一种胶原蛋白组合物及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物医药技术领域，尤其涉及一种胶原蛋白组合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 胶原蛋白为生物高分子，是动物结缔组织中的主要成分，也是哺乳动物体内含量 最多、分布最广的功能性蛋白，占蛋白质总量的25%~30%。与组织的形成、成熟、细胞间 信息的传递，以及关节润滑、伤口愈合、钙化作用、血液凝固和衰老等有着密切的关系。胶原 蛋白也是生物科技产业最具关键性的原材料之一，在医学材料、化妆品、食品工业等均有着 广泛应用。
[0003] 现有技术中，存在着将胶原蛋白与一些生物材料结合起来发挥止血作用的止血 剂，如申请号为200710115108. 5的中国专利公开了一种止血材料，其主要原材料为壳聚 糖、胶原蛋白和羧甲基纤维素钠，但是，该止血材料只具有止血的作用，对于出血的伤口不 仅没有促进愈合的作用，还可能会刺激破损出血的伤口，并且，该止血剂选用的壳聚糖和羧 甲基纤维素钠均为外来物质，存在一定的毒副作用。
【发明内容】
[0004] 本发明提供了一种胶原蛋白组合物及其制备方法，本发明提供的胶原蛋白组合物 同时具有止血和粘合伤口的功能，并且无毒副作用。
[0005] 本发明提供一种胶原蛋白组合物，包括：表皮细胞生长因子、胶原蛋白、血小板提 取物和水；
[0006] 所述血小板提取物在所述胶原蛋白组合物中的质量浓度为0. 5~I. 5mg/mL。
[0007] 优选的，所述表皮细胞生长因子在所述胶原蛋白组合物中的质量浓度为80~ 120ng/mL〇
[0008] 优选的，所述胶原蛋白组合物中胶原蛋白的质量分数为40~50 %。
[0009] 优选的，所述血小板提取物按照以下步骤制得：
[0010] A)将脐血离心，提取血小板；
[0011] B)采用缓冲液将所述血小板重悬，得到血小板混悬液，将所述血小板混悬液反复 冻融3~8次，得到血小板冻融液；
[0012] C)所述血小板冻融液采用6000~1000 Og的转速进行离心，得到血小板提取物。
[0013] 优选的，所述步骤A)具体包括：
[0014] 将脐血以200~500g的转速离心5~20min，取上层血浆；
[0015] 将上层血衆以200~500g的转速离心1~lOmin，取上清液；
[0016] 将上清液以1000~1500g的转速离心1~lOmin，得到血小板。
[0017] 优选的，所述步骤B)中冻融包括冷冻和融化；所述冷冻的温度为-85~-75°C ;
[0018] 所述融化的温度为30~40 °C。
[0019] 优选的，所述步骤C)中离心的温度为1~KTC ;
[0020] 所述步骤C)中离心的时间为20~40min。
[0021] 优选的，所述胶原蛋白组合物的pH值为6. 5~7. 0。
[0022] 本发明提供一种胶原蛋白组合物的制备方法，包括以下步骤：
[0023] 1)将脐血离心，提取血小板；
[0024] 2)采用缓冲液将所述血小板重悬，得到血小板混悬液，将所述血小板混悬液反复 冻融3~8次，得到血小板冻融液；
[0025] 3)所述血小板冻融液采用6000~1000 Og的转速进行离心，得到血小板提取物；
[0026] 4)将表皮细胞生长因子、胶原蛋白溶液和血小板提取物混合，得到胶原蛋白组合 物，所述胶原蛋白组合物中血小板提取物的质量浓度为〇. 5~I. 5mg/mL。
[0027] 优选的，所述步骤4)之前还包括：
[0028] 将胶原蛋白与冰醋酸混合后，依次进行除菌和灭活，得到胶原蛋白溶液，然后再将 表皮细胞生长因子、胶原蛋白溶液和血小板提取物混合，得到胶原蛋白组合物。
[0029] 本发明提供了一种胶原蛋白组合物，包括表皮细胞生长因子、胶原蛋白、血小板提 取物和水，所述血小板提取物在所述胶原蛋白组合物中的质量浓度为0. 5~I. 5mg/mL。本 发明通过提取血小板内部成分，结合胶原蛋白和表皮细胞生长因子（EGF)，能快速止血和粘 合伤口，因为是提取得到的血小板内部成分，能直接作用于止血，速度快，效果好，强化炎症 和免疫反应，结合EGF促进表皮细胞生长，加快伤口愈合。并且，上述各成分均可在人体内 降解，无任何毒副作用，无刺激作用，降解后无任何残留。
【附图说明】
[0030] 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现 有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本 发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据 提供的附图获得其他的附图。
[0031] 图1为本发明实施例中的B型伤口示意图；
[0032] 图2为使用本发明实施例4得到的胶原膜贴的B型伤口愈合图。
【具体实施方式】
[0033] 本发明提供了一种胶原蛋白组合物，包括：表皮细胞生长因子、胶原蛋白、血小板 提取物和水，
[0034] 所述血小板提取物在所述胶原蛋白组合物中的质量浓度为0. 5~I. 5mg/mL。
[0035] 本发明提供的胶原蛋白组合物包括表皮细胞生长因子（EGF)，所述表皮细胞生长 因子又名寡肽-1，是人体内的一种活性物质，所述表皮细胞生长因子在所述胶原蛋白组合 物中的质量浓度优选为80~120ng/mL，更优选为85~115ng/mL，最优选为90~IlOng/ mL。本发明对所述表皮细胞生长因子的来源没有特殊的限制，购买市售商品即可。如，可采 用ExCell (CB)公司提供的01. ExCell (CB). CB031-0041型号的重组人表皮细胞生长因子冻 干粉。
[0036] 本发明提供的胶原蛋白组合物包括胶原蛋白，所述胶原蛋白优选采用动物胶原蛋 白，所述胶原蛋白在所述胶原蛋白组合物中的质量分数优选为40~50%，更优选为43~ 48%，最优选为45~46%。本发明对所述胶原蛋白的来源没有特殊的限制，采用市售商品 即可，如，可采用石家庄旭尔美生物科技有限公司提供的QB2732-2005型号的动物胶原蛋 白。
[0037] 本发明提供的胶原蛋白组合物包括血小板提取物，所述血小板提取物在所述胶原 蛋白组合物中的质量浓度为0. 5~I. 5mg/mL，优选为0. 8~I. 3mg/mL，更优选为1~I. Img/ mL〇
[0038] 血小板内部含有α颗粒和致敏颗粒，α颗粒中含纤维蛋白原、血小板第4因子、组 织蛋白酶Α、组织蛋白酶D、酸性水解酶等；致敏颗粒含有5 -羟色胺、ADP、ATP、钙离子、肾上 腺素、抗血纤维蛋白酶、焦磷酸等。这些因子成分通过复杂的变化产生凝血酶，是血液中的 纤维蛋白原变为纤维蛋白，互相交织的纤维蛋白使血小板凝块与血细胞缠结成血凝块，即 血栓。伴随着血栓的形成，血小板释放血栓烷A2;致密颗粒和α颗粒通过与表面相连管道 系统释放ADP、5-羟色胺、血小板第4因子、β血栓球蛋白、凝血酶敏感蛋白、细胞生长因子、 血液凝固因子V、νπ、χπ和血管通透因子等多种活性物质，这些活性物质通过激活血液中其 他血小板，促进血管收缩，促纤维蛋白形成等多种方式加强止血。在本发明中，所述血小板 提取物主要是各类因子的蛋白成分。
[0039] 在本发明中，所述血小板提取物优选按照以下步骤制得：
[0040] Α)将脐血离心，提取血小板；
[0041] Β)采用缓冲液将所述血小板重悬，得到血小板混悬液，将所述血小板混悬液反复 冻融3~8次，得到血小板冻融液；
[0042] C)所述血小板冻融液采用6000~1000 Og的转速进行离心，得到血小板提取物。
[0043] 本发明将脐血离心，提取得到血小板，本发明优选将脐血以200~500g的转速离 心5~20min，取上层血浆；将上层血浆以200~500g的转速离心1~lOmin，取上清液；将 上清液以1000~1500g的转速离心1~lOmin，得到血小板；本发明更优选以300~400g 的转速离心10~15min，取上层血浆；将上层血浆以300~400g的