化合物的制作方法与工艺

化合物本发明涉及某些新颖吲哚衍生物或其药学上可接受的盐，它们具有抗癌活性并且因此潜在有用于治疗人体或动物体的方法。本发明还涉及用于制造所述吲哚衍生物的方法、含有它们的药物组合物以及它们在治疗方法中的用途，例如用于制造供预防或治疗温-血动物(如人)的癌症用的药物，包括用于预防或治疗癌症。本发明还涉及为雌激素受体的选择性下调调节剂的吲哚衍生物。雌激素受体α(ERα、ESR1、NR3A)和雌激素受体β(ERβ、ESR2、NR3b)是类固醇激素受体，这些类固醇激素受体是大的细胞核受体家族的成员。结构类似于所有核受体，ERa是由六个功能域(命名为A-F)构成的(达尔曼-赖特(Dahlman-Wright)等人，《药理学评论》(Pharmacol.Rev.)，2006,58:773-781)并且被分类为配体依赖性转录因子，因为在其与特异性配体(雌性性别类固醇激素17b雌二醇(E2))关联之后该络合物结合至命名为雌激素受体元件(ERE)基因组序列中，并且与共调控因子相互作用来调节靶基因的转录。该ERα基因位于6q25.1上并且编码595AA蛋白，并且由于替代性剪接和翻译起始位点，可以产生多种同种型。除了DNA结合域(结构域C)和配体结合域(结构域E)，该受体还包含N-末端(A/B)结构域、连接C和E结构域的铰链(D)结构域、以及C-末端延伸(F结构域)。虽然ERa和ERb的C和E结构域是相当保守的(分别为96％和55％氨基酸一致性)，但A/B、D和F结构域的保守性差(低于30％氨基酸一致性)。这两种受体都参与女性生殖道的调节和发育，并且此外在中枢神经系统、心血管系统和在骨代谢中起作用。ER的基因组作用发生在细胞的核中，此时该受体直接地(直接激活或经典途径)或间接地(间接激活或非经典途径)结合ERE。在不存在配体的情况下，ER与热休克蛋白Hsp90和Hsp70关联，并且该关联的分子伴侣机器稳定配体结合域(LBD)，使得其可接近配体。配体化的ER从热休克蛋白中解离，导致受体构象变化，从而允许二聚化、DNA结合、与共激活物或共阻抑物相互作用并调节目标基因表达。在非经典途径中，AP-1和Sp-1是被受体的两种同种型所使用的替代性调控DNA序列以调节基因表达。在这个实例中，ER不直接与DNA相互作用，但通过与其他DNA结合转录因子例如c-Jun或c-Fos相关联(库什纳(Kushner)等人,《纯应用化学》(PureAppliedChemistry)2003,75:1757-1769)。ER影响基因转录的精确机制了解很少，但似乎由DNA结合的受体招募的多种核因子介导。共调控因子的募集主要是由两个蛋白表面AF2和AF1介导的，AF2和AF1分别位于E-结构域和A/B结构域中。AF1是由生长因子调控的并且其活性取决于细胞和启动子环境，然而AF2完全依赖于用于活性的配体结合。虽然两个结构域虽然可以独立地发挥作用，最大ER转录活性是通过经由两个结构域(祖克曼(Tzukerman)等人，《分子内分泌学》(Mol.Endocrinology)，1994,8:21-30)的协同相互作用实现的。虽然ER被认为是转录因子，但它们还可通过非基因组机制发挥作用，如通过在E2给予之后在一个时标中于组织中的快速ER作用所证明的，该时标对于基因组作用被认为太快。对雌激素的快速作用负责的受体是否是相同的细胞核ER或不同的G-蛋白偶联类固醇受体仍不清楚(沃纳(Warner)等人，《类固醇》(Steroids)200671:91-95)，但越来越多的E2诱导途径已经被鉴定，例如MAPK/ERK途径和内皮一氧化氮合酶的活化以及PI3K/Akt途径。除了配体依赖性通路，ERα还已经显示通过AF-1具有配体独立性活性，通过生长因子信号例如胰岛素样生长因子1(IGF-1-1)和表皮生长因子(EGF)，AF-1已经与MAPK的刺激相关联。AF-1的活性依赖于Ser118的磷酸并且ER与生长因子信号传导之间的交互作用(crosstalk)的实例是通过MAPK响应于生长因子如IGF-1和EGF的Ser118的磷酸化(加藤(Kato)等人，《科学》(Science)，1995,270:1491-1494)。大量的结构不同的化合物已经被显示结合至ER。一些化合物如内源性配体E2充当受体激动剂，然而其他竞争性地抑制E2结合并且作为受体拮抗剂。这些化合物可以被分成2种类别，取决于它们的功能效应。选择性雌激素受体调节剂(SERM)如它莫西芬(它莫西芬)具有充当受体激动剂和拮抗剂两者的能力，取决于细胞和启动子情况连同ER同种型靶向。例如它莫西芬在乳腺癌中充当一种拮抗剂，但在骨、心血管系统和子宫中充当部分激动剂。所有SERM似乎充当AF2拮抗剂并且通过AF1派生其部分激动剂特征。第二组，以氟维司群(fulvestrant)做为一个实例，被分类为完全拮抗剂，并且经由AF1和AF2结构域的完全抑制通过在化合物结合的配体结合域(LBD)中诱导独特构象变化(其导致螺旋12与LBD的其余部分之间的相互作用完全消除，从而阻断辅因子招募)能够阻断雌激素活性(韦克林(Wakeling)等人，《癌症研究》(CancerRes.)，1991,51:3867-3873；派克(Pike)等人，《结构》(Structure)，2001,9:145-153)。ERα的细胞内水平在E2的存在下通过泛素/蛋白体(Ub/26S)途径来下调。配体化的ERα的聚泛素化通过至少三个酶来催化；经泛素-激活酶E1活化的泛素是通过E3泛素连接酶结合异肽经由E2与赖氨酸残基缀合，并且然后聚泛素化的ERα被导向蛋白体用于降解。虽然ER-依赖性转录调节和ER的蛋白体-介导的降解是连接的(纳德(Lonard)等人，《分子细胞》(Mol.Cell)，20005:939-948)，但转录在本身是对ERα降解是不需要的，并且转录起始复合物的组装是足以靶向ERα用于细胞核蛋白酶体的降解。此E2诱导的降解过程被认为对其能力是所必需的，以响应于用于细胞增殖、分化和代谢的要求而快速激活转录(斯蒂倪恩(Stenoien)等人，《分子细胞生物学》(Mol.CellBiol.)2001,21:4404-4412)。氟维司群也被划分为选择性雌激素受体下调调节剂(SERD)、拮抗剂的子集，这些拮抗剂也可以经由26S蛋白酶体途径诱导ERα的快速下调。相反，SERM如它莫西芬可以增加ERα水平，虽然对转录的作用类似于针对SERD所见到的。约70％的乳腺癌表达ER和/或孕酮受体，意味着在生长方面这些肿瘤细胞依赖激素。其他癌症如卵巢癌和子宫内膜癌也被认为在生长方面依赖于ERα信号传导。用于此类患者的疗法可以通过以下项抑制ER信号传导：拮抗配体结合至ER，例如它莫西芬，其被用来治疗在绝经前和绝经后两者环境中的早期和晚期ER阳性乳腺癌)；拮抗和下调ERα，例如氟维司群，其被用来治疗女性乳腺癌，尽管进行了用它莫西芬或芳香酶抑制剂的剂疗法，但是其仍进展；抑或阻断雌激素合成，例如芳香酶抑制剂，其被用来治疗早期和晚期ER阳性乳腺癌。尽管这些疗法对乳腺癌治疗具有极其阳性影响，但肿瘤表达ER的相当大数目的患者展示对存在的ER疗法的从头(denovo)抗性或对这些疗法随着时间发展的抗性。已经描述了多种不同机制来解释对第一次它莫西芬治疗的抗性，其主要涉及它莫西芬从充当拮抗剂的转变为充当激动剂，这是通过某些辅因子更低亲和力地结合至通过这些辅因子的过度表达被偏置(off-set)的它莫西芬-ERα复合物，抑或通过第二位点的形成，这些第二位点促使它莫西芬-ERα复合物与通常不结合到该复合物上的辅因子的相互作用。由于表达特异性辅因子(其驱使它莫西芬-ERα活性)的细胞的过度生长的结果抗性因此能够出现。还存在以下可能性，其他生长因子信号传导路径直接激活该ER受体或共激活物，以驱使独立于配体信号传导的细胞增殖。最近，在ESR1中的突变已经在转移性ER-阳性患者衍生的肿瘤样品和患者衍生的异种移植模型(PDX)中在从17％-25％变化的频率下被鉴定为可能的抗性机制。这些突变在导致突变功能蛋白的配体结合结构域中是主要地，但非排他性地；氨基酸变化的实例包括Ser463Pro、Val543Glu、Leu536Arg、Tyr537Ser、Tyr537Asn和Asp538Gly，其中在氨基酸537和538处的变化构成大多数当前描述的变化。这些突变先前在癌症基因组阿特拉斯数据库(CancerGenomeAtlasdatabase)表征的原发性乳房基因组样品中未检测到。对于ER表达阳性的390个原发性乳腺癌样品中在ESR1中检测到的不是单突变(癌症基因组阿特拉斯网络，2012自然(Nature)490:61-70)。该配体结合结构域突变被认为具有发展为响应于芳香酶抑制剂内分泌疗法的抗性，因为在不存在雌二醇的情况下，这些突变体受体显示出基本的转录活性。在氨基酸537和538处突变的ER的晶体结构显示两突变体有利于ER的激动剂构象，这是通过位移螺旋12的位置以允许共激活物招募并且由此模仿激动剂活化的野生型ER。公开数据已经显示内分泌疗法如它莫西芬和氟维司群仍然可以结合至ER突变体并且在某种程度上抑制转录激活，以及氟维司群能够降解Try537Ser，但可以需要更高剂量用于完全受体抑制(托伊(Toy)等人，《自然遗传学》(Nat.Genetics)2013,45:1439-1445；罗宾逊(Robinson)等人，《自然遗传学》2013,45:144601451；李，S(Li,S.)等人《细胞报告》(CellRep.)4,1116-1130(2013))。因此是可行的是某些具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐将能够下调和拮抗突变型ER，尽管在此时期未知ESR1突变是否与改变的临床结果关联。不管哪个抗性机制或抗性机制的组合机制发生，许多仍然是依赖于ER-依赖性活性，并且通过SERD机构去除受体提供了从细胞中去除ERα受体的最好方式。氟维司群是目前唯一经SERD批准用于临床用途的，又尽管其机制特性，该药物的药理学特性具有有限的疗效，这是由于当前每月500mg剂量的限制，其导致与在体外乳腺细胞系实验中所见的受体的完全下调相比在患者样品中的受体小于50％的周转(沃德尔(Wardell)等人，《生化药学》(Biochem.Pharm.)，2011,82:122-130)。因此，对新ER靶向试剂存在着需要，其具有所需药物特性和SERD机制以在早期、转移性和获得性抗性情况下提供增强的益处。本发明的化合物已发现具有强力抗肿瘤活性，有用于抑制由恶性疾病引起的不受控制的细胞增殖。本发明的这些化合物通过(作为最低限度)充当SERD提供抗肿瘤作用。根据本发明的一个方面，提供了具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐其中：R1和R2各自独立地是H或F；R3是H或甲基；并且以下两者之中任一：a)R4是H且R5是F；或b)R4是F且R5是H。在本发明的另一个方面，提供一种如上文所定义的具有化学式(I)的化合物。具有化学式(I)的化合物具有一个、两个或三个手性中心并且本发明涵盖纯的手性形式或其以任何比例的混合物。光学活性形式的合成可通过本领域中熟知的有机化学的标准技术，例如通过从光学活性起始物质合成或通过拆分外消旋形式来进行。类似地，可以使用标准实验室技术评估上文所提及的活性。在此所述的化合物的特定对映异构体或非对映异构体的活性可以高于同一化合物的其他对映异构体或非对映异构体。根据本发明的另一个方面，提供一种具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其是对映异构体过量(ee％)≥95％、≥98％或≥99％的单一对映异构体。适宜地，单一对映异构体以对映异构体过量(ee％)≥99％存在。根据本发明的另一个方面，提供一种药物组合物，该药物组合物包括具有化学式(I)的化合物，所述化合物是对映异构体过量(ee％)≥95％、≥98％或≥99％的单一对映异构体；或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的稀释剂或载体。适宜地，单一对映异构体以对映异构体过量(ee％)≥99％存在。根据本发明的另一个方面，提供一种具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，它是非对映异构体过量(de％)≥95％、≥98％或≥99％的单一非对映异构体。适宜地，单一非对映异构体以非对映异构体过量(de％)≥99％存在。根据本发明的另一个方面，提供一种药物组合物，该药物组合物包括具有化学式(I)的化合物，所述化合物是非对映异构体过量(de％)≥95％、≥98％或≥99％的单一非对映异构体；或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的稀释剂或载体。适宜地，单一非对映异构体以非对映异构体过量(de％)≥99％存在。在一个具体方面，具有化学式(I)的化合物是具有化学式(IA)的化合物：在另一个方面，具有化学式(I)的化合物是具有化学式(IB)的化合物：除非另有说明，在此提及具有化学式(I)的化合物应被理解为是指具有化学式(IA)和/或(IB)的化合物。例如，实例1的化合物(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸是具有化学式(IA)的化合物的实例。其异构体(E)-3-(3,5-二氟-4-((1S,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸是具有化学式(IB)的化合物的实例。这些两种异构体的两者都是(E)-3-(3,5-二氟-4-((3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸的实例，其是具有化学式(I)的化合物的实例。一些具有化学式(I)的化合物可以是结晶并且可以具有一种以上晶形。应了解，本发明涵盖任何晶形或非晶形或其混合物，该形式具有有用于SERD活性的性质，在本领域中熟知如何通过下文所述的标准测试测定晶形或非晶形对于SERD活性的功效。总体上已知可以使用常规技术分析结晶物质，如X射线粉末衍射(下文称为XRPD)分析、差示扫描热量测定(下文称为DSC)、热解重量分析(下文称为TGA)、漫反射红外傅里叶变换(DRIFT)光谱法、近红外(NIR)光谱法、溶液和/或固态核磁共振光谱法。这些结晶物质的水含量可以通过卡尔费歇尔分析(KarlFischeranalysis)测定。作为一个实例，实例7的化合物展现出结晶性并且已鉴别出一种晶形。因此，本发明的另一个方面是(E)-3-(4-(2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸的形式A(实例7)。根据本发明的另一个方面，提供了一种晶形，实例7的形式A，其X射线粉末衍射图在约2θ＝4.5°处具有至少一个特异峰。根据本发明的另一个方面，提供了一种晶形，实例7的形式A，其X射线粉末衍射图在约2θ＝10.8°处具有至少一个特异峰。根据本发明的另一个方面，提供了一种晶形，实例7的形式A，其X射线粉末衍射图在约2θ＝4.5°和10.8°处具有至少两个特异峰。根据本发明的另一个方面，提供了一种晶形，实例7的形式A，其X射线粉末衍射图在约2θ＝4.5°、4.8°、6.1°、7.9°、9.9°、10.8°、13.4°、14.0°、14.3°和18.5°处具有特异峰。根据本发明，提供晶形，实例7的形式A，其X射线粉末衍射图与图1中所示的X射线粉末衍射图实质上相同。根据本发明的另一个方面，提供了一种晶形，实例7的形式A，其X射线粉末衍射图在约2θ＝4.5°+/-0.2°2θ处具有至少一个特异峰。根据本发明的另一个方面，提供了一种晶形，实例7的形式A，其X射线粉末衍射图在约2θ＝10.8°+/-0.2°2θ处具有至少一个特异峰。根据本发明的另一个方面，提供了一种晶形，实例7的形式A，其X射线粉末衍射图在约2θ＝4.5°+/-0.2°2θ和10.8°+/-0.2°2θ处具有至少两个特异峰。根据本发明的另一个方面，提供了一种晶形，实例7的形式A，其X射线粉末衍射图在约2θ＝4.5°、4.8°、6.1°、7.9°、9.9°、10.8°、13.4°、14.0°、14.3°和18.5°+/-0.2o2θ处具有特异峰。此外，实例1还显示了结晶度。根据本发明，提供了一种晶形，(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸的晶形B，其X射线粉末衍射图在约2θ＝8.4°处具有至少一个特异峰。根据本发明，提供了一种晶形，(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸的晶形B，其X射线粉末衍射图在约2θ＝10.9°处具有至少一个特异峰。根据本发明，提供了一种晶形，(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸的形式B，其X射线粉末衍射图在约2θ＝8.4°和10.9°处具有至少两个特异峰。根据本发明，提供了一种晶形，(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸的形式B，其X射线粉末衍射图在约2θ＝8.4°、10.9°、18.3°、24.0°和14.0°处具有特异峰。根据本发明，提供了一种晶形，(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸的形式B，其X射线粉末衍射图在约2θ＝8.4°、10.9°、18.3°、24.0°、14.0°、19.0°、14.4°、13.0°、15.3°、20.6°处具有特异峰。根据本发明，提供了晶形，(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸的形式B，其具有实质上与图2中所示的X射线粉末衍射图相同的X射线粉末衍射图。根据本发明，提供了一种晶形，(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸的形式B，其X射线粉末衍射图在2θ＝8.4°+/-0.2°2θ处具有至少一个特异峰。根据本发明，提供了一种晶形，(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸的形式B，其X射线粉末衍射图在2θ＝10.9°+/-0.2°2θ处具有至少一个特异峰。根据本发明，提供了一种晶形，(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸的形式B，其X射线粉末衍射图在2θ＝8.4°和10.9°处具有至少两个特异峰，其中所述值可以+/-0.2°2θ。根据本发明，提供了一种晶形，(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸的形式B，其X射线粉末衍射图在约2θ＝8.4°、10.9°、18.3°、24.0°和14.0°处具有特异峰，其中所述值可以+/-0.2°2θ。根据本发明，提供了一种晶形，(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸的形式B，其X射线粉末衍射图在2θ＝8.4°、10.9°、18.3°、24.0°、14.0°、19.0°、14.4°、13.0°、15.3°、20.6°处具有特异峰，其中所述值可以+/-0.2o2θ。当陈述本发明涉及实例1形式B的一种晶形时，结晶度合宜地大于约60％，更合宜地大于约80％，优选地大于约90％并且更优选地大于约95％。最优选地，结晶度大于约98％。此外，当陈述本发明涉及实例1形式B的晶形时，该材料优选地是实质上不含其他晶形或非晶形材料。通过“实质上不含”，我们意指大于约60％，更合宜大于约80％，优选大于约90％，更优选大于约95％并且最优选大于约98％的单一多晶型。应了解，X射线粉末衍射图的2θ值可能因机器不同或因样品不同而略有变化，并且因此所引用的值不应理解为绝对的。已知可以获得取决于测量条件(如，所用设备或机器)而具有一个或多个测量误差的X射线粉末衍射图。具体来说，总体上已知X射线粉末衍射图的强度可以波动，取决于测量条件。因此应了解，除非另行说明，否则上述本发明的晶形不限于所提供的X射线粉末衍射图与相关图中所示的X射线粉末衍射图一致的晶体并且所提供的X射线粉末衍射图与这些图中所示的那些X射线粉末衍射图实质上相同的任何晶体均落入本发明的范围内。X射线粉末衍射领域的普通技术人员能够判断X射线粉末衍射图的实质一致性。X射线粉末衍射领域的普通技术人员也应认识到，相对峰强度可能受例如尺寸大于30微米的晶粒和非单一纵横比影响，这些因素可能影响样品分析。本领域普通技术人员也将认识到，反射位置可以受样品在衍射计中所处的确切高度和衍射计的零点校正影响。样品的表面平坦度也可能具有细微影响。因此，所呈现的衍射图数据不应视为绝对值(参见詹金斯R(Jenkins,R)和辛德尔R.L.(Snyder,R.L.)《X射线粉末衍射测定法的介绍》(‘IntroductiontoX-RayPowderDiffractometry’)，约翰·威利父子公司(JohnWiley&Sons)1996；邦C.W.(Bunn,C.W.)(1948)，《化学晶体学》(ChemicalCrystallography)，伦敦克拉伦登出版社(ClarendonPress,London)；克卢格H.P.(Klug,H.P.)和亚历山大L.E.(Alexander,L.E.)(1974)，《X射线衍射程序》(X-RayDiffractionProcedures))。总体而言，X射线粉末衍射图中衍射角的测量误差是约±0.2°2-θ，并且当考虑X射线粉末衍射数据时，应将该测量误差度考虑在内。此外，应了解强度可能波动，取决于实验条件和样品制备(优选取向)。特定本发明化合物是实例中的每一者，它们各自提供本发明的另一个独立方面。另外的特定本发明化合物是这些实例中的每一者的药学上可接受的盐(多种)，它们各自提供本发明的另一个独立方面。根据本发明的另一个方面，提供一种具有化学式(I)的化合物，它通过遵循如在此所披露的实例中的任一者可获得。另一个特征是在此所限定的范围中的任一者，其限制条件是如实例1、2、3等的特定实例单独地宣布弃权。本领域普通技术人员应了解，某些具有化学式(I)的化合物包含经不对称取代的碳原子，并且因此可以按光学-活性和外消旋形式存在并且分离。一些具有化学式(I)的化合物可以展现多晶型。应了解，本发明涵盖任何外消旋、光学-活性、多晶型或立体异构形式或其混合物，该形式具有有用于作为SERD的性质，在本领域中熟知如何制备光学-活性形式(例如通过用再结晶技术拆分外消旋形式、通过从光学-活性起始物质合成、通过手性合成、通过酶拆分、通过生物转化或者通过使用手性固定相进行色谱分离)以及如何通过下文所述的标准测试测定作为SERD的功效。应了解，上文定义的某些具有化学式(I)的化合物可以展现互变异构现象。应了解，本发明在其定义中包括任何此类互变异构形式或其混合物，它具有SERD活性并且不仅仅限于在化学式图中所用或在实例中所命名的任何一种互变异构形式。总体来讲，任何此类互变异构形式中仅一者在下文的实例中命名或在下文的任何相关化学式图中呈现。本发明打算包括存在于本发明化合物中的原子的所有同位素。同位素应理解为包括具有相同原子数但具有不同质量数的那些原子。举例来说，氢的同位素包括氚和氘。碳的同位素包括13C和14C。实例1的氘化形式描述在实例10中。具有化学式(I)的化合物的适合的药学上可接受的盐是例如碱金属盐或碱土金属盐，如钠盐、钙盐或镁盐；或铵盐；或与如甲胺、二甲胺、三甲胺、哌啶、吗啉或三-(2-羟乙基)胺的有机碱形成的盐。具有化学式(I)的化合物的另外的适合的药学上可接受的盐可以是其他金属盐，如钾盐、锌盐、或本领域中已知的其他此类金属阳离子。在本发明的一个方面，具有化学式(I)的化合物的药学上可接受的盐是与金属阳离子形成的盐、铵盐或与有机碱形成的盐。具有化学式(I)的化合物的另一个适合药学上可接受的盐是例如在给予具有化学式(I)的化合物之后人体或动物体内所形成的盐。具有化学式(I)的化合物的适合药学上可接受的盐还可以是例如具有化学式(I)的化合物的酸加成盐，例如与强无机或有机酸(如盐酸、氢溴酸、硫酸或三氟乙酸)的酸加成盐。具有化学式(I)的化合物的其他潜在的适合药学上可接受盐还可以是如以下针对实例1所描述的。在本发明的另一个方面，具有化学式(I)的化合物的药学上可接受的盐是一种酸加成盐。研究具有化学式(I)的化合物的盐形成的实验检查了实例1((E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸)形成结晶盐的潜力。尝试以下酸类和碱类：乙酸、己二酸、苯磺酸、苯甲酸、肉桂酸、柠檬酸、D,L-乳酸、乙烷二磺酸、乙烷磺酸、富马酸、盐酸、L-酒石酸、马来酸、苹果酸、丙二酸、甲烷磺酸、1,5-萘二磺酸(napadisylicacid)、磷酸、糖精、琥珀酸、硫酸、甲苯磺酸、乙酸钙、二乙胺、乙醇胺、乙二胺、羟基乙基吡咯烷、乙酸镁、葡甲胺、哌嗪、氢氧化钾、氢氧化钠、叔丁胺、三乙醇胺、三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)以及N,N-二乙基乙醇胺。在上述酸类和碱类中，可分离固体状盐以晶形在采用的实验条件中不总是可获得的或不可获得的。实例1的优选的盐包括可以以晶形分离的那些，例如，苯磺酸盐(benzenesulfonicacidsalt)(苯磺酸盐(besylatesalt))、琥珀酸盐(succinicacidsalt)(琥珀酸盐(succinatesalt))和马来酸盐(maleicacidsalt)(马来酸盐(maleatesalt))。在一个方面，实例1的适合盐可以包括苯磺酸盐、琥珀酸盐和马来酸盐。在另一个方面，实例1的适合盐可以是马来酸盐，其在实例11中所描述。应进一步了解，具有化学式(I)的化合物的适合药学上可接受的共晶体也形成本发明的一个方面。为免生疑，术语共晶体(co-crystal)(或共晶(cocrystal))是指一种多组分系统，其中存在一种或多种主体API(活性药物成分)分子和一种或多种客体(或共形成物)分子。在一种共晶体中，当单独地以其纯的形式时，该API分子和该客体(或共形成物)分子在室温下存在为一种固体状(以便从溶剂化物或水合物区分该共晶体)。其中显著或完全质子交换发生在API分子和该客体分子之间的盐从这个特定定义中排除。在一种共晶体中，该API和共形成物分子通过氢键以及可能其他非共价作用来相互作用。药学上可接受的共形成物包括中性分子(如烟酰胺、间苯二酚和二甲苯酚)连同可电离分子(如草酸，3,5-二羟基苯甲酸和异喹啉)(质子交换程度确定盐或共晶体是否形成)。应注意，一种共晶体可以本身形成溶剂化物，包括水合物。应进一步了解，具有化学式(I)的化合物的适合药学上可接受的溶剂化物也形成本发明的一个方面。适合医药学上可接受的溶剂化物为例如水合物，如半-水合物、单-水合物、二-水合物或三-水合物或其替代量。应进一步了解，具有化学式(I)的化合物的适合药学上可接受的前药也形成本发明的一个方面。因此，本发明化合物可以按前药形式给予，该前药为在人体或动物体内分解以释放本发明化合物的化合物。前药可以用于改变本发明化合物的物理性质和/或药物动力学性质。当本发明化合物包含可能连接修饰基团的适合基团或取代基时，可能形成前药。前药的实例包括在体内可裂解的酯衍生物，这些酯衍生物可以在具有化学式(I)的化合物中的羧基基团处形成。因此，本发明包括当通过有机合成可获得时以及当经由前药的裂解而在人体或动物体内可获得时，如上文所定义的那些具有化学式(I)的化合物。因此，本发明包括那些由有机合成方法产生的具有化学式(I)的化合物并且也包括在人体或动物体内经由前体化合物代谢而产生的这些化合物，即具有化学式(I)的化合物可以为合成产生的化合物或代谢产生的化合物。具有化学式(I)的化合物的适合药学上可接受的前药是基于合理医学判断，适合给予人体或动物体而无所不希望的药理学活性且无不当毒性者。例如在以下文献中已描述不同形式的前药：-a)《酶学方法》(MethodsinEnzymology)，第42卷，第309-396页，由K.韦德尔(K.Widder)等人编(学术出版社(AcademicPress)，1985)；b)《前药设计》(DesignofPro-drugs)，由H.邦加尔德(H.Bundgaard)编，(埃尔塞维尔(Elsevier)，1985)；c)《药物设计和开发教科书》(ATextbookofDrugDesignandDevelopment)，由克洛格斯加德-拉森(Krogsgaard-Larsen)和H.邦加尔德编，第5章“前药的设计和应用(DesignandApplicationofPro-drugs)”，H.邦加尔德第113-191页(1991)；d)H.邦加尔德，《高级药物递送综述》(AdvancedDrugDeliveryReviews)，8,1-38(1992)；e)H.邦加尔德,等人，《医药科学杂志》(JournalofPharmaceuticalSciences)，77,285(1988)；f)N.挂谷(N.Kakeya)等人，《化学与药学通报》(Chem.Pharm.Bull.)，32,692(1984)；g)T.樋口(T.Higuchi)和V.斯黛拉(V.Stella)，《依新颖递送系统的前药》(“Pro-DrugsasNovelDeliverySystems”)，ACS研讨会系列(A.C.S.SymposiumSeries)，第14卷；以及h)E.罗奇(E.Roche)(编者)，《药物设计中的生物可逆载体》(“BioreversibleCarriersinDrugDesign”)，培格曼出版社(PergamonPress)，1987。具有羧基的具有化学式I的化合物的适合的药学上可接受的前药为例如其体内可裂解的酯。包含羧基的具有化学式I的化合物的体内可裂解的酯为例如在人体或动物体内裂解以产生母体酸的药学上可接受的酯。对于羧基的适合的药学上可接受的酯包括(1-6C)烷基酯，如甲基酯、乙基酯和叔-丁基酯、(1-6C)烷氧基甲基酯如甲氧基甲基酯；(1-6C)链烷酰氧基甲基酯，如新戊酰氧基酯；3-酞基酯；(3-8C)环烷基羰氧基-(1-6C)烷基酯，如环戊基羰氧基甲基酯和1-环己基羰氧基乙基酯；2-氧代-1,3-二氧杂环戊烯基(dioxolenyl)甲基酯，如5-甲基-2-氧代-1,3-二氧杂环戊烯-4-基甲基酯；以及(1-6C)烷氧基羰氧基-(1-6C)烷基酯，如甲氧基羰氧基甲基酯和1-甲氧基羰氧基乙基酯。具有羧基的具有化学式I的化合物的适合的药学上可接受的前药为例如体内可裂解的酰胺，诸如N-C1-6烷基酰胺和N，N-二-(C1-6烷基)酰胺，如N-甲基酰胺、N-乙基酰胺、N-丙基酰胺、N，N-二甲基酰胺、N-乙基-N-甲基酰胺或N，N-二乙基酰胺。具有化学式(I)的化合物的体内作用可以部分地由在给予具有化学式(I)的化合物之后在人体或动物体内形成的一种或多种代谢物来发挥。如上所述，具有化学式(I)的化合物的体内作用也可以经由前体化合物(前药)代谢来发挥。实例1的两个异构的活性代谢物已经从如以下(其中由于在用*标记的碳处的两个构型的结果，这些异构体是非对映异构体)所示的体外人类系统中鉴定，并且两个异构体的合成在此实例14A和B中提出：另外，以下化合物被认为是一些物种例如在小鼠中的活性代谢物：此类活性代谢物形成本发明的另外的独立方面。为避免疑义，应了解，如果在本说明书中某一基团经‘上文所定义(hereinbeforedefined/definedhereinbefore)’限定，那么所述基团涵盖首次出现且最广泛的定义以及对该基团的每一和所有特定定义。本发明的特定新颖化合物包括例如具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其中除非另行说明，否则R1和R2各自具有上文或以下陈述中所定义的含义中的任一者：在一个方面，R1是氢。在另一个方面，R1是氟。在一个方面，R2是氢。在另一个方面，R2是氟。在一个方面，R1和R2两者都是氢。在另一个方面，R1和R2两者都是氟。在另一个方面，R1是氢并且R2是氟。在一个方面，R3是氢。在另一个方面，R3是甲基。在一个方面，R4是氢并且R5是氟。在另一个方面，R5是氢并且R4是氟。特定的本发明化合物为例如在下文中所陈述的实例中所披露的具有化学式(I)的化合物。举例来说，特定的本发明化合物为选自以下任一者的具有化学式(I)的化合物：-(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸；(E)-3-(4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸；(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸；(E)-3-(4-((1R,3R)-2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸；(E)-3-(3,5-二氟-4-(2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸；(E)-3-(3,5-二氟-4-(2-(2-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸；(E)-3-(4-(2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸；(E)-3-(4-(2-(2-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸；(E)-3-(3-氟-4-(2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸；或其一种药学上可接受的盐。另外的特定本发明化合物是选自以下任一者的具有化学式(I)的化合物：-(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸；(E)-3-(4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸；(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸；(E)-3-(4-((1R,3R)-2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸；(E)-3-(3,5-二氟-4(1R)-(2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸；(E)-3-(3,5-二氟-4(1R)-(2-(2-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸；(E)-3-(4(1R)-(2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸；(E)-3-(4(1R)-(2-(2-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸；(E)-3-(3-氟-4(1R)-(2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸；和(E)-3-[4-[(1R,3R)-1-氘-2-(2-氟-2-甲基-丙基)-3-甲基-4,9-二氢-3H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基]-3,5-二氟-苯基]丙-2-烯酸；或其一种药学上可接受的盐。本发明的特定药学上可接受盐为(1R,3R)-1-{4-[(E)-2-羧基乙烯基]-2,6-二氟苯基}-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-2-鎓马来酸盐。本发明的另一个方面提供一种制备具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的方法。适合方法通过以下代表性方法变化形式来说明，其中除非另行说明，否则R1至R5具有上文所定义的含义中的任一者。通过有机化学的标准程序可以获得必要的起始物质。这些起始物质的制备结合以下代表性方法变化形式并在随附实例中描述。可替代地，通过于有机化学家的普通技术中说明的那些程序的类似程序可获得必要的起始物质。具有化学式(I)的化合物是通过具有化学式(II)(其中R6是(1-6C)烷基，如甲基)的酯衍生物的水解来适宜制造的。在碱(如使用氢氧化钠)的存在下在合适的溶剂(诸如水性THF和MeOH(或另一个类似醇)，或如水性醇，例如水性异丙醇)中和合适的温度(方便地室温)下方便地进行水解。具有化学式(II)的化合物可以通过以下来制造，例如：a)具有化学式(III)的化合物与具有化学式(IV)的化合物在本领域中已知作为适用于皮克特-施彭格勒(Pictet-Spengler)反应的条件(如在酸(如乙酸)的存在下并且在一种适合的溶剂(例如甲苯)中以及适合的温度(如80℃))下的反应；或b)通过具有化学式(V)的化合物与具有化学式(VI)的化合物(其中LG是一种本领域中已知的离去基团(如卤化物或三氟甲烷磺酸酯(三氟甲磺酸酯)，适宜地是三氟甲磺酸酯)在碱(例如一种胺碱，如N-乙基-N-异丙基丙-2-胺)和一种适合的极性溶剂(如二噁烷)的存在下、在一种适合的温度(如从室温至90℃)下的反应。具有化学式(III)的化合物可以通过具有化学式(VII)的化合物与具有化学式(VI)的化合物在如以上针对具有化学式(V)和(VI)的化合物的反应所述的条件下的反应来制备。具有化学式(IV)的化合物可以通过具有化学式(VIII)的化合物与丙烯酸烷基酯(如当R6是甲基时的丙烯酸甲酯)在本领域已知的用于赫克反应的条件下反应来制备；该反应是在芳基膦(例如三-o-甲苯基膦)、钯催化剂(乙酸钯(II))和碱(如三乙胺)的存在下、在适合的溶剂(如DMA)中并且在适合的温度(例如80℃)下。具有化学式(V)的化合物可以通过具有化学式(VII)的化合物与具有化学式(IV)的化合物使用与以上针对具有化学式(III)和(VI)的化合物的反应所述的那些类似的条件下的反应来制备。具有化学式(VI)的化合物(其中LG是三氟甲磺酸酯)可以如以下在方案1和2中所示的来制备。其他具有化学式(VI)的化合物(其中LG不是三氟甲磺酸酯)可以通过本领域中已知的类似方法来制备。方案1步骤1：氟化试剂，例如N,N-二乙基-1,1,2,3,3,3-六氟丙-1-胺/DCM/RT，然后还原剂，例如氢化锂铝/THF/RT步骤2：三氟甲烷磺酸酐/碱，例如2,6-二甲基吡啶/DCM/0℃方案2步骤1：还原剂，例如氢化锂铝/醚/0℃步骤2：三氟甲烷磺酸酐/碱，例如2,6-二甲基吡啶/DCM/-10℃具有化学式(I)的化合物是手性的。本领域普通技术人员应了解可以使用立体选择性反应来获得所希望的异构体。可替代地，可以通过合适的方式来调整立体化学，如经由具有受保护的胺基的中间体酸化通过从顺式至反式异构体的差向异构作用，如在此实例4中所说明的(并描述于例如《有机化学杂志》(J.Org.Chem.))2009,74,2771-2779)。在本发明的另一个方面，提供了一种用于制造具有化学式(I)的化合物的方法，该方法包括方便地在碱的存在下水解具有化学式(II)的化合物。应了解，上述方法变化形式中的方法步骤的其他排列也有可能。应了解，通过上文所述方法中的任一者获得的任何具有化学式(I)的化合物必要时均可以转化成另一种具有化学式(I)的化合物。当需要具有化学式(I)的化合物的药学上可接受的盐时，它可以通过例如所述化合物与适合碱的反应获得。当需要具有化学式(I)的化合物的药学上可接受的前药时，它可以使用常规程序获得。举例来说，具有化学式(I)的化合物的体内可裂解的酯可以通过例如包含羧基的具有化学式(I)的化合物与药学上可接受的醇的反应获得。关于前药的另外的信息已在上文中提供。也应了解，在上文提及的一些反应中，可能必需或所希望的是保护化合物中的任何敏感性基团。必需或所希望保护的情况和适用于保护的方法为本领域普通技术人员所知。常规保护基可以根据标准规范来使用(关于说明，参见T.W.格林(T.W.Green)，《有机合成中的保护基》(ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis)，约翰威利父子公司(JohnWileyandSons)，1991)。因此，如果反应物包括如氨基、羧基或羟基的基团，那么在此提及的一些反应中可能所希望的是保护该基团。适合的氨基或烷基氨基保护基为例如酰基，例如烷酰基，如乙酰基；烷氧羰基，例如甲氧羰基、乙氧羰基或叔-丁氧羰基；芳基甲氧羰基，例如苯甲氧羰基；或芳酰基，例如苯甲酰基。关于以上保护基的脱除保护基条件必然随保护基的选择而变化。因此，举例来说，如烷酰基或烷氧羰基或芳酰基的酰基可以例如通过用如碱金属氢氧化物(例如，氢氧化锂或氢氧化钠)的适合碱进行水解来移除。可替代地，如叔-丁氧羰基的酰基可以例如通过用如盐酸、硫酸或磷酸或三氟乙酸的适合酸处理来移除，且如苯甲氧羰基的芳基甲氧羰基可以例如通过经如钯碳的催化剂氢化或通过用路易斯酸(Lewisacid)(例如三(三氟乙酸)硼)处理来移除。用于伯氨基的适合的替代保护基为例如酞酰基，它可以通过用例如二甲氨基丙胺的烷基胺或用肼处理来移除。适合的羟基保护基为例如酰基(例如烷酰基，如乙酰基)、芳酰基(例如苯甲酰基)或芳甲基(例如苯甲基)。关于以上保护基的脱除保护基条件将必然随保护基的选择而变化。因此，举例来说，如烷酰基或芳酰基的酰基可以例如通过用如碱金属氢氧化物(例如，氢氧化锂或氢氧化钠)的适合碱进行水解来移除。可替代地，如苯甲基的芳基甲基可以例如通过经如钯碳的催化剂氢化来移除。适合的羧基保护基为例如酯化基团，例如甲基或乙基，它可以例如通过用如氢氧化钠的碱进行水解来移除；或例如叔-丁基，它可以例如通过用酸(例如有机酸，如三氟乙酸)进行处理来移除；或例如苯甲基，它可以例如通过经如钯/碳的催化剂进行氢化来移除。可以使用于化学领域中熟知的常规技术于合成的任何便利阶段移除这些保护基。在此所定义的某些中间体(例如具有化学式II、III、IV、V、VI、VII和VIII的化合物，特别是具有化学式II、III和/或V的化合物)为新颖的且提供这些中间体作为本发明的另一个特征。生物测定-使用以下测定来测量本发明的这些化合物的效应。ERα结合测定化合物结合到分离的雌激素受体α配体结合结构域(ERα-LBD(GST))的能力在竞争测定中使用LanthaScreenTM时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)检测端点来评估。对于LanthaScreenTR-FRET端点，适合的荧光团(FluormoneES2，产品代码P2645)和重组人雌激素受体α配体结合域(产品代码PV4543)购买自英杰(Invitrogen)并且用来测量化合物结合。该测定原理是：将ERα-LBD(GST)添加到荧光配体以形成受体/荧光团复合物。使用铽标记的抗-GST抗体(产品代码PV3551)通过结合到受体的GST标签来间接标记受体，并且通过测试化合物置换荧光配体从而导致Tb-抗-GST抗体与示踪剂之间的TR-FRET信号损失的能力来检测竞争性结合。使用贝克曼库尔特商贸公司(BeckmanCoulter)BioRAPTRFRD微流体工作站进行所有试剂的添加，如下来进行该测定：1.将120nl的测试化合物声学分配到黑色低容量384孔测定板中。2.在ES2筛选缓冲液中制备1xErα-LBD/Tb-抗GSTAb，并且孵育20分钟。3.在使用之前将1x荧光团添加到ERα-LBD/Tb-抗GSTAb溶液中。4.将12μl的1xAR-LBD/Tb-抗-GSTAb/荧光团试剂分配到测定板的每个孔中。5.覆盖该测定板以保护这些试剂免受光照和蒸发，并且在室温下孵育1小时。6.在337nm处激发并且使用BMGPheraSTAR测量每个孔在490nm和520nm处的荧光发射信号。使用LabcyteEcho550，将化合物直接从包含经连续稀释化合物(分别包含10mM、0.1mM、1μM和10nM最终化合物的4个孔)的化合物来源微板中进行给予至测定微板。Echo550是一种液体处理机，其使用声学技术来进行DMSO化合物溶液的直接微板-至-微板的转移，并且该系统可以被编程以从不同来源板孔中转移多个小nL体积的化合物，以给出在该测定中所希望的连续稀释的化合物，然后将其返回-填充以跨稀释范围归一化DMSO浓度。将总120nL(化合物加上DMSO)添加至每个孔，并且将化合物以12点浓度响应形式在最终化合物浓度范围分别为100、29.17、10.42、2.083、1、0.292、0.104、0.02083、0.01、0.002917、0.001042、0.0001μM上进行测试。将用每种化合物获得的TR-FRET剂量响应数据导出到适合的软件包(如Origin或Genedata)中，以进行曲线拟合分析。将竞争性ERα结合表达为IC50值。将这通过计算所需化合物的浓度来确定，该浓度给出结合至ERα-LBD上的示踪化合物的50％降低。MCF-7ER下调测定将化合物下调雌激素受体(ER)数目的能力在基于细胞的免疫-荧光测定中，使用MCF-7人类导管癌乳腺细胞系来评估。将MCF-7细胞直接从包含2mML-谷氨酰胺和5％(v/v)活性炭/葡聚糖处理胎牛血清细胞的测定培养基(不含酚红的达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM)(西格玛(Sigma)D5921)的冷冻小瓶(约5x106个细胞)中复苏，使用无菌18Gx1.5英寸(1.2x40mm)宽规格的针注射一次，并且使用库尔特粒度仪(贝克曼(Beckman))来测量细胞密度。将细胞进一步稀释在测定培养基中至密度为3.75x104个细胞/ml，并且使用赛墨科技公司(ThermoScientific)MatrixWellMate或赛默Multidrop将40μl/孔添加到透明底、黑色、组织培养处理的384孔板(柯仕达(Costar)，编号3712)中。在细胞接种后，将板在37℃、5％CO2下孵育过夜(Liconic转盘孵育器)。使用LabCyte模型555化合物重新格式化仪产生测试数据，该格式化仪是自动化工作单元(集成的Echo2工作单元)的部分。测试化合物的10mM化合物储备溶液用来产生384孔化合物剂量板(LabcyteP-05525-CV1)。将40μl的每种10mM化合物储备溶液分配到第一四分之一孔中，并且然后使用HydraII(MATRIX英国)液体处理单元进行在DMSO中的1:100逐步连续稀释，以给出40ul的稀释化合物分别至四分之一孔2(0.1mM)、3(1μM)和4(0.01μM)中。该源板的行P中的孔中添加的40μlDMSO允许DMSO跨过该剂量范围归一化。为了向对照孔给以剂量，将40μl的DMSO添加到行O1中，并且将在DMSO中的40μl的100μM添加到该化合物源板的行O3中。Echo使用声学技术来进行DMSO化合物溶液至测定板的直接微板-至-微板转移。编程该系统以多个增量在微板之间转移低至2.5nL的体积，并且在这样做时在该测定板中产生一系列稀释的化合物，然后将其返回填充以跨稀释范围归一化DMSO浓度。使用整合的Echo2工作单元用如上的化合物源板将化合物分配到细胞平板上，产生具有3倍稀释和一个最终10倍稀释的12pt重复3μM至3pM剂量范围。将DMSO给予该最大信号对照孔，以给出最终浓度为0.3％，并且将芙仕得给予最小信号对照孔，以相应地给出最终浓度为100nM。将平板在37℃、5％CO2下进一步孵育18-22小时并且然后通过添加20μl的11.1％(v/v)甲醛(在磷酸盐缓冲盐水(PBS)中)溶液进行固定，给出最终甲醛浓度为3.7％(v/v)。将细胞在室温下固定20分钟，随后用250μlPBS/Proclin(具有杀生物防腐剂的PBS)使用BioTek洗板机(platewasher)洗涤两次，然后将40μl的PBS/Proclin添加到所有孔中并且将这些板储存在4℃下。将上述的固定方法在集成的Echo2工作单元上进行。使用自动化AutoElisa工作单元来进行免疫染色。将PBS/Proclin从所有的孔中吸出并且将这些细胞用包含0.5％吐温(Tween)TM20(v/v)的40μlPBS在室温下透性化1小时。将这些板在具有Proclin(具有杀生物防腐剂的PBST)的250μl的PBS/0.05％(v/v)吐温20中洗涤三次，并且然后添加20μlERα(SP1)兔单克隆抗体(赛默飞世尔(Thermofisher)，1:1000在PBS/TweenTM/3％(w/v)牛血清白蛋白中。将这些板在4℃(Liconic转盘孵育器)下孵育过夜并且然后在具有Proclin(PBST)的250μl的PBS/0.05％(v/v)吐温TM20中洗涤三次。然后，将这些板与20μl/孔的山羊抗兔IgGAlexaFluor(亚历克萨荧光)594或山羊抗兔亚历克萨荧光488抗体(分子探针公司(MolecularProbes))(具有赫斯特(Hoechst)以1:5000在PBS/吐温TM/3％(w/v)牛血清白蛋白中)在室温下孵育1hr。然后，将这些板在具有Proclin(具有杀生物防腐剂的PBST)的250μl的PBS/0.05％(v/v)吐温TM20中洗涤三次。将20μl的PBS添加到每个孔中，并且将这些板覆盖有一种黑色平板密封件并且储存在4℃下，随后进行读取。使用CellomicsArrayscan读取594nm(24hr时间点)或488nm(5hr时间点)处荧光来读取板，以测量每个孔中的ERα受体水平。将平均总强度针对细胞数目标准化，给出总强度/细胞。将数据导出到适合的软件包(如Origin)中，以进行曲线拟合分析。将ER受体的下调表达为IC50值并且通过计算所需化合物的浓度来确定，该浓度给出平均最大总强度信号的50％降低。虽然具有化学式(I)的化合物的药理学性质正如所预期的随结构变化而变化，但总体来讲，具有化学式(I)的化合物所具有的活性可以在以下浓度或剂量下在以上测试中的一者或多者中得到证明。对于这些实例产生以下数据(该数据可以是单一实验或多个重复实验的平均结果)：表A实例ER结合IC50值ER下调IC50值1<0.640.14210.85310.441.60.9950.20.576<1.30.44751.782.239<1.21.5使用实例1做为单一试剂以及与mTOR抑制剂组合进行的MCF-7体内异种移植研究。将MCF7细胞(悬浮在100μl的RPMI细胞培养基中的5x106细胞)经皮下植入在免疫受损(SCID)小鼠的后胁腹中，次日，将每只小鼠经手术植入0.5mg/21天雌激素丸剂(美国创新研究公司(InnovativeResearch,USA))。每周两次测量肿瘤并且通过双边游标卡测量(长度x宽度)确定肿瘤体积的变化和生长抑制，其中长度视为跨肿瘤的最长直径并且宽度为相应垂直的。使用公式(长度x宽度)x√(长度x宽度)xπ/6)来计算肿瘤体积。细胞植入后的13天，测量肿瘤以允许小鼠随机化至测试组。次日(即细胞植入后的14天)开始用化合物处理。将mTOR抑制剂AZD2014以15mg/kg每日一次每天以0.1ml/10g的体积经口(p.o.)给予至不同组的小鼠。实例1以5mg/kg每日一次经口以0.1ml/10g进行给予。将一组动物用运载体经口服进行给予，以作为对照。使用九只小鼠/组用于针对对照组的活性剂。将从该研究中获得的数据显示在图10中。具有化学式(I)的化合物与PI3Kα/δ的抑制剂的组合的作用可以以与以上mTOR抑制剂进行组合的类似的方式进行研究。HCC1428长期雌激素剥夺(HCC1428LTED)异种移植功效研究在细胞培养适合的时间之后，将HCC1428LTED细胞(1x106)经皮下植入已经历过度切除术(overectomy)的雌性免疫受损的NSG小鼠(美国杰克逊实验室(JacksonLabs,USA))的后胁腹中。每周两次测量肿瘤并且通过双边游标卡测量(长度x宽度)确定肿瘤体积的变化和生长抑制，其中长度视为跨肿瘤的最长直径并且宽度为相应垂直的。使用公式(长度x宽度)x√(长度x宽度)xπ/6)来计算肿瘤体积。在细胞植入后，每周一次测量肿瘤直到平均大小达到150mm3，在此时，将小鼠放置在随机化的测试组中，其中每组包含10只小鼠。次日(本研究中的第62天)开始用化合物处理并且继续每周一次的肿瘤测量。以25mg/kg每日一次每天以0.1ml/10g经口服(p.o.)给予实例1。将另一组动物用运载体经口服进行给予，以作为对照。在给药的28天之后，对照处理的肿瘤平均生长了220mm3(使用几何平均值)生长，然而来自通过实例1处理的小鼠的肿瘤的大小减小了46mm3，表示对肿瘤生长的121％抑制(P<0.001，通过非配对t-检验)。为了测量雌激素受体蛋白在异种移植肿瘤中的水平，在最终剂量的运载体和实例1处理后的24hr收获肿瘤样品，并且在液氮中速冻。对于蛋白提取，将肿瘤片段添加到其中添加西格玛磷酸酶抑制剂(编号2(P5726)和3(P0044)1以100稀释)和罗氏(Roche)完全(Complete)(11836145001)蛋白酶抑制剂(1片/50mI)、1mM二硫苏糖醇(DTT)的在于wt冰上的2ml样品管中的700ul的英杰(Invitrogen)细胞提取缓冲液(FNN0011)里。使用Mixermill(水平27次/秒)和均质化的3x2min循环将样品均质化。将样品简短地旋转以确定肿瘤完全均质化。将匀浆进行超声波处理10秒，然后在最高速度(13000rpm)旋转减慢离心15分钟。测量在上清液中的蛋白水平并且使用标准方法将约45ug的蛋白在15孔Bis-Tris凝胶(4％-12％凝胶)上跑电泳。随后蛋白分离并转移到硝酸纤维素膜上，雌激素受体68kDa：添加赛默飞世尔SP1#9101S抗体，用牛奶/PBS/T进行1:400稀释并且在4℃下孵育过夜。将过滤器在3x5min内用约20ml的TBS/T0.05％进行洗涤并且将第二抗兔检测抗体以在TBS/T中的5％马弗尔(marvel)里进行1:2000稀释，并且在室温下孵育1hr。使用化学发光检测信号超级信号WestDurac延长持续时间底物(SuperSignalWestDuraextendedDurationsubstrate)来检测信号并且使用Syngene进行定量。使用在马弗尔(marvel)中的经1:10,000稀释的V931西格玛和抗小鼠检测抗体将粘着斑蛋白水平进行测量，作为上样对照。相对于运载体对照，图11和12中的这些结果显示用实例1处理后观察到ER水平中的60％降低。根据本发明的另一个方面，提供一种药物组合物，该药物组合物包括一种如上文所定义的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐与药学上可接受的稀释剂或载体组合。用于片剂配制品的适合的药学上可接受的赋形剂包括例如惰性稀释剂、成粒剂和崩解剂、粘合剂、润滑剂、防腐剂以及抗-氧化剂。另外适合的药学上可接受的赋形剂可以是螯合剂。片剂配制品可以未包覆包衣或包覆包衣，以改变它们的崩解性和随后活性成分在胃肠道内的吸收，或改良它们的稳定性和/或外观，在任一种情况下，均使用在本领域中熟知的常规包衣剂和程序。经口使用的组合物可以可替代地呈硬明胶胶囊形式，其中活性成分与惰性固体状稀释剂混合；或呈软明胶胶囊形式，其中活性成分与水或油混合。水性悬浮液总体上包含呈细粉形式的活性成分以及一种或多种悬浮剂、分散剂或润湿剂。水性悬浮液还可以包含一种或多种防腐剂、抗-氧化剂、着色剂、调味剂和/或甜味剂。油性悬浮液可以通过将活性成分悬浮于植物油中或矿物油中来配制。油性悬浮液还可以包含增稠剂。可以添加甜味剂(如上文所列的甜味剂)和调味剂，以提供可口的口服制剂。这些组合物可以通过添加抗-氧化剂来保存。适于通过添加水来制备水性悬浮液的可分散性散剂和颗粒剂总体上包含活性成分以及分散剂或润湿剂、悬浮剂以及一种或多种防腐剂。也可以存在如甜味剂、调味剂以及着色剂的另外赋形剂。本发明的药物组合物还可以呈水包油乳液形式。--油相可以是植物油或矿物油或任何这些油的混合物。乳液也可以包含甜味剂、调味剂以及防腐剂。糖浆和酏剂可以使用甜味剂配制，并且也可以包含缓和剂、防腐剂、调味剂和/或着色剂。药物组合物还可以呈无菌可注射水性或油性悬浮液的形式，它可以根据已知程序，使用上述适当分散剂或润湿剂和悬浮剂中的一者或多者来配制。无菌可注射制剂还可以是于无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂系统中的无菌可注射溶液或悬浮液。用于经吸入给药的组合物可以呈常规加压气雾剂的形式，该加压气雾剂经安排以分配或者呈包含细粉状固体的气雾剂形式或者液滴形式的活性成分。可以使用如挥发性氟化烃或烃的常规气雾剂推进剂，并且便利地安排气雾剂设备以分配定量的活性成分。干粉吸入器也可以是适合的。有关配制品的另外的信息，请读者参考《综合医药化学》(ComprehensiveMedicinalChemistry)(科温·汉施(CorwinHansch)；编辑委员会主席)，培格曼出版社1990的第5卷，第25.2章。在本发明的一个方面，以上描述的药物组合物包括实例1的化合物[(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸]、或其一种药学上可接受的盐。合宜地，该实例1的化合物是以在此描述的其多晶型存在为晶形B。用于合成如在实例1中提出的(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸的方法推荐该方法在不存在光照的情况下并且在氮气气氛下进行，以避免降解产物的形成。该提及的降解产物具有以下结构，该降解产物是(R,E)-3-(3,5-二氟-4-(2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-4,9-二氢-3H-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-鎓-1-基)苯基)丙烯酸酯：并且被认为可以从实例1[(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸]中通过在空气中自氧化经由自由基链机制来形成。为免生疑，此降解产物不被认为具有显著SERD活性。此化合物还可以被称为(E)-3-[3,5-二氟-4-[(3R)-2-(2-氟-2-甲基-丙基)-3-甲基-4,9-二氢-3H-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-鎓-1-基]苯基]丙-2-烯酸酯并且用于制造它的合成方法在实例13中给出。本领域技术人员将理解，降解产物的形成的控制对安全生产和药物的储存是必要的。本领域的技术人员还将理解某些化合物可以在储存时、甚至在配制成药物组合物之后降解，并且在一些情况下，此类降解可以通过在药物组合物中使用适当的赋形剂和/或通过对最终产物进行适当的包装来控制。本领域技术人员将进一步理解，用于商业用途形成的最终制剂将需要针对许多特征进行优化，这些特征包括化学稳定性，但还包括例如物理稳定性和溶解特征。因此此类配制品将被开发，以便平衡许多不同的因素。适当地，(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸或其一种药学上可接受的盐的组合物包括充当抗氧化剂的化合物。适用于药物组合物的抗氧化剂化合物是本领域中已知的并且包括例如丙酮亚硫酸氢钠；α硫辛酸；α生育酚；抗坏血酸；抗坏血酸棕榈酸酯；丁羟茴醚；丁羟甲苯；胡萝卜素；一水合柠檬酸；没食子酸十二烷酯；异抗坏血酸；富马酸；谷胱甘肽；组氨酸；次磷酸；乳糖酸；硫辛酸；苹果酸；褪黑激素；甲硫氨酸；d-甘露糖；单硫代甘油；没食子酸辛酯；焦亚硫酸钾；丙酸；没食子酸丙酯；抗坏血酸钠；亚硫酸氢钠；甲醛次硫酸钠；焦亚硫酸钠；亚硫酸钠；硫代硫酸钠；氯化亚锡；二氧化硫；麝香草酚；生育酚；生育三烯酚；泛醇；尿酸；维生素E；以及维生素E聚乙二醇琥珀酸酯。此类化合物可以通过多种机制发挥其抗氧化剂作用，并且针对任何特定化合物这些机制中的一种或多种比其他的更有效。一些抗氧化剂化合物如BHA充当自由基清除剂。其他抗氧化剂，比如类焦亚硫酸钠和抗坏血酸是容易氧化的并且因此可以优先于活性成分而被氧化。例如，其中金属诱导的过氧化物形成参与氧化机制，使用一种螯合剂如EDTA(乙二胺四乙酸)可以有用于去除任何金属污染物并且由此间接地实现一个稳定效应。其他金属螯合剂在本领域中是已知的并且包括例如倍他环糊精磺丁基醚钠；乙酸钙；柠檬酸一水合物；环糊精；依地酸二钠；依地酸；富马酸；半乳糖；谷氨酸；组氨酸；羟丙基倍他环糊精；苹果酸；喷替酸；植物螯合肽；聚(甲基乙烯基醚/马来酐)；柠檬酸钾；二水柠檬酸钠；磷酸钠，磷酸氢二钠；磷酸钠，磷酸二氢钠；酒石酸；以及海藻糖。例如，没食子酸丙酯、焦亚硫酸钠、抗坏血酸以及丁羟茴醚包括在实例1的示例性配制品中。EDTA也包括在内。此类一种配制品的实例提供为实例12。在这些中，在许多不同的热和潮湿条件下在四周存储之后，包含焦亚硫酸钠的组合物似乎是比未具有抗氧化剂的那些更不稳定。包含抗坏血酸的组合物在许多不同的热和湿度条件下在4周存储之后似乎是最稳定的(如通过液相色谱分析例如UHPLC确定的)。用于包括实例1的化合物的配制品的其他合适的添加剂包括使用具有低金属含量的赋形剂、具有低过氧化物含量的赋形剂、做为自由基清除剂连同填充剂的赋形剂如甘露糖醇。此类一种配制品的生产方法还可以影响稳定性。例如，对于一些活性成分，确保活性成分与诱导稳定性的赋形剂密切混合在确保最大稳定化中可以是重要的。密切混合可以受例如混合速度、粒度和湿或干混合/粒化法影响。活性成分可以是与抗氧化剂成粒并且然后与其他赋形剂混合。抗氧化剂还可以添加至药物组合物外部上的任何包衣里。在本发明的一个方面，提供了一种药物组合物，该药物组合物包括(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸或其一种药学上可接受的盐，与至少一种药学上可接受的稀释剂或载体的结合。在本发明的一个方面，提供了一种药物组合物，该药物组合物包括(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸或其一种药学上可接受的盐，并且还包含一种抗氧化剂。适当地，抗坏血酸可以用作抗氧化剂。在本发明的一个方面，提供了一种药物组合物，该药物组合物包括(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸或其一种药学上可接受的盐，并且还包含金属螯合剂。适当地，EDTA可以是用作金属螯合剂。在本发明的另一个方面，提供了一种药物组合物，该药物组合物包括(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸或其一种药学上可接受的盐、抗氧化剂并且任选地进一步包含金属螯合剂。在本发明的另一个方面，提供了一种药物组合物，该药物组合物包括(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸或其一种药学上可接受的盐，与至少一种药学上可接受的稀释剂或载体的结合，其中该组合物包含小于5％w/w的(R,E)-3-(3,5-二氟-4-(2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-4,9-二氢-3H-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-鎓-1-基)苯基)丙烯酸酯。在本发明的另一个方面，提供了一种药物组合物，该药物组合物包括(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸或其一种药学上可接受的盐，与至少一种药学上可接受的稀释剂或载体的结合，其中该组合物包含小于2％w/w的(R,E)-3-(3,5-二氟-4-(2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-4,9-二氢-3H-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-鎓-1-基)苯基)丙烯酸酯。在本发明的另一个方面，提供了一种药物组合物，该药物组合物包括(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸或其一种药学上可接受的盐，与至少一种药学上可接受的稀释剂或载体的结合，其中该组合物包含小于1％w/w的(R,E)-3-(3,5-二氟-4-(2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-4,9-二氢-3H-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-鎓-1-基)苯基)丙烯酸酯。在本发明的另一个方面，提供了一种药物组合物，该药物组合物包括(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸或其一种药学上可接受的盐，与至少一种药学上可接受的稀释剂或载体的结合，其中该组合物包含小于0.5％w/w的(R,E)-3-(3,5-二氟-4-(2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-4,9-二氢-3H-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-鎓-1-基)苯基)丙烯酸酯。在本发明的另一个方面，提供了一种药物组合物，该药物组合物包括(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸或其一种药学上可接受的盐，与至少一种药学上可接受的稀释剂或载体的结合，其中该组合物包含小于0.1％w/w的(R,E)-3-(3,5-二氟-4-(2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-4,9-二氢-3H-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-鎓-1-基)苯基)丙烯酸酯。在本发明的另一个方面，提供了一种药物组合物，该药物组合物包括(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸或其一种药学上可接受的盐，与至少一种药学上可接受的稀释剂或载体的结合，其中该组合物包含小于0.05％w/w的(R,E)-3-(3,5-二氟-4-(2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-4,9-二氢-3H-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-鎓-1-基)苯基)丙烯酸酯。在以上方面，其中该组合物被描述为包含少于5％w/w、2％w/w、1％w/w、0.5％w/w、0.1％w/w或0.05％w/w的(R,E)-3-(3,5-二氟-4-(2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-4,9-二氢-3H-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-鎓-1-基)苯基)丙烯酸酯，然后本领域的技术人员将理解的是，这意在表示用于重量与存在于组合物中的(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸的重量比较的重量百分比。降解产物(R,E)-3-(3,5-二氟-4-(2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-4,9-二氢-3H-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-鎓-1-基)苯基)丙烯酸乙酯因此可以在分析技术(如HPLC)中被用作一种参考标记或参考标准以监测实例1的化合物或包含它的药物组合物的稳定性。与一种或多种赋形剂组合以产生单一剂型的活性成分的量将必要地变化，取决于所治疗主体和特定给药途径。举例来说，向人类经口给药将总体上需要例如从1mg到2g活性剂(更适当地从100mg到2g，例如从250mg到1.8g，如从500mg到1.8g，尤其从500mg到1.5g，宜为从500mg到1g)与适当且适宜量的赋形剂混合给予，这些赋形剂可以在总组合物的从约3重量％到约98重量％内变化。应了解，如果需要大剂量，那么可能需要多种剂型，例如两种或更多种片剂或胶囊，其中活性成分的剂量宜在其间划分。典型地，单位剂型将包含约10mg至0.5g的本发明的化合物，尽管单位剂型可以包含高达1g。适宜地，单一固体剂型可以包含1mg与300mg之间的活性成分。为实现治疗或预防目的的本发明的化合物的剂量大小自然将根据疾病病况的性质和严重程度、动物或患者的年龄和性别以及给药途径，根据熟知的医学原则而变化。在使用本发明的化合物以实现治疗或预防目的时，总体上将给予具有化学式(I)的化合物以致接受例如每千克体重1mg到每千克体重100mg的范围内的日剂量，如果需要那么分次给药。总体来讲，当采用肠胃外途径时，将给予更低剂量。因此，例如，对于静脉内给予来说，总体上将使用介于例如每千克体重1mg到每千克体重25mg范围内的剂量。类似地，对于经吸入给予来说，将使用介于例如每千克体重1mg到每千克体重25mg范围内的剂量。然而，经口给予(确切地说以片剂形式)为优选的。在本发明的一个方面，本发明的化合物或其药学上可接受的盐是作为片剂给予的，这些片剂包括10mg至100mg的具有化学式(I)的化合物(或其药学上可接受的盐)，其中一个或多个片剂是如所需进行给予以实现所希望的剂量。如上所述，已知经由ERα的信号传导通过以下作用中的一者或多者引起肿瘤形成：介导癌症和其他细胞的增殖、介导血管生成事件以及介导癌细胞的活动、迁移性以及侵袭性。我们已发现，本发明化合物具有强力抗肿瘤活性，该活性据相信借助于对抗或下调涉及信号转导步骤的ERα而获得，这些信号转导步骤引起肿瘤细胞增殖和存活以及使肿瘤细胞转移的侵袭性和迁移能力。因此，本发明化合物可以具有作为抗肿瘤剂的价值，具体来说，作为哺乳动物癌细胞增殖、存活、活动、播散以及侵袭的选择性性抑制剂，从而抑制肿瘤生长和存活并抑制转移性肿瘤生长。确切地说，本发明化合物可以具有在抑制和/或治疗实体肿瘤疾病方面作为抗增殖性及抗侵袭性药剂的价值。确切地说，本发明化合物可以有用于预防或治疗对ERα的抑制敏感且涉及信号转导步骤的那些肿瘤，这些信号转导步骤引起肿瘤细胞增殖和存活以及使肿瘤细胞转移的迁移能力和侵袭性。另外，本发明化合物可以有用于预防或治疗单独或部分地通过对抗或下调ERα来介导的那些肿瘤，即这些化合物可以用于在需要此类治疗的温血动物中产生ERα抑制作用。根据本发明的另一个方面，提供一种如上文所定义的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，在如人类的温血动物中用作药物。根据本发明的另一个方面，提供一种如上文所定义的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在如人类的温血动物中产生抗增殖性作用。根据本发明的另一个方面，提供一种如上文所定义的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在如人类的温血动物中作为抑制和/或治疗实体肿瘤疾病的抗侵袭性药剂。根据本发明的另一个方面，提供一种如上文所定义的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的用途，用于在如人类的温血动物中产生抗增殖性作用。根据本发明的另一个方面，提供一种如上文所定义的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在药物制造中的用途，用于在如人类的温血动物中产生抗增殖性作用。根据本发明的另一个方面，提供一种如上文所定义的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在药物制造中的用途，用于在如人类的温血动物中作为抑制和/或治疗实体肿瘤疾病的抗侵袭性药剂。根据本发明的另一个方面，提供一种在需要此类治疗的温血动物(如人类)中产生抗增殖性作用的方法，该方法包括向所述动物给予有效量的如上定义的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。根据本发明的另一个方面，提供一种通过在需要此类治疗的温血动物(如人类)中抑制和/或治疗实体肿瘤疾病来产生抗侵袭性作用的方法，该方法包括向所述动物给予有效量的如上定义的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。根据本发明的另一个方面，提供一种如上文所定义的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在如人类的温血动物中预防或治疗癌症。根据本发明的另一个方面，提供一种如上文所定义具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的在药物制造中用途，用于在如人类的温血动物中预防或治疗癌症。根据本发明的另一个方面征，提供一种在需要此类治疗的温血动物(如人类)中预防或治疗癌症的方法，该方法包括向所述动物给予有效量的如上定义的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。根据本发明的另一个方面，提供一种如上文所定义的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在如人类的温血动物中预防或治疗实体肿瘤疾病。根据本发明的另一个方面，提供一种如上文所定义的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在药物制造中的用途，用于在如人类的温血动物中预防或治疗实体肿瘤疾病。根据本发明的另一个方面，提供一种在需此类要治疗的温血动物(如人类)中预防或治疗实体肿瘤疾病的方法，该方法包括向所述动物给予有效量的如上定义的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。根据本发明的另一个方面，提供一种如上文所定义的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，用于预防或治疗对涉及信号转导步骤的ERα的抑制敏感的那些肿瘤，这些信号转导步骤引起肿瘤细胞的增殖、存活、侵袭性以及迁移性能力。根据本发明的另一个方面，提供一种如上文所定义的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在药物制造中的用途，用于预防或治疗对涉及信号转导步骤的ERα的抑制敏感的那些肿瘤，这些信号转导步骤引起肿瘤细胞的增殖、存活、侵袭性以及迁移性能力。根据本发明的另一个方面，提供一种用于预防或治疗对涉及信号转导步骤的ERα的抑制敏感的那些肿瘤的方法，这些信号转导步骤引起肿瘤细胞的增殖、存活、侵袭性以及迁移性能力，该方法包括向所述动物给予有效量的如上文所定义的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。根据本发明的另一个方面，提供一种如上文所定义的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，用于提供对ERα的抑制作用。根据本发明的一个另外的方面，提供了如在上文中定义的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在用于在提供对ERα的抑制作用中使用的药剂的制造中的用途。根据本发明的另一个方面，还提供一种用于提供对ERα的抑制作用的方法，该方法包括给予有效量的如上文所定义的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。根据本发明的另一个方面，提供一种如上文所定义的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，用于提供对ERα的选择性抑制作用。根据本发明的一个另外的方面，提供了如在上文中定义的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在用于在提供对ERα的选择性抑制作用中使用的药剂的制造中的用途。根据本发明的另一个方面，还提供一种用于提供对ERα的选择性抑制作用的方法，该方法包括给予有效量的如上文所定义的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在此描述是这样的化合物，其可以结合至ERα配体结合域并且是选择性雌激素受体降解剂。在基于生物化学和细胞的测定中，本发明的化合物证明是有效力雌激素受体结合剂并且减少ERα的细胞水平并且因此可以有用于治疗雌激素敏感性疾病或病症(包括已经对内分泌疗法形成抗性的疾病)，即用于在治疗乳腺和妇科癌症(包括子宫内膜癌、卵巢癌和宫颈癌)及表达ERα突变的蛋白质的癌症中使用，这些突变蛋白可以是从头突变或由于用之前的内分泌疗法(如一种芳香酶抑制剂)治疗已经产生的。根据本发明的另一个方面，提供了一种如在此之前所定义的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗乳腺癌或妇科癌症中使用。根据本发明的另一个方面，提供了一种如在此之前所定义的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗乳腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌或宫颈癌中使用。根据本发明的另一个方面，提供了一种如在此之前所定义的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗乳腺癌中使用。根据本发明的另一个方面，提供了一种如在此之前所定义的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗乳腺癌中使用，其中该癌症已经对一种或多种其他内分泌疗法形成抗性。根据本发明的另一个方面，提供了一种用于治疗乳腺癌或妇科癌症的方法，该方法包括给予有效量的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，如在上文中所定义的。根据本发明的另一个方面，提供了一种用于治疗乳腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌或宫颈癌的方法，该方法包括给予有效量的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，如在上文中所定义的。根据本发明的另一个方面，提供了一种用于治疗乳腺癌的方法，该方法包括给予有效量的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，如在上文中所定义的。根据本发明的另一个方面，提供了一种用于治疗乳腺癌的方法，其中该癌症已经对一种或多种其他内分泌疗法形成抗性，该方法包括给予有效量的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，如在上文中所定义的。根据本发明的另一个方面，提供了如之前在此所定义的具有化学式(I)的化合物或其一种药学上可接受的盐在制造用于治疗乳腺癌或妇科癌症使用的药物中的用途。根据本发明的另一个方面，提供了如之前在此所定义的具有化学式(I)的化合物或其一种药学上可接受的盐在制造用于治疗乳腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌或宫颈癌使用的药物中的用途。根据本发明的另一个方面，提供了如之前在此所定义的具有化学式(I)的化合物或其一种药学上可接受的盐在制造用于治疗乳腺癌使用的药物中的用途。根据本发明的另一个方面，提供了如之前在此所定义的具有化学式(I)的化合物或其一种药学上可接受的盐在制造用于治疗乳腺癌使用的药物中的用途，其中该癌症已经对一种或多种其他内分泌疗法形成抗性。在本发明的一个特征中，待治疗的癌症为乳腺癌。在这一特征的另一个方面，该乳腺癌为雌激素受体阳性(ER+ve)。在这一方面的另一个实施例中，具有化学式(I)的化合物与另一种抗癌剂如在此所定义的抗激素剂组合给予。根据本发明的另一个方面，提供了一种如在此之前所定义的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在治疗ER+ve乳腺癌中使用。根据本发明的另一个方面，提供了一种用于治疗ER+ve乳腺癌的方法，该方法包括给予有效量的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，如在上文中所定义的。根据本发明的另一个方面，提供了如之前在此所定义的具有化学式(I)的化合物或其一种药学上可接受的盐在制造用于治疗ER+ve乳腺癌使用的药物中的用途。如在上文中所述，具有化学式(I)的化合物的体内作用可以部分地由在给予具有化学式(I)的化合物之后在人体或动物体内形成的一种或多种代谢物来发挥。因此，本发明还涵盖一种用于抑制患者中的ER-α的方法，该方法包括向患者给予有效抑制该患者中的ER-α的量的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。因此，本发明还涵盖一种用于抑制患者中的ER-α的方法，该方法包括向患者给予有效抑制该患者中的ER-α的量的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在所有以上用途和方法中，适合的具有化学式(I)的化合物是实例1或其药学上可接受的盐。在一个方面，实例1是处于如在此描述的晶形B。在此所定义的抗癌治疗可以按单独疗法形式施用，或除本发明的化合物外，还可以涉及常规外科手术或放射线疗法或化学疗法。该化学疗法可以包括以下抗肿瘤剂类别中的一者或多者：-(i)如肿瘤医学中所用的其他抗增生性/抗赘生性药物和其组合，如烷基化剂(例如顺铂、奥赛力铂、卡铂、环磷酰胺、氮芥子气、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安、替莫唑胺以及亚硝基脲)；抗代谢物(例如吉西他滨和抗叶酸制剂，如氟嘧啶，如5-氟尿嘧啶和喃氟啶、拉替曲泽、甲氨喋呤、胞嘧啶阿拉伯糖苷以及羟基脲)；抗肿瘤抗生素(例如蒽环霉素，如阿霉素、博莱霉素、小红莓、道诺霉素、表柔比星、艾达霉素、丝裂霉素C、更生霉素以及光神霉素)；抗有丝分裂剂(例如长春花生物碱，如长春新碱、长春碱、长春地辛以及长春瑞滨，和紫杉类，如紫杉醇和多烯紫杉醇，以及polo激酶抑制剂)；以及拓扑异构酶抑制剂(例如表鬼臼毒素，如依托泊苷和替尼泊苷，安吖啶、拓朴替康以及喜树碱)；(ii)抗激素药剂，如抗雌激素(例如他莫昔芬、氟维司群、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬和碘昔芬)、孕激素(例如乙酸甲地孕酮)、芳香酶抑制剂(例如阿那曲唑、来曲唑、伏氯唑(vorazole)以及依西美坦)；(iii)生长因子功能和其下游信号传导路径的抑制剂：包括任何生长因子或生长因子受体目标的Ab调节剂，由施特恩(Stern)等人《肿瘤学/血液学的重要综述》(CriticalReviewsinOncology/Haematology)，2005,54，第11-29页)综述；也包括这些目标的小分子抑制剂，例如激酶抑制剂，实例包括抗erbB2抗体曲妥珠单抗[HerceptinTM]、抗EGFR抗体帕尼单抗、抗EGFR抗体西妥昔单抗[Erbitux,C225]以及酪氨酸激酶抑制剂，包括erbB受体家族的抑制剂，如表皮生长因子家族受体(EGFR/erbB1)酪氨酸激酶抑制剂，如吉非替尼或埃罗替尼，erbB2酪氨酸激酶抑制剂，如拉帕替尼，以及混合erb1/2抑制剂，如阿法替尼；类似策略可供用于生长因子和其受体的其他类别，例如肝细胞生长因子家族或其受体(包括c-met和ron)的抑制剂；胰岛素和胰岛素生长因子家族或其受体(IGFR、IR)的抑制剂、血小板衍生的生长因子家族或其受体(PDGFR)的抑制剂以及通过其他受体酪氨酸激酶(如c-kit、AnLK以及CSF-1R)介导的信号传导的抑制剂；还包括在PI3激酶信号传导路径中靶向信号传导蛋白质的调节剂，例如PI3激酶同种型(如PI3K-α/β/γ)和ser/thr激酶(如AKT、mTOR(如AZD2014)、PDK、SGK、PI4K或PIP5K)的抑制剂；还包括以上未列出的丝氨酸/苏氨酸激酶的抑制剂，举例来说，如维罗非尼的raf抑制剂，如司美替尼(AZD6244)的MEK抑制剂，如伊马替尼或尼罗替尼的Abl抑制剂，如依鲁替尼的Btk抑制剂，如福他替尼的Syk抑制剂，极光激酶抑制剂(例如AZD1152)，如JAK、STAT以及IRAK4的其他ser/thr激酶抑制剂，以及细胞周期素依赖性激酶抑制剂(如帕布昔利布(palbociclib))；iv)DNA损伤信号传导路径的调节剂，例如PARP抑制剂(例如奥拉帕尼)、ATR抑制剂或ATM抑制剂；v)细胞凋亡和细胞死亡路径的调节剂，如Bcl家族调节剂(例如ABT-263/Navitoclax、ABT-199)；(vi)抗血管生成剂，如抑制血管内皮生长因子的作用的那些药剂，[例如抗-血管内皮细胞生长因子抗体贝伐单抗(AvastinTM)和例如VEGF受体酪氨酸激酶抑制剂，如索拉非尼、阿西替尼、帕佐泮尼、舒尼替尼以及凡德他尼(以及通过其他机制起作用的化合物(例如利诺胺、整合素αvβ3功能的抑制剂以及血管生长抑素))]；(vii)血管破坏剂，如考布他汀A4；(viii)抗侵袭剂，例如c-Src激酶家族抑制剂，如(达沙替尼，药物化学杂志(J.Med.Chem.)，2004,47,6658-6661)和伯舒替尼(SKI-606)，以及金属蛋白酶抑制剂，如马立马司他、尿激酶纤维蛋白溶酶原激活剂受体功能的抑制剂或针对肝素酶的抗体]；(ix)免疫疗法方法，包括例如增加患者肿瘤细胞的免疫原性的离-体和体-内方法，如以如白介素2、白介素4或粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的细胞因子转染，减少T-细胞无变应性的方法，使用如细胞因子-转染的树突状细胞的经转染免疫细胞的方法，使用细胞因子-转染的肿瘤细胞系的方法，以及使用抗-个体基因型抗体的方法。特定实例包括靶向PD-1(例如BMS-936558)或CTLA4(例如伊匹单抗和曲美单抗)的单克隆单抗；(x)反义或基于RNAi的疗法，例如有关所列目标的那些疗法。(xi)基因疗法方法，包括例如置换异常基因(如异常p53或异常BRCA1或BRCA2)的方法；GDEPT(基因-定向酶前-药疗法)方法，如使用胞嘧啶脱氨酶、胸苷激酶或细菌性硝基还原酶的那些方法；以及增强患者对化学疗法或放射线疗法的耐受性的方法(如多重-耐药性基因疗法)。根据本发明的这一方面，提供一种适用于治疗癌症的组合，包括如在此定义的本发明的化合物或其药学上可接受的盐与另一种的抗肿瘤剂，尤其是在上文的(i)-(xi)下所列的抗肿瘤剂中的任一者。确切地说，以上在(i)-(xi)下所列的抗肿瘤剂为待治疗的特定癌症的护理标准；本领域普通技术人员应了解“护理标准”的含义。在一个方面，本发明的这些化合物是实例1或其药学上可接受的盐。因此，在本发明的另一个方面，提供与另一种抗肿瘤剂组合的本发明的化合物或其药学上可接受的盐，尤其是选自于在此上文的(i)-(xi)下所列的一者的抗肿瘤剂。在本发明的另一个方面，提供了实例1[(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸]或其药学上可接受的盐与另一种抗肿瘤剂组合，尤其是选自此上文中的(i)至(xi)下所列出的一者的抗肿瘤剂。在本发明的另一个方面，提供本发明的化合物或其药学上可接受的盐与另一种抗肿瘤剂组合，尤其是选自于在上文(i)下所列的一者的抗肿瘤剂。在本发明的另一个方面，提供了如之前在此定义的本发明化合物或其药学上可接受的盐和在上文的(i)下所列的任一种抗肿瘤剂。在本发明的另一个方面，提供了实例1或其药学上可接受的盐与在上文(i)下所列出的抗肿瘤试剂中任一者组合。在本发明的另一个方面，提供一种适用于治疗癌症的组合，包括如上文所定义的本发明的化合物或其药学上可接受的盐和紫杉类，如紫杉醇或他克唑泰尔(taxotere)，适宜地为他克唑泰尔。例如，与紫杉类如紫杉醇或他克唑泰尔(适宜地为他克唑泰尔)的组合的一种适合的本发明的化合物是实例1或其药学上可接受的盐。在本发明的另一个方面，提供本发明的化合物或其药学上可接受的盐与另一种抗肿瘤剂组合，尤其是选自于在此上文(ii)下所列的一者的抗肿瘤剂。在本发明的另一个方面，提供一种适用于治疗癌症的组合，包括如之前在此所定义的本发明的化合物或其药学上可接受的盐和在上文的(ii)下所列的抗激素剂中的任一者，例如在上文的(ii)中所列的抗雌激素中的任一者或例如在以上(ii)中所列的芳香酶抑制剂。在本发明的另一个方面，提供一种适用于治疗癌症的组合，包括实例1或其药学上可接受的盐和在上文的(ii)下所列的抗激素剂中的任一者，例如在上文的(ii)中所列的抗雌激素中的任一者或例如在以上(ii)中所列的芳香酶抑制剂。在本发明的另一个方面，提供一种适用于治疗癌症的组合，包括实例1或其药学上可接受的盐和mTOR抑制剂，如AZD2014(参见例如WO2008/02316)。在本发明的另一个方面，提供一种适用于治疗癌症的组合，该组合包括实例1或其药学上可接受的盐和PI3Kα-抑制剂，如在我们共同未决的PCT申请PCT/GB2014/050163中的PI3Kα/δ抑制剂。适合的PI3Kα/δ抑制剂的一个实例是来自PCT/GB2014/050163的实例3，其是化合物1-(4-(5-(5-氨基-6-(5-叔丁基-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-yl)-1-乙基-1H-1,2,4-三唑-3-基)哌啶-1-基)-3-羟基丙-1-酮或其药学上可接受的盐。制备PCT/GB2014/050163的实例3的方法在此参比实例1中提出。在本发明的另一个方面，提供一种适用于治疗癌症的组合，包括实例1或其药学上可接受的盐和帕布昔利布(palbociclib)。在一个方面，一种具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐(特别是实例1或其药学上可接受的盐)与在上文(ii)中所列出的抗肿瘤剂或mTOR抑制剂(如AZD2014)、或PI3K-α抑制剂(如在我们共同未决的PCT申请PCT/GB2014/050163、特别是在其中的实例3中那些PI3Kα/δ抑制剂)或帕布昔利布(palbociclib)的以上组合适用于在治疗乳腺癌或妇科癌症如乳腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌或宫颈癌(特别是乳腺癌，例如以下项)中使用：ER+-ve乳腺癌。在此，当使用术语“组合”时，应了解，这一术语是指同时、分开或顺序给药。在本发明的一个方面，“组合”是指同时给药。在本发明的另一个方面，“组合”是指分开给药。在本发明的另一个方面，“组合”是指顺序给药。在顺序的或分开的给药的情况下，在给予第二成分上的延迟不应该如此以至于失去该组合的有益效果。当分开或顺序地给予两种或多种组分的组合时，应当理解的是针对每种组分的剂量方案可以是不同的并且独立于其他组分。合宜地，本发明的这些化合物是每日给药一次。根据本发明的另一个方面，提供一种药物组合物，该药物组合物包括具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐与选自于在此上文的(i)-(xi)下所列的一者的抗肿瘤剂的组合，以及药学上可接受的稀释剂或载体。根据本发明的另一个方面，提供一种药物组合物，该药物组合物包括实例1[(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸]或其药学上可接受的盐与选自于在此上文的(i)-(xi)下所列的一者的抗肿瘤剂组合，以及药学上可接受的稀释剂或载体。根据本发明的另一个方面，提供了一种药物组合物，包括具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐与在以上(ii)中所列的抗激素剂中的任一者例如在以上(ii)中所列的抗雌激素中任一者或例如在以上(ii)中所列出的芳香酶抑制剂组合，以及药学上可接受的稀释剂或载体。根据本发明的另一个方面，提供了一种药物组合物，包括实例1或其药学上可接受的盐和在以上(ii)中所列的抗激素剂中的任一者例如在以上(ii)中所列的抗雌激素中任一者或例如在以上(ii)中所列出的芳香酶抑制剂，以及药学上可接受的稀释剂或载体。在本发明的另一个方面，提供了一种药物组合物，包括实例1或其药学上可接受的盐和mTOR抑制剂，如AZD2014(参见例如WO2008/023161)；以及药学上可接受的稀释剂或载体。在本发明的另一个方面，提供了一种药物组合物，包括实例1或其药学上可接受的盐和PI3Kα-抑制剂如在我们共同未决的PCT申请PCT/GB2014/050163中的那些PI3Kα/δ抑制剂，以及与药学上可接受的稀释剂或载体。适合的PI3Kα/δ抑制剂的一个实例是来自如在上文中所述的PCT/GB2014/050163的实例3。在本发明的另一个方面，提供了一种药物组合物，包括实例1或其药学上可接受的盐和帕布昔利布(palbociclib)，以及药学上可接受的稀释剂或载体。在一个方面，具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐(特别是实例1或其药学上可接受的盐)与在上文(ii)中所列出的抗肿瘤剂或mTOR抑制剂(如AZD2014)、或PI3K-α抑制剂(如在我们共同未决的PCT申请PCT/GB2014/050163、特别是在其中的实例3中那些PI3Kα/δ抑制剂)或帕布昔利布(palbociclib)的以上药物组合物适用于在治疗乳腺癌或妇科癌症如乳腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌或宫颈癌(中使用，特别是乳腺癌，例如：ER+-ve乳腺癌。根据本发明的另一个方面，提供一种用于治疗癌症的药物组合物，该药物组合物包括具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐与选自于在此上文的(i)-(ix)下所列的一者的抗肿瘤剂的组合，以及药学上可接受的稀释剂或载体。根据本发明的另一个方面，提供了一种药物组合物，该药物组合物包括具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐与在以上(ii)中所列的抗激素剂中的任一者例如在以上(ii)中所列的抗雌激素中任一者或例如在以上(ii)中所列出的芳香酶抑制剂的组合，以及药学上可接受的稀释剂或载体用于，在治疗癌症中使用。根据本发明的另一个方面，提供一种用于治疗癌症的药物组合物，该药物组合物包括实例1或其药学上可接受的盐与选自于在此上文的(i)-(xi)下所列的一者的抗肿瘤剂的组合，以及药学上可接受的稀释剂或载体。根据本发明的另一个方面，提供了一种药物组合物，该药物组合物包括实例1或其药学上可接受的盐和在以上(ii)中所列的抗激素剂中的任一者例如在以上(ii)中所列的抗雌激素中任一者或例如在以上(ii)中所列出的芳香酶抑制剂，以及药学上可接受的稀释剂或载体，用于在治疗癌症中使用。在本发明的另一个方面，提供了一种药物组合物，包括实例1或其药学上可接受的盐和mTOR抑制剂，如AZD2014(参见例如WO2008/023161)；以及药学上可接受的稀释剂或载体，用于在治疗癌症中使用。在本发明的另一个方面，提供了一种药物组合物，包括实例1或其药学上可接受的盐和PI3Kα-抑制剂如在我们共同未决的PCT申请PCT/GB2014/050163中的那些PI3Kα/δ抑制剂，以及与药学上可接受的稀释剂或载体，用于在治疗癌症中使用。适合的PI3Kα/δ抑制剂的一个实例是来自如在上文中所述的PCT/GB2014/050163的实例3。在本发明的另一个方面，提供了一种药物组合物，包括实例1或其药学上可接受的盐和帕布昔利布(palbociclib)，以及药学上可接受的稀释剂或载体，用于在治疗癌症中使用。在一个方面，具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐(特别是实例1或其药学上可接受的盐)与在上文(ii)中所列出的抗肿瘤剂或mTOR抑制剂(如AZD2014)、或PI3K-α抑制剂(如在我们共同未决的PCT申请PCT/GB2014/050163、特别是在其中的实例3中那些PI3Kα/δ抑制剂)或帕布昔利布(palbociclib)的以上药物组合物适用于在治疗乳腺癌或妇科癌症如乳腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌或宫颈癌中使用，特别是乳腺癌，例如：ER+-ve乳腺癌。根据本发明的另一个特征，提供一种具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐与选自于在此上文的(i)-(xi)下所列的一者的抗肿瘤剂的组合的用途，它是用于在制造用于治疗温-血动物(如人类)的癌症的药物中使用。根据本发明的另一个特征，提供实例1或其药学上可接受的盐与选自于在此上文的(i)-(xi)下所列的一者的抗肿瘤剂的组合的用途，它是用于在制造用于温-血动物(如人类)的癌症的药物中使用。根据本发明的另一个方面，提供了具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐与在以上(ii)中所列的抗激素剂中的任一者例如在以上(ii)中所列的抗雌激素中任一者或例如在以上(ii)中所列出的芳香酶抑制剂的组合在制造用于治疗温-血动物(如人类)的癌症的药物中的用途。在本发明的另一个方面，提供了实例1或其药学上可接受的盐与在以上(ii)中所列的抗激素剂中的任一者例如在以上(ii)中所列的抗雌激素中任一者或例如在以上(ii)中所列出的芳香酶抑制剂的组合在制造用于治疗温-血动物(如人类)的癌症的药物中的用途。本发明的另一个方面，提供实例1或其药学上可接受的盐与mTOR抑制剂如AZD2014(参见例如WO2008/023161)的组合在制造用于治疗温-血动物(如人类)的癌症的药物中的用途。本发明的另一个方面，提供了实例1或其药学上可接受的盐与PI3Kα-抑制剂如在我们共同未决的PCT申请PCT/GB2014/050163中的PI3Kα/δ抑制剂的组合在制造用于治疗温-血动物(如人类)的癌症的药物中的用途。适合的PI3Kα/δ抑制剂的一个实例是来自如在上文中所述的PCT/GB2014/050163的实例3。本发明的另一个方面，提供实例1或其药学上可接受的盐与帕布昔利布(palbociclib)的组合在制造用于治疗温-血动物(如人类)的癌症的药物中的用途。在一个方面，具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐(特别是实例1或其药学上可接受的盐)与在上文(ii)中所列出的抗肿瘤剂或mTOR抑制剂(如AZD2014)、或PI3K-α抑制剂(如在我们共同未决的PCT申请PCT/GB2014/050163、特别是在其中的实例3中的那些PI3Kα/δ抑制剂)或帕布昔利布(palbociclib)的以上用途适用于制造用于治疗乳腺癌或妇科癌症如乳腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌或宫颈癌的药物，特别是乳腺癌，例如ER+ve乳腺癌。因此，在本发明的另一个特征中，提供一种治疗需要此类治疗的温-血动物(如人类)的癌症的方法，该方法包括向所述动物给予有效量的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐与选自于在此上文的(i)-(xi)下所列的一者的抗肿瘤剂的组合。根据本发明的另一个方面，提供一种治疗需要此类治疗的温-血动物(如人类)的癌症的方法，该方法包括向所述动物给予有效量的实例1或其药学上可接受的盐与选自于在此上文的(i)-(xi)下所列的一者的抗肿瘤剂的组合。根据本发明的另一个方面，提供一种治疗需要此类治疗的温-血动物(如人类)的癌症的方法，该方法包括向所述动物给予有效量的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐与选自上文的(ii)中所列的抗激素剂中任一者例如在上文的(ii)中所列的抗雌激素中任一者或例如在上文的(ii)中所列的芳香酶抑制剂的组合。在本发明的另一个方面，提供一种治疗需要此类治疗的温-血动物(如人类)的癌症的方法，该方法包括向所述动物给予有效量的实例1或其药学上可接受的盐与选自上文的(ii)中所列的抗激素剂中任一者例如在上文的(ii)中所列的抗雌激素中任一者或例如在上文的(ii)中所列的芳香酶抑制剂的组合。在本发明的另一个方面，提供一种治疗需要此类治疗的温-血动物(如人类)的癌症的方法，该方法包括向所述动物给予有效量的实例1或其药学上可接受的盐与mTOR抑制剂如AZD2014(参见例如WO2008/023161)的组合。在本发明的另一个方面，提供一种治疗需要此类治疗的温-血动(如人类)的癌症的方法，该方法包括向所述动物给予有效量的实例1或其药学上可接受的盐与PI3Kα-抑制剂如在我们共同未决的PCT申请PCT/GB2014/050163中的那些PI3Kα/δ抑制剂的组合，适合的PI3Kα/δ抑制剂的一个实例是来自如在上文中所述的PCT/GB2014/050163的实例3。在本发明的另一个方面，提供一种治疗需要此类治疗的温-血动物(如人类)的癌症的方法，该方法包括向所述动物给予有效量的实例1或其药学上可接受的盐与帕布昔利布(palbociclib)的组合。在一个方面，治疗癌症的以上方法是用于治疗乳腺癌或妇科癌症如乳腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌或宫颈癌的方法，特别是乳腺癌，例如ER+-ve乳腺癌癌。根据本发明的另一个方面，提供一种试剂盒，包括具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐与选自于在此上文的(i)-(xi)下所列的一者的抗肿瘤剂的组合。根据本发明的另一个方面，提供一种试剂盒，包括具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐与选自于在此上文的(i)或(ii)下所列的一者的抗肿瘤剂的组合。根据本发明的另一个方面，提供一种试剂盒，该试剂盒包括：a)一种处于第一单位剂型的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐；b)一种处于第二单位剂型的选自于在此上文的(i)-(xi)下所列的一者的抗肿瘤剂；以及c)用于容纳所述第一和第二剂型的容器装置。根据本发明的另一个方面，提供一种试剂盒，该试剂盒包括：a)一种处于第一单位剂型的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐；b)一种处于第二单位剂型的选自在上文(i)-(ii)下列的一者的抗肿瘤剂；以及c)用于容纳所述第一和第二剂型的容器装置。根据本发明的另一个方面，提供一种试剂盒，包括实例1或其药学上可接受的盐与选自于在此上文的(i)-(xi)下所列的一者的抗肿瘤剂的组合。根据本发明的另一个方面，提供一种试剂盒，包括实例1或其药学上可接受的盐与选自于在此上文的(i)或(ii)下所列的一者的抗肿瘤剂的组合。根据本发明的另一个方面，提供一种试剂盒，该试剂盒包括：a)处于第一单位剂型的实例1或其药学上可接受的盐；b)处于第二单位剂型的选自于在此上文的(i)-(xi)下所列的一者的抗肿瘤剂；以及c)用于容纳所述第一和第二剂型的容器装置。根据本发明的另一个方面，提供一种试剂盒，该试剂盒包括：a)处于第一单位剂型的实例1或其药学上可接受的盐；b)处于第二单位剂型的选自在上文(i)-(ii)下所列的一者的抗肿瘤剂；以及c)用于容纳所述第一和第二剂型的容器装置。根据本发明的另一个方面，提供一种试剂盒，该试剂盒包括：a)处于第一单位剂型的实例1或其药学上可接受的盐；b)处于第二单位剂型的选自AZD2014、PI3Kα-抑制剂(如在我们的共同未决的PCT申请PCT/GB2014/050163中的那些PI3Kα/δ抑制剂)和帕布昔利布(palbociclib)的抗肿瘤剂；以及c)用于容纳所述第一和第二剂型的容器装置。在所有以上方法、用途和其他方面中，其中使用实例1的化合物，它适合用作晶形B。可以在典型地根据常见处方时程进行的护理疗法标准之上添加如上所述的组合疗法。虽然具有化学式(I)的化合物主要具有作为用于温-血动物(包括人类)的治疗剂的价值，但它们也有用在需要抑制ER-的任何时候。因此，它们有用于作为用于发展新生物测试以及搜寻新药理学药剂中的药理学标准。个人化医疗本发明的另一个方面是基于鉴别编码ERα的状态和用具有化学式(I)的化合物治疗的潜在易感性之间的联系。具体来说，ERα基因状态可以指示患者不太可能响应于现有的激素疗法(如芳香酶抑制剂)，至少部分是因为一些ERα突变被认为是作为对现有治疗的抗性机制而出现。SERD，特别是可以以更大剂量经口服给药而没有过度不便的SERD，然后可以有利地被用来治疗患有ERα突变的患者，这些患者可以对其他疗法有抗性。因此，这提供了机会、方法和工具用于选择用具有化学式(I)的化合物进行治疗的患者，特别是癌症患者。本发明涉及患者选择工具和方法(包括个人化药物)。该选择是基于待治疗的肿瘤细胞是具有野生型抑或突变型ERα基因。该ER基因状态因此可以被用作一种生物标记，以表明用SERD的选择治疗可以是有利的。为免生疑，如在此所述的具有化学式(I)的化合物被认为对抗野生型和突变型ERα基因，至少是在提交本申请日鉴定的ERα基因中的那些突变，是同样有活性的。明确需要将针对以下患者富集或用于选择这些患者的生物标记：这些患者的肿瘤将对SERD(如具有化学式(I)的化合物)治疗起反应。鉴别对一种药剂比另一种最可能起反应的患者的患者选择生物标记在癌症治疗中为理想的，因为它们减少具有非反应性肿瘤的患者的不必要治疗，从而减少这些药剂的潜在副作用。生物标记可以描述为“作为正常生物过程、致病过程或对治疗性干预的药理学响应的指示剂客观地经测量且评估的特性”。生物标记为与一种特定病状或疾病有关的任何可鉴别且可测量的指示剂，其中在生物标记的存在或含量与该病状或疾病的一些方面(包括该病状或疾病的存在、它的含量或变化含量、它的类型、它的阶段、它的易感性或对用于治疗该病状或疾病的药物的反应)之间存在相关性。相关性可以为定性的、定量的或定性且定量的。典型地，生物标记为化合物、化合物片段或化合物组。这些化合物可以为在生物体中发现或通过生物体产生的任何化合物，包括蛋白质(和肽)、核酸以及其他化合物。生物标记可以具有预测能力，并且因此可以用于预测或检测特定病状或疾病的存在、含量、类型或阶段(包括特定微生物或毒素的存在或含量)、对特定病状或疾病的易感性(包括遗传易感性)或对特定治疗(包括药物治疗)的响应。据认为在药物发现和发展的未来，生物标记将通过改良研究与发展程序的效率而发挥日益重要的作用。生物标记可以用作诊断剂、疾病进展监测剂、治疗监测剂以及临床结果预测剂。举例来说，不同生物标记研究项目试图鉴别出特定癌症和特定心血管疾病以及免疫疾病的标记。据相信新的经验证的生物标记的发展将使医疗和药物发展成本显著降低，并且使多种疾病和病状的治疗显著改善。为了最佳设计临床试验并且为了从这些试验获得最多信息，生物标记可以为需要的。该标记在替代物和肿瘤组织中可以为可测量的。这些标记理想地也将与功效相关并且由此可以最终用于患者选择。因此，本发明的这一方面的根本技术问题为鉴别对用具有化学式(I)的化合物治疗的患者分类的方法。该技术问题通过提供在此的权利要求书和/或说明书中所表征的实施例来解决。包含野生型ERα的肿瘤被认为对用具有化学式(I)的化合物治疗(例如作为一线治疗)是敏感的。肿瘤还可以响应于用具有化学式(I)的化学物作为第二线、第三线或后续疗法的治疗并且这可能是有用的，具体来说，其中这些肿瘤包含突变型ERα并且因此可以对现有疗法(如AIs)有抗性。在抗性环境中比在野生型肿瘤中需要更高剂量的具有化学式(I)的化合物。本发明提供一种测定细胞对具有化学式(I)的化合物的敏感性的方法。该方法包括测定所述细胞中的ERα基因状态。如果在细胞生长分析中具有化学式(I)的化合物抑制细胞数目增加(或者经由抑制细胞增殖和/或者经由增加细胞死亡)，那么将该细胞定义为对具有化学式(I)的化合物敏感。本发明方法有用于通过生长抑制预测更可能对具有化学式(I)的化合物响应的细胞。“代表肿瘤”的样品可以为经分离的实际肿瘤样品或者可以为已进一步加工的样品，例如从肿瘤样品进行PCR扩增的核酸样品。定义：在这一个人化医疗部分中：“等位基因”是指遗传基因座的特定形式，通过它的特定核苷酸或氨基酸序列与其他形式相区分。“扩增反应”为导致目标核酸优于非目标核酸进行特异性扩增的核酸反应。聚合酶链反应(PCR)为熟知扩增反应。“癌症”在此用于指由于细胞转化成赘生性表型所出现的赘生性生长。该细胞转化通常涉及遗传突变。“基因”为包含关于RNA产物的经调节生物合成的所有信息的DNA区段，包括启动子、外显子、内含子以及可以位于控制表达的5'或3'侧接区域内(不在该基因的转录部分内)的其他序列元件。“基因状态”是指该基因为野生型或者不是(即突变型)。“标记”是指能够产生指示在分析样品中存在目标聚核苷酸的可检测信号的组合物。适合标记包括放射性同位素、核苷酸发色团、酶、底物、荧光分子、化学发光部分、磁性粒子、生物发光部分等。因此，标记为通过光谱、光化学、生物化学、免疫化学、电学、光学或化学手段可检测的任何组合物。“非同义变异”是指基因编码序列中或与基因编码序列重叠的变异(变化)，导致产生不同(经改变的)多肽序列。这些变异可能影响或可能不影响蛋白质功能并且包括错义变异体(导致一个氨基酸取代另一个)、无义变异体(由于产生过早终止密码子而产生截短多肽)以及插入/缺失变异体。“同义变异”是指不影响所编码多肽的序列的基因编码序列中的变异(变化)。这些变异可以间接地(例如通过改变基因表达)影响蛋白质功能，但在不存在相反证据的情况下，总体上假定为无害的。“核酸”是指单链或双链DNA和RNA分子，包括自然界中所发现的天然核酸和/或经修饰的具有经修饰的主链或碱基的人工核酸，如本领域中已知。“引物”是指能够充当用于合成与待复制的核酸链互补的引物延伸产物的起始点的单链DNA寡核苷酸序列。引物的长度和序列必须使其能够引发延伸产物的合成。典型引物在与目标序列实质上互补的序列长度中包含至少约7个核苷酸，但略微更长的引物为优选的。通常，引物包含约15-26个核苷酸，但也可以采用更长或更短引物。“多态位点”为基因座内导致在一个群体中发现至少两种替代性序列的位置。“多态现象”是指在个体中在多态位点处所观察到的序列变异。多态现象包括核苷酸取代、插入、缺失以及微卫星，并且可以(但无需)引起基因表达或蛋白质功能方面可检测的差异。在不存在对表达或蛋白质功能的影响证据的情况下，包括非同义变异体的常见多态现象总体上视为包括在野生型基因序列的定义中。人类多态现象和相关注释的目录包括验证、观察的频率以及疾病关联，由NCBI(dbSNP:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/)维护。请注意，当用于基因序列的情形中时的术语“多态现象(polymorphism)”不应与当用于化合物的固态形式(即化合物的结晶或非晶性质)的情形中的术语“多晶型现象(polymorphism)”混淆。本领域普通技术人员将通过其背景了解所需的含义。“探针”是指具有与待检测的等位基因的目标序列完全互补的序列的单链序列特异性寡核苷酸。“响应”是通过根据实体肿瘤反应评估准则(ResponseEvaluationCriteriainSolidTumours；RECIST)进行的测量来定义，涉及将患者主要分成两个组：显示部分响应或稳定疾病的组和显示进行性疾病的迹象的组。“严格的杂交条件”是指在42℃下在包括50％甲酰胺、5×SSC(750mMNaCl、75mM柠檬酸三钠)、50mM磷酸钠(pH7.6)、5×邓哈特溶液(Denhardt’ssolution)、10％硫酸葡聚糖以及20pg/mI变性剪切的鲑鱼精子DNA的溶液中孵育过夜，继之以在0.1xSSC中在约65℃下洗涤过滤物。“存活”涵盖患者的整体存活和无进展存活。“整体存活(OS)”定义为从给药开始到由于任何原因死亡的时间。“无进展存活(PFS)”定义为从给药开始到第一次出现进行性疾病或由于任何原因死亡的时间。根据本发明的一个方面，提供一种用于选择用具有化学式(I)的化合物治疗的患者的方法，该方法包括从患者提供包含肿瘤细胞的样品；确定包含患者的肿瘤细胞的样品中的ERα基因为野生型抑或突变型；以及基于以上来选择用具有化学式(I)的化合物治疗的患者。该方法可以包括或不包括实际患者样品分离步骤。因此，根据本发明的一个方面，提供一种用于选择用具有化学式(I)的化合物治疗的患者的方法，该方法包括确定先前从患者分离的包含肿瘤细胞的样品中的ERα基因为野生型抑或突变型；以及基于以上来选择用具有化学式(I)的化合物治疗的患者。在一个实施例中，如果肿瘤细胞DNA具有突变型ERα基因，那么选择该患者用具有化学式(I)的化合物治疗。在其他实施例中，选择其肿瘤细胞DNA具有野生型ERα基因的患者用具有化学式(I)的化合物进行治疗。为了本发明的目的，野生型的基因状态打算表明基因的正常或恰当表达以及所编码蛋白质的正常功能。相比之下，突变型状态打算表明蛋白质功能改变的表达，与癌症中突变型ERα基因的已知作用(如在此所述)一致。任何数目的遗传或表观遗传变化(包括(但不限于)突变、扩增、缺失、基因组重排或甲基化特征变化)可以导致突变体状态。然而，如果这些变化仍然引起正常蛋白质或功能上等效变异体的恰当表达，那么该基因状态被视为野生型。典型地将不产生功能突变型基因状态的变异体实例包括同义编码变异体和常见多态现象(同义或非同义)。如下文所讨论，基因状态可以通过功能分析来评估，或者它可以从与参考序列的检测偏差的性质推断。在某些实施例中，ERα基因的野生型或突变型状态通过这些基因中非同义核酸变异的存在或缺乏来确定。所观察的非同义变异对应于未标注功能作用的已知常见多态现象，不促成突变型基因状态。ERα基因中意味着突变型状态的其他变异包括剪接位点变异，这些变异在前体mRNA加工成mRNA期间降低内含子/外显子接合点的识别。这可以导致外显子跳跃或在剪接mRNA中包括通常内含的序列(内含子滞留或采用隐含的剪接接合点)。这可以转而促使产生相对于正常蛋白质具有插入和/或缺失的异常蛋白质。因此，在其他实施例中，如果在内含子/外显子接合点处存在改变剪接位点识别序列的变异体，那么该基因具有突变型状态。关于ESR1，参考序列可供用于基因(基因库寄存编号：NG_008493)、mRNA(基因库寄存编号：NM_000125)以及蛋白质(基因库寄存编号：NP_000116或Swiss-Prot寄存号：P03372)。本领域普通技术人员将能够基于与野生型比较DNA或蛋白质序列来确定ESR1基因状态，即特定ESR1基因为野生型抑或突变型。应当清楚的是，关于ERα基因所披露的基因和mRNA序列是代表性序列。在正常个体中，每种基因存在两个拷贝(母本和父本拷贝)，这些拷贝将可能具有一些序列差异，此外在一个群体内将存在基因序列的许多等位基因变异体。视为野生型的其他序列包括具有以下的序列：核酸序列的一种或多种同义变化(这些变化不改变所编码的蛋白质序列)、改变蛋白质序列但不影响蛋白质功能的非同义常见多态现象(例如生殖系多态现象)以及内含子非剪接位点序列变化。存在本领域普通技术人员可获得的用以确定ERα的基因状态的许多技术。基因状态可以通过测定核酸序列来确定。这可以经由对全长基因进行直接测序或分析该基因内的特异性位点，例如一般突变位点。样品待测试基因状态的患者样品可以为从个体获得或从个体可获得的任何包含肿瘤组织或肿瘤细胞的样品。测试样品宜为从个体获得的血液样品、口腔抹片、活检体或其他体液或组织。特定实例包括：循环肿瘤细胞、血浆或血清中的循环DNA、从卵巢癌患者的腹水液分离的细胞、具有肿瘤的患者肺内的肺痰、来自乳腺癌患者的细针抽出物、尿液、外周血液、细胞刮片、毛囊、皮肤钻孔或面颊样品。应了解，测试样品同样可以为对应于测试样品中的序列的核酸序列，换句话说，样品核酸中的所有或一部分区域可以在分析之前先使用任何便利技术(例如聚合酶链反应(PCR))扩增。核酸可以为基因组DNA或者分级的或全细胞RNA。在特定实施例中，RNA为全细胞RNA且直接用作使用随机引物或polyA引物来标记一个第一链cDNA的模板。可以根据标准方法从测试样品提取该样品中的核酸或蛋白质(参见格林(Green)和萨姆布鲁克(Sambrook)编，《分子克隆实验指南》(MolecularCloning:ALaboratoryManual)，(2012，第4版，第1-3卷，ISBN9781936113422)，纽约州冷泉港的冷泉港实验室出版社(ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.))。本发明的诊断方法可以使用先前从个体或患者获取的样品进行。这些样品可以通过冷冻或固定以及嵌埋于福尔马林-石蜡或其他介质中来保存。可替代地，可以获得且使用包含新鲜肿瘤细胞的样品。可以使用来自任何肿瘤的细胞应用本发明方法。用具有化学式(I)的化合物治疗的适合肿瘤已在上文中描述。检测核酸的方法在本发明的上下文中，可以采用突变型ERα核酸的检测来选择药物治疗。因为这些基因中的突变发生在DNA层面，所以本发明方法可以基于检测基因组DNA的突变或变化，以及转录物和蛋白质本身。所希望的可以是通过分析转录物和/或多肽来确认基因组DNA突变，以便确保所检测的突变实际上在该受试者中表达。本领域普通技术人员将清楚，存在可以用于检测基因中一个或多个位置处变异体核苷酸的存在或缺乏的大量分析程序。一般来说，等位基因变异的检测需要突变辨别技术、任选的扩增反应(如基于聚合酶链反应的扩增反应)以及任选的信号产生系统。在本领域中可获得多种突变检测技术并且这些突变检测技术可以与信号产生系统组合使用，在本领域中可获得许多信号产生系统。检测等位基因变异的许多方法由诺劳(Nollau)等人，《临床化学》(Clin.Chem.)，1997,43,1114-1120；安德森SM.(AndersonSM.)《分子诊断学专家评论》(ExpertRevMolDiagn.)，2011,11,635-642；迈耶森M.(MeyersonM.)等人，《自然综述·遗传学》(NatRevGenet.)，2010,11,685-696综述；以及综述于标准教科书中，例如《突变检测的实验室方案》(“LaboratoryProtocolsforMutationDetection”)，由U.兰德格伦(U.Landegren)编，牛津大学出版社(OxfordUniversityPress)，1996和《PCR》(“PCR”)，第2版，由牛顿(Newton)和格雷安(Graham)编，拜尔斯科学出版社有限公司(BIOSScientificPublishersLimited)，1997。如上所指出，测定具有癌症的患者中存在或缺乏ERα基因的特定变化或多种变化可以按多种方式进行。此类测试通常使用从生物样品收集的DNA或RNA进行，这些生物样品例如组织活检体、尿液、大便、痰、血液、细胞、组织刮片、乳房抽出物或其他细胞物质，并且可以通过多种方法进行，这些方法包括(但不限于)PCR、与等位基因特异性探针杂交、酶突变检测、错配的化学裂解、质谱或DNA测序，包括微测序。适合的突变检测技术包括扩增阻碍突变系统(ARMSTM)、扩增阻碍突变系统线性延伸(ALEXTM)、竞争性寡核苷酸引发系统(COPS)、塔克曼(Taqman)、分子信标(MolecularBeacons)、限制性片段长度多态现象(RFLP)以及基于限制位点的PCR以及荧光共振能量转移(FRET)技术。在特定实施例中，用于测定生物标记基因内的核苷酸所用的方法是选自：等位基因特异性扩增(等位基因特异性PCR)(如扩增阻碍突变系统(ARMS))、测序、等位基因辨别分析、杂交、限制性片段长度多态现象(RFLP)或寡核苷酸连接分析(OLA)。在特定实施例中，与等位基因特异性探针杂交可以通过以下来进行：(1)溶液中结合到具有经标记样品的固相(例如玻璃、硅、尼龙膜)的等位基因特异性寡核苷酸，例如，如同在许多DNA芯片应用中；或(2)溶液中的经结合样品(通常为经克隆DNA或PCR扩增的DNA)和经标记寡核苷酸(或者等位基因特异性或者较短以便允许通过杂交来测序)。诊断测试可以涉及一组变化，通常在固体支撑物上，这使得能够同时测定一种以上变化。这些杂交探针在本领域中为熟知的(参见例如格林和萨姆布鲁克编，《分子克隆实验指南》，(2012，第4版，第1-3卷，ISBN9781936113422)，纽约州冷泉港的冷泉港实验室出版社)并且可以跨越两个或更多个变化位点。因此，在一个实施例中，检测至少一种突变的存在或缺乏使包含假定突变位点的ERα核酸与至少一种核酸探针接触。探针优先在选择性杂交条件下与包括变化位点且在该变化位点处包含互补核苷酸碱基的核酸序列杂交。杂交可以使用本领域普通技术人员已知的标记用可检测标记来检测。这些标记包括(但不限于)放射性、荧光、染料以及酶标记。在另一个实施例中，检测至少一种突变的存在或缺乏使包含假定突变位点的ERα核酸与至少一种核酸引物接触。引物优选在选择性杂交条件下与包括变化位点且在该变化位点处包含互补核苷酸碱基的核酸序列杂交。用作特异性扩增的引物的寡核苷酸可以携带与分子中间(因此扩增取决于差异性杂交；参见例如吉布斯(Gibbs)等人，1989，《核酸研究》(Nucl.AcidsRes.)，17,2437-248)或在一个引物的3'远端处的所关注的突变互补的核苷酸碱基，其中在恰当的条件下，可以防止错配或减少聚合酶延伸(参见例如普罗森纳(Prossner)，1993，《蒂布技术》(Tibtech)，11238)。在又另一个实施例中，检测至少一种突变的存在或缺乏包括对至少一种核酸序列进行测序且比较所获得的序列与已知野生型核酸序列。可替代地，至少一种突变的存在或缺乏包括质谱测定至少一种核酸序列。在一个实施例中，检测至少一种核酸变化的存在或缺乏包括进行聚合酶链反应(PCR)。使包含假设变化的目标核酸序列扩增且测定经扩增的核酸的核苷酸序列。测定经扩增的核酸的核苷酸序列包括对至少一个核酸区段进行测序。可替代地，扩增产物可以使用能够根据它们的大小分离扩增产物的任何方法来分析，包括自动化和手动凝胶电泳等。基因组核酸中的突变有利地通过基于扩增核酸片段中的活动位移的技术来检测。举例来说，陈(Chen)等人，《分析生物化学》(AnalBiochem)1996,239,61-9描述通过竞争性活动位移分析来检测单碱基突变。此外，基于马塞利诺(Marcelino)等人，《生物技术》(BioTechniques)1999,26,1134-1148的技术的分析可商购。在特定实例中，可以使用毛细管异双螺旋分析以基于毛细管系统中双螺旋核酸的活动位移来检测突变的存在作为存在错配的结果。从样品产生用于分析的核酸一般需要核酸扩增。许多扩增方法依赖于酶链反应(如聚合酶链反应、连接酶链反应或自持续序列复制)或来自已进行克隆的所有或一部分载体。优选地，根据本发明的扩增为指数扩增，如通过例如聚合酶链反应所展现。许多目标和信号扩增方法已描述于文献中，例如这些方法的总体综述描述于兰德格伦U.(Landegren,U.)等人，《科学》，1988242,229-237和路易斯R.(Lewis,R.)，《基因工程新闻》(GeneticEngineeringNews)1990,10,54-55中。这些扩增方法可以用于我们发明的方法中，并且包括聚合酶链反应(PCR)、原位PCR、连接酶扩增反应(LAR)、连接酶杂交、Qβ噬菌体复制酶、基于转录的扩增系统(TAS)、基因组扩增与转录物测序(GAWTS)、基于核酸序列的扩增(NASBA)以及原位杂交。适用于不同扩增技术的引物可以根据本领域中已知的方法制备。聚合酶链反应(PCR)PCR为核酸扩增方法，尤其描述于美国专利第4,683,195号和第4,683,202号中。PCR由DNA聚合酶产生的引物延伸反应的重复周期组成。目标DNA是热变性的且使两个寡核苷酸杂交，这两个寡核苷酸囊括待扩增的DNA相对链上的目标序列。这些寡核苷酸变成引物用于DNA聚合酶。通过引物延伸复制DNA来制造两个链的第二拷贝。通过重复热变性、引物杂交以及延伸的周期，目标DNA可以在约二到四小时内扩增一百万倍或更多。PCR为分子生物学工具，它必须与检测技术结合用于测定扩增结果。PCR的优点为它通过将目标DNA的量在约4小时内扩增一百万到十亿倍来增加敏感性。PCR可以用于在诊断背景中扩增任何已知核酸(莫(Mok)等人，《妇科肿瘤学》(GynaecologicOncology)，1994,52:247-252，)。如扩增阻碍突变系统(ARMSTM)的等位基因特异性扩增技术(牛顿等人，《核酸研究》，1989,17,2503-2516)也可以用于检测单碱基突变。在恰当的PCR扩增条件下，位于引物的3'末端的单碱基错配对完全匹配的等位基因的优先扩增来说已足够(牛顿等人，1989，前述)，允许辨别密切相关的物质。使用上述引物的扩增系统的基础是具有错配3'-残基的寡核苷酸在恰当的条件下将不充当PCR引物。这一扩增系统允许在琼脂糖凝胶电泳之后仅通过检查反应混合物来进行基因分型。扩增产物的分析可以使用能够根据它们的大小分离扩增产物的任何方法来进行，包括自动化和手动凝胶电泳、质谱等。核酸分离、扩增以及分析方法对本领域普通技术人员来说为常规的并且方案的实例可以见于例如格林和萨姆布鲁克编，《分子克隆实验指南》，(2012，第4版，第1-3卷，ISBN9781936113422)，纽约州冷泉港的冷泉港实验室出版社)。PCR扩增中所用方法的尤其有用的方案来源是《PCR(基础：从背景到实验台)》(PCR(Basics:FromBackgroundtoBench))，M.J.麦克弗森(M.J.McPherson)，S.G.梅尔乐(S.G.Mailer)，R.贝农(R.Beynon)，C.豪(C.Howe)，斯普林格出版社(SpringerVerlag)；第1版(2000年10月15日)，ISBN:0387916008。本发明还提供预测和诊断试剂盒，包括用于扩增ERα基因中的目标核酸的简并引物；以及说明书，包括扩增方案和结果分析。该试剂盒也可以可替代地包括用于进行扩增以及扩增产物的分析的缓冲剂、酶以及容器。该试剂盒也可以为包括其他工具(如DNA微阵列或其他支撑物)的筛选或诊断试剂盒的组件。优选地，该试剂盒还提供一个或多个对照模板，如从正常组织样品分离的核酸；和/或一系列代表参考基因中的不同变化的样品。在一个实施例中，该试剂盒提供两个或更多个引物对，每一对均能够扩增参考(ERα)基因的不同区域(每一区域具有可能变化位点)，由此提供用于分析生物样品在一个反应或若干平行反应中的若干基因变化的表达的试剂盒。试剂盒中的引物可以经标记(例如荧光标记)以促进检测扩增产物以及随后分析核酸的变化。该试剂盒还可以允许在一个分析中检测一种以上变化。组合试剂盒将因此包括能够扩增参考基因的不同区段的引物。这些引物可以例如使用不同的荧光标记进行差示性标记，以便在这些变化之间进行区分。在另一个方面，本发明提供一种治疗罹患癌症的患者的方法，该方法包括：确定患者的肿瘤细胞中的ERα基因的突变型或野生型状态，并且如果ERα基因是突变型，那么向该患者给予有效量的具有化学式(I)的化合物。如在此所用，术语“有效”和“有效性”包括药理学有效性和生理学安全性两者。药理学有效性是指在患者中产生所希望的生物作用的治疗能力。生理学安全性是指由所给予治疗在细胞、器官和/或生物体层面上造成的毒性程度或其他不良生理学作用(通常称为副作用)。“更不有效”意指该治疗产生治疗学上显著更低程度的药理学有效性和/或治疗学上更大程度的不良生理学作用。根据本发明的另一个方面，提供一种具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗其肿瘤细胞已经鉴别为具有突变型ERα基因的癌症患者的用途。在一个实施例中，具有化学式(I)的化合物是实例1。根据本发明的另一个方面，提供一种具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗具有已经鉴别为携带突变型ERα基因的肿瘤细胞的癌症。在一个实施例中，具有化学式(I)的化合物是实例1。根据本发明的另一个方面，提供一种治疗具有已经鉴别为携带突变型ERα基因的肿瘤细胞的癌症的方法，该方法包括给予有效量的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施例中，具有化学式(I)的化合物是实例1。在另一个实施例中，本发明涉及包括具有化学式(I)的化合物的药物组合物，它用于预防和治疗具有已经鉴别为携带突变型ERα基因的肿瘤细胞的癌症。在一个实施例中，具有化学式(I)的化合物是实例1。对于所有以上方面，所测定/鉴别的ERα的突变体形式处于基因中的所有位置处。对于所有以上方面，使用如乳腺癌的肿瘤作为一个实例，所测定/鉴别的ERα的特定突变体形式为在位置Ser463Pro、Val543Glu、Leu536Arg、Tyr537Ser、Tyr537Asn和Asp538Gly位置处者。附图简要说明图1显示实例7形式A的X射线粉末衍射图图2显示实例1形式B的X射线粉末衍射图图3显示实例1形式B的DSC热谱图。图4显示实例1形式A的X射线粉末衍射图图5显示实例1形式A的TGA热谱图图6显示实例1形式C的X射线粉末衍射图图7显示实例1形式C的TGA热谱图图8显示实例11的X射线粉末衍射图图9显示实例11的DSC迹线。图10显示实例1和AZD2014的MCF-7异种移植研究的结果。图11和12显示实例1的HCC1428长期雌激素剥夺(LTED)异种移植功效研究的结果。实例现将于下列实例中说明本发明，在这些实例中，总体上：(i)除非另行说明，否则在环境温度(即在17℃到25℃范围内)下和在如氮气的惰性气体的气氛下进行操作；(ii)通过旋转蒸发或利用Genevac设施或拜泰齐(Biotage)v10蒸发器在真空中进行蒸发且在通过过滤移除残余固体状之后进行处理程序；(iii)在自动化的TeledyneIscoRf或TeledyneIsco上使用预装的RediSepRfGoldTM硅胶柱(20-40μm，球形颗粒)、GraceResolvTM筒(二氧化硅)或Silicycle筒(40-63μm)进行快速色谱纯化。(iv)在具有UV收集的Gilson制备型HPLC仪器上进行制备色谱法；(v)在具有UV收集的吉尔森(Gilson)仪器(233注射器/级分收集器、333和334泵、155UV检测器)或用吉尔森305注射运行的瓦里安(Varian)制备星仪器(2xSD1泵、325UV检测器、701级分收集器)泵上进行手性制备色谱法；(vi)产率(当存在时)并不必需为可得到的最大值；(vii)总体来讲，具有化学式I的最终产物的结构通过核磁共振(NMR)光谱法确认；根据δ量表测量NMR化学位移值[使用BrukerAvance500(500MHz)或BrukerAvance400(400MHz)仪器测定质子磁共振光谱]；除非另外说明，否则在环境温度下进行测量；已使用以下缩写：s，单峰；d，双重峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；dd，双重峰的双重峰；ddd，双重峰的双重峰的双重峰；dt，三重峰的双重峰；bs，宽信号(viii)总体来讲，具有化学式I的最终-产物也通过液相色谱后的质谱(LCMS或UPLC)表征；UPLC是使用配备有沃特斯(Waters)SQ质谱仪(柱温40，UV＝220-300nm，质谱＝具有阳性/阴性转换的ESI)的沃特斯UPLC以1ml/min的流速，使用97％A+3％B到3％A至97％B的溶剂系统进行1.50min(连同平衡回至起始条件等的总运行时间1.70min)，其中A＝在水中的0.1％甲酸(用于酸工作)或在水中的0.1％氨(用于碱工作)B＝乙腈。对于酸分析，使用的柱是沃特斯AcquityHSST31.8μm2.1x50mm，对于碱分析，使用的柱是沃特斯AcquityBEH1.7μm2.1x50mm；LCMS是使用配备有沃特斯ZQESCi质谱仪的沃特斯AllianceHT(2795)和菲罗门(Phenomenex)Gemini-NX(50x2.1mm5m)柱，以1.1ml/min的流速、95％A到95％B进行4min，其中保持0.5min。将改性剂保持在恒定的5％C(50:50乙腈:含0.1％甲酸的水)或D(50:50乙腈:含0.1％氢氧化铵(0.88SG)的水，取决于其是酸性还是碱性方法。(ix)通常使用SCX-2(拜泰齐(Biotage)，丙磺酸官能化的二氧化硅，使用三官能硅烷制造，未封端的)筒进行离子交换纯化。(x)通过薄层色谱、质谱、HPLC(高效液相色谱)和/或NMR分析评估中间体纯度；(xi)对于实例7的XRPD分析，将样品安装在零背景硅片上并且使用PANalyticalCubiXPro衍射计进行分析。将样品旋转以改良计数统计。将数据以反射几何学以θ-2θ配置在2°到40°2θ扫描范围内进行收集，其中每0.025067°增量暴露25秒。通过在45kV和40mA下操作的铜制长细聚焦管来产生X射线。X射线粉末衍射领域的普通技术人员将认识到，峰的相对强度可以受例如大小在30微米以上的晶粒和非单一纵横比影响，这可能影响样品的分析。本领域普通技术人员也将认识到，反射位置可以受样品在衍射计中所处的确切高度和衍射计的零点校正影响。样品的表面平坦度也可能具有细微影响。因此，所呈现的衍射图数据不应视为绝对值；(xii)对于实例1的XRPD分析，通过将结晶物质样品安装在Panalytical单硅晶体(SSC)晶片支架上且借助于显微镜载片将样品展布成薄层来测定X射线粉末衍射图。使样品以每分钟30转旋转(以改良计数统计)且用由在45kV和40mA下操作的铜制长细聚焦管产生的具有1.5418埃的波长的X射线来照射。使X射线光束穿过0.04拉德索勒(soller)狭缝，然后穿过设定在20mm下的自动可变发散狭缝和最后穿过20mm光束遮罩。引导反射的辐射穿过20mm防散射狭缝和0.04拉德索勒狭缝。在θ-θ模式中从2°至40°2-θ的范围内，使样品每0.0025067°2-θ增量(连续扫描模式)暴露1.905秒。运行时间是3分36秒。该仪器装备有X-Celerator检测器。借助于用X'PertIndustry软件操作的DellPentium4HT工作站进行控制和数据撷取。(xiii)差示扫描热量测定：分析仪器：TA仪器Q1000DSC。典型地，少于5mg的物质被包含在装有盖子的标准铝盘中，将其以10℃/分钟的恒定加热速率在从25℃至300℃的温度范围内加热。以50mL/min的流速使用采用氮气的净化气体。(xiv)热解重量分析法分析仪器：TA仪器Q5000TGA。典型地，将少于10mg的物质放置在100μl铂盘上并且以10℃/分钟的恒定加热速率在从30℃至150℃的温度范围内加热。(xv)已使用以下缩写：-aq.水性CDCl3氘代-氯仿Conc.浓缩的DCM二氯甲烷DMAN，N-二甲基乙酰胺DMSO二甲基亚砜DSC差示扫描热量测定，EtOH乙醇EtOAc乙酸乙酯IPA/iPrOH异丙醇MeCN乙腈MTBE甲基叔丁基醚rt/RT室温sat.饱和sol.溶液THF四氢呋喃TFA三氟乙酸TGA热解重量分析法实例1：(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸以下这些方法应在氮气气氛下在没有光的情况下进行，可以形成为一种光降解产物[(R,E)-3-(3,5-二氟-4-(2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-4,9-二氢-3H-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-鎓-1-基)苯基)丙烯酸酯]。将(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(350g，766.69mmol)装填到5L固定容器中。将异丙醇(2.80L)添加到该容器中。一次性添加氢氧化钠(5M，460ml，2.30mol)并且将该混合物在21℃下搅拌16小时。将深色溶液通过过滤器进行筛选以去除微粒。将滤液返回到该反应容器中。将过滤器和滤液收集容器用异丙醇(700ml)洗涤并且将洗液添加到该反应容器中。搅拌反应混合物并且添加水(1.75L)。将浓盐酸(37％w/w，165ml，1.92mol)装填到该容器中。将另外的盐酸(21.5ml)添加到该容器中以调节pH在4.0与4.5之间。将溶液加热至50℃。经1小时添加水(1.92L)至该容器，维持温度在50℃-53℃之间。将夹套温度升高至70℃以在添加期间将反应温度维持在这个范围内。在完成水添加的10分钟之内，该混合物自身接种并开始结晶。将混合物在50℃-52℃下保持1.5小时(夹套组温度58℃)。将所得黄色悬浮液经6小时冷却至5℃(夹套温度)。将浆料在5℃(夹套温度)下保持11小时。通过过滤分离产生的黄色固体。将饼用抹刀涂抹以防止饼裂解。将容器用水(1.05L)洗涤。使用洗液来洗涤该饼。将饼在空气中抽干，然后经4天在真空中干燥至恒重(烘箱温度＝30℃)。因此将(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸分离为黄色结晶固体状，“形式B”(319.45g，94％)。1HNMR(500MHz,DMSO,27℃)1.05(3H,d),1.08-1.28(6H,m),2.35(1H,dd),2.58(1H,dd),2.8-2.97(2H,m),3.47-3.57(1H,m),5.22(1H,s),6.67(1H,d),6.91-7.06(2H,m),7.19(1H,d),7.41(1H,d),7.46(2H,d),7.54(1H,d),10.58(1H,s),12.62(1H,s)。用于合成实例1的替代性方法如下，其导致形式B结晶物质的形成：以下这些方法应在氮气气氛下在没有光的情况下进行，可以形成为一种光降解产物(如上所述)。将(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(50.0g；109.53mmol)在异丙醇(450ml)中搅拌。一次性添加氢氧化钠(68.34g，65.72ml，328.58mmol)并且将该混合物在20℃下搅拌16小时。将该反应混合物用水(250ml)稀释，用浓盐酸(27.28ml，317.63mmol)将pH调整到pH4并且将该混合物加热至50℃。经30分钟添加另外的水(225ml)，维持温度在45℃以上。在添加期间，该物质开始结晶。将该混合物经5小时自50℃冷却至5℃，然后将该悬浮液在0℃下保持另外的11小时。通过过滤分离黄色固体。将该滤饼用水(100ml)洗涤，在过滤器上干燥另外的20分钟，然后在真空烘箱中干燥持续16小时至恒重(30℃，空气流)，以给出呈结晶固体(形式B)的标题化合物(46.52g)。1HNMR(500MHz,DMSO,27℃)1.02-1.09(3H,m),1.17(6H,dd),2.37(1H,dd),2.59(1H,dd),2.8-2.98(2H,m),3.47-3.58(1H,m),5.24(1H,s),6.68(1H,d),6.9-7.06(2H,m),7.20(1H,d),7.38-7.51(3H,m),7.55(1H,d),10.59(1H,s),12.60(1H,br)。晶形B还可以分离自乙醇/水混合物和乙醇/MTBE混合物。在本发明的另一个方面，提供了实例1的晶形B，分离自异丙醇/水混合物。在本发明的另一个方面，提供了一种用于分离实例1的晶形B的方法，该方法包括在异丙醇和碱中水解(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯，随后从水性异丙醇中酸化和分离结晶产物。实例1形式B的特征为提供以下使用CuKα辐射所测量的2θ值中的至少一者：8.4和10.9。实例1形式B的特征为提供实质上如图2中所示的X射线粉末衍射图。在表A中示出了十个X射线粉末衍射峰值：表A实例1形式B的十个X射线粉末衍射峰实例1形式B的DSC分析显示它是具有吸热(显示在188.6℃开始熔融)的高熔融固体(图3)。实例1显示通过熔体降解可以导致熔融开始的变化，因此188.6℃的值不应视为绝对的。实例1的两个溶剂化形式也已经被观察到。形式A是甲基叔丁基醚单-溶剂化物。X射线粉末衍射图显示于图4中。在55℃-150℃之间TGA显示相关联的重量损失为14.7％w/w(图5)。对于单甲基叔丁基醚溶剂化物的理论损失被计算为16.6％。形式C是一种丙酮单-溶剂化物，该X射线粉末衍射图显示于图6中。TGA显示相关联的重量损失为10.0％w/w55℃-150℃％。(图7)。对于单丙酮溶剂化物的理论损失被计算为11.0％。用作起始物质的(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯如下制备：-2-氟-2-甲基丙基三氟甲烷磺酸酯的制备在氮气气氛下，将2-氟-2-甲基-丙-1-醇(1000g，10.86摩尔)装填到20L容器中。将DCM(8.5L)添加到该容器中。将该混合物进行搅动并且冷却至1℃。将2,6-二甲基吡啶(1395g，13.02摩尔)添加到该混合物中。经1小时添加在DCM(1L)中的三氟甲烷磺酸酐(3220g；11.41摩尔)溶液，维持该反应混合物的温度低于5℃(在添加期间，夹套组温度降至-20℃)。该添加容器是并且用DCM(0.5L)洗涤管线，将这些洗液一次性添加到容器中。将该混合物在0℃下搅动1小时，提供一种红色溶液。将浓盐酸的溶液(1.23L，37％w/w，16.3摩尔)添加到水(7L)中。将稀释的盐酸溶液添加到该红色溶液中，并且将该搅拌混合物加温至25℃。允许将这些层分离并且弃去上水层。将有机层用水(2x5L)洗涤。将有机溶液在减压下浓缩以给出一种红色油。将该红色油通过蒸馏使用刮板式薄膜蒸发器(4.5mbar，夹套温度50℃，冷凝器温度4℃)进行纯化，以提供呈浅红色油的2-氟-2-甲基丙基三氟甲烷磺酸酯(1.69Kg，69％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6,27℃)δ1.40(6H,d),4.79(2H,d)。(R)-N-(1-(1H-吲哚-3-基)丙-2-基)-2-氟-2-甲基丙-1-胺的制备在氮气气氛下，将(2R)-1-(1H-吲哚-3-基)丙-2-胺(3.81kg，21.21摩尔)添加到100L搪玻璃包夹套容器中。添加1,4-二噁烷(23L)，并且开启搅拌器。将二异丙基乙胺(5.55L；31.82摩尔)添加到经搅拌的悬浮液中，随后添加(2-氟-2-甲基-丙基)三氟甲烷磺酸酯(5.55kg，23.77摩尔)。将1,4-二噁烷(4L)添加到该容器中，并且将该混合物加热至75℃。继续加热24小时，随后冷却该混合物至25℃。将水(30.5L)添加到容器中，随后添加甲苯(30.5L)。在40分钟之后，将搅拌器关闭并且允许分离各层。去除水层并且将水(30.5L)添加到该有机溶液中。将该混合物搅动15分钟，随后允许分离各层。将水层从容器中去除。将有机溶液通过真空蒸馏(夹套温度65℃，110毫巴压力)进行浓缩直到大约27L的馏出物已被去除。将容器中剩余的溶液冷却，以提供(R)-N-(1-(1H-吲哚-3-基)丙-2-基)-2-氟-2-甲基丙-1-胺，为在甲苯(33％w/w)中的溶液(15.4Kg，97％)。1HNMR(500MHz,DMSO,27℃)0.98(3H,d),1.26(3H,d),1.30(3H,d),2.57-2.75(3H,m),2.81(1H,dd),2.84-2.92(1H,m),6.97(1H,t),7.06(1H,t),7.11-7.22(1H,被甲苯信号模糊的多重峰),7.34(1H,d),7.52(1H,d),10.80(1H,s)。{2,6-二氟-4-[(1E)-3-甲氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基]苯基}(羟基)甲烷磺酸钠的制备将2,6-二氟-4-溴苯甲醛(1000g，4.39mol)和1,1-双(二-叔丁基膦)二茂铁二氯化钯(57.2g；87.76mmol)装填到20L容器中。添加四-n-丁基氯化铵(122g，438.97mmol)，随后添加二甲基乙酰胺(5L)。将该容器用氮气流吹扫。将二异丙基乙胺(1.5L，8.78mol)添加到容器中，随后添加丙烯酸甲酯(0.435L，4.82mol)。将该混合物进行搅动并且加热至60℃。将该混合物在此温度下保持20小时。将乙酸乙酯(10L)添加到该混合物中，并且关闭加热。将水(5L)添加到该容器中。将经搅拌的混合物冷却至25℃并且继续搅拌10分钟。停止搅动并且允许分离各层。将水层去除并且丢弃。将有机层依序用盐酸(2.2M，6L)和水(5L)洗涤。将PhosphonicsSPM32清除剂(1050g，1050mol)添加到该容器中并且将该混合物在25℃下搅拌3天。将固体物质通过过滤去除。将饼用乙醇(5L)洗涤并且将合并的滤液在减压下进行浓缩以提供一种固体。将该固体溶解在乙醇(9L)中并且将该溶液在20L容器中搅拌。将溶液加热至50℃。经30分钟添加亚硫酸氢钠(460g，4.42mol)在水(2.5L)中的溶液。产生一种稠密浆料，将其在50℃下搅拌4小时。将该浆料经2小时冷却至20℃。将固体通过过滤分离，并且将容器和滤饼用MTBE(2x3L)洗涤。将所得固体在真空中干燥，以提供呈浅棕色固体状的{2,6-二氟-4-[(1E)-3-甲氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基]苯基}(羟基)甲烷磺酸钠(1035g，71％)。1HNMR(500MHz,DMSO,27℃)δ3.73(3H,s),5.32(1H,d),5.94(1H,d),6.76(1H,d),7.40(2H,d),7.60(1H,d)。(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-甲酰基苯基)丙烯酸酯的制备在氮气气氛下，将{2,6-二氟-4-[(1E)-3-甲氧基-3-氧代丙-1-烯-1-基]苯基}(羟基)甲烷磺酸钠(1.211kg，3.52mol)添加到100L容器中，随后添加碳酸钾(0.974kg，7.05mol)。添加水(9.1L)并且启动搅拌器。添加乙酸乙酯(9.1L)。将该混合物在25℃下搅动5小时。停止搅拌器并且允许该混合物在25℃下静置14小时。将下层水相去除并且丢弃。将上层有机相在减压下浓缩，以提供一种浅棕色固体。将固体在真空中干燥以提供呈棕色固体状的(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-甲酰基苯基)丙烯酸酯(608g，76％)。1HNMR(500MHz,DMSO,27℃)δ3.77(3H,s),6.94(1H,d),7.66(1H,d),7.71(2H,d),10.20(1H,s)。(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯的制备在氮气气氛下，将(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-甲酰基苯基)丙烯酸酯(0.606kg，2.65mol)和(R)-N-(1-(1H-吲哚-3-基)丙-2-基)-2-氟-2-甲基丙-1-胺(在甲苯中的33％w/w溶液，2.0kg，2.65mol)装填到20L容器中，随后添加甲苯(4.22L)。将乙酸(304ml，5.31mol)添加到该容器中。将该混合物进行搅动并且加热至80℃。将该混合物在80℃下搅动过夜，然后冷却至20℃。将碳酸钾(0.916kg，6.63mol)在水(3.3L)中的溶液添加到该混合物中。将该混合物搅拌10分钟，然后将搅拌器关闭并且允许分离各层。将水层去除并且丢弃。将水(3.3L)装填到该反应器中。将该混合物搅拌10分钟，然后允许静置10分钟。将下层水相去除，并且允许将有机层在室温下静置过夜。将该批加热至80℃。经35分钟将庚烷(4.61L)添加到该热溶液中。将经搅拌的混合物在约80℃下保持1小时。将该混合物经2小时冷却至30℃，在该时间期间该产物结晶。将该浆料在30℃下搅拌2.5小时。将固体通过过滤分离。将反应器容器壁用庚烷洗涤并且使用洗液来洗涤该滤饼。将该固体在真空中干燥，以提供呈粉色固体状的(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(0.763kg，61％)。1HNMR(400MHz,DMSO,27℃)δ1.06(3H,d),1.13(3H,d),1.21(3H,d),2.35(1H,dd),2.58(1H,dd),2.8-2.98(2H,m),3.44-3.61(1H,m),3.74(3H,s),5.24(1H,s),6.80(1H,d),6.9-7.05(2H,m),7.19(1H,d),7.41(1H,d),7.50(2H,d),7.63(1H,d),10.58(1H,s)。m/z:ES+[M+H]+457。实例1的替代性制备：(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸将7.5M氢氧化钠(32.9ml，247.10mmol)添加到(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(11.28g，24.71mmol)在THF(143ml)和甲醇(71.4ml)中的溶液里。将该反应在室温下搅拌4h。通过添加2NHCl将该水层的pH调整到约6.5，然后将该溶液用二乙醚(3x150ml)进行萃取。将合并的有机物经Na2SO4干燥，并浓缩。将粗产物通过快速二氧化硅色谱，在DCM中的0％到20％甲醇的洗脱梯度进行纯化，其提供一种黄色固体。由于比预期更高的溶解度，试图与丙酮/庚烷研磨失败了。将溶剂去除以给出一种黄色固体，将该固体在异己烷(50ml)中与几滴二乙醚进行研磨，将所得固体过滤出并且干燥，以给出呈黄色粉末的粗产物(11.14g)。在氮气下和在黑暗中，将该固体溶解在乙醇(100ml)中。然后使用真空泵在62℃下在黑暗中将该溶液蒸发至5毫巴。将此程序重复两次并且将所得黄色玻璃状物用抹刀刮成精细粉末并且使用真空泵在62℃下经受5毫巴持续60min，以提供一种黄色粉末。然后将该粉末留在真空烘箱中经P2O5在62℃在300毫巴下过夜，以提供呈浅黄色固体状的标题产物(9.77g，89％)。1HNMR(400MHz,DMSO,27℃)δ1.07-1.16(3H,m),1.18-1.29(6H,m),2.39(1H,dd),2.62(1H,dd),2.92(2H,dd),3.56(1H,d),5.26(1H,s),6.70(1H,d),7.02(2H,dd),7.22(1H,d),7.47(3H,dd),7.58(1H,d),10.60(1H,s),12.60(1H,s)。m/z:ES+(电喷射+)[M+H]+443。用作起始物质的(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯如下制备：-2-氟-2-甲基丙-1-醇的制备在0℃下，将氢化铝锂(3.37g，88.56mmol)经15min逐份添加到2-氟-2-甲基丙酸乙酯(9.9g，73.80mmol)在二乙醚(184ml)中的经冷却溶液里。将该反应搅拌1hr，然后依序地添加水(3.3ml)，随后是15％NaOH溶液(3.3ml)和水(6.7ml)。将该悬浮液搅拌15min，然后过滤并且将这些固体用二乙醚洗涤。将滤液进行蒸发，以给出呈无色油的2-氟-2-甲基丙-1-醇(5.90g，87％)。1HNMR(400MHz,CDCl3,27℃)δ1.37(6H,d),3.56(2H,d),OH未观察到。2-氟-2-甲基丙基三氟甲烷磺酸酯的替代性制备在-10℃下，将三氟甲烷磺酸酐(12.06ml，71.24mmol)、随后是2,6-二甲基吡啶(11.42ml，81.42mmol)添加到2-氟-2-甲基丙-1-醇(6.25g，67.85mmol)在DCM(146ml)中的溶液里。将该反应搅拌1hr，然后用2NHcl(2x100ml)和饱和NaHCO3溶液(2x100ml)洗涤。然后将有机相经Na2SO4干燥，并且浓缩，以给出呈红色油的2-氟-2-甲基丙基三氟甲烷磺酸酯(12.89g，85％)。1HNMR(400MHz,CDCl3,27℃)δ1.46(6H,d),4.41(2H,d)。可以将此中间体通过真空蒸馏纯化。通过DSC的分析显示该物质具有自我加热的潜力。由于方法安全性的原因，一种刮板式薄膜蒸发器或类似物对分批蒸馏可以是优选的。(R)-N-(1-(1H-吲哚-3-基)丙-2-基)-2-氟-2-甲基丙-1-胺的替代性制备将2-氟-2-甲基丙基三氟甲烷磺酸酯(8.04g，35.87mmol)添加到(R)-1-(1H-吲哚-3-基)丙-2-胺(5.00g，28.70mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(7.44ml，43.04mmol)在二噁烷(50ml)中的溶液里。将该反应加热至90℃，持续3h。在冷却至室温之后，将该反应用EtOAc(200mL)稀释并且用饱和NaHCO3溶液(2x100ml)洗涤。将水相用EtOAc(150ml)萃取，然后将合并的有机物经MgSO4干燥并且浓缩。将该粗产物通过快速二氧化硅色谱，100％EtOAc的洗脱梯度来纯化。将纯的级分蒸发至干燥，以给出呈棕色油的(R)-N-(1-(1H-吲哚-3-基)丙-2-基)-2-氟-2-甲基丙-1-胺(6.49g，91％)。1HNMR(400MHz,CDCl3,27℃)δ1.14(3H,d),1.31(3H,d),1.37(3H,d),1.94(1H,s),2.63-2.87(3H,m),2.92(1H,dd),3.07(1H,h),7.07(1H,d),7.08-7.15(1H,m),7.16-7.24(1H,m),7.37(1H,d),7.62(1H,d),8.04(1H,s)。m/z:ES+[M+H]+249(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-甲酰基苯基)丙烯酸酯的替代性制备将4-溴-2,6-二氟苯甲醛(9.99g，45.20mmol)和丙烯酸甲酯(6.14ml，67.81mmol)吸收在经充分脱气的DMA(100ml)中，并且添加三-o-甲苯基膦(1.376g，4.52mmol)、乙酸钯(II)(0.507g，2.26mmol)和三乙胺(12.60ml，90.41mmol)。将该反应搅拌并且加热至80℃持续6小时。将该反应混合物冷却并且通过硅藻土层过滤，并且用甲醇(50ml)洗涤。将粗产物预吸附到二氧化硅上并且通过抽吸色谱法用0-10％二乙醚/二氯甲烷洗脱进行纯化。将包含所希望产物的级分进行蒸发并且与二乙醚(50ml)研磨，以提供一种黄色固体，将该固体与水(50ml)研磨并且在高真空下在50℃干燥，以提呈供黄色固体状的(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-甲酰基苯基)丙烯酸酯(8.85g，87％)。1HNMR(400MHz,DMSO,27℃)δ3.75(3H,s),6.93(1H,d),7.52-7.81(3H,m),10.18(1H,s)。无质量离子在LCMS中观察到。(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯的替代性制备将(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-甲酰基苯基)丙烯酸酯(6.58g，29.09mmol)添加到(R)-N-(1-(1H-吲哚-3-基)丙-2-基)-2-氟-2-甲基丙-1-胺(6.02g，24.24mmol)在甲苯(51.1ml)和乙酸(2.78ml，48.48mmol)中的悬浮液里。将该反应加热至80℃，持续5小时。将该反应混合物通过离子交换层析使用SCX-2柱进行纯化。将所希望的产物使用7MNH3/甲醇从柱中洗脱并且将纯的级分蒸发至干燥，以提供一种棕色固体。将该粗产物通过快速二氧化硅色谱，在庚烷中的0％到30％EtOAc的洗脱梯度来纯化。将纯的级分蒸发至干燥，以提供呈黄色固体状的标题产物(7.52g，68.0％)。1HNMR(400MHz,DMSO,100℃)δ1.10(3H,d),1.12-1.31(6H,m),2.28-2.72(2H,m),2.84-3.09(2H,m),3.52-3.69(1H,m),3.76(3H,s),5.30(1H,s),6.64(1H,d),6.9-7.11(2H,m),7.21(1H,d),7.32(2H,d),7.42(1H,d),7.58(1H,d),10.14(1H,s)。m/z：ES+[M+H]+457实例2：(E)-3-(4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸将7.5M氢氧化钠溶液(0.983ml，7.37mmol)添加到(E)-甲基3-(4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(310mg，0.74mmol)在甲醇(5ml)中的溶液里。于20℃下搅拌混合物2小时。将该反应混合物通过离子交换层析使用SCX-2柱进行纯化。将包含所希望的产物的级分使用7MNH3/甲醇从柱中洗脱并且将纯的级分蒸发至干燥，以提供一种黄色固体。将粗产物使用水(包含0.1％甲酸)与MeCN的极性递减混合物作为洗脱剂，通过制备型HPLC(沃特斯SunFire柱，5μ二氧化硅，50mm直径，100mm长度)来纯化。将包含所希望的化合物的级分蒸发至干燥并且然后加载到SCX-2柱上，并且用在甲醇中的7N氨进行洗脱，以提供呈黄色固体状的标题产物(63.0mg，21.02％)。1HNMR(400MHz,DMSO,30℃)δ1.06(3H,d),1.30(3H,d),1.47(3H,d),2.53-2.64(2H,m),2.79(2H,s),3.10(1H,d),5.08(1H,s),6.47(1H,d),6.98(1H,t),7.06(1H,t),7.19-7.37(3H,m),7.44(1H,d),7.56(1H,d),7.63(2H,d),10.81(1H,s),12.30(1H,s)。m/z：ES+[M+H]+407。用作起始物质的(E)-甲基3-(4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯如下制备：-(E)-甲基3-(4-甲酰基苯基)丙烯酸酯的制备将4-溴苯甲醛(30g，162.15mmol)和丙烯酸甲酯(20.94g，243.22mmol)吸收在经充分脱气的DMA(300ml)中，并且用三-o-甲苯基膦(4.94g，16.21mmol)、乙酸钯(II)(1.820g，8.11mmol)和三乙胺(45.2ml，324.29mmol)进行处理并且加热至110℃持续16小时。在此时间之后，反应显示完全。将该反应混合物倾倒入水(4L)中并且将所得沉淀过滤并干燥。将该固体在二氧化硅上，用100％庚烷到在庚烷中的30％EtOAc洗脱来色谱分离。将相关的级分合并并且蒸发至干燥，以给出一种黄色固体状产物，将该产物与庚烷研磨，过滤并且用冷庚烷洗涤。将该固体干燥以提供呈黄色结晶产物的(E)-甲基3-(4-甲酰基苯基)丙烯酸酯(25.6g，83％)。1HNMR(400MHz,DMSO,30℃)δ3.75(3H,s),6.79(1H,d),7.72(1H,d),7.93(4H,s),10.03(1H,s)。无质量离子在LCMS中观察到。(E)-甲基3-(4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯的制备将(R)-N-(1-(1H-吲哚-3-基)丙-2-基)-2-氟-2-甲基丙-1-胺(如实例1起始物质的制备中所述获得的)(450mg，1.81mmol)和(E)-甲基3-(4-甲酰基苯基)丙烯酸酯(345mg，1.81mmol)溶解在甲苯(15ml)中，添加乙酸(5m)和分子筛。将该反应在110℃在氮气下搅拌16小时，然后冷却至室温。将该粗产物通过离子交换层析使用SCX-2柱进行纯化。将所希望的产物使用7MNH3/甲醇从柱中洗脱并且将纯的级分蒸发至干燥，以提供粗产物。将该粗产物通过快速二氧化硅色谱，在庚烷中的0％到30％EtOAc的洗脱梯度来纯化。将纯的级分蒸发至干燥，以提供呈黄色固体状的(E)-甲基3-(4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(317mg，41.6％)。1HNMR(400MHz,CDCl3,30℃)δ1.09(3H,d),1.30(3H,d),1.47(3H,d),2.48-2.78(4H,m),3.30(1H,m),3.79(3H,s),5.09(1H,s),6.40(1H,d),7.12(1H,td),7.17(1H,td),7.29(1H,d),7.34(2H,d),7.43(2H,d),7.54(1H,d),7.66(2H,m)。m/z：ES+[M+H]+421。实例3:(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸将2M氢氧化钠(3.0ml，6.00mmol)添加到(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(275mg，0.60mmol)在THF(1.5ml)/甲醇(1.5ml)中的溶液里。将该反应在室温下搅拌3h。添加EtOAc(15ml)和水(15ml)，然后通过添加2NHCl将该水层的pH调整到约7。分离各层并且将水层用EtOAc(15ml)萃取。将合并的有机物经Na2SO4干燥，并浓缩。将该粗产物通过快速二氧化硅色谱，在DCM中的0％到10％甲醇的洗脱梯度来纯化。将纯的级分蒸发至干燥，以提供呈浅黄色固体状的标题产物(250mg，94％)。1HNMR(400MHz,DMSO,30℃)δ0.77(3H,d),1.06(3H,d),1.93(1H,m),2.18(1H,dd),2.58(1H,dd),2.65(1H,dd),2.84(1H,dd),3.35(1H,dd),4.32(1H,d),4.44(1H,d),5.16(1H,s),6.67(1H,d),6.93-7.04(2H,m),7.21(1H,d),7.42(1H,d),7.46(2H,m),7.54(1H,d),10.57(1H,s),12.51(1H,s)。m/z：ES+[M+H]+443。用作起始物质的(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯如下制备：-(S)-3-氟-2-甲基丙-1-醇的制备将N,N-二乙基-1,1,2,3,3,3-六氟丙-1-胺(18.25ml，100.57mmol)逐滴添加到(R)-甲基3-羟基-2-甲基丙酸酯(9.25ml，83.81mmol)在DCM(77ml)中的溶液里(反应加温到约40℃)。将该反应在环境温度下搅拌1h，然后加温至回流持续4h，随后冷却至室温过夜。将该反应混合物倾倒入冰上，并且分离各层。将水层用DCM(2x150ml)萃取，然后将合并的有机物干燥并且小心地浓缩。将残余物溶解在THF(200ml)中并且在冰浴中冷却。经15min逐份添加氢化铝锂(6.45g，167.61mmol)。将该反应在0℃下搅拌1h并且加温至室温持续另外的1h。在冰浴中冷却后，将该反应通过加入水(7ml)，随后是15％NaOH(7ml)，并且最后是水(21ml)进行淬灭。添加MgSO4直至形成一种颗粒固体。将该固体通过硅藻土过滤并且将这些固体用二乙醚(50ml)洗涤。将滤液用2NHcl(2x100ml)洗涤，然后将有机相经Na2SO4干燥并且浓缩。将该粗产物通过快速二氧化硅色谱，在DCM中的0％到10％EtOAc的洗脱梯度来纯化。将纯的级分蒸发至干燥，以提供呈稻草色油的(S)-3-氟-2-甲基丙-1-醇(6.42g，83％)。1HNMR(400MHz,CDCl3,30℃)δ0.97(3H,dd),1.96-2.14(1H,m),3.64(2H,d),4.3-4.42(1H,m),4.42-4.54(1H,m),OH未观察到。(S)-3-氟-2-甲基丙基三氟甲烷磺酸酯的制备在0℃下，向(S)-3-氟-2-甲基丙-1-醇(7.9g，85.77mmol)在DCM(140ml)中的经搅拌溶液里逐滴添加三氟甲烷磺酸酐(17.31ml，102.92mmol)，随后逐滴添加2,6-二甲基吡啶(11.95ml，102.92mmol)。将该反应混合物在0℃下搅拌45min，并且在室温下搅拌30min。将该反应混合物用DCM(60ml)稀释，并且依序用1MHCl(3x100ml)、饱和碳酸氢钠溶液(100ml)和饱和盐水(50ml)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并且浓缩至接近干燥。将该溶液通过二氧化硅塞过滤并且通过用DCM(50ml)洗涤并且蒸发，以给出呈棕色油的(S)-3-氟-2-甲基丙基三氟甲烷磺酸酯(14.38g，74.8％)。1HNMR(400MHz,CDCl3,27℃)δ1.09(3H,dd),2.24-2.44(1H,m),4.30(0.5H,dd),4.37-4.46(1H,m),4.52(2.5H,tt)。(S)-N-((R)-1-(1H-吲哚-3-基)丙-2-基)-3-氟-2-甲基丙-1-胺的制备将(S)-3-氟-2-甲基丙基三氟甲烷磺酸酯(666mg，2.97mmol)添加到(R)-1-(1H-吲哚-3-基)丙-2-胺(470mg，2.7mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(0.700ml，4.05mmol)在1,4-二噁烷(6.05ml)中的溶液里。将该反应在室温下搅拌1h。将该反应混合物用EtOAc(20ml)稀释并用水(20ml)洗涤。将水层用EtOAc(2x20ml)萃取，然后将合并的有机物干燥(MgSO4)并且浓缩。将该粗产物通过快速二氧化硅色谱，在DCM中的0％到10％甲醇的洗脱梯度来纯化。将纯的级分蒸发至干燥，以给出呈棕色油的(S)-N-((R)-1-(1H-吲哚-3-基)丙-2-基)-3-氟-2-甲基丙-1-胺(590mg，88％)。1HNMR(400MHz,CDCl3,30℃)δ0.86(3H,dd),1.20(3H,d),1.94-2.11(1H,m),2.64-2.74(2H,m),2.85-2.98(2H,m),3.05-3.15(1H,m),4.13-4.39(2H,m),7.09(1H,d),7.12(2H,ddd),7.20(1H,ddd),7.33-7.41(1H,m),7.56-7.65(1H,m),8.10(1H,s)。m/z：ES+[M+H]+249(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯的制备将乙酸(2.0ml)添加到(S)-N-((R)-1-(1H-吲哚-3-基)丙-2-基)-3-氟-2-甲基丙-1-胺(273mg，1.10mmol)和(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-甲酰基苯基)丙烯酸酯(如实例1起始物质的制备中所述获得的)(226mg，1mmol)在甲苯(8.0ml)中的溶液里。将该反应加温至95℃持续2.5h。将挥发物在真空下去除，然后将残余物穿过SCX-2柱。然后将该柱用7MNH3/甲醇洗脱以释放产物。将滤液浓缩，并且将该粗产物通过快速二氧化硅色谱，在DCM中的0％到10％甲醇的洗脱梯度来纯化。将纯的级分蒸发至干燥，以提供呈浅黄色固体状的(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(282mg，61.8％)。1HNMR(400MHz,CDCl3,30℃)δ0.82(3H,d),1.12(3H,d),1.81-1.99(1H,m),2.24(1H,ddd),2.64(1H,ddd),2.71(1H,dd),2.93-3.01(1H,ddd),3.42(1H,dq),3.81(3H,s),4.25-4.39(1H,m),4.38-4.53(1H,m),5.20(1H,s),6.39(1H,d),6.99(2H,m),7.06-7.16(2H,m),7.21-7.25(1H,m),7.52(3H,m)。m/z：ES+[M+H]+457。实例4：(E)-3-(4-((1R,3R)-2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸将7.5M氢氧化钠溶液(0.904ml，6.78mmol)添加到(E)-甲基3-(4-((1R,3R)-2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(285mg，0.68mmol)在甲醇(3ml)中的溶液里。于20℃下搅拌混合物2小时。将该反应混合物通过离子交换层析使用SCX-2柱进行纯化。将包含所希望的产物的级分使用7MNH3/甲醇从柱中洗脱并且将纯的级分蒸发至干燥，以提供一种黄色固体。将粗产物通过制备型LCMS(菲罗门Gemini-NXaxia制备型C18OBD柱，5μ二氧化硅，50mm直径，100mm长度)，使用水(包含1％NH3)与MeCN的极性递减混合物作为洗脱剂来纯化。将包含所希望的化合物的级分蒸发至干燥，以提供呈黄色固体状的标题化合物(80mg，29.0％)。1HNMR(500MHz,DMSO,33℃)δ0.87(3H,d),1.04(3H,d),1.91-2.27(2H,m),2.50(1H,p),2.57-2.75(2H,m),3.13(1H,s),4.51(2H,dd),4.86(1H,s),6.47(1H,d),6.92-6.99(1H,m),7-7.09(1H,m),7.15-7.35(3H,m),7.35-7.5(2H,m),7.57(2H,d),10.64(1H,d),CO2H未观察到。m/z：ES+[M+H]+407。用作起始物质的(E)-甲基3-(4-((1R,3R)-2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯如下制备：-(E)-甲基3-(4-((1S,3R)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯的制备在23℃在氮气下，将(E)-甲基3-(4-甲酰基苯基)丙烯酸酯(如实例2起始物质的制备中所述获得的)(18.56g，97.57mmol)添加到(R)-1-(1H-吲哚-3-基)丙-2-胺(17g，97.57mmol)在乙酸(250ml)中的经搅拌溶液里。将所得溶液在80℃下搅拌2小时。将该反应混合物蒸发至干燥并且再溶解在DCM(500ml)中，并且依序地用饱和NaHCO3(300mlx2)、2MNaOH(aq)(300ml)、水(300ml)和饱和盐水(300ml)洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发以提供粗产物。将该粗产物通过快速二氧化硅色谱，在DCM中的1％到7％甲醇的洗脱梯度来纯化。将纯的级分蒸发至干燥，以提供呈米色泡沫的(E)-甲基3-(4-((1S,3R)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(25.1g，74.3％)。该产物大部分是顺式异构体，包含约12％不可分的反式异构体。1HNMR(400MHz,DMSO,30℃)δ1.25(3H,d),2.37-2.48(1H,m),2.74(1H,d),3.12(1H,s),3.73(3H,s),5.18(1H,s),6.64(1H,d),6.97(2H,dd),7.19(1H,d),7.36-7.46(3H,m),7.64-7.75(3H,m),10.19(1H,s),没有NH观察到。m/z：ES+[M+H]+347。(E)-甲基3-(4-((1S,3R)-2-烯丙基-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯的制备将(E)-甲基3-(4-((1S,3R)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(35g，101.03mmol)、3-溴丙-1-烯(9.62ml，111.14mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(19.36ml，111.14mmol)悬浮在乙腈(160ml)中，将氮气鼓泡通过5min并且然后将该混合物密封到微波管中。将该反应溶液在微波反应器中加热至140℃持续3.5小时并且冷却至室温。将该反应混合物蒸发至干燥并且再溶解在DCM(100ml)中，并且依序地用1M柠檬酸(100ml)、水(100ml)和饱和盐水(100ml)洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发以提供粗产物。将该粗产物通过快速二氧化硅色谱，在庚烷中的0％到20％EtOAc的洗脱梯度来纯化。将纯的级分蒸发至干燥，以提供呈浅黄色固体状的(E)-甲基3-(4-((1R,3R)-2-烯丙基-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯:(E)-甲基3-(4-((1S,3R)-2-烯丙基-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯的50:50混合物(10.00g，25.6％)。m/z：ES+[M+H]+387。(E)-甲基3-(4-((1R,3R)-2-烯丙基-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯的制备在20℃在氮气下，将三氟乙酸(5.59ml，75.29mmol)添加到在DCM(100ml)中的(E)-甲基3-(4-((1S,3R)-2-烯丙基-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(9.7g，25.10mmol)。将所得溶液在20℃下搅拌3天。将该反应混合物谨慎地用饱和NaHCO3溶液(250ml)稀释，并且将DCM层依序地用水(250ml)及饱和盐水(250ml)洗涤。将有机层经MgSO4干燥，过滤并蒸发以提供粗产物。将该粗产物通过快速二氧化硅色谱，在庚烷中的10％到20％EtOAc的洗脱梯度来纯化。将级分蒸发至干燥，以提供呈浅黄色固体状的(E)-甲基3-(4-((1R,3R)-2-烯丙基-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯:(E)-甲基3-(4-((1S,3R)-2-烯丙基-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯的65:35混合物(7.99g，82％)。m/z：ES+[M+H]+387(E)-甲基3-(4-((1R,3R)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯的制备将7个单独批次的65:35(E)-甲基3-(4-((1R,3R)-2-烯丙基-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯:(E)-甲基3-(4-((1S,3R)-2-烯丙基-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(2.00g，5.17mmol)如下反应。将(E)-甲基3-(4-((1R,3R)-2-烯丙基-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(2.00g，5.17mmol)和氯三(三苯膦)铑(I)(威尔金森催化剂)(2.346g，2.54mmol)悬浮在乙腈(12ml)和水(2.4ml)中并且氮气鼓泡通过持续5分钟，随后密封到微波管中。将该反应在微波反应器中加热至100℃持续60min并且冷却至室温。将反应混合物合并并且蒸发至干燥，并且再溶解在DCM(200ml)中，并且添加饱和NaHCO3溶液(200ml)。将有机层依序地用水(200ml)和饱和盐水(200ml)洗涤，随后经MgSO4干燥，过滤并且蒸发，以提供粗产物。将该粗产物通过快速二氧化硅色谱，在DCM中的0％到5％甲醇的洗脱梯度来纯化。将纯的级分蒸发至干燥，以提供呈浅黄色固体状的(E)-甲基3-(4-((1R,3R)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(7.02g，55.9％)。1HNMR(400MHz,DMSO,30℃)δ1.14(3H,d),2.27-2.4(1H,m),2.81(1H,dd),2.94-3.05(1H,m),3.72(3H,s),5.19(1H,s),6.60(1H,d),6.94-7(1H,m),7.01-7.09(1H,m),7.26(3H,d),7.43(1H,d),7.59-7.68(3H,m),10.70(1H,s),NH未观察到。m/z：ES+[M+H]+347(E)-甲基3-(4-((1R,3R)-2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯的制备将(S)-3-氟-2-甲基丙基三氟甲烷磺酸酯(如实例3起始物质的制备中所述获得的)(291mg，1.30mmol)添加到(E)-甲基3-(4-((1R,3R)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(300mg，0.87mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.226ml，1.30mmol)在1,4-二噁烷(5ml)的溶液里。将该混合物在90℃下搅拌1小时，然后将该混合物蒸发至干燥并且将残余物在DCM(30ml)与水(30ml)之间分段。将该水层用DCM(30ml)萃取并且将这些萃取物与有机层合并。将合并的萃取物通过相分离纸进行过滤并蒸发。将残余物通过快速二氧化硅色谱，在庚烷中的15％EtOAc的洗脱溶剂来纯化。将纯的级分蒸发至干燥，以提供呈灰白色固体状的(E)-甲基3-(4-((1R,3R)-2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(314mg，86％)。1HNMR(400MHz,DMSO,30℃)δ0.87(3H,d),1.06(3H,d),1.9-2.28(2H,m),2.55-2.8(3H,m),2.97-3.21(1H,m),3.72(3H,s),4.31-4.69(2H,m),4.88(1H,s),6.60(1H,dd),6.98(1H,t),7.04(1H,t),7.17-7.35(3H,m),7.44(1H,d),7.55-7.76(3H,m),10.65(1H,s)。m/z：ES+[M+H]+421。实例5：(E)-3-(3,5-二氟-4-(2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸(异构体1)*将氢氧化钠(184mg，4.61mmol)添加到在THF(1ml)/甲醇(1ml)中的(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-(2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(异构体1)(217mg，0.46mmol)里。将所得溶液在20℃下搅拌16小时。将该反应用水(10ml)稀释并且通过添加2NHCl将该pH调整至7。将该溶液用EtOAc(2x20ml)萃取。将合并的有机物经Na2SO4干燥，并浓缩。将该粗产物通过快速二氧化硅色谱，在庚烷中的0％到50％EtOAc的洗脱梯度来纯化。将纯的级分进行蒸发以给出一种粗物质。将该粗产物使用二乙醚/异己烷混合物进行研磨，以给出呈黄色固体状的标题产物(53.0mg，25.2％)。1HNMR(400MHz,DMSO,27℃)δ0.54(3H,d),1.06(3H,s),1.34(3H,s),2.14(1H,dd),2.66(1H,d),2.83(1H,d),3.03(1H,dd),4.21(1H,t),4.33(1H,t),5.12(1H,s),6.73(1H,d),7.01(2H,dtd),7.14-7.28(1H,m),7.43(1H,d),7.54(2H,s),7.59(1H,d),10.50(1H,s),12.61(1H,s),CO2H未观察到。m/z：ES+[M+H]+457*通过与其它实例类比，在未定义的中心推断是(R)的立体化学，即推断为以下的化合物：(E)-3-(3,5-二氟-4-(1R)-(2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸用作起始物质的3-(3,5-二氟-4-(2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(异构体1)如下制备：-(E)-甲基3-(4-(3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)-3,5-二氟苯基)丙烯酸酯的制备将1-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基丙-2-胺(807mg，4.29mmol)和(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-甲酰基苯基)丙烯酸酯(如实例1起始物质的制备中所述获得的)(970mg，4.29mmol)在乙酸(15ml)中合并，并且将该混合物加热至80℃持续2小时。将该反应混合物通过离子交换层析使用SCX-2柱进行纯化。将所希望的产物使用在甲醇中的2MNH3从该柱中洗脱，并且将包含产物的级分蒸发至干燥，以给出呈黄色泡沫的(E)-甲基3-(4-(3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)-3,5-二氟苯基)丙烯酸酯(1610mg，95％)。1HNMR(500MHz,DMSO,20℃)δ1.15(3H,s),1.27(3H,s),2.23(1H,s),2.61(2H,s),3.75(3H,s),5.46(1H,s),6.84(1H,d),6.97(2H,dtd),7.18(1H,d),7.39(1H,d),7.58(2H,s),7.67(1H,d),10.60(1H,s)。m/z：ES-[M+H]-395(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-(2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(异构体1)的制备将(S)-3-氟-2-甲基丙基三氟甲烷磺酸酯(如实例3起始物质的制备中所述获得的)(0.339g，1.51mmol)添加到(E)-甲基3-(4-(3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)-3,5-二氟苯基)丙烯酸酯(0.3g，0.76mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(0.458ml，2.65mmol)在1,4-二噁烷(2ml)中的溶液里。持续搅拌24小时，然后将挥发物在真空下去除并且将该粗产物通过快速二氧化硅色谱，在庚烷中的0％到25％EtOAc的洗脱梯度进行纯化。将纯的级分蒸发至干燥，以提供呈白色固体状的(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-(2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(0.202g，36％)。将该物质与另一个批次(0.36g)合并，并且通过制备型HPLC(ChiralpakIa柱，20μm二氧化硅，20mm直径，250mm长度)、以80ml/min(4次注射)的庚烷：IPA70:30进行纯化。将包含所希望化合物的级分进行蒸发，以产生(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-(2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(异构体1，第一次洗脱的，217mg)和(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-(2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(异构体2，第二次洗脱的，165mg)。在ChiralpakIa柱(5μm二氧化硅、4.6mm直径、50mm长度)上，以2ml/min的庚烷：IPA70:30进行分析。1HNMR(400MHz,DMSO,30℃)δ0.50(3H,d),1.02(3H,s),1.30(3H,s),2.11(1H,dd),2.62(2H,d),2.80(1H,d),2.99(1H,dd),3.74(3H,s),4.09-4.23(1H,m),4.29(1H,d),5.09(1H,s),6.81(1H,d),6.97(2H,dt),7.16(1H,d),7.39(1H,d),7.53(2H,d),7.64(1H,d),10.44(1H,s)。m/z：ES+[M+H]+471。实例6：(E)-3-(3,5-二氟-4-(2-(2-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸(异构体1)*将2M氢氧化钠(1.6ml，3.20mmol)添加到(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-(2-(2-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(异构体1)(148mg，0.31mmol)在THF(0.8ml)/甲醇(0.8ml)中的溶液里。将该反应在室温下搅拌3h。添加EtOAc(15ml)和水(15ml)，并且通过添加2NHCl将该水层的pH调整到约7。分离各层，并且将水层用EtOAc(15ml)萃取。将合并的有机物经Na2SO4干燥，并浓缩。将该粗产物通过快速二氧化硅色谱，在庚烷中的25％到100％EtOAc的洗脱梯度来纯化。将纯的级分蒸发至干燥，以提供呈浅黄色固体状的标题产物(异构体1)(124mg，86％)。1HNMR(400MHz,CDCl3,30℃)δ1.03(3H,d),1.08(3H,s),1.16(3H,d),1.35(3H,s),2.56(1H,dd),2.66(1H,d),3.02(1H,d),3.17(1H,dd),5.24(1H,s),6.39(1H,d),7.00(2H,d),7.05-7.16(2H,m),7.20(1H,dd),7.28(1H,s),7.49(1H,dd),7.61(1H,d),CO2H未观察到。m/z：ES+[M+H]+457。*通过与其他实例类比，在未定义的中心推断是(R)的立体化学。用作起始物质的(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-(2-(2-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(异构体1)如下制备：-(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-(2-(2-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(异构体1)的制备将2-氟-2-甲基丙基三氟甲烷磺酸酯(如实例1起始物质的制备中所述获得的)(679mg，3.03mmol)添加到(E)-甲基3-(4-(3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)-3,5-二氟苯基)丙烯酸酯(如实例5起始物质的制备中所述获得的)(600mg，1.51mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(0.915ml，5.30mmol)在1,4-二噁烷(2.5ml)中的溶液里。将该反应在室温下搅拌1h。然后将该反应加热至105℃，持续88小时。将挥发物在真空下去除并且将该粗产物通过快速二氧化硅色谱，在庚烷中的0％到50％EtOAc的洗脱梯度进行纯化。将纯的级分蒸发至干燥，以提供呈白色固体状的(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-(2-(2-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(430mg，60.4％)。将该外消旋产物通过制备型HPLC(ChiralpakAD柱、20μm二氧化硅，50mm直径，250mm长度)，庚烷:乙醇90:1090ml/min进行纯化。将包含所希望化合物的级分蒸发至干燥，以提供呈奶油色固体状的(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-(2-(2-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(异构体1，第一次洗脱的，149mg，34.6％)和(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-(2-(2-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(异构体2，第二次洗脱的，143mg，33.3％)。1HNMR(400MHz,CDCl3,30℃)δ1.01(3H,d),1.08(3H,s),1.15(3H,d),1.34(3H,s),2.55(1H,dd),2.66(1H,d),2.98-3.06(1H,m),3.17(1H,dd),3.80(3H,s),5.23(1H,s),6.38(1H,d),6.97(2H,d),7.07-7.12(2H,m),7.17-7.22(1H,m),7.32(1H,s),7.46-7.5(1H,m),7.52(1H,d)。m/zES-[M-H]-469。实例7：(E)-3-(4-(2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸(异构体1)*将2M氢氧化钠溶液(20.42ml，40.85mmol)添加到(E)-甲基3-(4-(2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(异构体1)(3.55g，8.17mmol)在甲醇(100ml)、THF(100ml)和水(75ml)中的溶液里。将该混合物在40℃下加热16小时。将该混合物用水(100ml)稀释并且浓缩至一个体积，这样使得有机溶剂已经被去除。将所得水性溶液用2MHCl酸化至pH6。将所得水性悬浮液用DCM(500ml)萃取(添加盐水以帮助分离形成的乳液)，通过相分离纸过滤，经MgSO4干燥，然后通过硅藻土过滤并且蒸发，以提供约3.5g的浅黄色固体。将该粗产物用二乙醚/DCM(1:1，150ml)处理并且进行超声处理。将形成的精细悬浮液穿过二氧化硅(约100g)垫并且将二氧化硅用二乙醚(约2L)洗脱。将包含产物的级分合并，蒸发并且在真空下在50℃干燥，以给出呈米色固体状的标题产物(2.305g，64.5％)。1HNMR(400MHz,DMSO,30℃)δ0.52(3H,d),1.03(3H,s),1.05-1.16(1H,m),1.23(3H,s),2.21(1H,dd),2.65(1H,d),2.84(1H,d),2.89(1H,dd),4.19(1H,ddd),4.31(1H,ddd),4.66(1H,s),6.50(1H,d),6.93(1H,ddd),6.98(1H,ddd),7.18(1H,d),7.38(2H,d),7.40(1H,d),7.58(1H,d),7.63(2H,d),10.18(1H,s),12.30(1H,s)。m/z：ES+[M+H]+421。*通过与其他实例类比，在未定义的中心推断是(R)的立体化学。将该产物(9.0g，21.40mmol)在乙腈(150ml)中在氮气下在黑暗中在经加塞的250ml圆底烧瓶中浆化持续1小时。将该混合物在室温下搅拌过周末，然后过滤并且用冷乙腈(60ml)洗涤，以提供一种白色固体状，将该固体在高真空下在40℃干燥持续5小时，以产生该标题产物的晶形A(7.81g，87％)。晶形A的XRPD迹线包括以下峰并且显示在图1中。用作起始物质的(E)-甲基3-(4-(2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(异构体1)如下制备：-(E)-甲基3-(4-(3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(外消旋体)的制备在氮气下，将(E)-甲基3-(4-甲酰基苯基)丙烯酸酯(41.8g，219.62mmol)(如实例2起始物质的制备中所述获得的)一次性添加到在乙酸(314ml)中的1-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基丙-2-胺(43.8g，219.62mmol)里。将所得溶液在80℃下搅拌5小时。将该反应混合物在真空中浓缩。添加甲苯(200ml)并且将残余物蒸发至干燥。将该共沸混合物处理再重复两次以给出一种棕色固体。将其在1:1EtOAc/庚烷(500ml)中搅拌30分钟，然后过滤并且用1:1EtOAc/庚烷洗涤。将该化合物进行空气干燥以给出一种白色固体。将该粗物质悬浮在2-甲基四氢呋喃(750ml)中，并且将饱和碳酸氢钠溶液经10min添加到经搅拌的混合物(泡腾)中，搅拌该混合物直至物质溶解并且水相保持碱性。分离这些相并且将有机相用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并且在真空中浓缩，以给出一种浅黄色泡沫(约78g)。将该物质溶解在二乙醚(200ml)中并且浓缩至干燥(重复两次)。在第二次添加时候，获得一种适当的固体。将其在二乙醚中搅拌并且蒸发至干燥，以给出(E)-甲基3-(4-(3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸乙酯(外消旋体)(73.6g，89％)。1HNMR(400MHz,CDCl3,30℃)δ1.26(3H,s),1.35(3H,s),1.42(1H,brs),2.69-2.82(2H,m),3.80(3H,s),5.12(1H,s),6.41(1H,d),7.06-7.16(2H,m),7.21(1H,dd),7.37(2H,d),7.46-7.54(4H,m),7.67(1H,d)。m/z：ES+[M+H]+361。(E)-甲基3-(4-(3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(异构体1)的制备将(E)-甲基3-(4-(3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(消旋体)(65g)以七次注射如下进行纯化。将该外消旋物质通过制备型HPLC(ChiralpakOd柱、20μm二氧化硅，100mm直径，250mm长度)，庚烷:IPA50:50进行纯化。将包含所希望化合物的级分蒸发至干燥，以提供(E)-甲基3-(4-(3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(异构体1，第一次洗脱的，30.3g，93％)和(E)-甲基3-(4-(3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(异构体2，第二次洗脱的，28.2g，86％)。1HNMR(400MHz,CDCl3,30℃)δ1.27(3H,s),1.36(3H,s),2.69-2.82(2H,m),3.80(3H,s),5.14(1H,s),6.43(1H,d),7.12(2H,pd),7.2-7.24(1H,m),7.39(3H,d),7.51(3H,d),7.68(1H,d),NH未观察到。m/z：ES+[M+H]+361。(E)-甲基3-(4-(2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(异构体1)的制备将(S)-3-氟-2-甲基丙基三氟甲烷磺酸酯(如实例3起始物质的制备中所述获得的)(5.32g，21.36mmol)添加到(E)-甲基3-(4-(3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(异构体1)(3.5g，9.71mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(6.34ml，36.41mmol)在1,4-二噁烷(17.5ml)中的溶液里。将该混合物在22℃下搅拌3天。将该混合物蒸发并且将残余物在DCM(150ml)与水(150ml)之间分段。将该水层用DCM(50ml)萃取并且将这些萃取物与有机层合并。将合并的萃取物通过相分离纸进行过滤并蒸发。将残余物通过快速二氧化硅色谱，在庚烷中的15％EtOAc的洗脱溶剂来纯化。包含显著量的产物的级分开始形成晶体；搅动这些管以促使进一步结晶。将这些晶体通过过滤收集并且用少量的在庚烷中的15％EtOAc洗涤，以提供呈白色结晶固体状的(E)-甲基3-(4-(2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(异构体1)(2.91g，69.0％)。将来自结晶的液体和包含产物的级分合并并且蒸发。将残余物从EtOAc/庚烷中再结晶，以提供更多呈白色结晶固体状的3-(4-(2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(异构体1)(635mg，15.1％)。1HNMR(400MHz,CDCl3,30℃)δ0.53(3H,d),0.95-1.07(1H,m),1.09(3H,s),1.32(3H,s),2.16(1H,dd),2.66(1H,d),2.94(1H,d),2.97(1H,d),3.80(3H,s),4.14(1H,ddd),4.31(1H,ddd),4.59(1H,s),6.42(1H,d),7.05-7.11(2H,m),7.13(1H,s),7.17(1H,dd),7.35(2H,d),7.45(2H,d),7.50(1H,dd),7.67(1H,d)。m/z：ES+[M+H]+435。实例8：(E)-3-(4-(2-(2-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸(异构体1)*将2M氢氧化钠(0.782ml，1.56mmol)添加到(E)-甲基3-(4-(2-(2-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(异构体1)(68mg，0.16mmol)在甲醇(5ml)、THF(5.00ml)和水(5.00ml)中的溶液里并且将该混合物在22℃下搅拌40小时。将该混合物浓缩至一个体积，这样使得所有有机溶剂已经被去除并且用2MHCl酸化至pH6。添加浓氨水(2滴)，随后添加甲醇(约2ml)，给出一种浅黄色溶液。将粗产物通过制备型HPLC(沃特斯Xbridge制备型C18OBD柱，5μ二氧化硅，50mm直径，100mm长度)，使用水(包含1％NH3)与MeCN的极性递减混合物作为洗脱剂来纯化。将包含所希望的化合物的级分蒸发至干燥，以提供呈黄色固体状的标题化合物(异构体1)(50.0mg，76％)。1HNMR(500MHz,DMSO,30℃)δ0.93(3H,s),1.19(3H,d),1.23(3H,s),1.51(3H,d),2.56-2.64(2H,m),2.75(1H,d),3.04(1H,dd),5.06(1H,s),6.40(1H,d),7.03(1H,ddd),7.09-7.15(2H,m),7.35(1H,dd),7.44-7.51(5H,m),10.87(1H,s),CO2H未观察到。m/z:ES+[M+H]+421。*通过与其他实例类比，在未定义的中心推断是(R)的立体化学。用作起始物质的(E)-甲基3-(4-(2-(2-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(异构体1)如下制备：-(E)-甲基3-(4-(2-(2-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(异构体1)的制备将2-氟-2-甲基丙基三氟甲烷磺酸酯(如实例1起始物质的制备中所述获得的)(389mg，1.73mmol)添加到(E)-甲基3-(4-(3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(外消旋体)(如实例7起始物质的制备中所述获得的)(250mg，0.69mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.453ml，2.60mmol)在1,4-二噁烷(1.25ml)中的溶液里。将该混合物在95℃下搅拌64小时并且然后在DCM(30ml)与水(30ml)之间分段。将该水层用DCM(20ml)萃取并且将这些萃取物与有机层合并。将合并的萃取物通过相分离纸进行过滤并蒸发。将残余物通过快速二氧化硅色谱，在庚烷中的15％EtOAc的洗脱溶剂来纯化。将纯的级分蒸发至干燥，以提供呈米色固体状的(E)-甲基3-(4-(2-(2-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(外消旋)(178mg，59.1％)。将该外消旋产物通过制备型HPLC(ChiralpakAd柱、20μm二氧化硅，50mm直径，250mm长度)，庚烷:乙醇80:20进行纯化。将包含所希望化合物的级分蒸发至干燥，以提供(E)-甲基3-(4-(2-(2-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(异构体1，第一次洗脱的，70mg)和(E)-甲基3-(4-(2-(2-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(异构体2，第二次洗脱的，66mg)。1HNMR(400MHz,CDCl3,30℃)δ1.00(3H,s),1.13(3H,d),1.20(3H,s),1.44(3H,d),2.57-2.78(3H,m),2.93(1H,dd),3.80(3H,s),5.05(1H,s),6.41(1H,d),7.13(1H,ddd),7.18(1H,ddd),7.32(1H,d),7.43(2H,d),7.51(2H,d),7.54(1H,d),7.64(1H,s),7.67(1H,d)。m/z:ES+[M+H]+435。实例9：(E)-3-(3-氟-4-(2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸(异构体1)*将2M氢氧化钠(3.31ml，6.63mmol)添加到(E)-甲基3-(3-氟-4-(2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(600mg，1.33mmol)(非对映异构体的混合物)在甲醇(5ml)和THF(20ml)中的溶液里，并且将该混合物在环境温度下搅拌4小时。将该混合物浓缩至一个体积，这样使得所有有机溶剂已经被去除，用水(50ml)稀释，用稀释的HCl酸化至pH6并且用乙酸乙酯(2x50ml)萃取。将这些萃取物合并并且在减压下蒸发。将残余物通过制备型HPLC(ChiralpakIa柱，20μm二氧化硅，20mm直径，250mm长度)，庚烷:IPA90:10，0.2％乙酸以80ml/min进行纯化。含有这些所希望的化合物的级分进行合并并且分析以产生(E)-3-(3-氟-4-(2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸(异构体1，第一洗脱的，130mg，22.36％)和(E)-3-(3-氟-4-(2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸(异构体2，第二洗脱的，30.0mg，5.16％)。1HNMR(500MHz,DMSO,30℃)δ0.49(3H,d),1.03(3H,s),1.14-1.21(1H,m),1.28(3H,s),2.17(1H,dd),2.59-2.71(1H,m),2.8-2.99(2H,m),4.09-4.34(2H,m),4.99(1H,s),6.59(1H,d),6.86-7.07(2H,m),7.1-7.19(1H,m),7.18-7.29(1H,m),7.36-7.49(2H,m),7.49-7.66(2H,m),10.31(1H,s),CO2H未观察到。m/z:ES+[M+H]+439。*通过与其他实例类比，在未定义的中心推断是(R)的立体化学。用作起始物质的(E)-甲基3-(3-氟-4-(2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(非对映异构体的混合物)如下制备：-(E)-甲基3-(3-氟-4-甲酰基苯基)丙烯酸酯的制备将4-溴-2-氟苯甲醛(20.88g，102.87mmol)和丙烯酸甲酯(13.98ml，154.30mmol)吸收在经充分脱气的DMA(150ml)中，并且添加三-o-甲苯基膦(3.13g，10.29mmol)、乙酸钯(II)(1.155g，5.14mmol)和三乙胺(28.7ml，205.74mmol)。将该反应搅拌并且加热至100℃持续16小时。添加更多的三-o-甲苯基膦(3.13g，10.29mmol)和乙酸钯(II)(1.155g，5.14mmol)并且将该反应混合物加热至110℃持续另外的2小时。添加水(1L)并且将该反应混合物用DCM(2x500mL)萃取。将合并的有机物干燥(MgSO4)，过滤并且蒸发，以给出一种棕色固体。将该粗产物通过快速二氧化硅色谱，在庚烷中的0％到25％EtOAc的洗脱梯度来纯化。将纯的级分蒸发至干燥，以提供呈黄色固体状的(E)-甲基3-(3-氟-4-甲酰基苯基)丙烯酸酯(15.20g，71.0％)。1HNMR(400MHz,CDCl3,30℃)δ3.83(3H,s),6.53(1H,d),7.31(1H,dd),7.41(1H,d),7.65(1H,d),7.79-8(1H,m),10.25-10.41(1H,m)。无质量离子在LCMS中观察到。(E)-甲基3-(4-(3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)-3-氟苯基)丙烯酸酯(外消旋体)的制备将1-(1H-吲哚-3-基)-2-甲基丙-2-胺(1g，5.31mmol)和(E)-甲基3-(3-氟-4-甲酰基苯基)丙烯酸酯(1.106g，5.31mmol)在乙酸(15ml)中在80℃在氮气下搅拌2小时。将该粗产物通过离子交换层析使用SCX-2柱进行纯化。将所希望的产物使用7MNH3/甲醇从该柱中洗脱并且将纯的级分蒸发至干燥，以提供(E)-甲基3-(4-(3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)-3-氟苯基)丙烯酸酯(外消旋体)(2.000g，99％)。1HNMR(400MHz,DMSO,30℃)δ1.14(3H,s),1.27(3H,s),2.52-2.74(2H,m),3.74(3H,s),5.12(1H,s),6.69(1H,d),6.86-7.05(2H,m),7.20(1H,d),7.25-7.33(2H,m),7.39(1H,d),7.73(1H,d),7.85(1H,t),10.29(1H,s),NH未观察到。m/z：ES+[M+H]+379。(E)-甲基3-(3-氟-4-(2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(非对映异构体的混合物)的制备将(S)-3-氟-2-甲基丙基三氟甲烷磺酸酯(如实例3起始物质的制备中所述获得的)(1.259g，5.62mmol)添加到(E)-甲基3-(4-(3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)-3-氟苯基)丙烯酸酯(外消旋体)(850mg，2.25mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(1.467ml，8.42mmol)在1,4-二噁烷(5ml)中的溶液里。将该混合物在60℃下加热4小时，然后在环境温度搅拌12小时。将该混合物在乙酸乙酯(25ml)与水(25ml)之间分段。将该水层用乙酸乙酯(2x25ml)萃取并且将这些萃取物与有机层合并。将合并的萃取物在真空下蒸发。将残余物通过快速二氧化硅色谱，在庚烷中的10％EtOAc的洗脱溶剂来纯化。将纯的级分蒸发至干燥，以提供(E)-甲基3-(3-氟-4-(2-((S)-3-氟-2-甲基丙基)-3,3-二甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(非对映异构体的混合物)(600mg，59.0％)。m/z：ES+[M+H]+453。实例10：(E)-3-[4-[(1R,3R)-1-氘-2-(2-氟-2-甲基-丙基)-3-甲基-4,9-二氢-3H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基]-3,5-二氟-苯基]丙-2-烯酸将(E)-3-[4-[(1R,3R)-1-氘-2-(2-氟-2-甲基-丙基)-3-甲基-4,9-二氢-3H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基]-3,5-二氟-苯基]丙-2-烯酸甲酯(4.70g，10.27mmol)溶解在iPrOH(42.8ml)中，并且一次性添加5M氢氧化钠溶液(6.16ml，30.82mmol)，然后将该反应在室温下搅拌4小时。添加水(100ml)和并且通过添加2NHCl使该pH至约5。将该溶液用EtOAc(x2)萃取并且将合并的有机物干燥(MgSO4)并在真空中浓缩。将残余物穿过硅胶塞，首先用DCM洗脱，然后用在DCM中的高达5％MeOH洗脱。将包含产物的级分蒸发至一种黄色固体状(约4.2g)。将残余物(4.2g)溶解在EtOH(20ml)中并且加温至35℃。经约40min缓慢添加水(30ml)。然后将该混合物搅拌另外的30分钟，然后缓慢冷却至室温。添加另外的水(30ml)，并且然后将该反应冷却至0℃。将该混合物过滤，并且将固体用水洗涤，随后在真空下在35℃干燥过夜以提供呈浅黄色固体状的(E)-3-[4-[(1R,3R)-1-氘-2-(2-氟-2-甲基-丙基)-3-甲基-4,9-二氢-3H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基]-3,5-二氟-苯基]丙-2-烯酸(3.34g，73.3％)。1HNMR(400MHz,CDCl3,30℃)1.12(3H,d),1.19(3H,d),1.26(3H,d),2.43(1H,dd),2.63(1H,dd),2.87(1H,dd),3.07(1H,dd),3.65(1H,q),6.41(1H,d),7.02(2H,d),7.06-7.16(2H,m),7.19-7.25(1H,m),7.41(1H,s),7.48-7.57(1H,m),7.63(1H,d),CO2H未观察到。m/z：ES+[M+H]+444。这种化合物可以可替代地命名为(E)-3-[4-[(1R,3R)-1-氘-2-(2-氟-2-甲基-丙基)-3-甲基-4,9-二氢-3H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基]-3,5-二氟-苯基]丙烯酸。(4-溴-2,6-二氟-苯基)-二氘-甲醇的制备将硼氘化锂(0.497g，17.25mmol)逐份添加到4-溴-2,6-二氟苯甲酸甲酯(2.89g，11.5mmol)在THF(46.0ml)中的溶液里。将该反应加热至50℃，持续2小时。冷却后，小心地添加加入2NHCl(30ml)。分离各层，并且将水层用EtOAc(2x50ml)萃取。将合并的有机物用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并且浓缩，以给出呈白色固体状的(4-溴-2,6-二氟-苯基)-二氘-甲醇(2.250g，87％)。1HNMR(400MHz,CDCl3,30℃)1.96(1H,s),7.07-7.13(2H,m)。4-溴-2,6-二氟-1-氘代苯甲醛的制备在室温下，将戴斯-马丁(Dess-Martin)试剂(4.98g，11.73mmol)添加到在DCM(39.1ml)中的(4-溴-2,6-二氟-苯基)-二氘-甲醇(2.20g，9.78mmol)里。将该反应搅拌1小时，然后通过添加包含10％硫代硫酸钠的饱和NaHCO3(50ml)淬灭。分离各层，并且将水相用DCM(2x50ml)萃取。将这些有机物干燥(MgSO4)并且浓缩，然后将该粗产物通过快速二氧化硅色谱，在庚烷中的0％到25％EtOA的洗脱梯度进行纯化。将纯的级分蒸发至干燥，以提供呈白色固体状的4-溴-2,6-二氟-1-氘代苯甲醛(2.040g，94％)。1HNMR(400MHz,CDCl3,30℃)7.18-7.25(2H,m)。无质量离子观察到。(E)-3-(4-氘羰基-3,5-二氟-苯基)丙-2-烯酸甲酯的制备将4-溴-2,6-二氟-1-氘代苯甲醛(3.33g，15.0mmol)、三乙胺(4.18ml，30.00mmol)、乙酸钯(II)(0.168g，0.75mmol)和三甲苯基膦(0.457g，1.50mmol)溶解在DMF(36.6ml)中，将其进行脱气。然后添加丙烯酸甲酯(2.026ml，22.50mmol)并且将该反应加热至80℃持续4小时。冷却后，将该混合物添加到水(150ml)中并且用EtOAc(2x150ml)萃取。将合并的有机物相继用2NHcl(100ml)、盐水(100ml)洗涤，然后干燥(MgSO4)并且浓缩。将该粗产物通过快速二氧化硅色谱，在庚烷中的0％到40％EtOAc的洗脱梯度来纯化。将纯的级分蒸发至干燥，以提供呈黄色固体状的(E)-3-(4-氘羰基-3,5-二氟-苯基)丙-2-烯酸甲酯(2.93g，86％)。1HNMR(400MHz,CDCl3,30℃)3.83(3H,d),6.51(1H,d),7.12(2H,m),7.57(1H,d)。m/z(ES+),[M+H]+＝228。(R)-N-(1-(1H-吲哚-3-基)丙-2-基)-2-氟-2-甲基丙-1-胺在氮气气氛下，将(2R)-1-(1H-吲哚-3-基)丙-2-胺(3.81kg，21.21摩尔)添加到100L搪玻璃包夹套容器中。添加1,4-二噁烷(23L)，并且开启搅拌器。将二异丙基乙胺(5.55L；31.82摩尔)添加到经搅拌的悬浮液中，随后添加(2-氟-2-甲基-丙基)三氟甲烷磺酸酯(5.55kg，23.77摩尔)。将1,4-二噁烷(4L)添加到该容器中，并且将该混合物加热至75℃。继续加热24小时，随后冷却该混合物至25℃。将水(30.5L)添加到容器中，随后添加甲苯(30.5L)。在40分钟之后，将搅拌器关闭并且允许分离各层。去除水层并且将水(30.5L)添加到该有机溶液中。将该混合物搅动15分钟，随后允许分离各层。将水层从容器中去除。将有机溶液通过真空蒸馏(夹套温度65℃，110毫巴压力)进行浓缩直到大约27L的馏出物已被去除。将容器中剩余的溶液冷却，以提供(R)-N-(1-(1H-吲哚-3-基)丙-2-基)-2-氟-2-甲基丙-1-胺，为在甲苯(33％w/w)中的溶液(15.4Kg，97％)。1HNMR(500MHz,DMSO,27℃)0.98(3H,d),1.26(3H,d),1.30(3H,d),2.57-2.75(3H,m),2.81(1H,dd),2.84-2.92(1H,m),6.97(1H,t),7.06(1H,t),7.11-7.22(1H,被甲苯信号模糊的多重峰),7.34(1H,d),7.52(1H,d),10.80(1H,s)。(E)-3-[4-[(1R,3R)-1-氘-2-(2-氟-2-甲基-丙基)-3-甲基-4,9-二氢-3H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基]-3,5-二氟-苯基]丙-2-烯酸甲酯的制备将(R)-N-(1-(1H-吲哚-3-基)丙-2-基)-2-氟-2-甲基丙-1-胺[在甲苯中的33％w/w](11.26g，14.97mmol)和(E)-3-(4-氘羰基-3,5-二氟-苯基)丙-2-烯酸酯(3.40g，14.97mmol)在甲苯(55.6ml)/乙酸(4.28ml，74.83mmol)中在80℃下加热5hr。冷却后，将挥发物在真空下去除。将残余物吸收在DCM(200ml)中并且用饱和NaHCO3溶液(200ml)洗涤。将水相用DCM(100ml)萃取，然后将合并的有机物用盐水洗涤，干燥并且在真空中浓缩。将粗物质加载到SCX-2柱上，用甲醇洗脱以去除未反应的醛。然后将该柱用7MNH3-MeOH洗脱以释放产物。将碱性滤液蒸发，并且将该粗产物通过快速二氧化硅色谱，在庚烷中的0％到40％EtOAc的洗脱梯度来纯化。将纯的级分蒸发至干燥，以提供呈浅黄色固体状的(E)-3-[4-[(1R,3R)-1-氘-2-(2-氟-2-甲基-丙基)-3-甲基-4,9-二氢-3H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基]-3,5-二氟-苯基]丙-2-烯酸甲酯(4.70g，68.6％)。1HNMR(400MHz,CDCl3,30℃)1.11(3H,d),1.19(3H,d),1.25(3H,d),2.42(1H,dd),2.62(1H,dd),2.87(1H,dd),3.07(1H,dd),3.65(1H,q),3.81(3H,s),6.39(1H,d),6.99(2H,d),7.06-7.17(2H,m),7.23(1H,dd),7.45(1H,s),7.49-7.6(2H,m)。m/z：ES+[M+H]+458。实例11：(1R,3R)-1-{4-[(E)-2-羧基乙烯基]-2,6-二氟苯基}-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-β-咔啉-2-鎓马来酸盐的制备将马来酸(1.31g，11.29mmol)在丙酮(15ml)中的溶液在氮气下搅拌。将(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸(实例1)(5.00g，11.3mmol)在丙酮(25ml)中的溶液添加到马来酸溶液里，以给出一种黄色溶液。将该反应容器覆盖在箔片中以保护免于光照并且用氮气流吹扫过夜直至溶剂蒸发。获得一种固体，将该固体在真空中干燥2小时，以给出呈奶油色固体的标题化合物(6.23g，98％)。1HNMR(500MHz,DMSO,27℃)0.95-1.34(9H,m),2.24-2.45(1H,m),2.54-2.66(1H,m),2.8-2.99(2H,m),3.52(1H,s),5.22(1H,s),6.26(2H,s),6.67(1H,d),6.89-7.07(2H,m),7.19(1H,d),7.39-7.51(3H,m),7.55(1H,d),10.59(1H,s)。此马来酸盐的XRPD迹线显示在图8中并且DSC迹线显示在图9中。实例12使用湿法制粒工艺，在75g规模下制造实例1的示例性组合物。将活性成分、甘露醇、微晶纤维素和羧甲基淀粉钠以下表列出的数量进行称重并且转移到迪斯纳(Diosna)P1-6混合器-制粒机中，并且在600rpm下混合(伴随着切碎)持续6分钟。对于组合物A，继续混合同时以两个等分试样以大约1mL/秒的速率添加30mL水，在等分试样之间暂停混合，然而对于组合物B，将通过在50℃下搅拌所需数量的EDTA与具有20mL水的抗坏血酸20分钟(避光)所制备的溶液使用类似方法进行添加，在在这种情况下该第二等分试样包括约10mL的冲洗液体。继续湿法混合持续总共1.5分钟。将润湿的颗粒穿过1.5mm筛网，然后在真空下在50℃-60℃下进行干燥至含水量<2％w/w。将所得颗粒使用1mm筛网进行研磨，然后使用特波拉掺合器(Turbulablender)在32rpm下与润滑剂混合5分钟。使用配备有6mm的标准凹面工具的丽娃迷你压(RivaMini-press)，通过压缩颗粒至标称100mg压缩重量来形成包含10mg的活性成分的片剂。针对如下表列出的包装在诱导(induction)密封的75ccHDPE瓶中或在皮氏培养皿中暴露于大气、储存在黑暗中、在受控的温度和湿度下的片剂，关于降解产物形成(其中“降解产物”意指(R,E)-3-(3,5-二氟-4-(2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-4,9-二氢-3H-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-鎓-1-基)苯基)丙烯酸酯)，评估组合物A和B的稳定性。显而易见的是，组合物B(包含螯合剂和抗氧化剂)比组合物A(其是一种标准片剂配制品)对化学降解更稳定。关于降解产物形成，示例性组合物的稳定性(％)ND未检测到(<0.02％w/w)实例13：(E)-3-[3,5-二氟-4-[(3R)-2-(2-氟-2-甲基-丙基)-3-甲基-4,9-二氢-3H-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-鎓-1-基]苯基]丙-2-烯酸酯在室温下，将(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸(200mg，0.45mmol)添加到硝酸铈铵(248mg，0.45mmol)在乙腈(6ml)/水(1.500ml)中的溶液里。将该反应搅拌持续2hr并且添加另外的硝酸铈铵(248mg，0.45mmol)。将该溶液在25℃下搅拌另外的15分钟。将该反应混合物用2MHcl(3ml)进行酸化并且用DCM(2x10ml)萃取。然后将有机物在真空中浓缩并且将粗产物使用水(包含0.1％甲酸)与MeCN的极性递减混合物作为洗脱剂，通过制备型HPLC(沃特斯SunFire柱，5μ二氧化硅，50mm直径，100mm长度)来纯化。将包含所希望化合物的级分蒸发至干燥，以给出呈橙色玻璃状的(R,E)-3-(3,5-二氟-4-(2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-4,9-二氢-3H-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-鎓-1-基)苯基)丙烯酸酯(35.0mg，17.58％)。1HNMR(500MHz,DMSO,30℃)1.27(3H,d),1.43-1.55(6H,m),3.51(1H,d),3.72(1H,dd),3.96(1H,dd),4.18-4.32(1H,m),4.67(1H,s),6.59(1H,s),7.09-7.3(2H,m),7.42(1H,t),7.52-7.73(3H,m),7.78(1H,d),NH未观察到。HRMS(ESI)：[M+H]+，发现值441.17831，C23H24F2N2O2需要441.17844。(E)-3-[3,5-二氟-4-[2-(2-氟-2-甲基-丙基)-3-甲基-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-鎓-1-基]苯基]丙-2-烯酸酯的制备将(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸(0.500g，1.13mmol)溶解在DMSO(10mL)中并且接在空气和光照下加热至120℃持续16h。然后将该反应加热至180℃，持续2.5h。将该反应混合物冷却并且通过制备型HPLC(沃特斯Xbridge制备型C18OBD柱，5μ二氧化硅，50mm直径，100mm长度)，使用水(包含1％NH3)与MeCN的极性递减混合物作为洗脱剂来纯化。将包含所希望的化合物的级分蒸发至干燥，以提供呈橙色固体状的(E)-3-[3,5-二氟-4-[2-(2-氟-2-甲基-丙基)-3-甲基-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚-2-鎓-1-基]苯基]丙-2-烯酸酯(0.047g，9.40％)。1HNMR(400MHz,DMSO,27℃)1.27(3H,s),1.33(3H,d),3.09(3H,s),4.59-4.8(1H,m),5.14-5.37(1H,m),6.54(1H,d),7.19(1H,d),7.39(1H,t),7.63(2H,d),7.74(1H,t),7.91(1H,d),8.45(1H,d),8.88(1H,s),10.79(1H,s)。m/z：ES+[M+H]+439。实例14A：(E)-3-[3,5-二氟-4-[(1R,3R)-2-(2-氟-3-羟基-2-甲基-丙基)-3-甲基-1,3,4,9-四氢吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基]苯基]丙-2-烯酸(异构体1)的制备将2M氢氧化钠(1.27mL，2.54mmol)添加到(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-3-羟基-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(异构体1)(120mg，0.25mmol)在THF(0.635mL)/甲醇(0.635mL)中的溶液里。将反应在室温下搅拌1h，然后用EtOAc和水稀释。通过添加2MHCl将水层调整至pH6，并且分离各层。将该水层用EtOAc萃取，然后将合并的有机物干燥(MgSO4)并在真空中浓缩。将该粗产物通过快速二氧化硅色谱，在DCM中的0％到10％MeOH的洗脱梯度来纯化。将纯的级分蒸发至干燥，以提供呈米色固体状的(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-3-羟基-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸(异构体1)(85mg，72.9％)。1HNMR(400MHz,DMSO,27℃)0.97(3H,d),1.05(3H,d),2.32-2.4(1H,m),2.44-2.54(1H,m),2.73-2.93(3H,m),3-3.14(2H,m),3.32-3.49(2H,m),4.73(1H,s),5.14(1H,s),6.58(1H,d),6.82-6.96(2H,m),7.10(1H,d),7.33(1H,d),7.36(1H,d),7.45(1H,d),10.49(1H,s).m/z(ES+),[M+H]+＝459。实例14B：(E)-3-[3,5-二氟-4-[(1R,3R)-2-(2-氟-3-羟基-2-甲基-丙基)-3-甲基-1,3,4,9-四氢吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基]苯基]丙-2-烯酸(异构体2)的制备将2M氢氧化钠(1.27mL，2.54mmol)添加到(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-3-羟基-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(异构体2)(110mg，0.23mmol)在THF(0.529mL)/甲醇(0.529mL)中的溶液里。将反应混合物在室温下搅拌1h，然后用EtOAc和水稀释。通过添加2MHCl将水层调整至pH6，并且分离各层。将该水层用EtOAc萃取，然后将合并的有机物干燥(MgSO4)并在真空中浓缩。将该粗产物通过快速二氧化硅色谱，在DCM中的0％到10％MeOH的洗脱梯度来纯化。将纯的级分蒸发至干燥，以提供呈米色固体状的(E)-3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-3-羟基-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸(异构体2)(81mg，76％)。1HNMR(400MHz,DMSO,27℃)1.02(2H,s),1.05(3H,d),1.23(1H,s),1.90(3H,s),2.28-2.46(1H,m),2.53-2.7(1H,m),2.86-3.03(2H,m),3.56(1H,d),4.83(1H,s),5.17(1H,s),6.66(1H,d),6.86-7.08(2H,m),7.17(1H,d),7.40(1H,d),7.44(2H,d),7.53(1H,d),10.54(1H,s).m/z(ES+),[M+H]+＝459。将用作起始物质的(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-3-羟基-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(异构体1和2)如下制备：-2-氟-2-甲基丙烷-1,3-二醇将LiAlH4(0.741g，19.25mmol)逐份添加到二乙基2-氟-2-甲基丙二酸酯(1.345g，7.00mmol)在THF(35.0ml)中的冷却溶液里。允许将该反应经1h加温至室温。冷却至0℃后，将该反应通过添加水(0.75mL)、15％NaOH(0.75mL)、然后水(1.5mL)进行淬灭。将该悬浮液搅拌30min，然后过滤并且将这些固体用THF洗涤。将滤液进行蒸发，以提供呈无色油的2-氟-2-甲基丙烷-1,3-二醇(0.745g，98％)。1HNMR(400MHz,CDCl3,27℃)1.34(3H,d),2.12-2.27(2H,m),3.75(4H,d)。3-(((R)-1-(1H-吲哚-3-基)丙-2-基)氨基)-2-氟-2-甲基丙-1-醇在0℃下，将三氟甲烷磺酸酐(1.151ml，6.80mmol)添加到2-氟-2-甲基丙烷-1,3-二醇(0.70g，6.47mmol)在DCM(17.85ml)中的溶液里，随后添加2,6-二甲基吡啶(0.908ml，7.77mmol)。允许将该反应经30min加温至室温，然后用2MHCl洗涤。将有机相穿过相分离筒并且在真空中浓缩。将残余物溶解在二噁烷(12mL)中，然后添加(R)-1-(1H-吲哚-3-基)丙-2-胺(1.128g，6.47mmol)和DIPEA(1.678ml，9.71mmol)，并且将该反应加热至90℃持续2h。在冷却之后，将该反应用DCM稀释并且用水洗涤。将水相用DCM萃取，然后将这些有机物在真空中浓缩。将该粗产物通过快速二氧化硅色谱，在DCM中的0％到10％MeOH的洗脱梯度来纯化。将纯的级分蒸发至干燥，以给出呈棕色胶状物的3-(((R)-1-(1H-吲哚-3-基)丙-2-基)氨基)-2-氟-2-甲基丙-1-醇(0.815g，47.6％)。m/z(ES+)，[M+H]+＝265。(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-3-羟基-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(异构体1和2)将(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-甲酰基苯基)丙烯酸酯(565mg，2.50mmol)添加到3-(((R)-1-(1H-吲哚-3-基)丙-2-基)氨基)-2-氟-2-甲基丙-1-醇(661mg，2.50mmol)在甲苯(11.3ml)/乙酸(1.25ml)中的悬浮液中。将该反应加热至90℃，持续5h。在冷却之后，将挥发物在真空下去除，然后将残余物穿过SCX-2柱，用甲醇洗脱以去除未反应的醛。然后将该柱用NH3/MeOH洗脱以释放产物。将碱性滤液蒸发，然后将该粗产物通过快速二氧化硅色谱，在庚烷中的0％到50％EtOAc的洗脱梯度来纯化。将纯的级分蒸发至干燥，以提供呈黄色固体状的(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-3-羟基-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(异构体1-122mg,10.3％)和呈黄色/橙色固体状的(E)-甲基3-(3,5-二氟-4-((1R,3R)-2-(2-氟-3-羟基-2-甲基丙基)-3-甲基-2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-1-基)苯基)丙烯酸酯(异构体2-129mg，11％)。异构体1-1HNMR(400MHz,CDCl3,27℃)1.10(3H,d),1.14(3H,d),2.54(1H,dd),2.62-2.73(1H,m),3.06-3.3(2H,m),3.40(1H,dd),3.56(1H,t),3.80(3H,s),3.87-4.08(1H,m),4.27(1H,s),5.16(1H,s),6.37(1H,d),7.01(2H,d),7.07-7.15(2H,m),7.14-7.24(1H,m),7.42-7.56(2H,m),7.71(1H,s)。m/z(ES+),[M+H]+＝473。异构体2-1HNMR(400MHz,CDCl3,27℃)1.15(3H,d),1.20(3H,d),2.65(1H,dd),2.79(1H,t),2.93-3.09(2H,m),3.57(1H,dt),3.70(1H,dd),3.78(3H,s),4.2-4.67(1H,m),5.42(1H,s),6.32(1H,d),6.94(2H,d),7.06-7.15(2H,m),7.19-7.27(2H,m),7.42(1H,s),7.51(1H,dd),8.02(1H,s)。m/z(ES+),[M+H]+＝473。参比实例1：1-(4-(5-(5-氨基-6-(5-叔丁基-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)-1-乙基-1H-1,2,4-三唑-3-基)哌啶-1-基)-3-羟基丙-1-酮在氮气下，将吡啶4-甲基苯磺酸酯(11.62g，46.24mmol)添加到1-(4-(5-(5-氨基-6-(5-叔丁基-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)-1-乙基-1H-1,2,4-三唑-3-基)哌啶-1-基)-3-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙-1-酮(128g，231.19mmol)在甲醇(1L)中的悬浮液里。将混合物在60℃搅拌1.5小时。5分钟后混合物溶解。使混合物在50℃下静置过夜，在此期间形成沉淀。将固体物质通过过滤来分离且用水和乙腈洗涤。此物质仍包含来自先前阶段的少量杂质且需要进一步纯化。将该物质溶解在二氯甲烷中并且通过硅胶快速色谱(0％甲醇/DCM到10％甲醇/DCM)来纯化。将所希望的产物1-(4-(5-(5-氨基-6-(5-叔丁基-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)-1-乙基-1H-1,2,4-三唑-3-基)哌啶-1-基)-3-羟基丙-1-酮(参比实例1)(92g，85％)分离为奶油色固体(形式A)：1HNMR光谱：(DMSO-d6)1.4-1.51(12H,m),1.51-1.78(2H,m),1.89-2.05(2H,m),2.72-2.86(1H,m),2.91-3.05(1H,m),3.12-3.24(1H,m),3.64(2H,q),3.83-4.01(1H,m),4.29-4.41(1H,m),4.47(1H,t),4.58(2H,q),8.26(2H,s),8.85(1H,s)；质谱[M+H]+＝470。将1-(4-(5-(5-氨基-6-(5-叔丁基-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)-1-乙基-1H-1,2,4-三唑-3-基)哌啶-1-基)-3-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙-1-酮如下制备：将1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯(76mL，511.14mmol)添加到4-(5-(5-氨基-6-(5-叔丁基-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)-1H-1,2,4-三唑-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(150g，319.46mmol)在2-甲基THF(1.2L)中的悬浮液里。添加碘乙烷(46mL，575.03mmol)并且将该混合物在35℃下搅拌16小时。添加另外的碘乙烷(46mL，575.03mmol)和1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯(76mL，511.14mmol)并且在35℃下继续搅拌24小时。将混合物倾入水中并且将不溶性物质通过过滤来分离，用水和MTBE洗涤并且在真空中干燥，以提供呈黄色固体状的4-(5-(5-氨基-6-(5-叔丁基-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)-1-乙基-1H-1,2,4-三唑-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(116g，73.0％)。用DCM萃取滤液且有机溶液经硫酸镁干燥，过滤且在减压下浓缩。将残余物通过二氧化硅快速柱色谱使用梯度洗脱(30％MTBE/庚烷到100％MTBE)进行纯化。因此将第二批所希望的产物(12g，24.12mmol，7.55％)分离为一种黄色固体状，将该固体随后与第一批合并：1HNMR光谱：(DMSO-d6)1.41(9H,s),1.44(9H,s),1.48(3H,t),1.52-1.69(2H,m),1.87-2.04(2H,m),2.79-3.03(3H,m),3.86-4.03(2H,m),4.59(2H,q),7.89(2H,s),8.85(1H,s)；质谱[M+H]+＝498。将4-(5-(5-氨基-6-(5-叔丁基-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)-1-乙基-1H-1,2,4-三唑-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(3009.5g，6.05mol)在DCM(9L)中的悬浮液在N2下冷却至5℃-10℃。将TFA(9L)逐份添加到悬浮液中，同时维持温度<30℃。在室温下搅拌反应混合物1h。浓缩混合物，将所得残余物溶解在水(30L)中，并且在0℃-5℃下缓慢添加到35％氨水溶液(12L)中。将该悬浮液搅拌30min，然后将产物过滤出并且用水(2×6L)洗涤。将产物在50℃下在真空中干燥持续2天，以提供3-(5-叔丁基-1,3,4-噁二唑-2-基)-5-(1-乙基-3-(哌啶-4-基)-1H-1,2,4-三唑-5-基)吡嗪-2-胺((2496g)：1HNMR光谱：(DMSO-d6)1.4-1.52(12H,m),1.57-1.73(2H,m),1.83-1.93(2H,m),2.57-2.7(2H,m),2.71-2.84(1H,m),2.96-3.09(2H,m),4.58(2H,q),8.06(2H,s),8.84(1H,s)；质谱[M+H]+＝398。在室温下在氮气下，向3-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙酸(HATU，48.80g，0.2774mol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(86.96mL，0.4993mol)在THF(552mL)中的溶液里逐份添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲脲鎓六氟磷酸盐(115.73g，0.3051mol)。将所得混合物搅拌20min，然后经1h逐份添加3-(5-叔丁基-1,3,4-噁二唑-2-基)-5-(1-乙基-3-(哌啶-4-基)-1H-1,2,4-三唑-5-基)吡嗪-2-胺(122.5g(110.25g活性)，0.2774mol)。3.5h后，浓缩混合物并且使残余物在室温下在MeCN(275mL)中浆化持续15min。将产物过滤出，用MeCN(3x110mL)洗涤并且在50℃下在真空中干燥过夜。这给出1-(4-(5-(5-氨基-6-(5-叔丁基-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)-1-乙基-1H-1,2,4-三唑-3-基)哌啶-1-基)-3-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙-1-酮(131.9g，96％)。1HNMR光谱：(DMSO-d6)1.29-1.48(16H,m),1.48-1.75(4H,m),1.83-1.99(2H,m),2.48-2.68(2H,m),2.68-2.79(1H,m),2.87-2.99(1H,m),3.07-3.19(1H,m),3.32-3.42(1H,m),3.47-3.6(1H,m),3.64-3.75(1H,m),3.75-3.84(1H,m),3.84-3.95(1H,m),4.24-4.39(1H,m),4.47-4.6(3H,m),7.84(2H,s),8.79(1H,s):质谱[M+Na]+＝577。参比实例1的替代性制备在N2下，向1-(4-(5-(5-氨基-6-(5-叔丁基-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)-1-乙基-1H-1,2,4-三唑-3-基)哌啶-1-基)-3-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙-1-酮(131.9g，0.2382mol)在甲醇(1045mL)中的悬浮液里添加p-甲苯磺酸吡啶鎓(11.97g，47.7mmol)。在60℃下搅拌反应混合物5.5h，然后在50℃下过夜。将反应混合物冷却到0℃且过滤出固体。使产物在水(250mL)中在室温下浆化持续20分钟，过滤，用水(3×40mL)洗涤且在50℃下在真空中干燥。这给出呈形式A(参见下文)的1-(4-(5-(5-氨基-6-(5-叔丁基-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)-1-乙基-1H-1,2,4-三唑-3-基)哌啶-1-基)-3-羟基丙-1-酮(21.4g)。浓缩甲醇液体且使所得固体在水(0.6L)中在室温下浆化持续20分钟。通过过滤分离固体，且用水(3×100mL)洗涤。滤饼在水(0.5L)中第二次浆化，再持续20分钟。将产物通过过滤分离，用水(100mL)洗涤并且在50℃下在真空中干燥。这给出81.9g呈形式A的1-(4-(5-(5-氨基-6-(5-叔丁基-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)-1-乙基-1H-1,2,4-三唑-3-基)哌啶-1-基)-3-羟基丙-1-酮(81.9g)。合并两批(103.3g)，用形式B(16.68g)接种且在MeCN(826mL)中在室温下浆化过夜。由此得到117.4g呈浅黄色固体状的1-(4-(5-(5-氨基-6-(5-叔丁基-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)-1-乙基-1H-1,2,4-三唑-3-基)哌啶-1-基)-3-羟基丙-1-酮(117.4g)，即形式B(参见下文)。这一物质通过在庚烷(7.5相对体积)中浆化持续1小时来进一步纯化。将该混合物过滤，在过滤器上吸干，且在50℃下在真空烘箱中干燥过夜，以提供呈形式B的1-(4-(5-(5-氨基-6-(5-叔丁基-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)-1-乙基-1H-1,2,4-三唑-3-基)哌啶-1-基)-3-羟基丙-1-酮(102.5g)。形式B也可以通过在不接种的情况下使形式A在MeCN中浆化来制造。形式A或B也可以如下转化成形式C：在回流下加热1-(4-(5-(5-氨基-6-(5-叔丁基-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)-1-乙基-1H-1,2,4-三唑-3-基)哌啶-1-基)-3-羟基丙-1-酮(例如通过以上概述的方法制得的形式B)于IPA(12体积)中的悬浮液，直到固体溶解。热过滤该溶液，然后冷却到室温。这给出呈浅黄色固体状的1-(4-(5-(5-氨基-6-(5-叔丁基-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)-1-乙基-1H-1,2,4-三唑-3-基)哌啶-1-基)-3-羟基丙-1-酮(99.3g，97％)，为形式C。形式C也可以如下转化成形式B：在10L法兰烧瓶中，将形式C(377.8克份1)在MIBK(7900mL)中加热到110℃-115℃，以给出溶液。使溶液冷却到97℃-103℃，且立即精制过滤到在-15℃下搅拌的包含乙腈(8220mL)中的形式B(0.8g)晶种的50L容器中。在添加期间，借助于夹套冷却将50L容器中的温度维持在-15℃与25℃之间。通过类似方法再添加三份溶解于MIBK中的该化合物。向所得浆料中添加形式B的晶种(0.8g)，且然后在10℃-20℃下搅拌混合物过夜。过程内分析证实所希望的形式(形式B)，不具有形式C或可见非晶形。过滤混合物，且用乙腈(3340mL)洗涤。将固体烘箱干燥2天(固体在干燥期间破碎成粉末以及大小为约1mm到约3-4mm的小团块的混合物)，直到获得恒重。产量＝1532.8g(93.5％)3-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙酸制备如下：在0℃下在氮气下，向甲醇(2.4L)和浓硫酸(44.4mL，832.61mmol)的搅拌溶液中逐滴添加β-丙内酯(175mL，2.78mol)。在室温下搅拌此溶液2天。将反应混合物冷却到10℃，随后逐份添加碳酸氢钠(145g，1.72mol)，在室温下搅拌所得悬浮液75分钟。过滤此溶液，用甲醇(800mL)洗涤滤饼。将滤液蒸发为油，将其再溶解于二氯甲烷(1.2L)中且搅拌60分钟，随后再过滤。过滤此溶液，随后蒸发，以给出呈油状物的3-羟基丙酸甲酯(219g，76％)。1HNMR光谱：(CDCl3)2.50(2H,t),3.63(3H,s),3.78(2H,t)。在室温下在氮气下，将p-甲苯磺酸吡啶鎓(7.65g，30.45mmol)添加到3-羟基丙酸甲酯(63.4g，609.00mmol)和3,4-二氢-2H-吡喃(78mL，852.60mmol)在二氯甲烷(650mL)中的澄清溶液中，以给出一种混浊溶液。将此溶液在室温下搅拌过夜。将该反应混合物用水(250mL)和盐水(250mL)洗涤，随后干燥(MgSO4)并且蒸发成油。将此粗产物通过快速二氧化硅色谱，在庚烷中的15％到30％EtOAc的洗脱梯度来纯化。将纯的级分蒸发至干燥，以提供呈无色油的3-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙酸甲酯(67.7g，59.0％)：1HNMR光谱：(CDCl3)1.47(4H,dddd),1.55-1.84(2H,m),2.55(2H,t),3.33-3.53(1H,m),3.53-3.7(4H,m),3.78(1H,ddd),3.93(1H,dt),4.42-4.72(1H,m)；质谱[MH]+＝189。在室温下，将氢氧化钠(2M，349mL，697.58mmol)添加到3-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙酸甲酯(67.68g，359.58mmol)在THF(680mL)中的溶液里。将该反应混合物在室温下搅拌3小时。在真空中去除THF，然后将水层用乙酸乙酯(260mL)洗涤，随后冷却到0℃并且通过添加盐酸(2M)小心酸化到pH5。将产物用乙酸乙酯(3x250mL)萃取，随后干燥(MgSO4)并且蒸发，以给出呈透明油状物的3-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙酸(57.0g，91％)。将此物质溶解在乙酸乙酯(750mL)中，然后用水(3x250mL)和盐水(250mL)洗涤以去除剩余乙酸。将有机溶液干燥(MgSO4)干燥并且蒸发，以给出呈无色油的3-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)丙酸(45.67g，72.9％)：1HNMR光谱：1HNMR(CDCl3)1.43-1.67(4H,m),1.65-1.95(2H,m),2.68(2H,t),3.48-3.58(1H,m),3.73(1H,dt),3.88(1H,ddd),4.02(1H,dt),4.59-4.7(1H,m)；质谱[M-H]-＝173。将4-(5-(5-氨基-6-(5-叔丁基-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)-1H-1,2,4-三唑-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯基如下制备：将水合肼(23.59mL，480.75mmol)逐滴添加到3-氨基-6-溴吡嗪-2-甲酸甲酯(100g，418.04mmol)在EtOH(2L)中的经搅拌混合物里。将该混合物在50℃下在氮气下加热。将所得稠悬浮液在50℃下搅拌16小时。一次性添加另外的肼(2.5mL)并且将该悬浮液在50℃下搅拌另外的24小时。向稠反应混合物中馈入乙醇(500mL)且使混合物冷却到室温。过滤所得悬浮液并且用乙醇(1L)洗涤固体并且在真空中干燥，以给出呈奶油色固体的3-氨基-6-溴吡嗪-2-甲酰肼(98g，定量)：1HNMR光谱：(DMSO-d6)4.52(2H,s),7.59(2H,s),8.30(1H,s),9.74(1H,s)；质谱[M+H]+＝232。将新戊酸酐(165mL，815.38mmol)添加到3-氨基-6-溴吡嗪-2-甲酰肼(172g，741.26mmol)在乙腈(1.8L)中的经搅拌混合物里并且将该混合物在80℃下加热1小时。搅拌反应物16小时。通过过滤分离所需黄色固体状物质。将滤液在EtOAc(2L)与碳酸氢钠水溶液(2L)之间分段。将有机层用饱和盐水洗涤并且经MgSO4干燥。过滤且浓缩溶液，得到橙色粘性固体，用MTBE(250mL)对其进行研磨。通过过滤分离不溶性黄色固体且此物质显示与第一固体状相同。将合并的固体在真空烘箱中在50℃下干燥3天，以给出呈黄色固体的3-氨基-6-溴-N’-新戊酰基吡嗪-2-甲酰肼(224g，96％)：1HNMR光谱：(DMSO-d6)1.17(9H,s),7.62(2H,s),8.37(1H,s),9.42-9.56(1H,m),10.09-10.23(1H,m)；质谱[M+H]+＝318。在50℃下经30min的时间向在MeCN(10.8L)中的3-氨基-6-溴-N’-新戊酰基吡嗪-2-甲酰肼(2301g，7.28mol)中逐份(约280gx6)添加DIPEA(3.044L，17.48mol)和p-甲苯磺酰氯(1665g，8.73mol)。将反应温度通过控制添加速率维持在65℃-70℃之间。在添加完成之后，将该反应混合物在70℃下搅拌1h。将该混合物冷却到室温并且用5％NaHCO3(水溶液，24.2L)淬灭。搅拌所得悬浮液30min，然后过滤。将产物用水(14.8L)洗涤，吸干并且在50℃下干燥16h。将产物溶解在DCM(12L)中并且分离各相。将有机相装载到二氧化硅垫(6kg)上，并且将该产物用20％EtOAc/DCM(8x10L)洗脱。将包含产物的级分进行浓缩，通过HPLC给出1987g(92％产率)的具有99.8％纯度的5-溴-3-(5-叔丁基-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-胺(36g，17％)：1HNMR光谱：(DMSO-d6)1.43(9H,s),7.70(2H,s),8.39(1H,s)；质谱[M+H]+＝298。使氮气流穿过5-溴-3-(5-叔丁基-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-胺(89.35g，239.75mmol)于DMA(1.2L)中的溶液，持续20分钟。将二环己基(2’,4’,6’-三异丙基联苯-2-基)膦(11.43g，23.98mmol)、三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(5.49g，5.99mmol)、锌(1.568g，23.98mmol)以及二氰基锌(16.89g，143.85mmol)依次添加到经搅拌混合物中。将该混合物加热到100℃并且搅拌1小时。将该混合物冷却并且在DCM(3L)与水(1L)之间分段。经由硅藻土过滤黑色混合物且分离有机层。相继用水、盐水洗涤溶液。经硫酸镁干燥溶液且在减压下浓缩。残余物用MTBE研磨且通过过滤分离，用MTBE洗涤。将滤饼在真空中干燥，以提供呈浅橙色固体的5-氨基-6-(5-叔丁基-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-甲腈(55.7g,95％)：1HNMR光谱：(DMSO-d6)1.46(9H,s),6.02(1H,s),8.38(2H,s)；质谱[M-H]-＝242。将水合肼(82mL，1.69mol)添加到在IPA(200mL)中的5-氨基-6-(5-叔丁基-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-甲腈(55g，225.18mmol)，并且将该混合物在50℃下在氮气下加热16小时。在冰浴中冷却混合物。将所得沉淀通过过滤收集，用IPA和二乙醚洗涤并且干燥到恒重，以提供呈黄色固体的(Z)-5-氨基-6-(5-叔丁基-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-甲腙酰胺(49.2g，79％)：1HNMR光谱：(DMSO-d6)1.45(9H,s),5.26(2H,s),5.58(2H,s),7.56(2H,s),8.75(1H,s)；质谱[M+H]+＝277。将O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲脲鎓六氟磷酸盐(74.3g，195.44mmol)添加到N-Boc-异哌啶甲酸(41.1g，179.15mmol)和4-甲基吗啉(35.9mL，325.74mmol)在DMA(800mL)中的溶液里。将该混合物搅拌10分钟，然后将(Z)-5-氨基-6-(5-叔丁基-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-甲腙酰胺(45g，162.87mmol)一次性添加到该溶液里(从22℃到27℃观察到放热)。数分钟后，从反应混合物结晶出产物。从容器中移出反应混合物且经由烧结物过滤。从容器侧面向洗涤产物中再添加DMA(150mL)且将此倾到滤饼上。向容器中添加异丙醇(600mL)且使用剧烈搅拌将容器中产物的剩余部分悬浮于此溶剂中。一旦DMA已通过抽吸去除，则使用异丙醇悬浮液来洗涤滤饼。吸干滤饼，然后用MTBE洗涤且再次吸干。将滤饼在真空中干燥，以提供呈黄色固体的(Z)-叔丁基4-(2-(氨基(5-氨基-6-(5-叔丁基-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)亚甲基)肼羰基)哌啶-1-甲酸酯(76g，95％)：1HNMR光谱：(DMSO-d6)1.40(9H,s),1.46(9H,s),1.63-1.9(2H,m),2.33-2.6(2H,m,因DMSO信号而模糊),2.63-3.03(2H,m),3.18-3.48(4H,m,因水信号而模糊),3.88-4.11(2H,m),6.43(2H,s),7.76(2H,br),8.84(0.5H,s),8.87(0.5H,s),9.85(1H,s)；质谱[M+H]+＝488。在一个替代性制备中，该N-Boc-异哌啶甲酸可以如下原位制造：将异哌啶甲酸(858g，3.74mol)溶解在DMA(25.3L)中并且添加4-甲基吗啉(393mL，3.74mol)。搅拌5min，且添加氯甲酸异丁酯(489mL，3.74mol)。将该反应混合物在25℃下搅拌2h，并且冷却到15℃，然后经10min逐份添加(Z)-5-氨基-6-(5-叔丁基-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-甲腙酰胺(940g，3.4mol)。将该反应混合物在15℃下搅拌1-2h。经1h逐份添加水(20.5L)，并且搅拌另外的1h，随后过滤。然后将滤饼用水(4x4L)洗涤，并且在过滤器上吸干，随后在真空烘箱中在50℃下干燥直到无水，以给出所希望的产物。将乙酸(200mL)添加到在3L固定双包夹套容器中的二噁烷(500mL)中并且将该溶液在氮气下加热到70℃。将(Z)-叔丁基4-(2-(氨基(5-氨基-6-(5-叔丁基-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)亚甲基)肼羰基)-哌啶-1-甲酸酯(74.5g，152.80mmol)逐份添加到温热的混合物中。10分钟后，升高温度到100℃(略微回流)。在100℃下搅拌反应混合物1.5小时(悬浮液)，然后在80℃下静置过夜(在静置过夜之后形成溶液)。在减压下浓缩所得溶液，然后用甲苯稀释，蒸发到干燥，用甲苯吸收且再次浓缩。剩余油与一些乙酸乙酯混合且浓缩到干燥。从溶液结晶的固体用MTBE(200mL)研磨且通过过滤分离。用水和MTBE洗涤滤饼，得到呈灰色固体状的4-(5-(5-氨基-6-(5-叔丁基-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)-1H-1,2,4-三唑-3-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(50g，70％)。在减压下浓缩滤液，得到黄色固体。此物质用MTBE研磨且过滤。将滤饼相继用乙酸乙酯、MTBE洗涤，以给出呈浅黄色固体的第二批(4.93g，7％)。此物质与第一批相同：1HNMR光谱：(DMSO-d6)1.17(9H,s),1.22(9H,s),1.29-1.47(2H,m),1.67-1.78(2H,m),2.57-2.87(3H,m),3.57-3.92(2H,m),7.56(2H,br),8.56(1H,s),13.47(2H,brs)；质谱[M+H]+＝470。