一种鬼臼毒素透皮给药制剂的制备方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药制剂领域，特别是鬼白毒素透皮给药制剂的制备方法，及其在治 疗尖锐湿疣外用给药中的应用。
【背景技术】
[0002] 鬼臼毒素(Podophyllotoxin，PPT)是小檗科桃儿七属植物桃儿七，鬼臼属植物的 八角莲、六角莲、云南八角莲、西藏八角莲及山荷叶属植物南方山荷叶等植物的根及根状茎 中提取到的木脂类成份，具有显著的抗肿瘤、抗病毒、抗免疫等作用。鬼白属植物在世界分 布广泛，在我国主要分布于甘肃、青海、西藏、四川、台湾等地，在民间主要用于虫蛇咬伤、跌 打损伤、风湿筋骨痛和气管炎等病症，其提取物还用于驱虫杀虫剂、泻药等(刘杰，2011)。
[0003] 鬼白毒素分子式为C22H22O8，包含一个五元内酯环，一个活性羟基，以及多个醚键。 为白色结晶性粉末，无臭，有吸湿性。在氯仿中易溶，在甲醇、乙醇中溶解，在乙醚中微溶，在 水中儿乎不溶。鬼白毒素为酯类化合物，是一种不稳定的化合物，在中性和偏酸性环境中较 稳定，在碱性和强酸性环境中不稳定，容易降解，降解速度随温度升高而加快(于燕燕等， 2011)。
[0004] 鬼臼毒素的临床应用主要集中在治疗尖锐湿疏(Condyloma acuminatum)，鬼臼毒 素能有效抑制疱疹病毒，抑制细胞中期的有丝分裂，用于病毒性性病（马海忠等，2013年）。 0.5%鬼白毒素为尖锐湿疣首选的治疗药物。临床实验表明鬼白毒素及从鬼白属植物中得 到的化合物能有效破坏尖锐湿疏中人乳头状瘤病毒(Human papiIIomavirus，HPV)的DNA， 其中采用鬼白毒素冷冻疗法最有效。
[0005] 常用的鬼白毒素制剂有鬼白毒素溶液、0.5%鬼白毒素酊剂、鬼白毒素软膏剂、鬼 臼毒素涂膜剂、鬼白毒素凝胶剂和鬼白毒素脂质体。目前已上市销售的鬼白毒素剂型有:溶 液、酊剂、软膏剂;进入试验研究阶段的剂型有:涂膜剂、纳米凝胶剂、固体脂质纳米粒等（肖 艳等，2013)。
[0006] 鬼白毒素酊剂是目前临床使用最为广泛，也是人们研究最多的一种剂型。但其存 在的主要缺点是药物靶向性不高，作用时间短，且易损伤真皮，导致疼痛、糜烂、水肿等，具 有明显的皮肤刺激胜，且易导致复发(Longstaff E et al.，2001)。
[0007] 为了减少鬼白毒素酊剂对皮肤的刺激性，改善其作用时间短等缺点，研制出了鬼 臼毒素涂膜剂和凝胶剂。李建军等(2003)观察了 0.5%鬼白毒素涂膜剂外用治疗尖锐湿疣 的疗效，与鬼白毒素酊剂的疗效相同，相较于酊剂，其使用后迅速在病灶上形成一片不溶解 于水的薄膜，使残留药物只渗透到薄膜下的病灶，而不污染周边正常皮肤，从而避免了引起 的周边正常皮肤溃烂等不良反应。曹健等(2003)研制了 0.5%鬼白毒素凝胶剂，其制备工艺 简单，并且将凝胶剂涂敷于人手臂和大腿内侧的皮肤上，24h无发红、皮疹、水疱，显示0.5% 鬼臼毒素凝胶剂较酊剂安全性更高。
[0008] 谢方明等（2007)以硬脂酸为载体制备了鬼臼毒素固体纳米粒，并且将其制成 0.5%鬼白毒素固体纳米粒凝胶，与普通鬼白毒素凝胶进行随机双盲、对照临床研究，结果 显示鬼白毒素固体纳米粒凝胶对尖锐湿疣的首次清除率与普通的鬼白毒素凝胶剂相近，但 复发率和不良反应发生率明显偏低，显示鬼白毒素固体脂质纳米粒凝胶局部外用不良反应 轻微，耐受性好，并能降低尖锐湿疣复发率。张敏等(2008)将鬼白毒素固体脂质纳米粒与鬼 臼毒素酊经皮外用的安全性进行了比较研究，发现在有效观察时间和一定浓度范围内，鬼 臼毒素固体纳米粒、酊剂对实验动物均无严重系统吸收毒性，但鬼白毒素固体纳米粒与酊 剂相比具有局部不良反应少，不良反应程度轻，不良反应出现迟，皮肤靶向性好等优点。
[0009] 本发明专利，采用羧基化碳纳米管负载鬼白毒素，能改善鬼白毒素的水溶性;鬼臼 毒素吸附于碳纳米管中空结构中，有利于增加鬼白毒素的稳定性;从中空结构中缓慢释放， 具有药物缓释效果，避免皮肤局部浓度过高引起的皮肤刺激性。羧基化碳纳米管负载鬼臼 毒素后制备成凝胶剂，与普通鬼白毒素凝胶剂相比，负载物中的鬼白毒素的皮肤透过率减 少，而皮肤滞留量增加，显示出良好的皮肤靶向性，有利于发挥透皮给药的药效。
[0010] 关于本发明的鬼白毒素透皮给药制剂，未见报道。
【发明内容】
[0011] 本发明的首要目的在于提供鬼白毒素一种外用制剂的制备方法及其应用，可有效 提尚治疗尖锐湿统的疗效，减少皮肤局部刺激性等不良反应。
[0012] 本发明的目的通过以下方式实现：
[0013] 1.-种鬼白毒素透皮给药制剂的制备方法，其特征在于由羧基化碳纳米管负载鬼 臼毒素，加入凝胶基质制备而成;所述的羧基化碳纳米管为羧基单壁碳纳米管及其衍生物， 或羧基多壁碳纳米管及其衍生物。
[0014] 2.权利要求1所述的鬼臼毒素(PPT)透皮给药制剂的制备方法，其特征在于（1)鬼 臼毒素采用甲醇或无水乙醇超声溶解，加入羧基化碳纳米管(CNTs-COOH)中冷冻球磨制备 负载物，即羧基化碳纳米管负载鬼臼毒素(PPT-CNTs-COOH)。（2)凝胶剂的处方，100g该处方 中各成分的质量比为:羧基化碳纳米管负载鬼臼毒素〇. I-IOg，卡波姆l-5g，甘油5-15g，氮 酮3-6g，三乙醇胺0 · 1-0 · 5g，纯水80-85g。
[0015] 3.权利要求1、2所述的鬼臼毒素(PPT)透皮给药制剂，PPT-CNTs-COOH的制备方法， 其特征在于：
[0016] 精密称取鬼臼毒素 Ι-lOOmg，超声溶解于IO-IOOmL甲醇或者无水乙醇中，制备成药 物溶液，备用。精密称取50-500mg CNTs-COOH置于球磨罐中，分次加入药物溶液;液氮保护 下560_590rpm · rnirT1球磨，每次5_15min。将球磨后的混合物收集于具塞棕色三角瓶中，静 置10-24h后，过滤，除去未吸附的药液。滤饼挥干甲醇或无水乙醇后，加入IO-IOOmL纯水，置 于离心管内离心1-2h(12000rpm · rnirT1)。将离心后的上消液过葡聚糖凝胶柱纯化，以水为 洗脱液，洗脱液进行冷冻干燥，即得PPT-CNTs-COOH冻干粉。
[0017] 4.权利要求1、2所述的鬼臼毒素(PPT)透皮给药制剂，凝胶剂的制备方法，其步骤 为：
[0018]称取卡波姆，用甘油浸润30min，搅拌下加入蒸馏水配成凝胶溶液，加入氮酮，静置 3-6小时，除去基质中的气泡;或超声除去气泡。称取PPT-CNTs-COOH，加入I-10mL水，搅拌分 散溶解，加入到凝胶溶液中，搅拌，逐步加水至全量。再边搅拌，边滴加三乙醇胺，搅至膏状 凝胶即得。
[0019] 5.权利要求1-3所述的PPT-CNTs-COOH，也可以制成其他外用制剂，乳剂、膏剂、贝占 剂、涂抹剂等，用于尖锐湿疣的治疗。
[0020] 本发明作为透皮给药系统，可以制成任意的外用制剂剂型，比如:软膏剂、乳剂、贝占 剂、凝胶剂等。本发明可以加入各种制剂的添加剂，比如：抗氧剂、遮光剂、促渗剂、填充剂 等。
[0021] 本发明物理以及化学稳定性良好，制备的条件容易满足，使用方便，具有很好的临 床应用价值。
【附图说明】
[0022] 图1是羧基化碳纳米管负载鬼臼毒素的傅立叶红外光谱图 [0023]图2是鬼臼毒素紫外扫描图
[0024] 图3是羧基化碳纳米管负载鬼臼毒素的紫外扫描图
[0025] 图4是羧基化碳纳米管负载鬼臼毒素溶解性图 [0026]图5是鬼臼毒素对照品HPLC图
[0027]图6是羧基化碳纳米管负载鬼臼毒素样品HPLC图
[0028]图7是鬼臼毒素凝胶剂(PPT凝胶剂)透皮22h HPLC图
[0029]图 8是PPT-CNTs-COOH凝胶剂透皮22h HPLC图
[0030]图9是PPT凝胶剂鼠皮药物滞留量HPLC图
[0031] 图10是PPT-CNTs-COOH凝胶剂鼠皮药物滞留量HPLC图
[0032]图11是PPT凝胶剂皮肤组织切片图
[0033] 图12是PPT-CNTs-COOH凝胶剂皮肤组织切片图
【具体实施方式】
[0034] 实施例1: PPT-CNTs-COOH的制备及表征
[0035]精密称取鬼臼毒素原料药5mg超声溶解于IOmL无水乙醇中备用；精密称取50mg多 壁羧基化碳纳米管(CNTs-COOH)置于球磨罐中；分三次加入鬼白毒素无水乙醇溶液，液氮保 护下580rpm · min1球磨三次，每次6min;将球磨后的混合物收集于具塞三角瓶中（避光操 作），静置12h;将未吸附的药液用0.45μπι有机滤膜过滤掉，滤饼放入培养皿，将无水乙醇挥 干后加入IOmL纯化水，置于离心管内离心lh(12000rpm· min1);将离心后的上清液过葡聚 糖凝胶柱纯化，以水为洗脱液，洗脱液进行冷冻干燥，即得PPT-CNTs-COOH冻干粉。对PPT-CNTs-COOH与PPT进行水溶性、红外、紫外表征比较。
[0036]傅立叶红外光谱表征:见【附图说明】图1所示，从红外表征可以看出，负载材料多壁 羧基化碳纳米管（CNTs-COOH)的红外主要吸收峰在3361cm-1，2956cm-1，2884cm- 1，1714cm-1， 567cm-1和442cm-1处。原料药鬼臼毒素（PPT)则以 3471cm-^291901^,175501^,1587011' 1481cm-1，1384cm- 1，1126cm-1，1040cm-1,996cm-1,929cm- 1 为主要的吸收峰。负载物PPT-CNTs-C00H在3458cm-1处出现中等强度的宽吸收峰，分别归属于PPT的-OH峰3471cm- 1与负载材料 中的-C00H峰3361CHT1，相互影响而形成的新吸收峰。PPT的内酯环羰基峰HSScnfSCNTs-C00H的羰基峰在1714cm-S而PPT-CNTs-COOH在1628cm- 1处形成一钝峰。峰的位置发生了一 定的偏移，并且强度也发生了一定的变化。说明负载物中的载体分子对药物分子中基团的 伸缩振动产生了影响，表明两者之间发生了相互作用，负载物制备成功。
[0037]紫外表征：见【附图说明】图2、图3所示，PPT的紫外吸收峰在217及290nm处，PPT-CNTs-COOH因为引入羧基而发生了蓝移，最大吸收波长在207及282nm处，且峰形明显地发生 了变化，说明负载物制备成功。
[0038] 溶解性结果见【附图说明】图4，0.5%PPT水溶液，因 PPT不溶于水呈现为白色浑浊液 (Α管溶液）：0.5%PPT-CNTs-C00H水溶液呈现淡黄色澄明液体(Β管溶液）。
[0039] 实施例2:PPT-CNTs-C00H含量测定
[0040] 色谱条件:色谱柱:Ecosil Cis柱;流动相(水-甲醇:40-60);流速（ImL · mirT1);检 测波长(292nm);柱温(室温）；进样量（IOyL)0
[0041 ] 对照品溶液的制备：精密称取PPT对照品1.2mg于25mL量瓶中，甲醇溶解并稀释至 刻度，配制成44.88yg · ml/1的对照品溶液，过0.45μπι微孔滤膜，即得。