一种路路通酸或熊果酸纳米颗粒及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种路路通酸纳米颗粒或熊果酸纳米颗粒及其制备方法，该路路通酸纳米颗粒或熊果酸纳米颗粒与原化合物路路通酸或熊果酸相比其水溶性大幅提高，同时该路路通酸纳米颗粒或熊果酸纳米颗粒与路路通酸或熊果酸相比提高了细胞通透率，并且该路路通酸纳米颗粒或熊果酸纳米颗粒具有抗肿瘤细胞增殖特性。本发明所述的纳米颗粒是具有抗肿瘤细胞增殖作用的药物原料、药物中间体。
【背景技术】
[0002]肿瘤是危害人类健康的重大疾病，其中天然产物中三萜及其同系物的抗肿瘤活性得到研宄者的重视，近年来相继报道了许多三萜化合物的药理活性，包括抗炎、抗癌、抗病毒和抗HIV等多种药理作用，三萜被视为很有潜力的抗肿瘤先导化合物。三萜酸如路路通酸(BEA，又称桦木酮酸)和熊果酸(URA)具有较明显的抑制肿瘤生长的活性，在抗肿瘤细胞毒方面已经表现出开发成新型抗肿瘤药物的潜力。
[0003]但是，路路通酸或熊果酸的共同特点是水溶性很差，在体外活性试验时一般不溶于水，由于溶解性差等因素导致它们不利于制备成药物，或制成的药物吸收很差、生物利用度低，如果要进一步开发成治疗肿瘤疾病方面的药物会受到很多限制。
[0004]因此，本发明把这两种三萜酸制备成水溶性纳米颗粒。自然界有许多天然形成的纳米材料，人类在长期的生产生活实践中也无意识地使用到了各种纳米材料。某些分子结构具有一端带有极性集团能和水形成氢键的亲水而另一端为非极性疏水的两亲分子特征。在溶液表面形成定向排列的吸附层，在水溶液中可以聚集形成多种形式的分子有序组合体系，在稀溶液中可形成胶团或胶束。疏水基结合在一起形成内核，亲水基团形成外层，这样可以达到疏水基逃离水环境、而亲水基和水结合的要求。
【发明内容】
[0005]很多五环三萜化合物虽然有活性，但使用原型三萜化合物无法简单的同时解决其溶解度或粒度问题，从而使它们的使用存在问题，无法进一步应用，本发明的目的之一是为了解决上述路路通酸或熊果酸等五环三萜酸难溶于水和由于吸收不足导致生物利用度低等使用局限，为了解决这类三萜酸难溶于水、细胞通透性差、生物利用度低等技术问题而提供一种路路通酸纳米颗粒或熊果酸纳米颗粒及其制备方法，该路路通酸纳米颗粒或熊果酸纳米颗粒能大大增强水溶性和细胞通透性，克服低吸收和生物利用度低的技术问题。同时由于使用食品级化合物作为壁材不会带来额外的毒性。
[0006]本发明的目的之二在于提供上述的一种路路通酸纳米颗粒或熊果酸纳米颗粒的制备方法。
[0007]本发明的技术方案一种路路通酸纳米胶囊颗粒或熊果酸纳米胶囊颗粒，以五环三萜化合物路路通酸或熊果酸为芯材，以明胶、β-环糊精、甜茶苷、可溶性淀粉、甜叶菊苷、茶皂苷中的一种或两种以上的混合物为壁材，芯材和壁材的量，按质量比计算，芯材:壁材为1:5-100 ；
当以明胶、环糊精、甜茶苷、可溶性淀粉、甜叶菊苷、茶皂苷中两种以上的混合物为壁材时，所述的壁材优选为甜茶苷、甜叶菊苷或茶皂苷与明胶进行混合所得的混合物，混合物中原料的混合比，按质量比计算，甜茶苷、甜叶菊苷或茶皂苷:明胶为1-50:1 ;
或优选为甜茶苷、甜叶菊苷或茶皂苷与环糊精进行混合所得的混合物，混合物中原料的混合比，按质量比计算，甜茶苷、甜叶菊苷或茶皂苷:β -环糊精为1-50:1 ;
或优选为甜茶苷、甜叶菊苷或茶皂苷与可溶性淀粉进行混合所得的混合物，混合物中原料的混合比，按质量比计算，甜茶苷、甜叶菊苷或茶皂苷与可溶性淀粉为1-50:1。
[0008]上述明胶、环糊精、甜茶苷、可溶性淀粉、甜叶菊苷、茶皂苷中的一种或两种以上的混合物均为亲水胶体，具备乳化性，易溶于水等特点。
[0009]上述的一种路路通酸纳米胶囊颗粒或熊果酸纳米胶囊颗粒的制备方法，采用超声波高速匀浆机法或高能球磨法制备路路通酸纳米胶囊颗粒或熊果酸纳米胶囊颗粒，具体如下:
(一)、高速匀浆法制备，具体包括如下步骤:
(1)、将芯材路路通酸或熊果酸加入乙醇或甲醇中，超声处理混合均匀后，得到质量百分比浓度为5-30%的芯材乙醇或甲醇溶液；
(2)、将壁材食品级明胶、β-环糊精、甜茶苷、可溶性淀粉、甜叶菊苷或茶皂苷溶于蒸馏水中，超声处理混合均匀后，得到质量百分比浓度为10-40%的壁材水溶液；
(3)、将步骤(I)所得的质量百分比浓度为5-30%的芯材乙醇或甲醇溶液和步骤(2)所得的壁材水溶液，按质量比计算，质量百分比浓度为5-30%的芯材乙醇或甲醇溶液中的芯材:壁材水溶液中的壁材为1:5-1:100的比例，将质量百分比浓度为5-30%的芯材乙醇或甲醇溶液及壁材水溶液混合后，经超声波高速匀浆机控制转速为10000-18000 rpm进行匀浆5_30min，然后采用旋转蒸发仪或快速溶剂真空蒸发仪(RAPIDVAP，Labconco, KansasCity, MO，USA)减压除去乙醇或甲醇等有机溶剂，控制温度在50-80°C之间，快速溶剂真空蒸发仪速度档为12-15，真空度120 - 350mbar,加热时间为45_120min喷雾干燥，喷雾干燥机进行干燥条件为:进口温度160-185 °C，入料流量速度为10-30 mL/min，喷雾压力150-190KPa，最终得到路路通酸纳米颗粒或熊果酸纳米颗粒。
[0010](二)、高能球磨法
将芯材和壁材置于研磨碗中，采用高能球磨机，在粉碎力的作用下，固体料块或粒子发生变形进而破裂，产生更微细的颗粒，优选采用FRITSCH加强型行星式球磨机，premiumline Planetary Mills, PULVERISETTE 7, Germany，控制进行研磨转速为 500-1100 r/min，球磨时间3-15min，最终得路路通酸纳米颗粒或熊果酸纳米颗粒。
[0011]上述所得的路路通酸纳米胶囊颗粒或熊果酸纳米胶囊颗粒，与三萜化合物相比，其溶解度增加400倍以上，更容易渗透细胞壁，同时吸收增加3倍以上。因此该路路通酸纳米胶囊颗粒或熊果酸纳米胶囊颗粒将增加了细胞通透性和生物利用度，从而导致对治疗癌症疗效的提尚。
[0012]上述所得的路路通酸纳米胶囊颗粒或熊果酸纳米胶囊颗粒，其平均粒径〈lOOnm。
[0013]上述所得的路路通酸纳米胶囊颗粒或熊果酸纳米胶囊颗粒，路路通酸纳米胶囊颗粒在水中的溶解度是74(^g/mL，熊果酸纳米胶囊颗粒在水中的溶解度为69(^g/mL。与BEA与URA在水中自身溶解度小于1.7Pg/mL相比，路路通酸纳米胶囊颗粒和熊果酸纳米胶囊颗粒比单独的路路通酸和熊果酸在水中的溶解度均增加400倍以上。路路通酸纳米胶囊颗粒和熊果酸纳米胶囊颗粒溶解在水中均能得到透明的水溶液。其原因是本发明选用的壁材能起到的增加路路通酸和熊果酸在水中的溶解度。
[0014]上述所得的路路通酸纳米胶囊颗粒或熊果酸纳米胶囊颗粒对癌细胞生长的抑制作用测试结果表明，路路通酸纳米胶囊颗粒或熊果酸纳米胶囊颗粒对人肠癌细胞HT-29，人前列腺癌细胞DU145，人乳腺癌细胞MDA-MB-231这三种肿瘤细胞细胞均有抑制作用。上述所得的路路通酸纳米胶囊颗粒或熊果酸纳米胶囊颗粒有较强的抗肿瘤细胞生长活性。
[0015]上述所得的路路通酸纳米胶囊颗粒或熊果酸纳米胶囊颗粒的细胞通透率进行测试的结果表明，路路通酸纳米胶囊颗粒或熊果酸纳米胶囊颗粒通过单层细胞比路路通酸或熊果酸体系具有更高的通透率。通过Caco2实验证实其对细胞通透性提高了。路路通酸纳米胶囊颗粒或熊果酸纳米胶囊颗粒显示通透系数与路路通酸纳米胶囊颗粒或熊果酸相比提高了 3倍以上。说明路路通酸纳米胶囊颗粒或熊果酸纳米胶囊颗粒通过单层细胞也比路路通酸或熊果酸体系具有更高的通透率。药物对细胞通透性高意味着药物更容易通过小肠壁从而