一种钩吻炭的制备方法与应用与流程

1.本发明属于饲料添加剂领域，具体涉及一种钩吻炭的制备方法与应用。


背景技术：

2.有关中草药添加剂的专利和文献报道，主要集中在提高养殖动物生产性能、改善肠道健康、防治疾病、提高产品品质等方面，制备加工方法包括超微粉碎（80目至200目）、煎煮-过滤-浓缩、浸提（醇-水提取）、萃取、微生物发酵等，其在配合饲料或全混合日粮中的添加比例从0.1%至3%不等。
3.钩吻（学名：gelsemium elegans (gardn. & champ. ) benth.），是马钱科钩吻属常绿木质藤本，俗称胡蔓藤、断肠草、大茶药等，广泛分布于我国福建、江西、广东、广西、湖南、贵州、云南等南方省份。钩吻是我国著名的毒性中药，含有大量吲哚类生物碱，主要为钩吻素子（含量最丰富）、钩吻素甲、胡蔓藤碱乙、胡蔓藤碱丙、钩吻素己（毒性最强）等。同时，现代药理学研究表明钩吻生物碱具有抗肿瘤、抗炎、镇痛、抗焦虑及免疫调节等作用，相关中国专利公开了钩吻素子用于治疗慢性疼痛（ cn101322705b）、焦虑症（cn102240287b）、类风湿性关节炎（cn102293768b）、糖尿病并发症（cn103690539b）、 脂质代谢紊乱及其相关疾病或病症（cn109893528a）、淀粉样蛋白沉积和/或tau病变相关性疾病或病症（cn109953991b）以及抗癌镇痛（cn1281613c）等。
4.钩吻兽用：《兽药质量标准》（中药卷，2017年版，p172）记载，钩吻性温，味辛、苦，具有杀虫、促生长、调节免疫、抗应激、镇痛等作用。《本草纲目》记载，羊食之则大肥，猪食之能治热性病。cn101972304a公开了一种采用常温三段粉碎，制备超微钩吻粉作为中兽药及兽用天然植物饲料添加剂的制备方法。cn103549206a公开了钩吻经水浸泡、加热提取，提取液经浓缩、乙醇再次提取后，得到钩吻提取物浸膏，将浸膏与糊精、淀粉按一定质量比造粒、丙烯酸树酯包衣，制备猪用钩吻提取物颗粒的方法，饲料中添加1000 mg/kg提取物颗粒剂可促进猪生长。cn104186973b公开了采用醇提法得到钩吻提取物，按重量百分比钩吻提取物10％、山楂提取物15％、纳米氧化锌20％、甘草提取物25％、纤维素酶30％混合组成的促进猪生长的饲料添加剂，猪全价配合饲料添加2wt
‰
。cn103990144b公开了钩吻经氯仿提取得到浸膏生物碱，再与β-环糊精按一定质量比在乙醇溶液中反应，得到钩吻生物碱包合物的制备方法，包合物在鸡饲料中的添加量为5 mg/kg。
5.炮制减毒：钩吻炮制减毒存效工艺方法主要有砂炒减毒、配伍减毒（配伍玉叶金花减毒（cn106038788b）、配伍水蛭粉大黄等减毒（cn108379362b）、配伍猪胆粉蒸制减毒（cn113577136a））、双向固体发酵减毒（cn106552005a）、高温炮制减毒等。钩吻经高温炮制后毒性明显下降，同时保存了其良好的镇痛作用（吴水生等，基于谱效关系的钩吻炮制减毒存效的实验研究，中医药学报, 2017, 45(5):80-84）。钩吻中所含的吲哚类生物碱经高温炮制发生氧化而降解或转化，从而降低了钩吻的毒性（任丽等，钩吻炮制减毒存效的物质基础分析，中国实验方剂学杂志, 2020,26(3):117-124）。cn104000875b公开了一种通过加热降低钩吻毒性的炮制方法及炮制品。钩吻藤茎经切片、除杂、干燥后，放入马沸炉加热至表
面成焦黑色，通过小鼠毒性试验、药效试验，确定钩吻加热炮制工艺为，在250-260℃加热炮制14-22分钟。
6.与本技术提案技术方案最为接近的专利“cn104000875b一种钩吻的炮制方法及炮制品”，采用马沸炉加热炮制钩吻（250-260℃加热炮制14-22分钟，至表面成焦黑色）无法实现批量、连续生产。同时，该专利未将钩吻炭进一步低氧活化，未提出用于判定钩吻炭质量的特征性指标。
7.本技术按照炭药“保持存性”、“防止灰化”的质量要求，对钩吻进行炭化活化炮制，降低其毒性、保留其药效。利用钩吻炭低氧活化后形成微孔、具有吸附力的特点，测定不同活化温度、活化时间条件下制得的钩吻炭的碘吸附值，对照钩吻标准炭吸附值，确定制备钩吻炭适宜的活化参数（温度、时间）。将采用本技术技术方案制备的钩吻炭与艾草炭、鱼腥草炭、川木香炭组方配伍，制得含钩吻炭饲料添加剂，在肉鸡配合饲料中添加0.1-0.2 wt
‰
（100-200 g/t），可促进肉鸡生长。


技术实现要素：

8.本发明的目的在于提供一种钩吻炭的制备方法与应用。
9.为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种钩吻炭的制备方法，包括以下步骤：（1）钩吻藤茎除杂、切成4-6 mm厚片，晒干或在50℃-60℃烘干；（2）晒干或烘干后的钩吻片，进一步用粉碎机粉碎，粉碎细度60目-100目；（3）粉碎后的钩吻物料，经输送器输送、进料器投料，进入沸腾炭化炉进行炭化，炭化温度：250℃，炭化时间：10 min；（4）炭化后的钩吻炭，进一步进入活化炉进行低氧活化（氧气含量为8%~12%），活化温度：400℃-600℃，活化时间：5-15 min；（5）活化后的钩吻炭，经冷却，进一步进行超微粉碎，超微粉碎后物料颗粒直径在90μm以下；（6）超微粉碎后的钩吻炭，进一步进入成品仓，打包保存。
10.进一步的，步骤（4）中所述活化温度为500℃，活化时间为10 min。
11.应用：将钩吻炭用于饲料添加剂的制备，具体是将钩吻炭与艾草炭、鱼腥草炭、川木香炭配伍组方，按质量份数配比为：钩吻炭5份、艾草炭10份、鱼腥草炭5份、川木香炭5份，经超微粉碎至200目、混合制得含钩吻炭的饲料添加剂，该饲料添加剂在肉鸡配合饲料中的添加量为100-200 g/t。
12.本发明的优点在于：（1）实现钩吻炭连续生产。
13.（2）用碘吸附值判定钩吻炭质量，具有操作简单、实用、快速等特点。
14.（3）采用本发明制备方法制得的钩吻炭安全性好。通过小鼠经口急性毒性试验及骨髓细胞染色体畸变试验表明，钩吻炭对小鼠经口急性毒性试验的ld
50
大于250 mg/kg体重，钩吻炭在62.5 mg/kg-250 mg/kg体重剂量范围内对小鼠骨髓中染色体无明显致畸作用。
15.（4）与其他中药炭（艾草炭、鱼腥草炭、川木香炭）组方配伍，在肉鸡配合饲料中添
加0.1-0.2 wt
‰
（100-200 g/t），可促进肉鸡生长。
16.（5）低氧活化能够降低钩吻炭的毒性。
附图说明
17.图1为钩吻炭连续生产工艺流程图。
具体实施方式
18.为让本发明的上述特征和优点能更明显易懂，下文特举实施例，作详细说明。本发明的方法如无特殊说明，均为本领域常规方法。
19.实施例1（一）钩吻炭炮制工艺1.钩吻藤茎除杂、切成5 mm厚片，在55℃烘干。
20.2.烘干后的钩吻片，进一步用粉碎机粉碎，粉碎细度80目。
21.3.粉碎后的钩吻物料，经输送器输送、进料器投料，进入沸腾炭化炉进行炭化。炭化温度：250℃左右，炭化时间：10 min左右。
22.4.炭化后的钩吻炭，进一步进入活化炉进行低氧活化（氧气含量为10%），活化温度：400℃-600℃，活化时间：5-15 min。
23.5.活化后的钩吻炭，经冷却，进一步进行超微粉碎，超微粉碎后物料颗粒直径在90μm以下。
24.6.超微粉碎后的钩吻炭，进一步进入成品仓，打包保存。
25.（二）钩吻炭最适活化参数试验按表1正交试验设计（2因素3水平）活化炮制钩吻炭样品，进行样品外观性状判定，按照gb/t 12496.8-2015规定的方法测定样品的碘吸附值，以钩吻标准炭为参照，确定本技术方案中钩吻炭最适的活化参数（温度、时间）。
26.表1 钩吻炭活化因素及水平设计表2 钩吻炭外观性状及碘吸附值
由表2可见，在活化温度500℃、活化时间10 min条件下，钩吻炭样品5与钩吻标准炭的外观及碘吸附值最为相近，可确认钩吻炭最适活化温度为500℃、活化时间10 min。
27.（三）钩吻炭毒理学安全评估试验1.钩吻炭小鼠经口急性毒性试验(ld
50
测定)将30只体重16-18g健康spf级小鼠随机分为3组，每组10只（雌雄各半）, 雌雄分笼饲养，自由采食和饮水（无菌水）。将钩吻炭用1%羧甲基纤维素钠配置成混悬液，经口对实验小鼠进行灌胃染毒，每天灌胃体积为0.4 ml/10g体重 (分两次灌服,每次间隔2小时)，连续灌胃7天。每天注意观察染毒后小鼠的一般表现、中毒症状和死亡情况并做好记录，试验结束时每组随机挑选5只小鼠进行大体剖检并做好记录。
28.表3结果表明，按250 mg/kg体重剂量经口染毒，在试验观察期限内小鼠死亡率均为0%（0/10、0/10、0/10），未见有中毒症状和剖检异常情况，可判定钩吻炭对小鼠经口急性毒性试验的ld
50
大于250 mg/kg体重。
29.表3 钩吻炭对小鼠死亡、中毒症状及大体剖检结果
2.小鼠骨髓细胞染色体畸变试验将80只体重25-30g的spf级小鼠随机分为5组，每组16只（雌雄各半），雌雄分笼饲养，自由采食和饮水（无菌水）。5个组分别为：钩吻炭高剂量组（250 mg/kg体重）、钩吻炭中剂量组（125 mg/kg体重）、钩吻炭低剂量组（62.5 mg/kg体重）、阴性对照组、阳性对照组（环磷酰胺40 mg/kg体重）。钩吻炭组用1%羧甲基纤维素钠配置成各组测试浓度的混悬溶液，采用经口灌胃法，对实验小鼠进行染毒；阴性对照组用1%羧甲基纤维素钠进行灌胃，阳性对照组按2 mg/ml浓度配制溶液对实验小鼠灌胃染毒。每头每天灌胃体积为0.4 ml/10g体重(分两次灌服,每次间隔2小时)，连续灌胃3天。在末次灌胃24小时后，每组随机挑选10只小鼠（雌雄各半）以颈椎脱臼法处死小鼠，取股骨骨髓细胞制片。采用双盲法，在显微镜下检查计数中期分裂相细胞，观察记录染色体结构异常和数目异常细胞。
30.表4结果表明，阳性对照组小鼠染色体畸变细胞率显著高于阴性对照组 (p 《 0.01)，钩吻炭各剂量组小鼠染色体畸变细胞率与阴性对照组无显著性差异(p 》 0.05)，表明钩吻炭在62.5 mg/kg-250 mg/kg体重剂量范围内对小鼠骨髓中染色体畸变细胞率无显著影响。
31.表4 钩吻炭对小鼠骨髓细胞染色体畸变试验结果
注：差异显著性为各剂量组及阳性对照组小鼠骨髓细胞染色体畸变细胞率与阴性（溶剂）对照比较。
32.（四）含钩吻炭饲料添加剂的配伍组方及应用将钩吻炭与艾草炭、鱼腥草炭、川木香炭配伍组方，按质量份数配比为：钩吻炭5份、艾草炭10份、鱼腥草炭5份、川木香炭5份，经超微粉碎（200目）、混合制得含钩吻炭的饲料添加剂，该饲料添加剂在肉鸡配合饲料中添加100-200 g/t（0.1-0.2 wt
‰
）。
33.1.含钩吻炭饲料添加剂对黄羽肉鸡生长性能的影响选取1日龄黄羽肉鸡公雏320羽，随机分为4组，每组8个重复，每重复10羽。试验1组为对照组，试验2组为抗生素组（添加亚甲基水杨酸杆菌肽40 mg/kg），试验3组、试验4组分别为添加含钩吻炭饲料添加剂100 mg/kg和200 mg/kg。在相同条件下，试验鸡分1-21 d、22-42 d、43-70 d三阶段饲养至70 d，各组饲喂相同的基础日粮，自由采食和充足饮水，测定肉鸡1-70d生长性能。
34.表5 含钩吻炭饲料添加剂对1-70d黄羽肉鸡生长性能的影响注：同行数据肩标相同字母表示差异不显著（p＞0.05），不同字母表示差异显著（p＜0.05）。
35.由表5可见，黄羽肉鸡饲料中添加含钩吻炭饲料添加剂100 mg/kg和200 mg/kg，与对照组相比，可显著提高1-70d平均日增重、降低料重比（p＜0.05）。
36.2.含钩吻炭饲料添加剂对白羽肉鸡生长性能的影响选取1日龄aa肉鸡320羽，随机分为4组，每组8个重复，每重复10羽。试验1组为对照
组，试验2组为抗生素组（添加亚甲基水杨酸杆菌肽40 mg/kg），试验3组、试验4组分别为添加含钩吻炭饲料添加剂100 mg/kg和200 mg/kg。在相同条件下，试验鸡分1-21d、22-42d两阶段饲养至42d，各组饲喂相同的基础日粮，自由采食和充足饮水，测定肉鸡1-42 d生长性能。
37.表6 含钩吻炭饲料添加剂对1-42d aa肉鸡生长性能的影响注：同行数据肩标相同字母表示差异不显著（p＞0.05），不同字母表示差异显著（p＜0.05）。
38.由表6可见，白羽肉鸡饲料中添加含钩吻炭饲料添加剂100 mg/kg和200 mg/kg，与对照组相比，可显著提高1-42d平均日增重、降低料重比（p＜0.05）。
39.以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。