长非编码核糖核酸mrak009713小干扰rna在制备神经病理痛药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及神经病理痛镇痛药物用途发明领域。
【背景技术】
[0002] 疼痛是大多数疾病具有的共同症状，是人类共有而个体差异很大的一种不愉快的 感觉。由于疼痛给人们造成极大痛苦，据2001年第二期《国际疼痛学会通迅》报道：美国 106次国会通过一项决议，宣布从2001年元月一日起的十年为"疼痛控制和研究的十年"。 由此说明疼痛治疗是世界难题。根据疼痛时程可将疼痛分为急性痛（生理性痛）和慢性痛 (病理性痛）。慢性痛包括炎症痛、神经病理痛、癌症痛，是临床上常见主诉之一。由于慢性 痛机理复杂，其治疗成为临床上的难题。神经病理痛是指由神经系统损伤或疾病所引起的 疼痛综合征，常常表现为自发性的疼痛，对机械、冷、热等伤害性刺激产生痛觉过敏；对非伤 害性刺激产生触诱发痛、痛觉倒错和烧灼痛等神经病理性痛觉过敏。常规镇痛药副作用较 大（如吗啡容易成瘾），加之慢性痛持续时间长，对人身心健康危害较大，因此探明其发病 机制寻找安全有效的慢性痛防治方法是全世界科学家研究的热点和重点。
[0003] 嘌呤类物质三磷酸腺苷（ATP)作为重要的信使物质参与痛觉信息传递。嘌呤受体 分为Pl和P2受体，ATP及其类似物作用于P2受体。P2受体分为配体门控性离子通道型受 体（P2X受体）和G蛋白偶联型受体（P2Y受体）。外周感受器感受伤害性刺激后形成伤害 冲动是通过脊神经（背根）节初级感觉神经细胞传入。疼痛、伤害性刺激使损伤细胞、应激 细胞以及感觉神经末梢本身释放大量ATP，ATP及其作用的P2X受体涉及痛觉及伤害性信息 在初级感觉神经元的传递，其中主要是同聚性P2X3受体和异聚性P2X 2/3受体参与初级感觉 神经元的痛觉及伤害性信息传递。基因敲除P2X3受体和双重基因敲除P2X 2/3受体的小鼠减 小了对福尔马林致痛试验的两相反应。P2X#PP2X2/3受体介导神经病理痛的痛觉传递。神 经病理痛刺激时，P2X3受体和P2X 3mRNA表达增加，感觉神经元？2乂3受体介导ATP激活的门 控通道电流明显增强。应用P2X3受体反义寡核苷酸及RNA干扰技术可使炎性痛大鼠模型 背根神经节的P2X3受体水平下调，进而明显减轻P2X 3受体激动剂α，β -meATP和福尔马林 所致的足底伤害性反应。这些发现为神经病理痛的发病机理提供了新的依据。申请人实验 室以前的研究也显示神经病理痛可导致背根感觉神经元P2X3受体表达增加。目前国外已 有研究生产P2X3受体拮抗剂（如R03)用于临床治疗疼痛的报道。
[0004] 随着基因组测序计划的完成以及新一代深度测序技术的应用，人们发现哺乳动物 细胞中多于95%的转录序列为非编码核糖核酸（noncoding RNA，ncRNA)。非编码RNA是一 类不编码蛋白质但具有生物学调控功能的RNA分子，它可通过参与mRNA的稳定和翻译水平 的调节、蛋白质的运输、RNA的加工和修饰以及影响染色体的结构等机制，调控生物体的基 本生命活动，同时与一些重要疾病的病理生理过程相关。非编码RNA包括短非编码核糖核 酸（包括 siRNA、miRNA、piRNA)和长非编码核糖核酸（long non-coding RNA, IncRNA)。长 度大于200个碱基（200nt)为长链非编码核糖核酸（IncRNA)。目前长度小于50个核苷酸 的非编码RNA(如microRNA、siRNA和piRNA)等的研究已取得突破性进展，但对具有功能的 长非编码核糖核酸的研究不多。本发明通过坐骨神经慢性压迫性损伤（CCI)大鼠模型，观 察长非编码核糖核酸MRAK009713小干扰核糖核酸处理后大鼠痛行为的变化，以及与介导 神经病理痛的P2X3受体表达变化的关系，为MRAK009713小干扰RNA用于慢性痛（即神经 病理痛）的预防和治疗提供帮助。
【发明内容】
[0005] 本发明的第一个目的在于提供长非编码核糖核酸MRAK009713小干扰RNA的第一 个新用途，即长非编码核糖核酸MRAK009713小干扰RNA在制备治疗神经病理痛药物中的应 用。
[0006] 本发明的第二个目的在于提供长非编码核糖核酸MRAK009713小干扰RNA的第二 个新用途，即长非编码核糖核酸MRAK009713小干扰RNA在制备涉及卩2&受体介导神经系 统疾病防治药物中的应用。
[0007] 长非编码核糖核酸MRAK009713小干扰RNA可减轻神经病理痛大鼠的痛行为反应。 长非编码核糖核酸MRAK009713小干扰RNA在防治神经病理痛的作用机理为：降低背根神经 节上的？2&受体表达，产生防治疼痛的作用。
【附图说明】
[0008] 图1为坐骨神经慢性压迫性损伤模型大鼠机械缩足反射阈值变化图。长非编码核 糖核酸MRAK009713的小干扰RNA处理后对CCI大鼠的机械痛行为具有抑制作用。包括对 照组；假手术组；慢性坐骨神经压迫性损伤组；慢性坐骨神经压迫性损伤+长非编码核糖核 酸MRAK009713的小干扰RNA处理组；慢性坐骨神经压迫性损伤+乱序的小干扰RNA阴性对 照组。其中\〈〇. 05, #p〈0. 01表示和正常组比较，#p〈0. 05, ##p〈0. 01表示与坐骨神经慢性 压迫性损伤模型组比较。
[0009] 图2为坐骨神经慢性压迫性损伤模型大鼠热缩足反射阈值变化图。长非编码核糖 核酸MRAK009713的小干扰RNA处理后对坐骨神经慢性压迫性损伤大鼠的热敏痛行为具有 抑制作用。实验分组包括：对照组；假手术组；慢性坐骨神经压迫性损伤组；慢性坐骨神经 压迫性损伤+长非编码核糖核酸MRAK009713的小干扰RNA处理组；慢性坐骨神经压迫性损 伤+乱序的小干扰RNA阴性对照组。其中\〈0. 05, wp〈0. 01表示和正常组比较，#p〈0. 05，##p〈0. 01表示与坐骨神经慢性压迫性损伤模型组比较。
[0010] 图3为坐骨神经慢性压迫性损伤大鼠背根神经节（DRG)长非编码核糖核酸 MRAK009713的实时定量逆转录-聚合酶链式反应（realtime RT-PCR)检测结果图。长非编 码核糖核酸MRAK009713的小干扰RNA处理后可降低坐骨神经慢性压迫性损伤大鼠 DRG上 调的长非编码核糖核酸MRAK009713水平。实验分组包括：对照组；假手术组；慢性坐骨神 经压迫性损伤组；慢性坐骨神经压迫性损伤+长非编码核糖核酸MRAK009713的小干扰RNA 处理组；慢性坐骨神经压迫性损伤+乱序的小干扰RNA阴性对照组。其中wp〈0. 01表示和 正常组比较，#p〈〇. 05, ##p〈0. 01表示与坐骨神经慢性压迫性损伤模型组比较。
[0011] 图4为坐骨神经慢性压迫性损伤大鼠 DRG的？2乂3受体realtime RT-PCR检测结 果图。长非编码核糖核酸MRAK009713的小干扰RNA处理后可降低坐骨神经慢性压迫性损 伤大鼠 DRG上调的？2&受体水平。实验分组包括：对照组；假手术组；慢性坐骨神经压迫性 损伤组；慢性坐骨神经压迫性损伤+长非编码核糖核酸MRAK009713的小干扰RNA处理组； 慢性坐骨神经压迫性损伤+乱序的小干扰RNA阴性对照组。其中wp〈0.0 l表示和正常组比 较，##P〈〇. 01表示与坐骨神经慢性压迫性损伤模型组比较。
[0012] 图5为坐骨神经慢性压迫性损伤大鼠 DRG的P2X3受体免疫组织化学检测结果图。 长非编码核糖核酸MRAK009713的小干扰RNA处理后可降低坐骨神经慢性压迫性损伤大鼠 DRG上调的？2&受体水平。图5 (a)为免疫组织化学实验结果图，图5 (b)为实验数据分析 比较柱状图，实验分组包括：对照组；假手术组；慢性坐骨神经压迫性损伤组；慢性坐骨神 经压迫性损伤+长非编码核糖核酸MRAK009713的小干扰RNA处理组；慢性坐骨神经压迫性 损伤+乱序的小干扰RNA阴性对照组。其中#p〈0. 01表示和正常组比较，##p〈0. 01表示与 坐骨神经慢性压迫性损伤模型组比较。
[0013] 图6为坐骨神经慢性压迫性损伤大鼠 DRG的P2X3受体蛋白印迹检测结果图。长 非编码核糖核酸MRAK009713的小干扰RNA处理后可降低坐骨神经慢性压迫性损伤大鼠 DRG 上调的？2&受体水平。图6(a)为蛋白印迹实验结果图，图6(b)为实验数据分析比较柱状 图，实验分组包括：对照组；假手术组；慢性坐骨神经压迫性损伤组；慢性坐骨神经压迫性 损伤+长非编码核糖核酸MRAK009713的小干扰RNA处理组；慢性坐骨神经压迫性损伤+乱 序的小干扰RNA阴性对照组。其中\〈0. 05表示和正常组比较，##p〈0. 01表示与坐骨神经慢 性压迫性损伤模型组比较。
[0014] 图7为坐骨神经慢性压迫性损伤大鼠