一种乌司他丁注射液及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种乌司他丁注射液及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 乌司他丁(Ulinastatin)是从人体尿液中分离纯化的一种糖蛋白，其实质为一种 胰蛋白酶抑制剂，因此也被称为人尿胰蛋白酶抑制剂（Human Urinary Trypsin Inhibitor) aBeurer和Reich等人于1909年第一次报道了人体尿液中存在这种胰蛋白酶抑 制剂。乌司他丁由143个氨基酸残基组成，相对分子量为60-70KD，等电点为2.6，是一种酸性 蛋白。乌司他丁主要有三个功能域：〇-糖苷键连接的糖基化区域(Alal_Lys21)、N端的 Kunitz型结构域I (Lys22-Arg77)以及具有胰蛋白酶抑制活性的C端Kunitz型结构域II (Thr78-Leul43)。两个Kunitz型结构域具有一定的同源性，每个结构域中都含有6个保守的 半胱氨酸，通过形成3对二硫键维持一定的空间构型。有研究标明，乌司他丁的酶抑制剂活 性主要存在于其主体蛋白骨架中的Kunitz型结构域。乌司他丁特殊的分子结构决定了其多 样的生物学功能。
[0003] 乌司他丁具有以下药理作用:减少促炎性细胞因子的生成和释放;调节凝血功能， 抑制纤溶亢进，保护血小板;稳定溶酶体膜，抑制多种水解酶活性;免疫调节作用等。因此， 乌司他丁在临床抗炎、脏器保护、脑损伤神经保护、改善微循环等方面具有重要作用。当机 体处于由于多发伤、严重烧伤等引起的缺血缺氧状态时，体内氧自由基增加，炎性细胞因子 产生，应用乌司他丁可使过度炎性反应被抑制，从而起到保护肠黏膜的作用。乌司他丁还可 抑制凝血因子V、ΥΠΙ、Μ等的过度激活，从而使这些凝血因子的消耗减少，有益于维护术后 凝血系统的正常功能。除此之外，乌司他丁是一种蛋白酶抑制剂，对胰蛋白酶、α-糜蛋白 酶、弹力蛋白酶、透明质酸酶、纤溶酶等多种蛋白酶具有良好的抑制作用。另有研究发现，应 用乌司他丁可调节T细胞数量，从而调整免疫功能。临床上乌司他丁常用于急性胰腺炎、急 性循环障碍的治疗;大中型手术期的器官保护；以及危重症中全身性炎症反应、多器官功能 障碍综合症的预防等。
[0004] 按照WHO国际药物监测合作中心的规定，药物不良反应（Adverse Drug React ions ,ADR)指正常剂量的药物用于预防、诊断、治疗疾病或调节生理机能时出现的有 害的和与用药目的无关的反应。乌司他丁用于治疗急性胰腺炎的研究中显示其施用在一定 程度上会引起用药对象发生皮疹、唾液分泌增多、注射部位血管痛、例恶心呕吐、ALT升高 等不良反应。目前市售的商品乌司他丁注射剂的说明书中也明确说明该药物的不良反应包 括：白细胞减少或嗜酸粒细胞增多;AST、ALT上升;恶心、呕吐、腹泻;注射部位血管痛、发红、 瘙痒感、皮疹等；以及过敏等。上述药物不良反应可能会引起用药者的身体不适，甚至致使 病情恶化，引发新的疾病。
[0005] 本发明人长期致力于乌司他丁制剂的研发工作，并取得一定效果。例如，在中国专 利申请CN101439181A中公开了一种稳定的乌司他丁水针剂药物组合物，该乌司他丁水针剂 药物组合物的制备方法主要包括以下几步：称取所需乌司他丁以及其他辅料于入配液桶 内；加入注射用水溶解；调节pH值;加入剩余的注射用水至所需体积;过滤除菌，灌封，包 装。但该乌司他丁水针剂药物组合并不能满足实际生产中对降低乌司他丁制剂生产成本的 需求。例如，在一个已公开的处方中，配制每10000万单位的乌司他丁需加入多达100g甘露 醇，才能保持乌司他丁活性残留率>99.9%。此外，目前临床使用的乌司他丁制剂多为粉针 剂，其配制过程需要一定时间，在此过程中存在活性降低以及微生物污染的可能性。
[0006] 因此，在降低生产成本的同时，如何最大限度地保持乌司他丁注射液中的乌司他 丁活性成分在存储过程中的稳定性，并减少其药物不良反应，是其实际生产和临床使用需 要解决的重要问题。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是提供一种稳定的、低不良反应的乌司他丁注射液及其制备方法， 以解决乌司他丁制剂在临床使用中存在的问题。
[0008] 在本发明中，乌司他丁单位被定义为:2yg胰蛋白酶活性被抑制50%时的乌司他丁 的用量为1个单位。
[0009] -个方面，本发明提供了 一种乌司他丁注射液，其pH值范围为6.2-6.8,其配方为， 每1000支：
其中，甘露醇、氯化钠、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠为该乌司他丁注射液的辅料成分。 [0010]药物制剂辅料指在药物制剂中，除活性成分之外，加入的有助于药物制剂成型、稳 定、增溶、助溶、缓释等不同功能和作用的必须添加品。供注射液使用的药用辅料应该具有： 在应用的有效浓度内，对人体安全无毒、水溶性好、理化性质稳定、与活性成分无配伍禁忌 并对其有一定的辅助功能等五个方面的特性。注射液辅料根据功能和作用可分为:稳定剂、 增溶剂、助溶剂、抗氧剂、酸碱调节剂、PH值缓冲剂、乳化剂、抑菌防腐剂等。
[0011 ]本发明所述的乌司他丁注射液中，甘露醇的用量优选为1~25g;进一步优选为1~ 15g〇
[0012] 本发明所述的乌司他丁注射液中，氯化钠的用量优选为0~6g;进一步优选为5g。
[0013] 本发明所述的乌司他丁注射液中，磷酸氢二钠的用量优选为0~2g;进一步优选为 1·28g〇
[0014] 本发明所述的乌司他丁注射液中，磷酸二氢钠的用量优选为0~2g;进一步优选为 0.7g〇
[0015] 另一方面，本发明还提供了上述乌司他丁注射液的制备方法，该制备方法包括如 下步骤： ⑴.辅料溶液配制:按照配方用量称取甘露醇、氯化钠、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠，加总 体积450mL~900mL、温度为2~4°C的注射用水，搅拌至溶解，加入医用活性炭吸附处理后， 使用0.45μπι滤膜过滤脱碳，得到辅料溶液，并保持该溶液温度为2~4°C; ⑵.按照配方用量称取乌司他丁，并于配液罐中依次加入步骤⑴所得辅料溶液、乌司他 丁，搅拌至完全溶解，得到药液A，并保持该药液温度为2~4°C; (3).用盐酸或氢氧化钠溶液调节步骤⑵所得药液A的pH值至6.8,得到药液B，并保持 该药液温度为2~4°C; ⑷.采用0.22μπι滤膜对药液B过滤除菌后，得到药液C，并保持该药液温度为2~4°C; (5) .用2~4°C注射用水将上述药液C补足体积至1500mL，混匀，得到药液D，并保持该药 液温度为2~4°C; (6) .采用0.22μπι滤膜对药液D过滤除菌后，进行分装灌封，包装。
[0016] 本发明所述的制备方法步骤⑴中的医用活性炭吸附处理的方式为在2~4°C下进 行搅拌。
[0017] 本发明所述的制备方法步骤⑴中的医用活性炭的添加量为1~5g;优选为1~4g; 进一步优选为1~3g;最优选为2~3g。
[0018] 本发明所述的制备方法步骤⑴中的医用活性炭的吸附处理时间为12~20分钟;优 选为12~18分钟;进一步优选为13~17分钟;最优选为14~16分钟。
[0019]本发明所述的制备方法步骤⑴中的医用活性炭的平均粒径为6~9_;优选为6~8 μπι;进一步优选为7~8μηι。
[0020] 本发明所述的制备方法步骤⑶中的盐酸和氢氧化钠溶液的浓度为3Μ。
[0021] 与现有技术相比，本发明提供的乌司他丁冻干粉制剂的制备方法具有以下特点： ⑴.本发明提供的配方中，辅料总量为l_50g，辅料用量明显低于现有技术。在现有技术 公开的一个配方中，配制每10000万单位的乌司他丁注射液，甘露醇的添加量多达l〇〇g。本 发明提供的乌司他丁注射液配方中，辅料用量少，不仅降低了其生产成本，同时还降低了其 不良反应发生率。
[0022] ⑵.本发明先利用2~4°C的注射用水配制除乌司他丁以外的辅料溶液，在利用医 用活性炭吸附处理该辅料溶液，吸附处理的方式为2~4°C下搅拌。本发明还对医用活性碳 的添加量以及吸附时间进行了研究，能够实现本发明所述效果的医用活性炭的添加量为1 ~5g，吸附时间为12~20分钟。现有技术中活性炭处理方式通常采用高温加热吸附，乌司他 丁作为一种生物活性蛋白质，高温加热容易使其变性，生物活性降低甚至丧失。本发明不同 于现有技术，通过使用添加量为1~5g、平均粒径为6~9μπι的活性炭在2~4°C下低温吸附处 理12~20分钟，在吸附掉杂质的同时，保证了乌司他丁的稳定性。
[0023] 综上所述，利用本发明提供的配方与制备方法配制的乌司他丁注射液，稳定性相 对较高，不良反应发生率相对较低。
【具体实施方式】
[0024]本发明的【具体实施方式】仅限于进一步解释和说明本发明的内容，并不对本发明的 内容构成限制。
[0025] 本发明实施例中所述"精密称取"指称取重量应准确至所取质量的千分之一" 实施例1: 一种乌司他丁注射