白介素-4受体（IL-4R)拮抗剂和/或编码IL-4R拮抗剂的多核苷酸。
[0070] 在第十一个方面中，本发明提供抗原和白介素-4受体（IL-4R)拮抗剂在制备用于 预防或治疗受试者感染的药物中的用途。
[0071] 在第十二个方面中，本发明提供抗原和白介素-4受体（IL-4R)拮抗剂在制备用于 针对感染向受试者进行疫苗接种的药物中的用途。
[0072] 在第十三个方面中，本发明提供抗原和白介素-4受体（IL-4R)拮抗剂，其用于预 防或治疗受试者感染。
[0073] 在第十四个方面中，本发明提供抗原和白介素_4受体（IL-4R)拮抗剂，其用于针 对感染向受试者进行疫苗接种。
[0074] 在第^^一个方面的一个实施方案中，药物为疫苗。
[0075] 在第十三个方面的一个实施方案中，抗原和白介素_4受体（IL-4R)拮抗剂为疫苗 的组分。
[0076] 在第十一个和第十三个方面的一个实施方案中，疫苗包含第一组分和第二组分， 其中第一组分包含白介素-4受体（IL-4R)拮抗剂并且第二组分包含抗原，并且其中第一组 分和第二组分用于，或配制用于同时或依次向受试者施用。
[0077] 在第十一个和第十三个方面的一个实施方案中，疫苗用于作为初次剂量、加强剂 量或两者向受试者施用或配制用于向受试者施用。
[0078] 在第十二个方面的一个实施方案中，药物用于作为初次剂量、加强剂量或两者向 受试者施用或配制用于向受试者施用。
[0079] 在第十四个方面的一个实施方案中，抗原和白介素_4受体（IL-4R)拮抗剂用于作 为初次剂量、加强剂量或两者向受试者施用，或配制用于向受试者施用。
[0080] 在第十一个和第十三个方面的一个实施方案中，疫苗在向受试者施用之后能够減 Φ#试者中CD103+、b220+、CD8 α +细朐的数目和/或增加 #试者中CDllb+、CD103-、b220-、 CD8a -细胞。CD103+、b220+、CD8a + 细胞和 / 或〇01讣+、〇0103-4220-、〇08(1-细胞可对 抗原抗原具有特异性。抗原可为HIV抗原（例如HIV gag、pol和/或env抗原）。
[0081] 在第十二个和第十四个方面的一个实施方案中，所述接种能够减少受试者中 CD103+、b220+、CD8a +细胞的数目和 / 或增加受试者中 CDllb+、CD103-、b220-、CD8a -细 胞。0)103+几220+、0)8(1+细胞和/或〇)11&+、0)103-几22〇-、0)8