1.一种定向克隆的方法，所述方法包括：
提供靶载体和插入脱氧核糖核酸(DNA)片段；和
在容器中混合所述靶载体、所述插入DNA片段、一定量的限制酶和
一定量的DNA连接酶，以：
在第一温度下切割所述靶载体，和
在第二温度下将所述插入DNA片段的至少一部分连接至所述靶载体，其中所述第一温度与所述第二温度相同或基本相同。
2.根据权利要求1所述的方法，其中将所述插入DNA片段与所述靶载体的所述连接包括将所述插入DNA片段连接至所述靶载体，以产生包括所述靶载体的至少一部分和所述插入DNA片段的所述至少一部分的重组DNA分子。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述重组DNA分子为表达载体。
4.根据权利要求2所述的方法，其中所述插入DNA片段包括所述插入DNA片段的所述至少一部分和包括所述限制酶的识别位点的DNA序列。
5.根据权利要求2所述的方法，还包括：
在所述第一温度下切割所述插入DNA片段以产生所述插入片段的所述至少一部分。
6.根据权利要求2所述的方法，其中当混合所述靶载体、所述插入DNA片段、所述一定量的限制酶、所述一定量的DNA连接酶的时候，所述容器中的所述靶载体分子基本上为闭环质粒。
7.根据权利要求1所述的方法，其中对所述靶载体、所述插入DNA片段、所述一定量的限制酶、所述一定量的DNA连接酶的所述混合包括在单一容器内混合所述靶载体、所述插入DNA片段、所述一定量的限制酶、所述一定量的DNA连接酶。
8.根据权利要求1所述的方法，对所述靶载体、所述插入DNA片段、所述一定量的限制酶、所述一定量的DNA连接酶的所述混合包括在单一容器内混合所述靶载体、所述插入DNA片段、所述一定量的限制酶、所述一定量的DNA连接酶持续约5分钟至约20分钟的时间段。
9.根据权利要求1所述的方法，其中所述限制酶包括II型限制酶。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述II型限制酶可以包括BsaI、BbsI、BsmBI、AarI、Alw26I或LguI的至少一种。
11.根据权利要求1所述的方法，其中所述DNA连接酶包括T4DNA连接酶或大肠杆菌DNA连接酶的至少一种。
12.根据权利要求1所述的方法，其中所述插入DNA片段包括聚合酶链式反应(PCR)产物。
13.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一温度为约16℃至约37℃的温度。
14.根据权利要求1所述的方法，还包括：
提供附加插入DNA片段，其中在所述第一温度下，在所述容器中对所述靶载体、所述插入片段、所述一定量的限制酶和所述一定量的DNA连接酶进行所述混合以切割所述靶细胞，在所述第二温度下，将所述插入DNA片段的所述至少一部分连接至所述靶细胞，其包括：
在所述容器中混合所述靶载体、所述插入DNA片段、所述附加插入DNA片段、所述一定量的所述限制酶和所述一定量的所述DNA连接酶，以：
在第一温度下切割所述靶载体，和
在所述第二温度下将所述插入DNA片段的所述至少一部分和所述附加插入DNA片段的至少一部分连接至所述靶载体。