本发明属于液体肥料的技术领域，更具体地，涉及一种有利于夏黑葡萄保花保果的液体肥料及其制备方法。
背景技术：
夏黑葡萄产于日本，早熟欧美品种，云南夏黑葡萄3月份就有成熟，其特点是早熟，无核，高糖低酸，香味浓郁，肉质细脆，硬度中等。嫩梢黄绿色，有少量绒毛。幼叶浅绿色，带淡紫色晕，叶片上表面有光泽，叶背密被丝状绒毛。成龄叶片特大，近圆形，叶片中间稍凹，边缘凸起。叶5裂，裂刻深，叶缘锯齿较钝，呈圆顶形，叶柄洼矢形。新梢生长直立，一年生成熟枝条红褐色，属于两性花。
链霉菌属(streptomyces)是放线菌目的一属。基内菌丝不断裂，气生菌丝通常发育良好，形成长(有时短)的孢子丝。孢子不能运动，外鞘上常有疣、刺或毛发等状饰物。链霉菌广泛存在于土壤中，是丝状的革兰氏阳性细菌，主要通过孢子繁殖，绝大多数链霉菌对人体无害。链霉菌是产生各种抗生素的主要来源，源于链霉菌的抗生素包括红霉素、四环素、链霉素、氯霉素、新霉素、制霉菌素、卡那霉素、放线菌酮和两性霉素等，因此，对于链霉菌的已有研究主要集中于菌株产生抗菌活性物质的能力和大小等方面。
夏黑葡萄经常出现开花少、结果少等的现象和生长期间落花落果现象，主要由于栽培过程中植株体缺少营养贮存，因此栽培过程中的营养肥料的施加直接影响果实发育及产量。
技术实现要素：
本发明要解决的技术问题是克服现有夏黑葡萄栽培过程中落花落果的问题，提供一种有利于夏黑葡萄保花保果的液体肥料及其制备方法。
本发明上述目的通过以下技术方案实现：
一种有利于夏黑葡萄保花保果的液体肥料，由以下重量份的物质组成：
活性液体肥基底制剂1000份、氨基酸24～32份、螯合钾21～32份、磷肥26～34份、赤霉素1～8份、芸苔素0.1～2份、中微量元素22～38份；所述中微量元素为ca、b、mg、zn、fe、mn；所述液体肥料中总氮含量≥2.5mg/g，氨基氮含量≥0.4mg/g，有机质含量为110～145g/l。
所述中微量元素ca、b、mg、zn、fe、mn分别来源于有机钙、硼酸、硫酸镁、螯合锌、螯合铁、螯合锰。
优选地，所述液体肥料由以下物质组成：活性液体肥基底制剂1000份、氨基酸30份、螯合钾26份、磷肥30份、赤霉素4份、芸苔素0.4份、中微量元素30份；所述液体肥料中总氮含量≥2.5mg/g，氨基氮含量≥0.4mg/g，有机质含量为120～135g/l。
进一步地，所述活性液体肥基底制剂由链霉菌属菌株“ty-001#”发酵得到；
链霉菌属菌株“ty-001#”的培养基为：取大豆进行浸泡或取豆粕进行预发酵后，进行打浆、过滤；然后往滤液中加入糖后，加水定容至培养基中糖的浓度≥100g/l，ph为7.4～7.6；
所述链霉菌属菌株“ty-001#”于2017年3月24日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，分类命名为streptomyces.，其保藏编号为gdmccno.：60152，保藏地址是中国广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
进一步地，所述氨基酸为甘氨酸、脯氨酸、丝氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、天冬氨酸中的至少两种。
进一步地，所述氨基酸、螯合钾、磷肥份数之比为1:0.8～1:1。进一步地，所述赤霉素与芸苔素份数之比为4～10:1。
进一步地，所述磷肥为磷酸石灰、重过磷酸钙、磷酸二氢铵中的一种或多种。
进一步地，所述螯合钾由氨基酸或多肽与含钾化合物螯合而成，所述含钾化合物为硫酸钾、磷酸二氢钾、氯化钾中的一种或多种。
进一步地，所述中微量元素各元素由以下份数组成：1～3份ca、20～25份b、1～3份mg、1～3zn份、1～3份fe、1～3份mn。
一种所述有利于夏黑葡萄保花保果的液体肥料的制备方法，包括以下步骤：
s1.制备培养基：取大豆进行浸泡或取豆粕进行预发酵后，进行打浆、过滤；然后往滤液中加入糖后，加水定容至培养基中糖的浓度≥100g/l，ph为7.4～7.6；
s2.接种：取链霉菌属菌株“ty-001#”的液体菌种，接种到培养基中，搅拌均匀；
s3.发酵：在发酵过程中往培养基中持续通入氧气，于20～28℃下持续发酵7～8天后，得到发酵液；
s4.终止发酵：将发酵液灌装密闭静置15天，得到所述活性液体肥基底制剂；
s5.液体肥料的配置：往所述活性液体肥基底制剂添加氨基酸、螯合钾、磷肥、赤霉素、芸苔素、中微量元素，得到所述液体肥料。
所述链霉菌属菌株“ty-001#”于2017年3月24日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，分类命名为streptomyces.，其保藏编号为gdmccno.：60152，保藏地址是中国广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
进一步地，所述预发酵的步骤为：
s11.往豆粕中加水，并搅拌充分均匀，直至豆粕用手紧捏达到滴水成线的状态即可；
s12.用薄膜覆盖在豆粕表面，不留缝隙，计时开始预发酵过程；
s13.预发酵时间为3～5天；开始发酵2天后，将温度计插入豆粕深处，发酵原料内部温度≥40℃时，将预发酵豆粕里外翻转一次，继续发酵2～3天。
优选地，所述步骤s1中加水定容至培养基中糖的浓度为100g/l。
优选地，所述活性液体肥基底制剂存放15天后其氨基态氮含量≥4.2g/l。
优选地，所述液体菌种中每毫升有2亿个活菌；所述液体菌种与培养基的比例为165g:250l。
优选地，链霉菌属菌株“ty-001#”的形态特征为：菌落呈圆形，乳白色，边缘光滑，表明有炼乳状光泽；孢子革兰氏染色呈阳性。
一种所述链霉菌属菌株(streptomyces)的培养方法，包括以下步骤：
s1.取链霉菌属菌株“ty-001#”划线于固体培养基上，25～30℃倒置活化培养3～7天，制得活化后菌株；
s2.取步骤s1制得的活化后菌株接种至液体培养基中，在温度为25～30℃、转数为150～220转/分钟的条件下，摇床培养3～7天，得到菌液。
优选地，所述液体培养基每升组分如下：取大豆、豆粕100g磨成豆浆过滤，弃渣；白砂糖、蔗糖或红糖100g；水定容至1升，ph为7.4～7.6。
优选地，所述液体培养基每升组分如下：牛肉膏3.0g、蛋白胨10.0g、氯化钠5.0g，水定容至1升，ph为7.4～7.6。
优选地，所述固体培养基每升组分如下：牛肉膏3.0g、蛋白胨10.0g、氯化钠5.0g、琼脂15～25g，水定容至1升，ph为7.4～7.6。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明的液体肥料能够有效促进葡萄的保花保果，坐果率显著提高，且有利于果实的品质提高和果树的生长发育。
本发明的液体肥料对夏黑葡萄的花朵数增加了28.9％，坐果率88.8％，相对对照组增加了25.2％，具有显著的提高。使用了本发明液体肥料的夏黑葡萄保果率达90.8％，而对照组仅为85.2％；单个鲜果重也增加了20.3％，实现亩产量增长率高达128.5％，效果非常可观。然而，该液体肥料对巨峰葡萄的花朵数量以及坐果率的促进效果都没有起到实质的作用，对巨峰葡萄的保果率、亩产量和果实品质增加仅有较为小的作用。本发明的液体肥料对夏黑葡萄的保花保果具有十分显著的效果，对不同品种的葡萄藤的保花保果具有较高的选择性。
本发明提供的链霉菌属菌株“ty-001#”，该菌株能够适应高渗透压下通气发酵培养。
具体实施方式
以下结合说明书和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
实施例1链霉菌属菌株(streptomyces)的分离与鉴定
1.实验材料和条件
(1)在湖南省郴州市某地采集到的土壤样品。
(2)液体培养基每升组分如下：牛肉膏3.0g、蛋白胨10.0g、氯化钠5.0g，水定容至1升，ph为7.5。
固体培养基每升组分如下：牛肉膏3.0g、蛋白胨10.0g、氯化钠5.0g、琼脂15～25g，水定容至1升，ph为7.5。
培养基分装，高压灭菌锅灭菌(121℃，30min)。
(3)无菌操作条件：所有器皿和用具均须经高压灭菌锅灭菌(121℃，30min)，接种等操作均在超净工作台内进行。
(4)菌株培养条件：置于25±1℃光照恒温箱(14l：10d)中培养，待菌落形成后，转移到pda斜面，再转入5℃冰箱内保存。
2.菌株分离与筛选
(1)从湖南省郴州市某地的土壤样品中分离获得一株链霉菌属菌株t0。
(2)将分离得到的链霉菌属菌株t0接入固体培养基中斜面继代培养，再转入5℃冰箱内保存。
(3)将继代培养的菌株t0于液体培养基中，在振荡摇床上220转/分钟，25℃条件下培养5天。
(4)培养5天后的t0液体菌，放置于20瓦紫外线灯25cm处照射2小时。
(5)将照射后的t0液体菌接入固体斜面培养基中25℃下培养5天，然后挑出长得最好的存活菌落接入固体培养基继代培养。
(6)重复若干遍步骤(2)～(5)的过程循环。在每一遍重复过程循环中，固体培养基和液体培养基中的氯化钠用量都增加1克，直至固体培养基和液体培养基中的氯化钠用量达到25克。将最终存活的健壮菌株进行继代培养，再转入5℃冰箱内保存。
(7)将以上筛选出的耐高渗透压菌株t0，进行发酵生产试验。经7天25℃敞开有氧发酵后，测定发酵液中氨基态氮(按甲醛滴定法测定氨基氮标准检测)，挑选出氨基态氮含量(≥0.7mg/l)最高的菌株作为最终生产用菌株，命名“ty-001#”。
发酵生产试验所用的培养基如下：取大豆100g磨成豆浆过滤，弃豆渣；白砂糖100g，定容至1000ml，ph为7.5。
3.菌株“ty-001#”的鉴定
(1)形态学鉴定
形态特征为：菌落呈圆形，乳白色，边缘光滑，表明有炼乳状光泽；孢子革兰氏染色呈阳性。
形态学鉴定显示，该菌株属于链霉菌属。
综上所述，菌株“ty-001#”为链霉菌属，于2017年3月24日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，其保藏编号为gdmccno.：60152，保藏地址是中国广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
实施例2一种有利于夏黑葡萄保花保果的液体肥料的制备和应用
一种有利于夏黑葡萄保花保果的液体肥料的制备方法包括以下步骤：
s1.制备培养基：取1000g大豆浸泡10h后，放入磨浆机中磨成豆浆，滤去豆渣，将滤液置于干净的发酵桶中，然后往滤液中加入白砂糖后，加水定容至培养基中糖的浓度100g/l，ph为7.5；
s2.接种：取链霉菌属菌株“ty-001#”的液体菌种，接种到培养基中，搅拌均匀；液体菌种中每毫升有2亿个活菌；液体菌种与培养基的比例为165g:250l；
s3.发酵：开启氧气泵，在发酵过程中往发酵桶中持续通入氧气，并根据发酵桶中单独浆液气泡情况，加入适量的消泡剂。发酵桶用透气膜覆盖，以免落入杂物，于25℃下持续发酵7天后，得到发酵液；
s4.终止发酵：将发酵液灌装密闭静置15天，得到活性液体肥基底制剂。
s5.液体肥料的配置：往1000份活性液体肥基底制剂中添加氨基酸30份(甘氨酸6份、脯氨酸6份、丝氨酸4份、谷氨酸2份、苯丙氨酸8份、天冬氨酸4份)、螯合钾26份、磷肥30份、赤霉素4份、芸苔素0.4份、中微量元素30份(ca2份、b22份、mg2份、zn2份、fe1份、mn1份)得到液体肥料；所得液体肥料中总氮含量≥2.5mg/g，氨基氮含量≥0.4mg/g，有机质含量为110～145g/l。其中磷肥为磷酸二氢铵，ca、b、mg、zn、fe、mn分别来源于葡萄糖酸钙、硼酸、硫酸镁、螯合锌、螯合铁、螯合锰。
链霉菌属菌株“ty-001#”于2017年3月24日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，分类命名为streptomyces.，其保藏编号为gdmccno.：60152，保藏地址是中国广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
实施例3一种有利于夏黑葡萄保花保果的液体肥料的制备和应用
一种有利于夏黑葡萄保花保果的液体肥料的制备方法包括以下步骤：
s1.制备培养基：取1000g大豆浸泡10h后，放入磨浆机中磨成豆浆，滤去豆渣，将滤液置于干净的发酵桶中，然后往滤液中加入白砂糖后，加水定容至培养基中糖的浓度100g/l，ph为7.5；
s2.接种：取链霉菌属菌株“ty-001#”的液体菌种，接种到培养基中，搅拌均匀；液体菌种中每毫升有2亿个活菌；液体菌种与培养基的比例为165g:250l；
s3.发酵：开启氧气泵，在发酵过程中往发酵桶中持续通入氧气，并根据发酵桶中单独浆液气泡情况，加入适量的消泡剂。发酵桶用透气膜覆盖，以免落入杂物，于25℃下持续发酵7天后，得到发酵液；
s4.终止发酵：将发酵液灌装密闭静置15天，得到活性液体肥基底制剂。
s5.液体肥料的配置：往1000份活性液体肥基底制剂中添加氨基酸26份(甘氨酸6份、脯氨酸6份、丝氨酸3份、谷氨酸2份、苯丙氨酸2份、天冬氨酸7份)、螯合钾21份、磷肥26份、赤霉素1份、芸苔素0.1份、中微量元素25份(ca1份、b20份、mg1份、zn1份、fe1份、mn1份)得到液体肥料；所得液体肥料中总氮含量≥2.5mg/g，氨基氮含量≥0.4mg/g，有机质含量为110g/l。其中磷肥为磷酸二氢铵，ca、b、mg、zn、fe、mn分别来源于葡萄糖酸钙、硼酸、硫酸镁、螯合锌、螯合铁、螯合锰。
链霉菌属菌株“ty-001#”于2017年3月24日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，分类命名为streptomyces.，其保藏编号为gdmccno.：60152，保藏地址是中国广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
实施例4一种有利于夏黑葡萄保花保果的液体肥料的制备和应用
一种有利于夏黑葡萄保花保果的液体肥料的制备方法包括以下步骤：
s1.制备培养基：取1000g大豆浸泡10h后，放入磨浆机中磨成豆浆，滤去豆渣，将滤液置于干净的发酵桶中，然后往滤液中加入白砂糖后，加水定容至培养基中糖的浓度100g/l，ph为7.5；
s2.接种：取链霉菌属菌株“ty-001#”的液体菌种，接种到培养基中，搅拌均匀；液体菌种中每毫升有2亿个活菌；液体菌种与培养基的比例为165g:250l；
s3.发酵：开启氧气泵，在发酵过程中往发酵桶中持续通入氧气，并根据发酵桶中单独浆液气泡情况，加入适量的消泡剂。发酵桶用透气膜覆盖，以免落入杂物，于25℃下持续发酵7天后，得到发酵液；
s4.终止发酵：将发酵液灌装密闭静置15天，得到活性液体肥基底制剂。
s5.液体肥料的配置：往1000份活性液体肥基底制剂中添加氨基酸28份(甘氨酸6份、脯氨酸6份、丝氨酸3份、谷氨酸2份、苯丙氨酸2份、天冬氨酸7份)、螯合钾28份、磷肥28份、赤霉素5份、芸苔素0.5份、中微量元素32份(ca2份、b22份、mg2份、zn2份、fe2份、mn2份)得到液体肥料；所得液体肥料中总氮含量≥2.5mg/g，氨基氮含量≥0.4mg/g，有机质含量为130g/l。其中磷肥为磷酸二氢铵，ca、b、mg、zn、fe、mn分别来源于葡萄糖酸钙、硼酸、硫酸镁、螯合锌、螯合铁、螯合锰。
链霉菌属菌株“ty-001#”于2017年3月24日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，分类命名为streptomyces.，其保藏编号为gdmccno.：60152，保藏地址是中国广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
实施例5一种有利于夏黑葡萄保花保果的液体肥料的制备和应用
一种有利于夏黑葡萄保花保果的液体肥料的制备方法包括以下步骤：
s1.制备培养基：取1000g大豆浸泡10h后，放入磨浆机中磨成豆浆，滤去豆渣，将滤液置于干净的发酵桶中，然后往滤液中加入白砂糖后，加水定容至培养基中糖的浓度100g/l，ph为7.5；
s2.接种：取链霉菌属菌株“ty-001#”的液体菌种，接种到培养基中，搅拌均匀；液体菌种中每毫升有2亿个活菌；液体菌种与培养基的比例为165g:250l；
s3.发酵：开启氧气泵，在发酵过程中往发酵桶中持续通入氧气，并根据发酵桶中单独浆液气泡情况，加入适量的消泡剂。发酵桶用透气膜覆盖，以免落入杂物，于25℃下持续发酵7天后，得到发酵液；
s4.终止发酵：将发酵液灌装密闭静置15天，得到活性液体肥基底制剂。
s5.液体肥料的配置：往1000份活性液体肥基底制剂中添加氨基酸32份(甘氨酸12份、脯氨酸6份、丝氨酸3份、谷氨酸2份、苯丙氨酸2份、天冬氨酸7份)、螯合钾32份、磷肥32份、赤霉素8份、芸苔素2份、中微量元素38份(ca3份、b25份、mg3份、zn3份、fe2份、mn2份)得到液体肥料；所得液体肥料中总氮含量≥2.5mg/g，氨基氮含量≥0.4mg/g，有机质含量为145g/l。其中磷肥为磷酸二氢铵，ca、b、mg、zn、fe、mn分别来源于葡萄糖酸钙、硼酸、硫酸镁、螯合锌、螯合铁、螯合锰。
链霉菌属菌株“ty-001#”于2017年3月24日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，分类命名为streptomyces.，其保藏编号为gdmccno.：60152，保藏地址是中国广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
对比例1一种有利于夏黑葡萄保花保果的液体肥料的制备和应用
一种有利于夏黑葡萄保花保果的液体肥料的制备方法包括以下步骤：
s1.制备培养基：取1000g大豆浸泡10h后，放入磨浆机中磨成豆浆，滤去豆渣，将滤液置于干净的发酵桶中，然后往滤液中加入白砂糖后，加水定容至培养基中糖的浓度100g/l，ph为7.5；
s2.发酵：开启氧气泵，在发酵过程中往发酵桶中持续通入氧气，并根据发酵桶中单独浆液气泡情况，加入适量的消泡剂。发酵桶用透气膜覆盖，以免落入杂物，于25℃下持续发酵7天后，得到发酵液；
s3.终止发酵：将发酵液灌装密闭静置15天，得到活性液体肥基底制剂。
s4.液体肥料的配置：往1000份活性液体肥基底制剂中添加氨基酸24份(甘氨酸8份、脯氨酸6份、丝氨酸3份、谷氨酸2份、苯丙氨酸2份、天冬氨酸3份)、螯合钾21份、磷肥34份、赤霉素5份、芸苔素0.1份、中微量元素32份(ca2份、b22份、mg2份、zn2份、fe2份、mn2份)得到液体肥料；所得液体肥料中总氮含量≥2.5mg/g，氨基氮含量≥0.4mg/g，有机质含量为135g/l。其中磷肥为磷酸二氢铵，ca、b、mg、zn、fe、mn分别来源于葡萄糖酸钙、硼酸、硫酸镁、螯合锌、螯合铁、螯合锰。
有利于夏黑葡萄保花保果的液体肥料的应用效果评价：
液体肥料能快速补充果藤生长所需的养分，促进瓜果生长。为验证本发明制备的液体肥料在夏黑葡萄上大面积示范应用的实际效果，申请人选择在夏黑葡萄上进行了试验示范。
1材料与方法
1.1供试地点1设在资兴市某夏黑葡萄基地内，试验地面积12亩，土壤肥力水平较均匀。
供试地点2设在建宁市某巨峰葡萄基地内，试验地面积12亩，土壤肥力水平较均匀。
1.2供试作物1夏黑葡萄，藤行距0.8m*2m，长势中庸且一致。
供试作物2巨峰葡萄，藤行距0.8m*2m，长势中庸且一致。
1.3供试肥料实施例2～5制得的夏黑葡萄保花保果的液体肥料，产品剂型为液体。
1.4每个供试地点均进行3个试验处理：
①实验组：种植后每个月浇施一次供试肥料，每次500ml/亩，稀释200倍。
②对照组(ck)：每亩每次以同实验组等量清水同时期进行，其他施肥措施同处理①。
③对比例组：每亩每次以同实验组等量的对比例1制备的化肥同时期进行，其他施肥措施同处理①。
实验组和对照组、对比例组均按当地常规栽培技术进行管理。试验各处理以每亩为小区，重复3次，管理一致。各组随机选取10株葡萄藤，统计平均葡萄藤花果数量的平均值，测定保花保果状况。
2结果与分析
2.1不同处理对坐果率的影响
由表1可知，本实施例2～5制备的液体肥料对夏黑葡萄的花朵数相对对照组增加了28.9％，坐果率达88.8％，相对对照组增加了25.2％，具有显著的提高。然而，该液体肥料对巨峰葡萄的花朵数量以及坐果率的促进效果都没有起到实质的作用。可见，本发明的液体肥料对不同葡萄的保花保果具有选择性，对夏黑葡萄的保花保果作用最为显著。
表1不同葡萄藤品质不同处理的坐果率结果
2.2对亩产量的影响
统计每亩株数，随机10点取样，统计挂果数，称鲜果重，计算平均挂果数、单个鲜果重的平均值，测算理论亩产量。
经测算，每亩栽种400株葡萄藤，抽取10株葡萄藤挂果数、单个鲜果均重、单株果穗数和亩产量的平均值如表2。由表2可知，使用了该液体肥料的夏黑葡萄保果率达90.8％，而对照组仅为85.2％；单个鲜果重也增加了20.3％，实现亩产量增长率高达128.5％，效果非常可观。然而，该液体肥料对巨峰葡萄的保果率和亩产量增加仅有较为小的作用。可见，本发明的液体肥料对夏黑葡萄的保花保果具有十分显著的效果，对不同品种的葡萄藤具有较高的选择性。
表2不同葡萄藤品质不同处理的结果情况及亩产量
以上所述仅为本发明的优选实施例，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的包含范围之内。