含有病毒的配制物及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物学活性材料如基于病毒的材料（例如病毒、病毒颗粒、病毒疫 苗……）的配制物，或者更精确地，涉及适于其贮存的配制物的领域。本发明还涉及这种配 制物的制备。更精确地，本发明涉及一种配制物，其包含（i)基于病毒的材料，（ii)选自聚 乙烯吡咯烷酮及其衍生物的至少一种聚合物，（iii)至少一种糖，（iv)至少两种不同的氨 基酸，（V)至少两种药物可接受的盐，其中至少一种所述盐是磷酸盐，及任选地，（Vi)药物 学可接受的缓冲液。更特别地，本发明的配制物适于干燥加工，更特别是冷冻干燥加工。本 发明进一步涉及获得的干燥产物，及更特别是获得的冷冻干燥的产物。本发明的配制物和 干燥产物可用作疫苗以预防和/或治疗疾病如癌症、自身免疫疾病和感染性疾病。
[0002] 发明背景
[0003] 在例如制药工业中使用的生物学活性材料的贮存和运输存在问题，因为这些材料 容易降解，特别是热降解。特别地，这在生物学活性材料如疫苗的情况中确实如此，所述疫 苗可在世界范围内分布，并且因此需要根据分布的国家而经受不同温度或者经受转运期间 的温度变化。这进一步限制了所述生物学材料在基础设施有限的发展中国家的分布。
[0004] 基于病毒的材料，包括病毒、病毒颗粒、病毒疫苗的治疗活性要求在贮存和/或运 输期间保持其结构完整性，以使其具有感染性和/或生物学活性。
[0005] 基于病毒的材料的结构完整性在配制过程中通常被损害，因此妨碍其治疗应用。 所述治疗活性进一步要求病毒滴度丧失及特别是感染性滴度丧失是有限的。
[0006] 因此开发新的方法或配制物以使用于工业化应用如疫苗的生物学活性材料稳定、 改善这些生物学材料的贮存和运输能力是制药工业的持续目标。
[0007] 已经提出的一种方案是将生物学活性材料维持在特定温度范围内，特别是在较低 温度，即低于〇°C，特别是直至-30°c及更优选直至-80°c。这种超低温贮存不仅非常昂贵， 而且产生显著的贮存、转运和临床应用的不便。因此，开发可以在冷藏条件贮存的配制物是 必需的。
[0008] 根据一种选择，已经提议所述生物学活性材料与动物或人来源添加剂，如白蛋白、 蛋白胨、明胶或尿素交联明胶，一起配制。然而，这些成分的使用由于安全性问题而受限，如 过敏反应的危险或感染性物质（例如BSE (牛海绵状脑病））污染或传播的危险。此外，这 种方案通常是昂贵的，因此与工业化生产不相容。
[0009] 此外，假设基于病毒的材料当以液体形式在冷藏条件下贮存很长时间不保持其感 染性。结果，关于在冷藏条件下以液体形式配制和贮存病毒尚无报道的研宄。因此，仍需要 长期贮存稳定的病毒制备物配制物。
[0010] 另一选择是以干燥形式保存生物学活性材料，特别是基于病毒的材料。在可利用 的干燥生物材料的技术中，冷冻干燥（也称作冻干法）代表生产生物学药物如疫苗的关键 步骤。冷冻干燥使得干燥的生物学产物在大约4°C -8°c是稳定的，及在一些情况中在直至 大约25°C是稳定的。冻干法已经广泛用于改良各种病毒疫苗和重组蛋白质产物的稳定性。
[0011] 冷冻干燥方法包括以下连续步骤，冷冻生物学材料的溶液或悬浮液及随后进行初 级和次级干燥步骤（参见Adams, 2007, Methods Mol. Biol. 368, 15-38)。基本上，这种技术 基于水在零下温度在真空下的升华而无溶液熔化。然而，水蒸气从冷冻的生物学材料中的 扩散速率非常低，因此该程序很耗时。此外，冷冻和干燥阶段引入胁迫例如盐浓度、沉淀/ 结晶、剪应力、极端pH、通过冷冻干燥方法保留的残余水分……），其迫使生物学材料经历明 显的化学和物理改变，及对于一些生物学材料如基于病毒的材料造成极大损害。因此适合 的配制物以在干燥期间及有利地进一步在贮存和/或运输期间保存该生物学活性材料是 必需的。
[0012] 现有技术领域提供了用于冷冻干燥生物学材料、更精确地是基于病毒的材料的配 制物的实例。
[0013] 为了限制脊髓灰质炎病毒制备物的感染性滴度丧失，W089/06542提议在37°C在 存在由10%海藻糖作为唯一防护剂的稳定化溶液的条件下干燥病毒原液。然而，感染性滴 度的下降仍很大且高于对非干燥的疫苗的观测结果。
[0014] EP 0 872 249描述了重组病毒载体制备物，其包含谷氨酸或其钠盐和葡萄糖的组 合。
[0015] WO 95/10601揭示了水性重组病毒溶液，其包含糖、高分子量结构添加剂、氨基酸、 缓冲液和水。
[0016] WO 03/053463揭示了痘苗病毒配制物，其包含蔗糖、葡聚糖、谷氨酸和无磷酸盐的 缓冲液。
[0017] WO 2005/066333描述了一种病毒组合物，其包含尿素、糖、盐、缓冲液、分散剂以及 必需和非必需氨基酸的混合物。
[0018] WO 2007/056847揭示了含有病毒的配制物，其包含蔗糖、山梨糖醇、聚乙烯吡咯烷 酮、尿素、TRIS缓冲液、谷氨酸一钠及另一氨基酸如精氨酸、丙氨酸、丝氨酸或甘氨酸。
[0019] W02008/114021和W02011/121306描述了病毒组合物，其包含聚乙烯亚胺化合物， 任选地，与一或多种糖组合。
[0020] 然而，仍需要一种新的配制物，使得可以稳定生物学材料，特别是基于病毒的材 料，使得可以工业化应用、贮存而不影响产物的生物学活性，更特别是避免病毒滴度丧失。
[0021] 本发明提供了含有基于病毒的材料的配制物，更特别是适于冷冻干燥的水性配制 物。根据优选的实施方案，本发明的配制物在如后文定义的长期稳定性测试中，更特别是在 贮存期间在温度高于〇°C，特别是在大约4°C -30°c之间，优选在大约4°C -25°c之间，更优选 在大约2°C -8°C之间及更优选在大约4°C -5°C之间（例如冷藏温度）是稳定的。
【发明内容】
[0022] 配制物
[0023] 根据第一个实施方案，本发明涉及一种配制物，其包含（i)至少一种基于病毒的 材料，（ii)选自聚乙烯吡咯烷酮及其衍生物的至少一种聚合物，（iii)至少一种糖，（iv)至 少两种不同的氨基酸，（V)至少两种药物可接受的盐，其中至少一种所述盐是磷酸盐，及任 选地，（vi)药物可接受的缓冲液。
[0024] 除非另外指出，在本申请中使用的如下术语具有如下含义。
[0025] 在本文中"和/或"包括"和"、"或"及"该术语联系的要素的所有或任何其它组合" 的含义。
[0026] "包含（comprising) "和"包含（comprise) "是指材料、产物、配制物、组合物和方 法包括引用的成分或步骤，但是不除外其它。"基本由…组成（consisting essentially of)"和"基本由…组成（consist essentially of)"当用于定义产物、组合物和方法时， 是指排除任何本质意义的其它成分或步骤。因此，例如基本由所列举的成分组成的组合物 不排除微量的污染物和药物可接受的载体。"由…组成（consisting of)"和"由…组成 (consist of) "是指排除超过微量要素的其它成分或步骤。
[0027] 如本文使用，"大约"或"近似"是指在指定数值或范围的10%，更优选在5%以内。 根据这个定义的特定实施方案，"大约X"也包括X。
[0028] 根据优选的实施方案，本发明的配制物是水性配制物。这种配制物，特别是冷冻干 燥的，适于贮存在冷藏温度或者贮存在非冷藏温度（例如室温）。
[0029] 根据本发明，"基于病毒的材料或产物"是指病毒、病毒颗粒、病毒载体和病毒疫 苗。这些术语是同义词且可互换使用。该术语包括野生型病毒、杀灭、活的减毒的、失活的 和重组的病毒。其进一步包括基于病毒的产物，如病毒载体、病毒颗粒如病毒样颗粒（VLPs) 或核壳体。
[0030] 根据本发明，"病毒"优选涉及在疫苗中使用的那些病毒，更优选DNA病毒，如腺病 毒科、疱瘆病毒科和痘病毒科。
[0031] 根据更优选的实施方案，"病毒"是指痘病毒载体。本发明的痘病毒更优选是指 脊索痘病毒（Chordopoxvirus)(脊椎动物痘病毒）。脊索痘病毒包括但不限于正痘病毒、 副痘病毒、禽痘病毒、羊痘病毒、兔痘病毒（Lepripoxvirus)、猪痘病毒、软琉痘病毒或者 亚塔痘病毒。本发明优选的脊索痘病毒是正痘病毒。根据另一个优选的实施方案，其选 自痘苗病毒，合适的痘苗病毒包括但不限于Copenhagen毒株（Goebel et al.，1990，Vir ol. 179, 247-266and517-563 Johnson et al.，1993, Virol. 196, 381-401)、Wyeth 毒株、 Elstree、Western Reserve (WR)、IHDJ，及其衍生的高度减毒的病毒包括MVA、NYVAC(见 TO 92/15672-Tartaglia et al·，1992, Virology, 188, 217-232)。所述载体也可以得自痘 病毒科任何其它成员，特别是鸟痘病毒（例如TR0VAC，见Paoletti et al，1995, Dev Biol Stand.，84, 159-163)、金丝雀痘病毒（例如 ALVAC, WO 95/27780, Paoletti et al, 1995, Dev Biol Stand.，84, 159-163)、鸽子痘病毒、猪痘病毒等。
[0032] 根据一个实施方案，所述病毒载体是能复制的载体，其能感染哺乳动物细胞，特别 是分裂细胞（即溶瘤载体），及更特别是选自痘苗病毒毒株Copenhagen或WR的能复制的痘 病毒载体（见例如 W02009/065547、W02009/065546 或 W09531105)。
[0033] 根据另一个实施方案，所述病毒载体是减毒的痘病毒，特征在于其在人细胞系中 再生性复制能力丧失。
[0034] 根据优选的实施方案，本发明的基于病毒的材料是选自痘苗病毒（VV)和修饰的 痘苗病毒安卡拉（MVA)的病毒或病毒颗粒。
[0035] 优选的 VV 可以是如专利申请 W02009/065546、W02009/065547 或 W095/31105 中描 述的VV，上述申请描述了具有免疫刺激细胞因子GM-CSF或者具有自杀基因的VV。
[0036] 本发明优选用修饰的痘苗病毒安卡拉（MVA)进行（Sutter et al.，1994, Vaccine, 12, 1032-40)。典型的MVA毒株是MVA 575,其保藏在欧洲动物细胞培养 物保藏中心，保藏号为ECACC V00120707。根据本发明可用的MVA毒株的其它例子是保藏在 CNCM的保藏号为N° 1-721的MVA毒株，保藏在ECACC的保藏号为V00083008. MVA 11/85的 MVA-BN，保藏在ECACC的保藏号为V94012707的MVA-572,或者任一这种病毒的衍生物。
[0037] 如前文定义，本发明的病毒可以是野生型、减毒的或重组病毒，更优选是重组痘病 毒。
[0038] 术语"重组"病毒是指这样的病毒，特别是痘病毒，其包含插入其基因组中的外源 序列。如本文所用，外源序列是指不天然存在于亲代病