用于治疗和/或预防雌激素相关性疾病的化合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及植物化学领域，特别涉及用于治疗和/或预防雌激素相关性疾病的化 合物。
【背景技术】
[0002] 植物中一类具有雌激素样或抗雌激素作用的活性成分被称为植物雌激素 (phytoestrogen，PE)。现有技术已知，在人体内，植物雌激素具双向调节作用，一方面，当机 体内雌激素水平低于正常水平时，可发挥拟雌激素样作用，这一作用可以防治女性更年期 综合征、前列腺癌、骨质疏松症和心血管疾病等。另一方面，在体内雌激素水平高于正常水 平（如乳腺增生、子宫肌瘤等病症）时，可产生雌激素拮抗作用，有效减弱靶细胞对雌激素 的应答。因此也有人称其为"选择性雌激素受体调节剂"。寻找具有雌激素活性而又没有雌 激素副作用的植物雌激素，为临床提供新的治疗选择，仍是本领域技术人员期待的。
【发明内容】
[0003] 淫羊藿别名仙灵脾，为小檗科（Berberdiaceae)淫羊藿属（Epimedium)的多种植 物的干燥地上部分，是具补肾壮阳，祛风除湿功效的传统中草药。淫羊藿药用历史悠久，李 时珍在《本草纲目》中称其有"益精气，坚筋骨，补腰膝，强心力"之效用。现代药理实验研 究表明，淫羊藿能增强心脑血管血流量、促进造血功能、提高免疫功能、调节骨代谢、还具有 抗衰老和抗肿瘤等功效。
[0004] 发明人从淫羊藿中分离得到一系列化合物，并令人惊讶的发现，所分离得到的一 系列化合物具有雌激素样或抗雌激素作用的活性，可以作为植物雌激素。用于治疗雌激素 相关性疾病。并基于此，完成了本发明。
[0005] 本发明第一方面提供了通式（I)的化合物在制备用于治疗和/或预防雌激素相 关性疾病的药物中的用途；
[0006]
[0007] 其中，R代表氢、C1-C4烷基、C「C4烷氧基或C2_C4烯基。
[0008] 本发明第一方面的一些优选实施方式中，R代表氢或C1-C4;^氧基。
[0009] 本发明第一方面的一些优选实施方式中，R代表甲氧基。
[0010] 在本发明第一方面的一些优选实施方式中，雌激素相关性疾病可以是指：由雌激 素水平低于正常水平而引起的疾病。
[0011] 其中，所述由雌激素水平低于正常水平而引起的疾病可以包括：女性更年期综合 征、前列腺癌、骨质疏松症和心血管疾病。
[0012] 在本发明第一方面的另一些优选实施方式中，雌激素相关性疾病可以是指：由雌 激素水平高于正常水平而引起的疾病。
[0013] 其中，由雌激素水平高于正常水平而引起的疾病可以包括：乳腺增生、子宫肌瘤。
[0014] 本发明第二方面提供了能够分离出通式（I)的化合物的淫羊藿提取物。通过该 淫羊藿提取物，可以得到通式（I)的化合物，进而可以通过通式（I)的化合物来治疗雌 激素相关性疾病。
【具体实施方式】
[0015] 下面将结合具体实施例对本发明的技术方案进行描述，所描述的实施例仅仅是本 发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在 没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0016] 下面将结合具体的实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所 描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例， 本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发 明保护的范围。
[0017] 实施例1:制备淫羊藿提取物
[0018] 取20kg淫羊藿全草，用95% (v/v)乙醇热回流提取，提取料液比1:1. 5,每次提取 时间2h，共提取3次。在50°C下减压蒸馏，浓缩至无醇，体积约6L，估算浸膏质量约4kg。将 3kg粗浸膏溶于IOL水中，用等体积乙酸乙酯萃取，共萃取3次，将乙酸乙酯层减压蒸馏，浓 缩至干，得浸膏约lkg。水层50°C减压蒸馏至浓浸膏，得浸膏质量约2kg。
[0019] 实施例2 :制备化合物2, 3, 4, 6, 7-五甲氧基-菲
[0020] 取乙酸乙酯萃取物（1kg)，以1.5kg硅胶拌样，进行硅胶柱层析分离，以二氯甲 烷-丙酮（1:0 - 10:1 - 5:1 - 2:1 - 1:1 - 0:1)进行梯度洗脱，TLC检识合并相同流分， 得到43个流分（Fr. 1~43)。Fr. 2 (100g)经开放C18柱色谱，甲醇-水（10:90 - 100:0) 梯度洗脱，HPLC检识合并相同流分，得到12个流分（Fr. 2-1~12)。Fr. 2-12 (I. 4g)经反 相高效液相色谱分离得到了化合物I(23mg)。
[0021] 实施例3:化合物2, 3, 4, 6, 7-五甲氧基-菲结构的确定
[0022] 通过1H、13C-NMR等NMR方法，确定化合物1-4结构；
[0023]NMR仪器的型号为：BRUKERAVANCEIII500超导核磁共振波谱仪（TMS为内标，瑞士 Bruker公司）；
[0024] 化合物的表征如下：
[0025]1H-NMR(500MHz,MeOD) :3. 96, 3. 97, 3. 98, 3. 99, 4. 01(each3H,s,OMeX5), 7. 19(1H,s,H-l), 7. 30(1H,s,H-8), 8 7. 52 (1H,d,J= 8Hz,H-9), 8 7. 57 (1H,d,J= 8Hz，H-10)，9.03(lH，s，H-5)。
[0026]13C-NMR(125MHz，MeOD) :S56. 2 (CH30-2)，56. 3 (CH30-6)，56. 4 (CH30-7)，61.I(CH3O -3)，61. 7 (CH30-4)，106. 7 (C-8)，108. 9 (C-I)，109. 7 (C-5)，119. 7 (C-8a)，125. 6 (C-IOa)，12 6.O(C-9)，127. 3 (C-IO)，128. 9 (C-4a)，131. 2 (C-3)，143. 8 (C-4b)，149. 6 (C-4)，150. 2 (C-6) ,152. 7(C-2), 153. 2(C-7)〇
[0028] 实施例4 :2, 3, 4, 6, 7-五甲氧基-菲的雌激素活性实验
[0029]试剂：DMEM/F-12，HEPES,nophenolred为Gibco? 公司生产，；货号为11039-021 规格为500ml/瓶；
[0030] 活性碳吸附胎牛血清FBS为BioInd公司生产，货号为04-201-1A，规格为500ml/ 瓶；
[0031] penicillinstreptomycinsolution为hyclone公司生产，货号为SV30010规格 为IOOrnl/瓶；
[0032] FBS为Hyclone公司生产货号：SH30084. 03E规格500ml;
[0033] ERaAntibody(F-10)为SantaCruz公司生产货号：sc_8002规格200Ug/ml;
[0034] DonkeyAnti-MouseIgGH&L(AlexaFluor? 488)为abeam公司生产货号： abl50105 500ug；
[0035] Hochest33342为SIGMA公司生产货号：14533 ;
[0036] 他莫昔芬为Sigm