脂质体悬浮液及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明关于一种脂质体悬浮液的制备方法，尤指一种可降低粒径分布、可单一孔 径过滤、且可大规模生产的脂质体悬浮液的制备方法；本发明亦关于一种由前述制备方法 所制得的脂质体悬浮液，其中脂质体悬浮液的脂质体的平均粒径介于IOnm至200nm，且粒 径分布指数介于0. 01至0. 5 ;本发明亦关于一种前述脂质体悬浮液用于包载药物的方法及 其方法所获得的含药的脂质体悬浮液。
【背景技术】
[0002] 脂质体具有由1层以上的脂质双层所包围的内相的微细闭合小胞，可将水溶性物 质保持于内相中，并将脂溶性物质保持于脂质双层中。脂质体可作为药物、化合物、遗传物 质等物质的载剂，并保护包覆于内的物质以避免被体内酶破坏，并于特定的部位将所包覆 的物质由脂质体中释放出来以达到传输或治疗的目的。目前临床研宄认为若通过脂质体应 用于药物传递，以单层脂质体（unilamellarvesicles,UVs)包载药物能有效将药物传输至 肿瘤组织或肝脏细胞等，达到靶向治疗的效果。
[0003] 现有技术制备脂质体的方法包括有水合法（hydration)、超声波处理法 (ultrasonification)、逆相蒸发法（reverse-phaseevaporation)、界面活性剂处理法 (surfactanttreatment)、孑L挤压法（poreextrusion)以及高压均质法（highpressure homogeni-zation)等，其中如美国专利第6596305号所揭示，其是将脂质溶于与水互溶的 有机溶剂后，直接加入水相溶液中并持续搅拌，形成脂质体悬浮液。此方法所配制的脂质 溶液浓度在〇. 03~0. 8mg/ml，浓度极低不利于大规模生产，且搅拌过程须维持在高转速下 (2000rpm)操作；此外需重复改变有机溶剂的比例才能筛选出最适当的脂质体粒径大小， 过程繁复，所得的脂质体平均粒径大，约为200纳米（nm)至300nm。以上数项缺点如高转 速、繁复过程等均不利于大规模量产制造。
[0004] 如美国专利第5000887号所揭示，其是以与水互溶的有机溶剂（例如乙醇）溶解 脂质，制备脂质溶液，将水相溶液慢慢加入脂质溶液中，再利用逆渗透（reverseosmosis) 或是蒸发（evaporation)等方式移除脂质体悬浮液中的有机溶剂以提高水与溶剂的比例， 所制得的脂质体的粒径虽小于等于300nm，但其制备方法复杂且繁琐，过程中须不断去除有 机溶剂，不利于大规模生产。
[0005] 如美国专利第4687661号所揭示，其是以与水互溶、非挥发性的有机溶剂（例如 polyhydricalcohols、glycerinesters、benzylalcohols等）溶解脂质，直接加入水相 溶液中混合，搅拌后形成脂质体悬浮液。此专利所制得的脂质体粒径大小受混合搅拌的方 式直接影响，所欲的粒径愈小，便需愈剧烈或高频率的搅拌震荡，例如：若以机械搅拌的搅 拌叶片混合方式则制得大尺寸的脂质体，若使用高剪切力的方式（例如均质机）则制得脂 质体的粒径较小，如需制备更小粒径的脂质体（200nm以下），得需使用超声波或是高压均 质乳化的方式才有机会达到。此方法所选用的有机溶剂虽属无毒性，但工艺中大多需要高 温操作（90°C以上）才能溶解或是水合脂质，且即便制备过程处于高温，脂质于溶剂中的溶 解度仍然不佳，导致后续形成的脂质体粒径偏大（平均粒径约500nm至微米（ym)不等）， 且粒径分布范围广，若欲使用于临床，必须再进一步处理降低其粒径并均匀化粒径分布，此 方法不仅花费大量时间且产出质量及效果不佳，亦不适合用于工业量产制备脂质体。
[0006] 如美国专利第5077057号所揭示，其是以非质子性溶剂与低级烷醇类的混合溶剂 溶解药物及脂质，再以每分钟〇. 5毫升（ml/min)至lOml/min的注入速度以溶解于混合溶 剂的药物及脂质注入水相溶液，并同时搭配250rpm至750rpm高转速搅拌以形成脂质体悬 浮液，此方法所制得的脂质体粒径分布广，其工艺中所使用的注入速度慢，且所同时使用的 皆是对人体有危害的有机溶剂，如：二甲基亚砜（dimethylsulfoxide,DMSO)、二甲基甲酰 胺（dimethylformamide，DMF)或二甲胺（dimethylamine，DMA)等，不仅所制得的脂质体不 适合临床使用，其工艺更是难以放大且耗时费力，不适合大规模生产使用。
[0007] 如美国专利第5008050号所揭示，其是以氯仿（chloroform)溶解所选的混合脂 质，然后蒸发去除氯仿而得脂质膜（lipidfilm)，加入水性溶液进行水合作用，形成多层脂 质体（multilamellarvesicles,MLVs)，再将该多层脂质体经挤压通过具有两片堆叠的聚 碳酸酯滤膜的过滤装置，其中脂质体粒径大小取决于滤膜孔径的选择，且必须再加上施以 IOOpsi(镑/平方英寸）至700psi的高压，才能达到20ml/min至60ml/min的过滤流速，以 解决滤膜阻塞的问题。由于高压操作相对危险、装置设计复杂，且制备过程须先制得MLVs， 再经由挤压过滤方获得小单层脂质体（smallunilamellarvesicles,SUVs)，加上过滤流 速慢而耗时冗长，因此并不适合用于放大工艺。
[0008] 如中国台湾专利第1391149号所示，其亦是以氯仿溶解脂质混合物后，再蒸发以 去除氯仿以得脂质膜（lipidfilm)，接着加入水性基质并于71°C至86°C下进行水合以获 得多层脂质体（MLVs)。为了降低脂质体的粒径，先将上述的脂质体悬浮液进行冷冻解冻或 超声波震荡以获得大单层脂质体（largeunilamellarvesicles,LUVs)，再将大单层脂质 体进行孔挤压处理，其中孔挤压处理须依序通过三种孔径的聚碳酸脂薄膜（200nm、100nm 及50nm)，以获得小单层脂质体（SUVs)。由于此方法的操作温度较高，且须经过前处理将 多层脂质体制成大单层脂质体，再将大单层脂质体经过三种孔径滤膜的孔挤压处理后才能 制得小单层脂质体，操作步骤繁复进而拉长制备时间，加上制备成本高，亦不适合大规模生 产。
[0009] 如中国台湾第1250877号所揭示，其是使用醇溶剂溶解脂质，形成脂质溶液，再 直接加入水相溶液中混合形成脂质体悬浮液，接着将该悬浮液通过操作压力为40psi至 140psi且孔径为IOOnm的挤压处理重复挤压10次后，再以50nm的过滤器重复挤压10次， 并以蔗糖水溶液来透析上述的过滤液，由于此方法因起始混合溶液时形成粒径较大的多层 脂质体（MLVs)，故须以较高的压力挤压过滤，且制备过程须使用两种不同孔径的滤膜经两 阶段不同滤膜孔径的挤压，才能得到大单层脂质体（LUVs)或小单层脂质体（SUVs)，因此制 备成本相对较高。
[0010] 综上所述，现有技术制备脂质体的制备具过程繁杂、需高压操作、需多次且不同孔 径的滤膜重复过滤、制备温度较高而使生产成本提高，及耗时冗长等缺点，因此并不适合用 于脂质体的工业大规模量产。
【发明内容】
[0011] 鉴于现有技术制备脂质体的制备过程繁杂、需高压操作、需多次且不同孔径的 滤膜重复过滤、或制备温度较高而使生产成本提高、耗时冗长，且所制得的脂质体的平 均粒径及分布系数大等缺点，故本发明的目的在于提供一种适合作为工业量产脂质体 悬浮液的制备方法，其中通过注入装置调控流速等参数制得单层脂质体（unilamellar vesicles，UVs)，并使用单一孔径滤膜过滤等简易的制备步骤及条件，以获得平均粒径小且 分布系数小（亦即粒径单一分布）而适于供作临床使用及大量制造的脂质体悬浮液。
[0012] 为达上述目的，本发明提供一种脂质体悬浮液的制备方法，其包括：
[0013] 提供组合物，所述的组合物是由磷脂化合物、胆固醇（cholesterol)或其衍生的 盐类、聚乙二醇衍生物所组成的，其中磷脂化合物、胆固醇或其衍生的盐类、聚乙二醇衍生 物的摩尔比例为3~50 :1~50 :1 ;
[0014] 将所述的组合物与醇类溶剂混合以形成混合物，且所述的组合物于醇类溶剂的摩 尔浓度介于2mM(mmol.L〇至300mM;以及，
[0015] 将所述的混合物以注入装置注入于热状态的水相溶液中，