组合物、组合物的用途及制造方法
【专利说明】组合物、组合物的用途及制造方法
[0001] 发明概沐
[0002] 本发明提供包含下述中的至少两种（例如2、3、4、5或6种）的组合物：（a)海胆 色素 A (2-乙基-3, 5, 6, 7, 8-五羟基-1，4-萘醌）；(b)棘色素 A (2-乙酰基-3, 5, 6, 8-四羟 基-1，4-萘二酮）；（c)棘色素 B (2, 3, 5, 7-四羟基-1，4-萘二酮）；（d)棘色素 C(2-乙酰 基-3, 5, 6, 7, 8-五羟基-1，4-萘二酮）；（e)棘色素 D (2, 3, 5, 6, 8-五羟基-1，4-萘二酮）；以 及（f)棘色素 E (六羟基-1，4-萘二酮）。组合物可包含一种或多种另外的活性成分（如维 生素、维甲酸（全反式视黄酸或ATRA)、糖胺聚糖（GAG)、皮肤填充剂、肉毒杆菌（Botulinum) 毒素等）和/或一种或多种非活性成分（如溶剂、载体、胶凝剂、着色剂等）。组合物可以是 干燥的固体形式（如粉末）或者是液体形式。此外，上文（a) - (f)中的每一组分都可以以 天然来源的形式或以合成制备的形式独立存在于组合物中。
[0003] 海胆可包含下述中的至少一种：巨紫球海胆（Strongylocentrotus franciscanus)、紫球 海胆(Strongylocentrotus purpuratus)、绿海胆 (Strongylocentrotus droebachiensis)、 Loxechinus albus、 Evechinus Chloroticus、 Strongylocentrotus droebachiensin、 ?!下夷马 奠海胆(Strongylocentrotus intermedius)、光棘球海胆(Strongylocentrotus nudus)、 Strongylocentrotus pallidas、 Strongylocentrotus polyacanthus、 Paracentrotus lividus、 Lytechinus variegatus、Lytechinus variegatus、紫海胆（Heliocidaris erythrogramma)、长刺海胆 (Centrostephanus rodgersii)以及 Heliocidaris tuberculate。
[0004] 本发明也提供一种方法，包括向患者（如人）施用有效量的本文所述的组合物。所 述施用可以是局部施用或全身施用。
[0005] 本发明也提供一种方法，包括向患者（如人）局部施用有效量的本文所述的组合 物。局部施用组合物以治疗以下中的至少一种：与衰老有关的局部状况（如皱纹和/或光 老化）、痤疮、局部细菌性感染、局部真菌性感染（如指甲真菌）以及局部病毒性感染（如口 腔溃疡）。
[0006] 本发明也提供一种方法，包括向患者（如人）口服施用有效量的本文所述的组合 物。
[0007] 本发明也提供抑制患者（如人）内存在的其它分子（如抗氧化酶）的氧化的方法。 所述方法包括向患者施用有效抗氧化量的本文所述的组合物。
[0008] 本发明也提供制备从海胆中获得的组合物的方法。所述方法包括：（i)将海胆干 燥以提供干燥的海胆；（ii)将干燥的海胆的尺寸减小为粉末；和（iii)任选地，对所述粉 末进行溶剂提取。所述海胆可包含全海胆、海胆壳、海胆棘、海胆软组织和海胆内骨骼中的 至少一种。可获得相当高产率（例如至少约〇. Iwt. % )和/或相当高纯度（例如至少约 95wt. % )的组合物。可任选地对组合物进行后续纯化，可包括，例如高压液相层析（HPLC)、 结晶化和/或溶剂提取。
[0009] 附图简要描休
[0010] 可通过参考下文的描述以及对本文公开的实施方案进行示例性说明的附图来更 好的理解此类实施方案。
[0011]图1显示了描述制备市售为T-Regalus?i的液体提取物的方块流程图（图1)。
[0012] 图2显示了描述制备可用作如肥料的组合物的粉末形式的方块流程图（图2)。
[0013] 发明详沐
[0014] 现在将详细参考本文公开的某些权利要求，这些权利要求的实例在所附的结构和 配方中进行了示例性说明。虽然本公开的主题将与列举的权利要求一起描述，但是应当理 解，它们不意图将本公开的主题限于那些权利要求。相反，本公开的主题意图覆盖所有的替 代物、修饰以及等同物，其可以包含于权利要求所限定的本公开的主题的范围内。
[0015] 本说明书提到的"一个实施方案"、"实施方案"、"示例性实施方案"等显示所描述 的实施方案可包括具体的特征、结构或特性，但是每一实施方案不一定包含所述的具体特 征、结构或特性。此外，此类短语不一定指相同的实施方案。另外，当结合实施方案描述具 体的特征、结构或特性时，认为在本领域技术人员的知识范围内可实现与其它实施方案有 关的该特征、结构或特性，无论是否明确描述。
[0016] 本公开的主题涉及组合物及其制备和使用方法。当描述组合物及其制备和使用方 法时，下文的术语具有下述含义，除非另外指明。
[0017] 本文使用的"结晶化"包括从溶液中形成晶体（晶体材料）的过程。
[0018] 本文使用的"尺寸减小"指减小海洋组织（如干燥的具有软组织的海胆壳/棘）的 尺寸，通常将其变为粉末。这可以通过，例如撕碎、碾磨和/或浸软来完成。可实施尺寸减 小，以使固体颗粒的平均尺寸至少减小10%，至少减小20%，至少减小30 %或者至少减小 40%。在具体实施方案中，固体颗粒的平均尺寸减小最高至70%，最高至50%，或者最高至 30%〇
[0019] 本文使用的"干燥"包括将其中存在的大部分（如大于90wt. % )有机溶剂和水移 除。例如，可将具有软组织的海胆壳/棘干燥，以移除其中大量的水分。这可通过例如下述 方法来完成：将海洋组织在环境条件下干燥较长一段时间（如约48小时），然后将其置于 对流烤箱中并加热至较高的温度，持续较长一段时间（例如加热至约116° F，加热约72小 时）。可进行干燥以使海洋组织中的最终水分含量低于约20wt. % (如约7-12wt. % )。
[0020] 本文使用的"有机溶剂"指在环境条件下是液体的物质，其中化合物被认为是有机 分子（即存在一个或多个碳原子）。有机溶剂可以是极性的或者是非极性的。此外，有机 溶剂可以是质子性的或者是非质子性的。有机溶剂可包含一定量的水。例如，有机溶剂可 包括乙醇，乙醇自身可包含水。具体地，有机溶剂可包含95%的乙醇（即，有机溶剂可含有 95 %的乙醇和5 %的水）。
[0021] 本文使用的"纯化"指去除期望的杂质材料的过程。合适的纯化方法包括，例如洗 涤、溶剂提取、层析（如HPLC)、再结晶和干燥。
[0022] 本文使用的" μ g"表示微克，"mg"表示毫克，"g"表示克，" μ L"表示微升，"mL" 表示毫升，"L"表示升，"nM"表示纳摩尔含量，" μ Μ"表示微摩尔含量，"mM"表示毫摩尔含 量，"M"表示摩尔含量，"nm"表示纳米。
[0023] 制诰（加工）方法
[0024] 在本文所述的制备方法中，在不脱离本文所述的原则的情况下，可以以任意顺序 来实施步骤，除非对时间程序或操作程序进行明确地叙述。当在权利要求中叙述先实施一 个步骤，随后实施一些其它步骤时，这应被理解为在任何其它步骤之前实施第一步骤，但是 其它步骤可以按任何合适的顺序来实施，除非在其它步骤中进一步叙述了实施顺序。例如， 叙述"步骤A、步骤B、步骤C、步骤D和步骤E"的权利要求部分应被解释为首先实施步骤A， 最后实施步骤E，步骤B、C以及D可以按步骤A和E之间的任何顺序来实施，并且所述顺序 仍落入要求保护的过程的字面范围内。
[0025] 此外，可同时实施规定的步骤，除非权利要求语言中明确叙述它们应当分开实施。 例如，可在单次操作中同时实施权利要求中进行X的步骤和权利要求中进行Y的步骤，且产 生的过程将落入要求保护的过程的字面范围内。
[0026] 关于图1和图2,本文描述的加工方法包括：⑴将海胆干燥以提供干燥的海胆， (ii)将干燥的海胆的尺寸减小至粉末，和（iii)任选地，对粉末进行溶剂提取。可实施本文 所述的方法以获得本文描述的组合物。
[0027] 在加工方法中使用的海胆可包括全海胆或其任何部分。例如，海胆可包括全海胆、 海胆壳、海胆棘、海胆软组织以及海胆内骨骼中的至少一种。
[0028] 在加工方法中使用的海胆可包括任何合适的海胆种类或种类组合。例如，在 加工方法中使用的海胆可包含下述中的至少一种：巨紫球海胆、紫球海胆、绿球海胆、 Loxechinus albus、 Evechinus Chloroticus、 Strongylocentrotus droebachiensin、 4下夷马奠海胆、光棘球海胆、Strongylocentrotus pallidas、Strongylocentrotus polyacanthus、 Paracentrotus Iividus、 Lytechinus variegatus、 Lytechinus variegatus、紫海胆、长刺海胆以及 Heliocidaris tuberculate。
[0029] 本文所述的加工方法中的干燥步骤可以以任何合适的以及适当的方式实施。例 如，可使用干燥炉或通过晒干来实施干燥步骤。
[0030] 本文所述的加工方法中的尺寸减小步骤可以以任何合适的以及适当的方式实施。 例如，可使用将干燥的海胆撕碎、覆盖（mulching)、研磨以及碾磨中的至少一种来实施尺寸 减小步骤。
[0031 ] 本文所述的加工方法中的溶剂提取步骤可以以任何合适的以及适当的方式实施。 例如，可使用有机溶剂（如乙醇和/或二甲醚）来实施溶剂提取步骤。具体而言，可使用索 氏系统来实施溶剂提取步骤。
[0032] 关于图1中显示的方法，可将粉末状的（干燥的）海胆直接用在商业中。可选地， 可将粉末状的（干燥的）海胆进行溶剂提取（例如95%的乙醇和/或二甲醚）以获得粉 末状的（干燥的）海胆的提取物。在具体实施方案中，粉末状的（干燥的）海胆的提取物 可直接用在商业中。可选地，可配制粉末状的（干燥的）海胆的提取物（例如与稳定剂和 /或防腐剂混合）以提供液体提取物（如T-Regalus?')。
[0033] 药物制剂
[0034] 随后可用常规的载体和赋形剂来配制本文所述的组合物，可按通常的实践来 选择载体和赋形剂。片剂可含有赋形剂、助流剂、填充剂、粘合剂等。将水制剂制备 为无菌形式，并且当意图通过除口服给药之外的方式递送时，其通常是等张的。所有 制剂任选地含有赋形剂，如在 Handbook of Pharmaceutical Excipients，5th Ed.; Rowe, Sheskeyj and Owen,Eds. ；American Pharmacists Association ；Pharmaceutical Press:Washington，DC，2006中列出的那些赋形剂包括抗坏血酸和其它的抗氧化剂，螯合 剂（如EDTA)，碳水化合物（如糊精），羟烷基纤维素，羟烷基甲基纤维素，硬脂酸等。制剂 的pH范围为约3-约11，但是通常为约7-10。
[0035] 虽然单独施用本文所述的组合物的活性成分是可能的，但优选以例如药物制剂、 美容制剂或植物制剂（如肥料）等的形式存在。因而，本文公开的制剂（兽用、人用以及植 物用）包含至少一种如上文所限定的活性成分和一种或多种可接受的载体，以及任选地包 含其它治疗成分。载体必须是"可接受的"，其意义在于与制剂中的其它成分相容且对其接 受者在生理上是无害的。
[0036] 制剂包括适合于前述给药途径的那些制剂。制剂可方便地以单位剂量的形式存 在，并且可通过药学领域众所周知的方法中的任何方法来制备。通常可在Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA, (1985)中找到技术和 制备方式。此类方法包括将组合物与包含一种或多种辅助成分的载体相结合的步骤。通常， 通过下述方式来制备制剂：将组合物与液体载体或精细切割的固体载体或与这两者均匀且 紧密相结合，然后如果需要，将产物成形。
[0037] 适合口服给药的本文公开的制剂可以以下述形式存在：离散单元（如胶囊、扁囊 剂或片剂），每个单元含有预定量的组合物；粉末或颗粒；水性或非水性液体的溶液或悬 液；或者水包油液体乳剂或油包水液体乳剂。还可将组合物作为大丸剂、药糖剂或糊剂来施 用。
[0038] 通过压缩或模制来制备片剂，任选地与一种或多种辅助成分进行压缩或模制。可 通过下述方式来制备压缩片剂：将自由流动形式的组合物（如粉末或颗粒）在合适的机器 中压缩，组合物任选地混合有粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂。 可通过下述方式来制备模制片剂：将用惰性液体稀释剂润湿的粉末状的组合物的混合物在 合适的机器中进行模制。片剂可任选地被包被或刻痕，并且任选地被配制为能提供组合物 的缓释或控释。
[0039] 对于向眼部或其它外部组织（如口或皮肤）的施用，优选地，将制剂制备为含有活 性成分的局部用软膏或乳霜，其中活性成分的量为，例如〇. 075% -20% w/w(包括增量为 0· 1 % w/w 的范围为 0· 1 % -20% 的活性成分，如 0· 6% w/w、0. 7% w/w 等），优选 0· 2% -15% w/