Nadph在制备治疗心脏疾病药物中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及NADPH的新适应症，具体地说是NADPH在制备治疗心脏疾病药物中的应用。
【背景技术】
[0002]心脑血管疾病是指心脏血管和脑血管的疾病统称。心脑血管疾病具有“发病率高、死亡率高、致残率高、复发率高、并发症多”(“四高一多”)的特点，目前已成为全球卫生保健和卫生资源的沉重负担，是第二次卫生革命的头号敌人。目前，我国心脑血管疾病患者已经超过2.7亿人，尤其是我国进入老年化社会后，心脑血管疾病的发病率仍在不断增加，因此，研宄心脑血管疾病的病理机制及治疗防护一直是医药界的重要任务。心脑缺血疾病发病机制十分复杂，研宄心脑缺血疾病新的致病机制、寻找药物作用新的靶点，对于心脑血管疾病的预防和治疗药物的开发具有重要现实的意义。在心脑血管疾病中，由于心脏承担着提供循环系统中的动力的角色，因此，其病变具有不同于其他脏器的特殊性。
[0003]还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(triphosphopyridine nucleotide,NADPH)由葡萄糖经过磷酸戊糖途径(PPP)代谢产生，作为细胞内最为重要的电子供体和生物合成的还原剂，可为还原性生物合成提供氢离子。NADPH是谷胱甘肽(GSH)的还原酶的辅酶，可使氧化型谷胱甘肽(GSSG)生成还原型GSH，维持还原型的GSH的正常含量。GSH是细胞内重要的抗氧化剂，可保护一些含巯基的蛋白质、脂肪和蛋白酶类免受氧化剂的破坏，特别在维持红细胞膜的完整性方面起着重要作用。NADPH除了参与胆固醇、脂肪酸、单加氧酶系、类固醇激素等的生物合成，还参与体内羟化反应和药物、毒物及某些激素的生物转化。例如，NADPH可利用解毒细胞的电子供体，通过体内代谢减少生物体氧化型化合物，维持其氧化还原的平衡，在氧化防御系统发挥重要作用。NADPH也可以借助于异柠檬酸穿梭作用进入呼吸链产生ATP:由于线粒体内膜对物质的通透性很低，线粒体外产生的NADPH不能直接进入呼吸链被氧化。NADPH上的H可以在异柠檬酸脱氢酶的作用下被交给NAD+，然后由NAD+进入呼吸链产生能量。细胞能量代谢的维持和减少ROS (活性氧簇)对细胞生存，特别对缺血缺氧的组织至关重要，普遍认为能量代谢障碍和氧化应激是心脑缺血疾病的重要机制，研宄表明增加细胞能量代谢能力，降低细胞ROS产生可减轻缺血缺氧引起的细胞损伤。基于NADPH的多重生理功能，目前已有一些研宄将NADPH应用于某些疾病的治疗中。
[0004]根据国际文献报道《p53与TIGAR在缺氧条件下调节心肌细胞能量平衡的作用》(p53and TIGAR regulate cardiac myocyte energy homeostasis under hypoxic stress)中的研宄表明，敲除心肌细胞的TIGAR或TIGAR的上游调节基因有加重缺氧条件下心肌细胞凋亡的作用。TIGAR的功能是抑制糖酵解和激活戊糖旁路，戊糖旁路产生两个代谢产物:-NADPH和5-磷酸戊糖，因此，敲除TIGAR的作用增加了糖酵解，且降低了戊糖代谢的活性，而抑制戊糖通路则意味著降低了 NADPH，由此可推断出NADPH对于心肌损伤具有加重的作用，因此，目前尚未有研宄将NADPH应用于心脏疾病的治疗中。
【发明内容】
[0005]本发明所要解决的技术问题是提供一种NADPH的新的适应症的应用，即NADPH在制备治疗心脏疾病药物中的应用。
[0006]本发明提供了 NADPH在制备治疗心脏疾病药物中的应用。
[0007]进一步地，所述心脏疾病是指心肌损伤、心肌梗死、心肌病中的一种。
[0008]进一步地，所述心肌病为肥厚性心肌病。
[0009]所述药物包括药学上有效量的NADPH和药学上可接受的载体。
[0010]本发明提供的用于治疗心脏疾病的药物，所述药物以NADPH为活性成分，向NADPH中加入常规辅料按照常规工艺制成临床上可接受的合剂、胶囊剂、片剂、药膜剂、喷雾剂。
[0011]本发明提供的用于治疗心肌损伤、心肌梗死或心肌病中任意一种疾病的药物，所述药物以NADPH为活性成分，向NADPH中加入常规辅料按照常规工艺制成临床上可接受的合剂、胶囊剂、片剂、药膜剂、喷雾剂。
[0012]本发明所述的方案以NADPH作为制备治疗心脏疾病药物的活性成分，证实了NADPH具有保护血管内皮细胞、维护血管正常通透性、减少缺血性心肌损伤的作用，通过研宄给予外源性NADPH是否有治疗缺血性心肌损伤作用，发现了 NADPH在治疗心肌损伤、心肌梗死的新用途。具体的，经研宄小鼠注射的NADPH可以进入血脑屏障，进入细胞内，NADPH在脑缺血再灌后可以维护血管正常通透性，减少血脑屏障损伤；NADPH可缩小心肌梗死范围，发挥急性缺血性心肌损伤的保护作用。上述结果提示NADPH对缺血性心血管损伤起保护作用，NADPH是一个有效的治疗心脏疾病，尤其是心肌损伤、心肌梗塞和心肌病的药物。
[0013]由于NADPH是一个内源性的抗氧化物质，也可以是供应能量的物质，在治疗应用时没有发现有毒副作用，因此，具有用量小、安全的优点。加之，NADPH可通过口服、可注射、可透过口鼻粘膜和皮肤给药，服用方便。并且，由于氧化应激和能量代谢障碍是其它脏器组织缺血损伤的共同机制，因此，NADPH在其它疾病中也可有广泛的用途。
【附图说明】
[0014]为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中，
[0015]图1为外源NADPH对低糖缺氧的原代培养内皮细胞HUVEC细胞存活率的影响；
[0016]图2为治疗性给予NADPH对永久脑缺血性中风小鼠脑内参与血脑屏障的免疫细胞的影响；
[0017]图3为预防性给予NADPH对脑缺血性再灌注中风小鼠血脑屏障通透性的影响；
[0018]图4为治疗性给予NADPH对永久脑缺血性中风小鼠血脑屏障损伤的影响；图4a为血脑屏障损伤测定结果；图4b为血脑屏障通透性测试结果；
[0019]图5为治疗性给予NADPH对心肌缺血再灌注性小鼠心肌损伤的影响；图5a为TTC染色结果；图5b为缺血梗死区心肌质量占缺血区心肌质量的百分比对比图。
【具体实施方式】
[0020]实施例1含有NADPH的胶囊剂
[0021]本实施例的胶囊剂包括以下成分:
[0022]NADPH 20g ;助悬剂微晶纤维素60g ;防腐剂叔丁基一4一羟基苯甲醚0.04g ;润滑剂硬脂酸镁2g ;填充剂乳糖加至200g。
[0023]其制备方法包括以下步骤:
[0024]称取上述处方量的NADPH和各药用辅料，混合均匀，过60目筛三次，装入胶囊即得。
[0025]作为中所用的常规辅料包括但不限于填充剂、崩解剂、润滑剂、粘合剂、矫味剂、助悬剂、防腐剂中的一种或几种的混合物。
[0026]具体而言，所述填充剂还可替换为预胶化淀粉、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖中的一种或多种的混合物；
[0027]所述崩解剂还可替换为淀粉、交联聚维酮、羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠中的一种或多种的混合物；
[0028]所述润滑剂还可替换为滑石粉、二氧化硅、十二烷基硫酸钠中的一种或多种的混合物；
[0029]所述助悬剂还可替换为聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素中的一种或多种的混合物；
[0030]所述防腐剂还可替换为尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸盐中的一种或多种的混合物；
[0031]所述粘合剂还可替换为聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素中的一种或多种的混合物；
[0032]所述矫味剂还可替换为甜味剂和/或香精；所述甜味剂为糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素中的一种或多种的混合物；
[0033]当然，所述常规辅料包括但不限于上述列举的范围，本领域技术人员可根据实际情况做适应性的选择及调整。
[0034]本领域技术人员可以使用本领域中已知的任何方式施用本发明的药物，包括但不限于外用、口服、舌下、经鼻、胃肠外、局部、皮下、注射、经皮或直肠的施用途径。本发明的药物组合物优选口腔剂型以及注射剂型，口腔型选自口服液、胶囊剂、泡腾片、口服药膜或喷雾剂；注射剂型选自供肌肉、皮下注射给药或静脉滴注使用的粉针剂和水针剂等。且本发明的药物可以采用本领域中公知的方法制为相应剂型。
[0035]实验例
[0036]下面，为验证本发明的技术效果进行以下实验:
[0037]实验例1外源性NADPH对原代培养内皮细胞HUVEC保护作
[0038](1)实验材料:
[0039]试验所使用的原代培养内皮细胞HUVEC细胞均购于美国ATCC细胞库。冻存条件:2ml冻存管，每管160万细胞，含70%高糖DMEM，20%国产胎牛血清，10% DMSO。
[0040](2)实验方案:
[0041]内皮细胞HUVEC培养:培养条件:37°C (5% C02，95%空气)，饱和湿度，高糖DMEM培养基，培养基每升含100U青霉素和100U链霉素；10%国产胎牛血清；待细胞生长至80-90%左右融合，用胰酶-EDTA液消化后进行传代，传代密度:5X 105/瓶隔2_3天传代；取对数生长的HUVEC细胞，加入适量胰蛋白酶-EDTA消化液，使贴壁细胞脱落，收集细胞，计数，用含10%胎牛血清的培养液配成细胞悬液(5X 104/ml)，于96孔板中每孔加入100 μ 1，在37°C、5% C02培养24h。取NADPH溶于无菌生理盐水中配制成母液为10mmol/L的溶液，滤膜过滤除菌后加入到细胞培养基中MTT法细胞存活率检测:
[0042]细胞活性检测:将细胞接种于96孔板中，待细胞生长至指数阶段时加入终浓度为1，5，10,20, 40 μΜ的NADPH。以溶剂为阴性对照，放入培养箱于相同条件下继续培养48h。结束培养前4h加入MTT (5mg/ml，D-Hanks ’溶解)10 μ 1，试验结束时吸去上清，加入150 μ IDMSO,用酶联免疫检测仪于570nm处测定各孔OD值，取6孔OD值求均值，计算抑制率:抑制率(IR% ) = (1-测试孔OD/对照孔0D) X 100%。
[0043](3)实验结果
[0044]图1为外源NADPH对低糖缺氧的原代培养内皮细胞HUVEC活性的影响。与正常对照组相比，5，10，20 μ M浓度的NADPH作用48h可以使HUVEC细胞存活率明显降低。5 μ M的NADPH作用48h细胞存活率约为65.3% (p < 0.05) ；10μΜ NADPH作用48h细胞存活率约为 73.6% (P < 0.01) ；20μΜ NADPH 作用 48h 细胞存活率约为 70.9% (p < 0.01)。I)对照组；2)缺氧低糖组；3)缺氧低糖组+NADPH 1μΜ；4)缺氧低糖组+NADPH5 μΜ ;5)缺氧低糖组+NADPH 10 μ M ；6)缺氧低糖组+NADPH 20 μ M ;7)缺氧低糖组+NADPH 40 μ Μ.**与对照组相比，P < 0.01 与缺氧低糖组相比，P < 0.05 ； ##与缺氧低糖组相比，P < 0.01ο其中**表示 ρ〈0.01，#表示 ρ〈0.05，##表示 ρ〈0.01。
[0045]实验例2预防性给予NADPH减轻脑损伤后血脑屏障有关免疫细胞反应
[0046](I)实验材料
[0047]清洁级雄性ICR小鼠，质量23?28g，苏州大学实验动物中心提供，实验动物生产许可证号:XCYK (苏)200