一种植物乳杆菌zs2058及其用图_2

文档序号:9385969阅读:来源:国知局
使其药物润 湿并诱发其具有粘性,于是能够制成颗粒的液体。凡是具有这种性能而又不会影响本发明 菌剂效果的物质都可以用于本发明,也都在本发明保护范围之内。具体地,本发明使用的润 湿剂选自水、乙醇、淀粉或糖浆,优选地选自水、乙醇或淀粉,更优选地选自水或淀粉。
[0043] 根据本发明,所述的崩解剂应该理解是一种能够促进片剂在胃肠液中快速崩解成 细小粒子的辅料。凡是具有所述这种性能而又不会影响本发明菌剂效果的物质都可以用于 本发明,也都在本发明保护范围之内。具体地,本发明使用的崩解剂选自羧甲基淀粉钠、羟 丙纤维素、交联羧甲基纤维素、琼脂、碳酸钙或碳酸氢钠,优选地选自羧甲基淀粉钠、羟丙纤 维素、交联羧甲基纤维素、琼脂或碳酸氢钠,更优选地选自羧甲基淀粉钠、羟丙纤维素、交联 羧甲基纤维素或碳酸氢钠。
[0044] 根据本发明,所述的粘合剂应该理解是当药物本身无粘性或粘性不足时需要加入 一种粘性物质以便将其药物制成颗粒剂,这种粘性物质称为粘合剂。凡是具有所述这种性 能而又不会影响本发明菌剂效果的物质都可以用于本发明,也都在本发明保护范围之内。 具体地,本发明使用的粘合剂选自纤维素衍生物、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮,优选地 选自纤维素衍生物、明胶或聚乙烯吡咯烷酮,更优选地选自明胶或聚乙烯吡咯烷酮。
[0045] 根据本发明,所述的润滑剂应该理解是一种在制粒过程中能够提高片剂流动性, 防止片剂粘附在制片机上,有利于片剂脱模的物质。凡是具有所述这种性能而又不会影响 本发明菌剂效果的物质都可以用于本发明,也都在本发明保护范围之内。具体地,本发明使 用的润滑剂选自滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、微粉硅胶或聚乙二醇,优选地选自滑石粉、硬 脂酸钙、硬脂酸镁或聚乙二醇,更优选地选自滑石粉或硬脂酸钙。
[0046] 根据本发明,所述的矫味剂应该理解是一种在药品中用以改善或屏蔽药物不良气 味和味道(例如强烈苦味或其它异味等)的辅料。凡是具有这种性能而又不会影响本发明 菌剂效果的物质都可以用于本发明,也都在本发明保护范围之内。具体地,本发明使用的矫 味剂选自单糖浆、蔗糖、卵磷脂、橙皮糖浆、枸橼糖浆、樱桃糖浆甜味剂;柠檬、茴香、薄荷油 芳香剂;海藻酸钠、阿拉伯胶、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠胶浆剂;枸橼酸、酒石酸 与碳酸氢钠混合物泡腾剂,优选地选自单糖浆、蔗糖、橙皮糖浆、樱桃糖浆甜味剂;柠檬、薄 荷油芳香剂;海藻酸钠、阿拉伯胶、明胶、羧甲基纤维素钠胶浆剂;酒石酸与碳酸氢钠混合 物泡腾剂,更优选地选自蔗糖、橙皮糖浆、樱桃糖浆甜味剂;柠檬芳香剂;海藻酸钠、阿拉伯 胶胶浆剂;酒石酸与碳酸氢钠混合物泡腾剂。
[0047] 在本发明中,填充剂、润湿剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂或矫味剂的用量应该根据实 际使用的需要进行确定,这些对于制药技术领域的技术人员而言是不存在任何技术困难 的。
[0048] 本发明的植物乳杆菌ZS2058菌剂可以与在药学上可接受的载体或赋形剂组合制 成各种剂型,例如颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液,其中在药学上可接受的载体或赋形 剂可以根据不同剂型进行选择,所使用的这些载体或赋形剂及其用量对于制药技术领域的 技术人员都是容易确定的,也是显而易见的。
[0049] 所述的剂型一般应该理解是适用于人的单剂量药物形式,单个剂型含有为达到所 需药物量的预定活性物质,例如本发明的植物乳杆菌ZS2058菌剂。
[0050] [有益效果]
[0051] 本发明的有益效果是:
[0052] 本发明植物乳杆菌ZS2058能够有效改善小鼠腹泻、大便隐血、便血等结肠炎症 状,并能够抑制疾病活动指数(DAI)的升高,改善小鼠结肠长度的变化,显著减低髓过氧化 物酶(MP0)活性,可以制备用于预防和治疗肠道炎症的药物。
[0053] 植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)ZS2058 即植物乳杆菌 (Lactobacillusplantarum)ZH008已于2005年4月10日在武汉市武昌洛珈山武汉大学内 中国典型培养物保藏中心保藏,其保藏号为CCTCCNo.M206033。 【【附图说明】】
[0054] 图1表示各组造模期间疾病活动指数的变化,植物乳杆菌ZS2058显著降低小鼠的 疾病活动指数;
[0055] 图中:* :P〈0. 05, ** :P〈0. 01,*** :P〈0. 001。
[0056] 图2表示各组结肠长度的变化,植物乳杆菌ZS2058改善DSS(葡聚糖硫酸钠)诱 导结肠炎后小鼠结肠长度变化;
[0057] 图中:* :P〈0. 05, ** :P〈0. 01,*** :P〈0. 001。
[0058] 图3表示各组髓过氧化物酶(MP0)活力的变化,植物乳杆菌ZS2058显著降低髓过 氧化物酶活力;
[0059] 图中:ns :P>0. 05, * :P〈0. 05, ** :P〈0. 01,*林:P〈0. 001〇
[0060] 图4表示各组结肠组织HE染色(图4-A,图4-B,图4-C)及组织损伤评分(图4-B),
[0061] 图4-A:正常组;
[0062] 图4-B:造模组;
[0063] 图4-C:植物乳杆菌ZS2058处理组;
[0064] 图4-D:植物乳杆菌ZS2058显著降低DSS诱导结肠炎后小鼠结肠病理评分;
[0065] 图中:* :P〈0. 05, ** :P〈0. 01,*** :P〈0. 001。
[0066] 图5表示植物乳杆菌ZS2058调节肠道免疫应答;
[0067] 图中:ns :P>0. 05, * :P〈0. 05, ** :P〈0. 01,*林:P〈0. 001〇 【【具体实施方式】】
[0068] 通过下述实施例将能够更好地理解本发明。
[0069] 实施例1 :植物乳杆菌ZS2058改善DSS诱导的结肠炎的动物实验
[0070] 具体实验如下:
[0071] 1、实验动物
[0072] 6-8周龄SPF级雄性C57BL/6J小鼠24只,它购自苏州苏普思生物科技有限公司, 在温度22±2°C、自由取食、自由饮水和12h昼夜交替的条件下饲养,所用饲料为苏州双狮 实验动物饲料科技有限公司生产的小鼠繁殖配合饲料,普通饮食饲养适应一周后进行实 验。
[0073] 2、植物乳杆菌ZS2058培养
[0074] 将植物乳杆菌ZS2058菌体在固体MRS平板上划线,挑单菌落于液体MRS培养基中 培养12h,传两代后用于后续实验。
[0075] 将活化的植物乳杆菌ZS2058按照以MRS培养基体积计1 %接种量接种到液体MRS 培养基中,在温度37°C的条件下在恒温培养箱中培养12h,然后收集菌体,再用pH 7. 4的 PBS洗掉两遍,接着重悬于浓度以重量计13%脱脂乳溶液中,活菌数为1XK^CFU/mL,用于 后续试验。
[0076] 3、实验方法
[0077] (1)结肠炎小鼠模型的建立
[0078] C57BL/6J小鼠自由饮用2%DSS(葡聚糖硫酸钠,MW:36000-50000,购自MP公司) 溶液,连续7天。
[0079] (2)实验分组及给药
[0080] 将24只C57BL/6J小鼠随机分为3组,即正常组,模型组和植物乳杆菌ZS2058处理 组,每组8只。植物乳杆菌ZS2058处理组给药方式为灌胃,灌胃剂量为2X109CFU/200yL/ 只/天。ZS2058处理组在造模前7天开始每天灌胃植物乳杆菌ZS2058,直到实验结束(含 造模过程),连续14天,正常组和模型组均用灌胃重悬后的13%脱脂乳粉作为对照,连续14 天,至实验结束。
[0081] (3)指标测定
[0082] I.小鼠造模期间,观察小鼠进食、活动状态、毛发整齐程度,每日称量体重,观察 粪便性状及检测粪便隐血情况按照文献(MurthySNS,DigDisSci,1993)进行疾病活动指 数(DiseaseActivityIndex,DAI)评分,DAI=体重下降分数+大便性状+便血分数,具 体评分标准见表1。
[0083] 表1 :DAI评分标准
[0084]
[0085] 表中:
[0086] *正常大便:成形大便;松散大便:不粘附于肛门的糊状、半成形大便;稀便:可粘 附于肛门的稀水样便;
[0087] #便血情况:鼠粪便正常者为便血阳性,粪便呈红色或褐色者为肉眼血便,对肉眼 血便不明显又可疑隐血者,用四甲基联苯胺检测隐血情况。
[0088] II?处死小鼠,取结肠,测量结肠长度;取远端结肠1cm于Carnoy'sSolution 固定、常规组织脱水、石蜡包埋、切片、H&E染色;根据组织学损伤评分标准(Murthy SNS,DigDisSci,1993)对结肠进行组织学损伤评分,具体评分标准见表2。
[0089] 表2 :组织学损伤评分标准
[0090]
[0091] III?结肠样品髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MP0)测定
[0092] 按照由南京建成生物工程研究所有限公司销售的MP0试剂盒使用说明书描述
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