一种蛮龙液的制备方法及应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药制剂技术领域，具体涉及一种蛮龙液的制备方法及应用。
【背景技术】
[0002] 蛮龙液记载于部颁标准，处方为雄蚕蛾25g、刺五加25g、酒制菟丝子17. 5g、淫羊 藿20g、盐制熟地黄10g、盐制补骨脂10g，以上六味，取雄蚕蛾加白酒适量，浸泡30天，浸液 减压回收乙醇，制成流浸膏；其余刺五加等五味，加70%乙醇提取二次，第一次4小时，第二 次2小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇至适量，加乙醇使含醇量为70%，静置24小时， 滤过，沉淀用适量60 %乙醇洗涤，洗液与滤液合并，回收乙醇至无醇味，加蔗糖适量，使溶 解，与雄蚕蛾浸膏混合，加白酒及适量水调整总量至1000ml，混匀，即得。现有技术中，尚未 有蛮龙液在提取制备方面采用微波技术的报道，而采用乙醇回流等方法，工艺粗糙、落后， 杂质多，导致患者用量过大，不方便服用，严重影响了本品在临床上应用。
【发明内容】
[0003] 发明目的：为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种蛮龙液的制备方法。
[0004] 本发明的另一个目的在于提供一种蛮龙液在制备抑制小鼠黑色素瘤B16细胞增 殖药物和治疗或预防登革病毒感染药物中的应用。
[0005] 技术方案：本发明的目的是通过如下的方案实现的：
[0006] -种蛮龙液的制备方法，由雄蚕蛾25g、刺五加25g、酒制菟丝子17. 5g、淫羊藿 20g、盐制熟地黄10g、盐制补骨脂IOg作为原料药制成，所述的方法由下列步骤组成：取雄 蚕蛾25g、刺五加25g、酒制菟丝子17. 5g、淫羊藿20g、盐制熟地黄10g、盐制补骨脂10g，粉 碎，加入2L的70 %乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率400-600W，萃取2 次，每次4-8分钟，合并萃取液，浓缩，加到DlOl大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5 倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩，加蔗糖、白酒及适量水调整总量至800ml，混匀，即 得。
[0007] 所述蛮龙液的制备方法，所述微波萃取功率500W，每次萃取6分钟。
[0008] 所述蛮龙液在制备抑制小鼠黑色素瘤B16细胞增殖药物中的应用，其特征在于蛮 龙液由雄蚕蛾25g、刺五加25g、酒制菟丝子17. 5g、淫羊藿20g、盐制熟地黄10g、盐制补骨 脂IOg作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成：取雄蚕蛾25g、刺五加25g、酒制菟丝子 17.5 8、淫羊藿2(^、盐制熟地黄1(^、盐制补骨脂1(^，粉碎，加入21的70%乙醇，投入微波 萃取装置中进行微波萃取，萃取功率400-600W，萃取2次，每次4-8分钟，合并萃取液，浓缩， 加到DlOl大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓 缩，加蔗糖、白酒及适量水调整总量至800ml，混匀，即得。
[0009] 所述蛮龙液在制备抑制小鼠黑色素瘤B16细胞增殖药物中的应用，所述微波萃取 功率500W，每次萃取6分钟。
[0010] 所述蛮龙液在制备治疗或预防登革病毒感染药物中的应用，蛮龙液由雄蚕蛾25g、 刺五加25g、酒制英丝子17. 5g、淫羊藿20g、盐制熟地黄10g、盐制补骨脂IOg作为原料药制 成，制备方法由下列步骤组成：取雄蚕蛾25g、刺五加25g、酒制菟丝子17. 5g、淫羊藿20g、盐 制熟地黄l〇g、盐制补骨脂l〇g，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃 取，萃取功率400-600W，萃取2次，每次4-8分钟，合并萃取液，浓缩，加到DlOl大孔吸附树 脂柱上，50 %乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩，加蔗糖、白酒及适 量水调整总量至800ml，混匀，即得。
[0011] 所述蛮龙液在制备治疗或预防登革病毒感染药物中的应用，所述微波萃取功率 500W，每次萃取6分钟。
[0012] 上述中药均符合药典标准或者记载在《中药大辞典》中。
[0013] 现有技术中，原蛮龙液，口服，一次30~40毫升，一日2次，采用本发明制备成的 蛮龙液单位体积的蛮龙液中药材量增加，因此每次仅需20ml，一日服用3次，在具有更多活 性成分的条件下大大减少了服用量。
【具体实施方式】
[0014] 以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此 理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均 属于本发明的范围。
[0015] 实施例1 :取雄蚕蛾25g、刺五加25g、酒制菟丝子17. 5g、淫羊藿20g、盐制熟地黄 l〇g、盐制补骨脂l〇g，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取 功率400W，萃取2次，每次4分钟，合并萃取液，浓缩，加到DlOl大孔吸附树脂柱上，50%乙 醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩，加蔗糖5g、白酒500ml及适量水调 整总量至800ml，混匀，即得。
[0016] 实施例2 :取雄蚕蛾25g、刺五加25g、酒制菟丝子17. 5g、淫羊藿20g、盐制熟地黄 l〇g、盐制补骨脂l〇g，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取 功率500W，萃取2次，每次6分钟，合并萃取液，浓缩，加到DlOl大孔吸附树脂柱上，50%乙 醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩，加蔗糖5g、白酒500ml及适量水调 整总量至800ml，混匀，即得。
[0017] 实施例3 :取雄蚕蛾25g、刺五加25g、酒制菟丝子17. 5g、淫羊藿20g、盐制熟地黄 l〇g、盐制补骨脂l〇g，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取 功率600W，萃取2次，每次8分钟，合并萃取液，浓缩，加到DlOl大孔吸附树脂柱上，50%乙 醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩，加蔗糖5g、白酒500ml及适量水调 整总量至800ml，混匀，即得。
[0018] 实施例4 :蛮龙液抑制小鼠黑色素瘤B16细胞增殖的实验研究资料
[0019] 1实验材料 [0020] 1. 1实验用细胞株
[0021] 小鼠黑色素瘤B16细胞，南京医科大学实验室细胞库，DMEM+10% FBS常规培养。
[0022] 1. 2实验药物
[0023] 研究药物：本发明蛮龙液：按实施例3方法制备。
[0024] 药液储液：取5ml蛮龙液，0. 2 ym滤器过滤，500 y I doff管分装，-20°C存储，同时 0. 2 ii m滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。按卫生部方法制备市售蛮龙液的对照组样品。
[0025] 1. 3实验试剂
[0026] DMEM(GIBC0 公司Cat.No. 12100-061Lot.No. 758137);胎牛血清（浙江天 杭生物科技有限公司Lot.No. 100419) ;NaHC03 (上海久亿化学试剂有限公司Cat. No.11810-033Lot.No. 1088387)Jrypsin(AMRESC0 公司批号：2010/04) ;EDTA(AMRESC0 公司批号：2009/10)!PenicillinGSodiumSalt(AMRESC0公司批号：2010242); Str印tomycinSulfate(AMRESC0公司批号：2010382);无水乙醇（南京化学试剂有限公司 批号：080310182) ;MTT(Biosharp批号：0793);PBS(实验室自配）；
[0027] 1. 4实验器材
[0028] 莱卡倒置显微镜（德国Leica型号：DMlL);可见-紫外光微孔板检测仪（美国MD 公司型号：SPECTRAMAX 190) ;C02培养箱（FORMA型号：3111);超净台（苏净集团安泰公 司制造型号：SW-CJ-ZFD);纯水仪（美国Spring公司型号：S/N 020579);精密移液器（法 国吉尔森公司型号：P2);电子天平（德国赛多利斯有限公司型号：BT323S);全自动高压灭 菌锅（日本SANYO公司型号：MLS-3020);台式电热鼓风干燥箱（上海精密实验设备公司型 号：DHG9123A);冰箱（西门子公司型号：KG18V21TI);液氮罐（CBS型号：2001);低速离心 机（上海安亭科学仪器厂型号：KA-1000) ;0? 2ym滤器（MILLIP0RE型号：SLGP033RB) ;10cm 培养皿（NEST公司）、96孔培养板（NEST公司）；细胞计数板；离心管、移液管、Tips若干。
[0029] 2实验方法
[0030] 1)小鼠黑色素瘤B16细胞用DMEM+10% FBS于37°C、5%C02进行常规培养（10cm 培养皿），当细胞生长至对数期时，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入3ml0. 25 %胰 蛋白酶-0. 04% EDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培养基中和反应，吹打细胞后 将其转入离心管中，1000 rpm离心5min，调整细胞悬液浓度3X 104个/ml。
[0031 ] 2)将细胞种入96孔培养板中，每孔加入细胞悬液180 y 1，培养板放入细胞培养箱 中（37°C，5% C02)常规培养。
[0032] 3)根据细胞生长情况，一般长至50% -70%，加入蛮龙液溶液或苍耳子的对照组 样品，继续培养24h。
[0033]4) 24h后加入 20yI MTT 溶液（5mg/ml，即 0? 5 % MTT)，继续培养 4h