一种组合物及其制备方法、美容制剂的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明属于美容整形技术领域，尤其涉及一种组合物及其制备方法、美容制剂。
【背景技术】
[0002]面部衰老是机体和面、颈部的软、硬组织共同变化的结果。面部老化与体质、遗传因素、生活环境、心理情绪、工作性质、营养状况、疾病、局部皮肤护理等因素有着密切的关系。一般人到25岁以后，便开始出现衰老征象，而面部皮肤皱纹的形成是一个重要的特征和指标。
[0003]面部年轻化是指能够使老化的面部恢复年轻化外貌的各种手段和方法(包括外形、解剖和生理结构等)。随着生活水平的提高，人们对气质外形的要求越来越高，在追求美的同时对安全性也有了更好的要求，因此，水光注射技术由于其微创、无痛、恢复快、效果好等优点，受到了爱美人士的青睐。
[0004]水光注射技术是在微电脑的控制下，使用特制的注射工具通过负压系统将皮肤吸起，在负压的空间把制剂导入到相应的部位的一种治疗方法。目前，水光注射主要使用的配方为单方的透明质酸(HA)、或者透明质酸(HA)与高浓度血小板血浆(PRP)的混合制剂。
[0005]高浓度血小板血浆是来自自体血小板经过提纯浓缩后的产物，其已被广泛应用于各个领域，并延伸至面部年轻化的应用。浓缩的血小板在激活后，可释放一系列的细胞生长因子，如VEGF、血小板源生长因子(TOGF)、IGF、TGF等，这些因子均已被实验证实有控制细胞迀移、黏附、增殖，并且有助于通过与细胞表面受体结合，提高细胞外基质蛋白的释放，对除皱、淡化疤痕色斑有显著的功效。
[0006]但是现有的美容制剂成分较为单一，效果不够明显。
【发明内容】
[0007]有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种组合物及其制备方法、美容制剂，该美容制剂效果较好。
[0008]本发明提供了一种组合物，包括:
[0009]细胞生长因子溶液 30?70体积份；
[0010]高浓度血小板血浆 30?70体积份；
[0011]脂肪干细胞0.1 X 16?2 X 16个/mL。
[0012]优选的，所述细胞生长因子溶液的浓度为I?40mg/mL。
[0013]优选的，所述细胞生长因子溶液为碱性成纤维细胞生长因子溶液。
[0014]本发明还提供了一种组合物的制备方法，包括:
[0015]将30?70体积份的细胞生长因子溶液、30?70体积份的高浓度血小板血浆与
0.1 X 16?2 X 10 6个/mL的脂肪干细胞混合，得到组合物。
[0016]本发明还提供了一种美容制剂，包括组合物。
[0017]优选的，所述美容制剂保存的温度为0°C?8°C ;保存的期限为24h。
[0018]本发明还提供了一种美容制剂的使用方法，将美容制剂作用于皮肤表面；所述美容剂包括组合物。
[0019]优选的，所述美容制剂的使用剂量为0.01?0.02mL/cm2。
[0020]优选的，所述皮肤表面为面部皮肤表面。
[0021]本发明提供了一种组合物及其制备方法、美容制剂，该组合物包括细胞生长因子溶液30?70体积份；高浓度血小板血浆30?70体积份；脂肪干细胞0.1 X 16?2 X 106个/mL。与现有技术相比，本发明将组合物用于美容制剂，细胞生长因子是具有很强活性的促细胞生长因子，能够促进血管生成，创口愈合及组织损伤修复，高浓度血小板血浆有助于细胞与细胞表面受体结合，提高细胞外基质蛋白的释放，对除皱、淡化疤痕色斑有显著功效，脂肪干细胞可分泌多种具有显著生物功能的活性因子，上述三种物质相互作用提高了美容剂的除皱功能。
【附图说明】
[0022]图1为皮肤算数平均粗糙度变化率柱形图；
[0023]图2为皮肤弹性相对变化率柱形图；
[0024]图3为受试者使用实施例2中得到的美容制剂前的皮肤照片；
[0025]图4为受试者使用实施例2中得到的美容制剂一个月后的皮肤照片；
[0026]图5为受试者使用实施例3中得到的美容制剂前的皮肤照片；
[0027]图6为受试者使用实施例3中得到的美容制剂一个月后的皮肤照片。
【具体实施方式】
[0028]下面将结合本发明实施例的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0029]本发明提供了一种组合物，包括:
[0030]细胞生长因子溶液 30?70体积份；
[0031]高浓度血小板血浆 30?70体积份；
[0032]脂肪干细胞0.1 X 16?2 X 16个/mL。
[0033]其中，所述细胞生长因子溶液的含量优选为40?60体积份，再优选为45?55体积份；所述细胞生长因子浓度为本领域技术人员熟知的浓度即可，并无特殊的限制，本发明优选为I?40mg/mL，更优选为5?35mg/mL，再优选为10?30mg/mL ;所述细胞生长因子的种类优选为碱性成纤维细胞生长因子。
[0034]碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)广泛分布于人体组织中.是人体内含有的一种微量活性蛋白。内皮细胞是其主要来源，当内皮细胞受损时可大量释放bFGF，它对源于中胚层和神经外胚层的细胞和组织具有促进丝裂、分化和调节作用.是创伤愈合和上皮形成的重要调节物。其具有的美容效果有:(I)高效修复:促进成纤维细胞、表皮细胞代谢、增殖和分化；(2)消除皱纹:促进细胞间质的形成，促进胶原蛋白的合成和分泌，促进弹性纤维合成和分泌。促进细胞间基质的增加，使皮肤细嫩健美、饱满有弹性，从而消除皱纹；(3)美白红润:改善皮肤微循环，保证皮肤细胞有充足营养供应，使蜡黄、无光泽、不健康的皮肤变得红润有光泽。
[0035]所述高浓度血小板血楽的含量优选为40?60体积份，再优选为45?55体积份，更优选为48?52体积份。高浓度血小板血浆(PRP)是来自自体血小板经过提纯浓缩后的产物。浓缩的血小板在激活后，可释放一系列的细胞生长因子，如VEGF、血小板源生长因子(PDGF), IGF、TGF，这些因子有控制细胞迀移、黏附、增殖、并有助于通过与细胞表面受体结合，提高细胞外基质蛋白的释放，对除皱、淡化疤痕色斑有显著功效。
[0036]所述脂肪干细胞的含量优选为0.5X 16?1.5X106个/mL,更优选为0.8X 106?
1.2X 16个/mL。脂肪干细胞是从脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的干细胞，能分泌多种具有显著生物功能的活性因子，如VEGF、EGF、SDF-1、bFGF、TGF- β 1、血管内皮生长因子b2等等，这些因子在改善心血管疾病病症、促进组织再生、修复组织损伤、抑制黑色素沉淀等方面具有不可替代的作用。
[0037]本发明还提供了一种上述组合物的制备方法，包括:将30?70体积份的细胞生长因子溶液、30?70体积份的高浓度血小板血浆与0.1 X 16?2 X 10 6个/mL的脂肪干细胞混合、得到组合物。
[0038]其中，所述细胞生长因子溶液、高浓度血小板血浆、脂肪干细胞均同上所述，在此不再赘述。所述细胞生长因子溶液由细胞生长因子冻干粉与溶媒混合得到，所述溶媒为本领域技术人员熟知的溶媒即可，并无特殊的限制，本发明优选以生理盐水为溶媒。
[0039]按照本发明，优选先将30?70体积份的高浓度血小板血浆与0.1 X 16?2 X 10 6个/mL的脂肪干细胞混合，然后再与30?70体积份的细胞生长因子溶液混合，得到组合物。
[0040]本发明还提供了一种美容制剂，包括上述的组合物。该美容制剂保存的温度优选为0°C?8°C ;保存的期限优选为24h。
[0041]本发明将组合物用于美容制剂，细胞生长因子可作用于真皮层的成纤维干细胞，使处于休眠、损伤的成纤维干细胞被激活和修复并成熟分化大量的成纤维细胞，高浓度血小板血浆有助于细胞与细胞表面受体结合，提高细胞外基质蛋白的释放，对除皱、淡化疤痕色斑有显著功效，脂肪干细胞可分泌多种具有显著生物功能的活性因子，上述三种物质相互作用提高了美容剂的除皱功能。
[0042]本发明还提供了一种上述美容制剂的使用方法，将美容制剂作用于皮肤表面，优选作用于皮肤皮下组织，更优选采用水光注射技术将美容制剂作用于皮肤皮下组织。所述美容制剂的使用剂量优选为0.01?0.02mL/cm2;所述皮肤表面组织优选为面部皮肤表面。
[0043]为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的一种组合物及其制备方法、美容制剂进行详细描述。
[0044]以下实施例中所用的试剂均为市售。
[0045]实施例1
[0046]1.1取Pl代、汇合度达到90%的脂肪干细胞，去掉培养上清，用生理盐水洗3遍后，加入0.02mL/cm2的0.25 %的胰酶与0.02 % EDTA消化2min，用10倍于消化液的完全培养基(lonza UltraCULTURE MEDIUM无血清培养基+PALL血清替代物+2mM L-谷氨酰胺+IxNEAA)终止酶解，取样计数，200g离心5min，去上清，用生理盐水重悬细胞，根据计数结果，调整细胞总数为5 X 16个，加入生理盐水至45mL，200g离心5min，再按照上述步骤清洗两遍细胞，最后沉淀即为制备好的脂肪干细胞。