一种多肽及其衍生物在制备抗肺纤维化药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种多肽及其衍生物在制备抗肺纤维化药物 中的应用。
【背景技术】
[0002] 组织纤维化是内外致病原引起的组织损伤的共同后果，也是多种感染和非感染性 炎症疾病的基本病理改变。组织纤维增生存在于呼吸系统疾病、循环系统疾病、肾脏及肝脏 疾病、慢性胰腺炎、系统性红斑狼疮及黄斑变性等，而且往往会加重组织负担。组织纤维化 几乎累及人体所有器官和系统，是导致大量患者死亡的主要原因，严重威胁人类健康。根据 美国有关统计资料证明，全球范围内因各种疾病而致死的患者中，接近45%可以归为由各 种组织纤维化造成的，因此组织纤维化在人体各主要器官的发生和发展过程中起着重要作 用。其中肺纤维化疾病是由于有毒物质、自发免疫疾病、药物副作用、感染、严重外伤等上百 种不同原因引起的肺部炎症，肺泡持续性损伤、细胞外基质反复破坏、修复、重建并过度沉 积，导致正常肺组织结构改变、功能丧失的一类疾病。目前，组织纤维化仍然没有针对性的， 安全有效的治疗方案。
[0003] 肺纤维化是肺部最为严重的一种病理状态，其病理改变大多表现为最初的下呼吸 道炎症，以及肺泡上皮细胞和血管内皮细胞损伤，伴有成纤维母细胞和II型肺泡细胞增 殖、细胞因子释放，细胞外基质蛋白和胶原沉积，最终引起肺部改变。肺纤维化患者肺部肺 泡逐渐被纤维性物质取代，导致肺组织变硬变厚，肺脏气体交换能力逐步丧失，导致患者不 同程度缺氧而出现呼吸困难，最后因呼吸衰竭而死亡。肺纤维化是呼吸病四大病种之一， 病因复杂，发病机制不明，目前已有的治疗肺纤维化的药物和方法十分有限，且疗效差强人 意，预后极差，5年生存率仅为50%。
[0004] 近年来，胶原的清除是肺纤维化治疗的热点之一。自噬能清除细胞内冗余、错误 折叠蛋白，特别是由组织损伤而造成的细胞内胶原的堆积，维持基因组稳定性，抑制纤维化 的发生和发展。自噬还被认为是另一种形式的程序性细胞死亡，可以诱导损伤细胞进行清 除，从而减少细胞碎片在肺组织的堆积。P62是反映自噬动态过程的重要指标，作为"货车 蛋白"，P62蛋白结构域中的泛素相关结构域（Ubiquitin associated domain, UBA)能与泛 素化蛋白（Ubiquitin，Ub)结合，并把它们募集到自噬体膜上与LC3结合，这个过程主要通 过P62蛋白的LIR(LC3-Interacting Region, LIR)结构域与LC3结合，介导泛素化蛋白的 降解，P62的表达水平也随之降低。自噬受到抑制时，P62与其结合的泛素化蛋白不能及时 降解，在胞浆内堆积而表达升高。在肺纤维化组织中TRB3蛋白（Tribbles 3)呈现高表达 状态，而且TRB3蛋白能与P62蛋白发生相互作用，进而阻断其他泛素化蛋白与P62蛋白的 结合，造成自噬通路被抑制，细胞内胶原不能得到清除，加重肺纤维化病理改变。因此，研宄 和开发TRB3蛋白的抑制剂或者能阻断其与P62蛋白结合的物质，具有很好的制备预防或治 疗肺纤维化药物的潜力。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题是针对目前缺乏有效的TRB3蛋白抑制剂的现状，提 供一种能特异性结合TRB3蛋白的多肽或其衍生物在制备预防或治疗肺纤维化药物中的应 用。
[0006] 为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案是：一种可特异性结合TRB3蛋白的 多肽或其衍生物在制备预防或治疗肺纤维化的药物中的应用，所述可特异性结合TRB3蛋 白的多肽是如序列表中SEQ ID NO:l，SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3中任意一条所示的多 肽；所述可特异性结合TRB3蛋白的多肽的衍生物为可特异性结合TRB3蛋白的多肽与细胞 穿膜肽接连所形成的嵌合肽。
[0007] 本发明中所述的"肺纤维化"是指由于有毒物质、自发免疫疾病、药物副作用、感 染、严重外伤等多种原因引起的肺部炎症特别是肺泡壁炎症，肺泡持续性损伤，细胞外基质 反复破坏、修复、重建并过度沉积即肺间质形成大量纤维结缔组织和肺结构紊乱，导致正常 肺组织结构改变、功能丧失的一类疾病。其中，所述的肺纤维化通常为原发性（特异性）的 肺纤维化，即原因不明的肺纤维化；也可以为继发性的肺纤维化，即是继发于多种病因的肺 纤维化。所述的病因可以为：肺感染、外伤、粉尘、放射线或者药物（例如博莱霉素）。所述肺 纤维化可以表现为：肺部炎症尤其是间质性肺炎、肺功能退化例如慢性阻塞性肺病（COPD) 和肺损伤（如肺间质形成大量纤维结缔组织和肺结构紊乱）中的一种或多种。
[0008] 本发明所述的可特异性结合TRB3蛋白的多肽如序列表SEQ ID NO: 1(其氨基 酸序列为：Ser-Leu-Ser-Gln-Met-Leu-Ser-Met)，SEQ ID NO: 2 (其氨基酸序列为：Gl y-Gly-Trp-Leu-Thr-Arg-Leu-Leu-Gln-Thr-Lys)和 SEQ ID N0:3(其序氨基酸列为： Ile-Gly-Ala-Ala-Leu-Asp-Thr-Ile)中任意一条所示的多肽，可适当引入氨基酸替换，缺 失或添加，只要改变后的氨基酸序列仍然能够形成与TRB3蛋白特异性结合的多肽且该多 肽仍然保持改变前的活性即可。
[0009] 本发明所述的细胞穿膜肽为本领域常规的细胞穿膜肽，只要所述细胞穿膜肽能辅 助将所述多肽送入细胞以发挥作用即可，一般而言，所述的细胞穿膜肽为由10~30个氨基 酸组成的短肽分子。所述的细胞穿膜肽较佳地为：HLYVSPW(如序列表中SEQ ID N0:4所示， 该细胞穿膜肽被命名为pep2肽，简称pep2)、HIV_1病毒反转录激活因子（Trans-activator transcription，Tat)蛋白的 TAT 肽（YGRKKRRQRRR，其氨基酸序列如 SEQ ID N0:5 所示， 简称TAT肽）、果蝇触角同源异型蛋白的转录因子Antp肽（RQIKIWFQNRRMKWKK，其氨基 酸序列如SEQ ID N0:6所示，简称Antp肽）、p印-1肽（KETWWETffffTEWSQPKKKRKV，其氨基 酸序列如3￡〇10勵:7所示）、]\0^肽（641^11^11^463了]\?^13〇?1(31(服￥，其氨基酸序列如 SEQ ID:8所示）和R⑶肽（Arg-Gly-Asp)(其氨基酸序列如SEQ ID N0:9所示）中的任 一种或多种。所述的多肽衍生物较佳地是将细胞穿膜肽的C端（所述的细胞穿膜肽较佳 地为P印2肽，TAT肽或Antp肽）连接在序列表中SEQ ID NO: 1，SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO:3中任意一条所示的多肽后所形成的嵌合肽。所述的细胞穿膜肽较佳地连接在上述多 肽的N端或C端，更佳地为上述多肽的N端。所述嵌合肽的氨基酸序列较佳地如序列表中 SEQ ID NO: 10 (其氨基酸序列为：HLYVSPWGGSLSQMLSM)，SEQ ID NO: 11 (其氨基酸序列为： HLYVSPWGGGGWLTRLLQTK)、SEQ ID N0:12(其氨基酸序列为：HLYVSPWGGIGAALDTI)、SEQ ID N0:13(其氨基酸序列为：YGRKKRRQRRRGGGGWLTALLQTK)和SEQ ID N0:14(其氨基酸序列为： RQIKIWFQNRRMKWKKGGGGWLTRLLQTK)中任一条所示。本发明所述多肽及其衍生物作为活性成 分用于制备预防或治疗肺纤维化的药物。其中，所述的预防或治疗肺纤维化的药物中包含 预防或治疗有效量的本发明所述多肽及其衍生物中的一种或多种，其中，"预防或治疗有效 量"是指在给予所需对象足以有效预防或治疗本文所述的疾病或病症的化合物的量。虽然 构成"预防或治疗有效量"的化合物的量将根据化合物、病症及其严重度、以及欲治疗所需 对象的年龄而变化，但可由本领域技术人员以常规方式确定。本发明所述的药物在治疗时 的使用剂量较佳地为〇. 1~15mg/kg，更佳地为5~10mg/kg，优选地为5mg/kg，给药次数较 佳地为一天一次或数次。
[0010] 所述可特异性结合TRB3蛋白的多肽或其衍生物可以和药学上可接受的载体制备 预防或治疗肺纤维化药物。其中所述的药学上可接受的载体可根据药物剂型进行常规选 择，例如填充剂、稀释剂等。在该药物中，所述可特异性结合TRB3蛋白的多肽或其衍生物可 以作为单一活性成分或者与其他具有预防或治疗肺纤维化活性的化合物联合作为活性成 分。
[0011] 本发明所述的预防或治疗肺纤维化的药物剂型没有特别限制，为本领域常规剂 型，较佳地是固体、半固体或液体，也可以是水溶液、非水溶液或混悬液，更佳地是片剂、胶 囊、颗粒剂、注射剂或输注剂。所述药物的给药途径为本领域常规的给药途径，较佳地为注 射给药或口服给药。其中所述注射给药的方式较佳地包括：静脉注射、肌肉注射、腹腔注射、 皮内注射或皮下注射途径。
[0012] 本发明所述"预防"是指在可能的肺纤维化因素的存在下，使用后防止或降低肺纤 维化的产生。本发明所述"治疗"