山菅兰的活性提取物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001 ]本发明涉及植物分离提取领域，具体而言，涉及一种山菅兰的活性提取物及其制 备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 近年来，随着市面上各种化学合成类的化妆品屡次出现中毒事件，人们在选择化 妆品的时候越来越崇尚一些纯天然的植物类别的化妆品。中草药因其具有药效温和、不良 作用小而得到消费者的广泛认同。然而，我国的中草药种类繁多，药性多变，且每味药材中 均含有多种的化学成分，这就对寻找开发一种高效、副作用小的天然中草药美白化妆品造 成极大的困难。
[0003] 山菅兰为百合科山菅属草本植物山菅(Dianella ensifolia)的干燥全草，是广泛 分布于中国云南、四川、贵州东南部、广西、广东南部、江西南部、浙江沿海地区、福建和台湾 的常见草本植物。药用价值上，山菅兰的根状茎磨干粉后调醋外敷，可治痈疮脓肿、癣、淋巴 结炎等。
[0004] 近年来对山菅兰的化学成分研究分离得到的间苯二酚类化合物有:2,4_二羟基-3，6_二甲基苯甲酸甲酯（methy 1 2，4-dihydroxy-3，6-dimethylbenzoate)、2，4_二羟基_6_ 甲基苯甲酸甲酯即苔色酸甲酯（methyl 2,4-dihydroxy-6_methylbenzoate， methylorsellinate)2 和4_二羟基-6-甲氧基-3-甲基苯乙酮（2，4-dihydroxy-6-methoxy-3-methylacetophenone)〇
[0005] 综合现有文献资料，未发现山菅兰及其所含成分具有美白作用的相关报道。
【发明内容】
[0006] 本发明的第一目的在于提供一种山菅兰的活性提取物。这种山菅兰的活性提取物 具有抗酪氨酸酶活性、并对B16黑色素细胞有抑制作用，且其对皮肤的副作用小，能够作为 天然植物美白制剂应用在各种美白化妆品中。
[0007] 本发明的第二目的在于提供一种山菅兰的活性提取物的制备方法。采用这种方法 制备的山菅兰的活性提取物中有效成分的纯度高，且对酪氨酸酶和B16黑色素细胞的抑制 作用大。
[0008] 本发明的第三目的在于提供一种山菅兰的活性提取物的应用，即将山菅兰的活性 提取物作为美白化妆品的活性成分。
[0009] 为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
[0010] -种山菅兰的活性提取物的制备方法，包括以下步骤：
[0011] 浸提步骤:将山菅兰粉末浸泡于pH值为8-10的弱碱水中进行浸提，然后去除山菅 兰粉末得到浸提液，再调节浸提液的pH值为2-6,然后静置处理，再去除浸提液的上清液得 到沉淀物，将沉淀物干燥后得到山菅兰粗提物；
[0012] 萃取步骤:将山菅兰粗提物用水溶解得到山菅兰溶解液，然后向山菅兰溶解液中 加入萃取剂进行萃取，得到萃取物，其中萃取剂的体积是山菅兰溶解液的体积的ο. 5-2倍；
[0013] 分离步骤：用吸附色谱法对萃取物进行分离，用不同配比的有机溶剂混合液作为 洗脱剂进行梯度洗脱，得到洗脱液，然后再去除洗脱液中的洗脱剂，得到山菅兰的活性提取 物。美白剂能够抑制酪氨酸酶活性或者阻断酪氨酸生成黑色素的氧化途径，从而减少黑色 素生成达到美白皮肤的效果。皮肤美白剂就是作用于皮肤黑色素生成、代谢过程中，抑制黑 色素生成且符合规范的物质。然而传统的皮肤美白剂，往往采用化学性物质，如具有增白作 用的汞盐和具有祛斑作用的氢醌。这些化合物虽然有快速达到美白之功效，但对皮肤有较 大的毒副作用，尤其对敏感性皮肤的损伤更为严重，长期使用会引起接触性皮炎或引起永 久脱色等不良作用，在许多国家已被禁用。目前要求的皮肤美白剂应该符合两个标准:一是 对酪氨酸酶活性有较高的抑制率，能显著的减少黑色素的生成;二是有较高的安全性，对人 体皮肤无毒无刺激。
[0014] 本发明中，采用山菅兰这一传统的药用植物为研究客体，得到一种具有抗酪氨酸 酶活性、并对B16黑色素细胞有抑制作用的山菅兰活性提取物。山菅兰为天然植物，美白效 果好，药性温和，对皮肤的刺激性小，且副作用小。因此，这种山菅兰提取物能够作为美白化 妆品的活性成分，应用于美白化妆品中。
[0015] 在制备这种山菅兰的活性提取物时，首先采用碱提酸沉法进行粗提取。这种提取 方法的好处在于pH为8-10的弱碱水能够增大山菅兰中酸性成分和弱碱性成分的溶出率，从 而提高提取效率。随后调节所得浸提液的pH值为2-6的目的在于，使溶液中的酸性成分和弱 碱性成分的溶解性降低，从浸提液中析出，静止后得到沉淀，从而去除水提取液中的部分杂 质，进一步达到分离纯化的效果。
[0016] 随后，用萃取剂进行萃取，根据相似相容原理，将山菅兰溶解液中的化学成分按照 极性大小进行分段，且能够除去山菅兰溶解液中的一些极性很大或者很小的化学成分。对 所得的萃取物采用吸附色谱法进行更进一步的纯化后，所得山菅兰的活性提取物中，有效 活性物质的含量增多，纯度增大，其抗酪氨酸酶活性和对B16黑色素细胞的抑制作用得到了 显著的提升。
【具体实施方式】
[0017] 下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会 理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体 条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为 可以通过市售购买获得的常规产品。
[0018] -种山菅兰的活性提取物，通过包括如下步骤的方法制得：
[0019] 浸提步骤:将山菅兰粉末浸泡于pH值为8-10的弱碱水中进行浸提，然后去除山菅 兰粉末得到浸提液，再调节浸提液的pH值为2-6,然后静置处理，再去除浸提液的上清液得 到沉淀物，将沉淀物干燥后得到山菅兰粗提物。
[0020] 在本发明的一些优选的实施例中，山菅兰为粉末，提取时所加的弱碱水与山菅兰 粉末的体积比为1:6-1:10。更进一步的优选为，采用超声波法进行提取，提取1-3次，每次以 20MHz-50MHz的频率超声30min-50min，过滤后合并滤液，得到浸提液。这种提取方法能够增 加山菅兰中有效物质的溶出率，进一步能够提高山菅兰粗提物对酪氨酸酶和B16细胞的抑 制活性。
[0021 ] 萃取步骤:将山菅兰粗提物用水溶解得到山菅兰溶解液，然后向山菅兰溶解液中 加入萃取剂进行萃取，得到萃取物，其中萃取剂的体积是山菅兰溶解液的体积的0.5-2倍。 [0022]在本发明的一些优选的实施例中，萃取剂为乙酸乙酯，得到乙酸乙酯萃取物。由于 乙酸乙酯属于中等极性的有机溶剂，根据相似相容原理，能够除去水提液中的一些极性很 大或者很小的化学成分，保留能够溶解在乙酸乙酯中的化学成分。更进一步的，在本发明的 一些优选的实施例中，萃取剂包括石油醚、氯仿、乙酸乙酯，萃取步骤为依次用石油醚、氯 仿、乙酸乙酯对山菅兰溶解液进行萃取，得到石油醚萃取物、氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物。 这种萃取方法得到的乙酸乙酯萃取物中所含的杂质较少，从而降低杂质对酪氨酸酶和B16 细胞的抑制活性的影响。分离步骤:用吸附色谱法对萃取物进行分离，用不同配比的有机溶 剂混合液作为洗脱剂进行梯度洗脱，得到洗脱液，然后再去除洗脱液中的洗脱剂，得到山菅 兰的活性提取物。在本发明的一些优选的实施例中，用吸附色谱法进行分离的萃取物为乙 酸乙酯萃取物，根据萃取物对酪氨酸酶和B16细胞的抑制活性跟踪发现，乙酸乙酯萃取物对 酪氨酸酶和B16细胞的抑制活性大，因此，直接对乙酸乙酯萃取物进行吸附色谱分离，有利 于减少工序、降低时间和经济成本，在短时间内即可得到对酪氨酸酶和B16细胞的抑制活性 最好的活性提取物。
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