本发明涉及一种具有抗肿瘤活性的化合物。具体而言，本发明涉及通式(I)化合物及其制备方法，还涉及通式(I)化合物在抗肿瘤方面的用途。
背景技术：
氨基二硫代甲酸酯类化合物具有广泛的生物活性，特别是抗肿瘤活性。例如李润涛等人在中国发明专利申请CN200410054686.9中公开了此类化合物的通式：
其中，R2选自-(CH2)n-R3、-CH2-R4、-(CH2)m-COR5或-(CH2)m-COCO2R6。
本发明的发明人经过大量的实验研究，在上述通式的基础之上进行不断的优化和改造，发现了一类具有抗肿瘤活性的新型氨基二硫代甲酸(氨磺酰基)乙酯类化合物。
技术实现要素：
在本发明的第一方面，提供了具有通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
其中，R、R1、R2和R3满足下述A和B两种情形之一：
(A)R选自于由氢、烷基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂环基、杂环基烷基、卤代烷基和硫烷基所组成的组；
R1、R2和R3各自独立地选自于由氢、烷基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂环基、杂环基烷基、烷氧基、环烷氧基、芳基氧基、烷基硫基、环烷基硫基、芳基硫基、烷氧基羰基、芳基氧基羰基、氨磺酰基、酰基、硫代酰基、酰基氧基、酰胺基、脲基、亚硫酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、氨基、卤代烷基、氨甲酰基、卤素、氰基、异氰基、硝基、亚硝基、硫氰基、异硫氰基、酰肼基、硫烷基、磺基和甲硅烷基所组成的组，上述基团任选被一个或多个取代基所取代，上述取代基各自独立地选自于由烷基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂环基、杂环基烷基、烷氧基、环烷氧基、芳基氧基、烷基硫基、环烷基硫基、芳基硫基、烷氧基羰基、芳基氧基羰基、酰基、硫代酰基、酰基氧基、酰胺基、脲基、亚硫酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、卤代烷基、氨甲酰基、卤素、氰基、异氰基、硝基、亚硝基、硫氰基、异硫氰基、酰肼基、硫烷基、磺基和甲硅烷基所组成的组；或者R1、R2和R3连同它们所连接的碳原子共同形成环烷基、芳基、杂芳基或杂环基，上述环烷基、芳基、杂芳基或杂环基上任选具有一个或多个取代基，上述取代基各自独立地选自于由烷基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂环基、杂环基烷基、烷氧基、环烷氧基、芳基氧基、烷基硫基、环烷基硫基、芳基硫基、烷氧基羰基、芳基氧基羰基、酰基、硫代酰基、酰基氧基、酰胺基、脲基、亚硫酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、卤代烷基、氨甲酰基、卤素、氰基、异氰基、硝基、亚硝基、硫氰基、异硫氰基、酰肼基、硫烷基、磺基和甲硅烷基所组成的组；或者
(B)R1和R2均为氢，R3和R连同它们分别所连接的碳原子和氮原子共同形成五元、六元或七元的杂环基，上述杂环基任选具有一个或多个取代基，上述取代基各自独立地选自于由烷基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂环基、杂环基烷基、烷氧基、环烷氧基、芳基氧基、烷基硫基、环烷基硫基、芳基硫基、烷氧基羰基、芳基氧基羰基、酰基、硫代酰基、酰基氧基、酰胺基、脲基、亚硫酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、杂芳基磺酰基、稠合苯环、稠合杂芳环、卤代烷基、氨甲酰基、卤素、氰基、异氰基、硝基、亚硝 基、硫氰基、异硫氰基、酰肼基、硫烷基、磺基和甲硅烷基所组成的组，上述稠合苯环、稠合杂芳环任选进一步被烷基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、杂环基、杂环基烷基、烷氧基、环烷氧基、芳基氧基、烷基硫基、环烷基硫基、芳基硫基、烷氧基羰基、芳基氧基羰基、酰基、硫代酰基、酰基氧基、酰胺基、脲基、亚硫酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、杂芳基磺酰基、稠合苯环、稠合杂芳环、卤代烷基、氨甲酰基、卤素、氰基、异氰基、硝基、亚硝基、硫氰基、异硫氰基、酰肼基、硫烷基、磺基和甲硅烷基取代。
在优选的实施方式中，所述化合物具有下式(II)所示的结构或下式(III)所示的结构：
其中，R4表示苯环上任选存在的取代基，所述取代基如上一段落中所定义；
n为选自0-5的整数，m为选自0、1、2的整数；或者
在本发明的第二方面，提供一种药物组合物，所述药物组合物包含：本发明第一方面所述化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；以及药学上可接受的载体。
在本发明的第三方面，制备上述通式(I)化合物的方法，该方法包括如下步骤：
(1)在无水磷酸盐的存在下，将3-氨基吡啶与二硫化碳反应，生成吡啶-3-基甲基氨基二硫代甲酸盐；优选地，所述无水磷酸盐为无水磷酸钾；
(2)在有机碱、优选三乙胺的存在下，将式(M)的原料与2-氯乙烷磺酰氯反应，生成式(Q)的中间体；
(3)将步骤(1)得到的吡啶-3-基甲基氨基二硫代甲酸盐与步骤(2)得到的式(Q)的中间体反应，得到权利要求1-6中任一项所述的化合物；
其中，R、R1、R2和R3如本发明第一方面中所定义。
在本发明的第四方面，提供了上述通式(I)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物在制备用于抗肿瘤的药物方面的用途。
在本发明第四方面的优选实施方式中，所述肿瘤选自于由肺癌、乳腺癌、肝癌、胃癌、宫颈癌、结肠癌和上皮癌所组成的组。
具体实施方式
本发明中使用的术语“烷基”是指仅由碳原子和氢原子组成、且不具有不饱和度(例如双键、三键或环)的基团，其涵盖了各种可能的几何异构基团与立体异构基团。该基团通过单键与分子的其余部分相连。作为烷基的非限制性实例，可以列举以下直链或支链的基团：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基及其另外七种异构体、正己基及其另外十六种异构体、正庚基及其各种异构体、正辛基及其各种异构体、正壬基及其各种异构体、正癸基及其各种异构体。
本发明中使用的术语“环烷基”是指由至少3个碳原子组成的饱和非芳香环系，该环系可以是单环、双环、多环，也可以是稠环、桥环、螺环。作为环烷基的非限制性实例，可以列举以下基团：环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基；以及由两个或多个上述单环通过公共边和公共碳原子形成的稠环、桥环或螺环基团。
本发明中使用的术语“烯基”是指在上述烷基基团中(除甲基外)存在一个或多个双键的情况下所形成的基团。
本发明中使用的术语“环烯基”是指在上述环烷基基团中存在一个或多个双键的情况下所形成的基团。
本发明中使用的术语“炔基”是指在上述烷基基团中(除甲基外) 存在一个或多个叁键的情况下所形成的基团。
本发明中使用的术语“烷氧基”是指氧原子与上述烷基相连、并且通过该氧原子以单键连接至分子其余部分的基团，其涵盖了各种可能的几何异构基团与立体异构基团。作为烷氧基的非限制性实例，可以列举以下直链或支链的基团：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基及其另外七种异构体、正己氧基及其另外十六种异构体、正庚氧基及其各种异构体、正辛氧基及其各种异构体、正壬氧基及其各种异构体、正癸氧基及其各种异构体。
本发明中使用的术语“芳基”是指由至少6个碳原子组成的芳香环系，该环系可以是单环、双环、多环，其中双环和多环可以由单环通过单键连接方式或稠合方式形成。作为芳基的非限制性实例，可以列举以下基团：苯基、萘基、蒽基、菲基、茚基、芘基、苝基、薁基、戊搭烯基、庚搭烯基、苊基、芴基、非那烯基、萤蒽基、醋菲烯基、苯并苊基、三亚苯基、基、并四苯基、苉基、戊芬基、并五苯基、四邻亚苯基、己芬基、并六苯基、蔻基、三亚萘基、庚芬基、并七苯基、吡蒽基、卵苯基、联苯基、联萘基。
本发明中使用的术语“杂芳基”是指具有一个或多个独立地选自N、O或S的杂原子的5-14元芳香族杂环环系，该环系可以是单环、双环、多环，其中双环和多环可以由单环通过单键连接方式或稠合方式形成。作为杂芳基的非限制性实例，可以列举以下基团：噁唑基、异噁唑基、咪唑基、呋喃基、吲哚基、异吲哚基、吡咯基、三唑基、三嗪基、四唑基、噻吩基、噻唑基、异噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、苯并吡喃基、咔唑基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、噌啉基、萘啶基、蝶啶基、嘌呤基、喹噁啉基、噻二唑基、吲哚嗪基、吖啶基、吩嗪基、酞嗪基、香豆素基、吡唑并吡啶基、吡啶并哒嗪基、吡咯并吡啶基、咪唑并吡啶基、吡唑并哒嗪基；以及由上述杂芳基通过单键连接方式或稠合方式形成的基团。
本发明中使用的术语“杂环基”是指由碳原子和独立选自N、O或S的杂原子组成的非芳香族3-15元环系，该环系可以是单环、双环或多环， 也可以是稠环、桥环、螺环，并且可以任选地包含一个或多个双键。作为杂环基的非限制性实例，可以列举以下基团：氮杂基、吖啶基、苯并间二氧杂环戊烯基、苯并二氧杂环己基、苯并二氢吡喃基、二氧戊环基、二氧磷杂环戊基、十氢异喹啉基、茚满基、吲哚啉基、异吲哚啉基、异苯并二氢吡喃基、异噻唑烷基、异噁唑烷基、吗啉基、噁唑啉基、噁唑烷基、噁二唑基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、2-氧代氮杂基、八氢吲哚基、八氢异吲哚基、全氢化氮杂基、哌嗪基、4-哌啶酮基、哌啶基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、奎宁环基、四氢异喹啉基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢吡咯基、噻唑啉基、噻唑烷基、硫代吗啉基、硫代吗啉基亚砜和硫代吗啉基砜。
本发明中使用的术语“芳基烷基”是指一个或多个氢原子被芳基独立取代的烷基，其中所述的芳基和烷基如上文所定义。
本发明中使用的术语“杂芳基烷基”是指一个或多个氢原子被杂芳基独立取代的烷基，其中所述的杂芳基和烷基如上文所定义。
本发明中使用的术语“卤素”或“卤代”是指氟、氯、溴或碘。
本发明中的药物组合物含有本发明第一方面所述的化合物作为活性成分。此外，该药物组合物还可包含药学上可接受的载体，包括但不限于：水、盐溶液、醇、聚乙二醇、多羟基乙氧基化的蓖麻油、花生油、橄榄油、明胶、乳糖、石膏粉、蔗糖、糊精、碳酸镁、糖、环糊精、直链淀粉、硬脂酸镁、滑石、明胶、琼脂、果胶、阿拉伯胶、硬脂酸或纤维素低烷基醚、硅酸、脂肪酸、脂肪酸胺、脂肪酸单甘油酯和二甘油酯、季戊四醇脂肪酸醚、聚氧乙烯、羟甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。该药物组合物还可包含一种或多种药学上可接受的辅助剂、润湿剂、乳化剂、悬浮剂、防腐剂、渗透压调节剂、缓冲剂、甜味剂、矫味剂、着色剂或上述的任意组合。
本发明的药物组合物可以制成任何形式的制剂，例如胶囊剂、片剂、气雾剂、溶液剂、悬浮剂、糖衣剂、锭剂、糖浆剂、乳剂、软膏剂、膏剂、注射剂、散剂、颗粒剂、糊剂、缓释剂、泡沫剂。根据给药途径，本发明的药物可以制成口服给药制剂、鼻部给药制剂、肺部给药制剂、 口腔含化制剂、皮下给药制剂、皮内给药制剂、经皮给药制剂、胃肠外给药制剂、直肠给药制剂、储库式给药制剂、静脉内给药制剂、尿道内给药制剂、肌内给药制剂、鼻内给药制剂、眼部给药制剂、硬膜外给药制剂或局部给药制剂。
本发明中的“癌症”包括本领域中已知的各种癌症，包括但不限于：肺癌、肝癌、胃癌、宫颈癌、结肠癌、乳腺癌、白血病、非小细胞癌、前列腺癌或累色素瘤、脑癌、皮肤癌、骨癌、淋巴癌、鼻咽癌、喉癌、食道癌、十二指肠癌、小肠癌、大肠癌、胰腺癌、肾癌、生殖器官癌、甲状腺癌。
实施例
接下来，通过实施例进一步对本发明进行详细的说明，但本发明不仅限于这些实施例。
在一个示例性的实施方式中，本发明的化合物通过以下方法进行合成，其中各取代基如通式(I)中所定义。
在一个示例性的合成方法中，将3-氨基吡啶溶于二氯甲烷中，加入无水磷酸钾，小心滴加二硫化碳。反应30min后，停止反应，旋蒸除去过量未反应的二硫化碳及溶剂待用。另取一反应瓶加入上式中的原料M、三乙胺，在冰浴下小心滴加2-氯乙烷磺酰氯。反应30min，再与上述得到的待用体系混合，室温下继续反应6h，停止反应。将反应体系加入水中，用二氯甲烷萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析分离，得泡沫状固体，加入少量乙酸乙酯采用冷热法重结晶得产物。
实施例1：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-{2-(N-丙基氨基)磺酰基}乙酯
将3-氨甲基吡啶(0.51mL，5mmol)溶于20mL二氯甲烷中，加入无水磷酸钾(2.12g，10mmol)，10分钟后再小心滴加二硫化碳(0.75mL，12.5mmol)。反应30min后，停止反应，旋蒸除去过量未反应的二硫化碳及溶剂待用。另取一反应瓶加入丙胺(0.41mL，5mmol)、三乙胺(2.50mL，20mmol)，在冰浴下小心滴加2-氯乙烷磺酰氯(0.52mL，5mmol)。反应30min，再与上述得到的待用体系混合，室温下继续反应6h，停止反应。将反应体系加入水(30mL)中，用二氯甲烷(30mL×3)萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，硅胶柱层析分离(P:E＝1:1至P:E＝1:3)，得泡沫状固体，加入少量乙酸乙酯采用冷热法进行重结晶，得白色固体0.56g，收率33.6％，熔点73-74℃。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.41(s,1H),8.32(s,1H),7.63(m,1H),7.23(m,1H),4.86(d,2H,J＝5.4Hz),3.52(m,2H),3.35(m,2H),3.01(m,2H),1.52(m,2H),0.86(t,3H,J＝7.4Hz).
13C NMR(100MHz,CDCl3):δ196.93,149.03,148.44,136.60,132.72,123.86,51.39,48.09,45.09,28.58,23.52,11.26
HRMS(ESI):calcd for C12H20N3O2S3；m/z([M+H]+)334.07050
实施例2：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-{2-(N,N-二乙基氨基)磺酰基}乙酯
参照实施例1，用二乙胺代替丙胺，得白色固体，产率48.0％，熔点88-90℃。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.45(m,2H),7.74(m,1H),7.28(m,1H),4.91(m,2H),3.69(m,4H),1.21(m,6H)
13C NMR(100MHz,CDCl3):δ180.69,149.07,148.76,135.76,123.63,110.00,66.30,47.28,47.07,45.38,12.73
HRMS(ESI):calcd for C13H22N3O2S3；m/z([M+H]+)348.08609
实施例3：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-{2-(环己胺基)磺酰基}乙酯
参照实施例1，用环己胺代替丙胺，得淡黄色固体，产率38.0％，熔点136-137℃。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.37(m,2H),7.64(d,1H,J＝7.8Hz),7.21(m,1H),4.86(s,2H),3.55(m,2H),3.34(m,2H),1.96(m,2H),1.64(m,1H),1.06(m,4H),0.78(m,3H)
13C NMR(100MHz,CDCl3):δ195.99,148.19,147.67,135.43,131.58,122.77,52.07,47.14,33.58,32.11,27.80,24.18,23.88
HRMS(ESI):calcd for C15H24N3O2S3；m/z([M+H]+)374.10252
实施例4：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-(2-对氰基苄胺基磺酰基)乙酯
参照实施例1，用对氰基苄胺代替丙胺，得白色固体，产率24.0％，熔点66-69℃。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.50(m,2H),7.77(m,2H),7.69(m,1H),7.58(m,2H),7.37(m,1H),4.86(d,2H,J＝5.5Hz),4.62(s,2H),3.56(m,2H),3.39(m,2H)
13C NMR(100MHz,CDCl3):δ196.09,149.08,148.47,145.41,143.65,135.51,132.28,129.82,123.50,118.73,109.83,47.48,42.23,37.61
HRMS(ESI):calcd for C17H19N4O2S3；m/z([M+H]+)407.06646
实施例5：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-(2-对氟苯胺基磺酰基)乙酯
参照实施例1，用对氟苯胺代替丙胺，得白色固体，产率18.3％，熔点59-61℃。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.55(s,2H),8.47(m,1H),7.70(d,1H,J＝ 7.8Hz),7.28(m,5H),7.04(m,2H),4.92(d,2H,J＝4.8Hz),3.66(m,2H),3.48(m,2H)
13C NMR(100MHz,CDCl3):δ196.74,149.08,148.79,136.53,132.30,124.13,124.04,123.89,116.50,116.27,50.98,48.25,28.64
HRMS(ESI):calcd for C15H17FN3O2S3；m/z([M+H]+)386.04614
实施例6：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-2-(3,4-二氟苄胺基磺酰基)乙酯
参照实施例1，用3,4-二氟苄胺代替丙胺，得白色固体，产率37.7％，熔点156-156℃。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.50(m,2H),7.94(m,1H),7.70(d,1H,J＝9.6Hz),7.39(m,2H),7.22(m,1H),4.85(d,2H,J＝5.5Hz),4.19(d,2H,J＝6.2Hz),3.49(m,2H),3.34(m,2H)
13C NMR(100MHz,CDCl3):δ196.03,149.07,148.47,135.51,132.72,124.32,123.51,117.45,117.27,116.60,116.43,51.03,47.26,44.80,27.81
HRMS(ESI):calcd for C16H18F2N3O2S3；m/z([M+H]+)418.05237
实施例7：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-2-(2,6-二氟苯胺基磺酰基)乙酯
参照实施例1，用2,6-二氟苯胺代替丙胺，得棕黄色液体，产率11.8％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.39(m,2H),7.61(m,1H),7.12(m,2H),6.83(m,2H),4.79(s,2H),3.63(m,2H),3.51(m,2H)
13C NMR(100MHz,CDCl3):δ196.92,158.89,149.06,148.82,136.78,132.89,128.50,123.95,113.67,112.21,53.37,48.05,28.57
HRMS(ESI):calcd for C15H16F2N3O2S3；m/z([M+H]+)404.03660
实施例8：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-2-(2,6-二氯苯胺基磺酰基)乙酯
参照实施例1，用2,6-二氯苯胺代替丙胺，得棕红色液体，产率12.0％。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.47(m,2H),7.69(m,2H),7.28(m,3H),7.10(m,1H),4.89(d,2H,J＝5.1Hz),4.15(m,2H),3.63(m,2H),3.60(m,2H)
13C NMR(100MHz,CDCl3):δ196.29,149.03,148.51,136.40,134.80,133.61,130.54,125.91,123.71,122.09,60.35,20.95,14.10
HRMS(ESI):calcd for C15H16Cl2N3O2S3；m/z([M+H]+)435.97762
实施例9：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-(2-邻氯苯胺基磺酰基)乙酯
参照实施例1，用2-氯苯胺代替丙胺，得白色固体，产率13.5％。熔点96-98℃。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.51(m,2H),7.68(d,1H,J＝7.8Hz),7.51(m,2H),7.37(m,2H),7.27(m,1H),4.84(d,2H,J＝5.4Hz),3.62(m,2H),3.48(m,2H)
13C NMR(100MHz,DMSO-d6):δ196.42,149.56,148.97,135.99,134.22,133.19,130.43,129.47,128.36,128.16,128.09,124.00,52.83,47.77,28.30
HRMS(ESI):calcd for C15H17ClN3O2S3；m/z([M+H]+)402.01659
实施例10：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-(2-间溴苯胺基磺酰基)乙酯
参照实施例1，用3-溴苯胺代替丙胺，得白色絮状固体，产率32.6％，熔点59-61℃。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.43(m,2H),7.61(m,1H),7.38(m,2H),7.13(m,3H),4.86(m,2H),3.43(m,2H),3.21(m,2H)
13C NMR(100MHz,CDCl3):δ195.55,147.85,147.56,137.37,135.73, 131.10,129.99,127.09,126.50,123.00,122.03,117.76,47.24,45.38,20.07
HRMS(ESI):calcd for C15H17ClN3O2S3；m/z([M+H]+)445.06600
实施例11：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-(2-对溴苯胺基磺酰基)乙酯
参照实施例1，用4-溴苯胺代替丙胺，得白色固体，产率28.6％，熔点66-68℃。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.47(m,2H),8.15(m,1H),7.63(m,2H),7.37(m,2H),7.09(m,2H),4.88(d,2H,J＝5.4Hz),3.43(m,2H),3.17(t,2H,J＝6.7Hz)
13C NMR(100MHz,CDCl3):δ195.62,148.28,147.95,135.60,134.79,132.02,131.75,122.93,122.00,121.17,48.34,47.30,28.68
HRMS(ESI):calcd for C15H17BrN3O2S3；m/z([M+H]+)445.96608
实施例12：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-2-(N-甲基对硝基苯胺基磺酰基)乙酯
参照实施例1，用N-甲基对硝基苯胺代替丙胺，得黄色固体，产率50.1％，熔点119-121℃。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.50(m,2H),8.25(m,2H),7.68(m,3H),7.37(m,1H),4.82(d,2H,J＝5.5Hz),3.65(m,2H),3.51(m,2H),2.51(s,3H)
13C NMR(100MHz,DMSO-d6):δ195.74,149.06,148.47,147.08,144.41,135.22,132.63,124.45,124.40,123.48,49.75,47.33,37.29,27.47
HRMS(ESI):calcd for C16H19N4O4S3；m/z([M+H]+)427.05629
实施例13：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-(2-(2-甲基-6-硝基苯胺基)磺酰基)乙酯
参照实施例1，用2-甲基-6-硝基苯胺代替丙胺，得白色固体，产率50.1％，熔点68-69℃。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.44(m,2H),8.29(m,1H),8.28(m,1H),7.62(m,2H),7.30(m,1H),7.19(m,1H),7.06(m,1H),4.82(d,2H,J＝5.3Hz),3.58(m,2H),3.56(m,2H),2.24(s,3H)
13C NMR(100MHz,CDCl3):δ195.45,148.74,147.19,146.03,134.95,133.74,130.75,128.56,125.00,122.86,119.35,115.74,51.39,47.33,27.57,17.70
HRMS(ESI):calcd for C16H19N4O4S3；m/z([M+H]+)427.05629
实施例14：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-(2-(2,4-二甲基苯胺基)磺酰基)乙酯
参照实施例1，用2,4-二甲基苯胺代替丙胺，得白色固体，产率22.1％，熔点111-113℃。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.53(m,1H),8.42(s,1H),8.37(m,1H),7.60(d,1H,J＝7.9Hz),7.24(m,1H),6.90(m,2H),4.82(d,2H,J＝5.1Hz),3.59(m,2H),3.43(m,2H),2.24(s,3H),2.21(s,3H)
13C NMR(100MHz,CDCl3):δ195.76,148.23,147.87,135.42,135.34,131.30,131.19,130.91,130.68,126.70,123.17,122.76,50.87,47.19,27.67,19.84,17.27
HRMS(ESI):calcd for C17H22N3O2S3；m/z([M+H]+)396.08687
实施例15：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-(2-苯乙胺基磺酰基)乙酯
参照实施例1，用苯乙胺代替丙胺，得黄色固体，产率27.0％，熔点 85-87℃。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.52(m,2H),8.11(s,1H),7.71(d,1H,J＝7.7Hz),7.28(m,5H),4.95(d,2H,J＝5.1Hz),3.57(dd,2H,J＝9.1,6.0Hz),3.45(dd,2H,J＝13.2,6.7Hz),3.36(dd,2H,J＝9.1,6.0Hz),2.93(t,2H,J＝6.9Hz)
13C NMR(100MHz,CDCl3):δ196.93,149.38,149.21,137.76,136.22,132.05,128.93,128.87,126.94,123.79,51.58,48.32,44.51,36.56,28.75
HRMS(ESI):calcd for C17H22N3O2S3；m/z([M+H]+)396.0868
实施例16：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-(2-均三甲基苯胺基磺酰基)乙酯
参照实施例1，用均三甲基苯胺代替丙胺，得白色固体，产率20.0％，熔点91-94℃。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.58(m,2H),7.75(d,1H,J＝7.7Hz),7.43(m,1H),6.94(m,2H),4.99(d,2H,J＝5.3Hz),3.68(m,2H),3.51(m,2H),2.33(s,6H),2.26(s,3H)
13C NMR(100MHz,CDCl3):δ196.04,149.07,148.46,137.11,136.24,135.51,132.73,130.97,128.90,123.50,53.63,47.26,27.99,20.72,18.90
HRMS(ESI):calcd for C18H24N3O2S3；m/z([M+H]+)410.10252
实施例17：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-(2-对甲基苯胺基磺酰基)乙酯
参照实施例1，用对甲基苯胺代替丙胺，得白色晶体，产率7.6％，熔点108-110℃。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.41(s,1H),8.36(m,1H),8.05(s,1H),7.60(m,1H),7.09(m,4H),4.79(s,2H),3.55(dd,2H,J＝8.6,6.0Hz),3.37(dd,2H,J＝8.6,6.0Hz),2.22(s,3H)
13C NMR(100MHz,CDCl3):δ195.76,148.08,147.65,135.50,134.31, 132.89,129.85,129.09,124.68,120.83,49.83,47.13,27.60,19.85
HRMS(ESI):calcd for C16H20N3O2S3；m/z([M+H]+)382.07122
实施例18：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-(2-二苯胺基磺酰基)乙酯
参照实施例1，用二苯胺代替丙胺，得淡黄色固体，产率14.0％，熔点139-140℃。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.42(m,2H),8.24(m,1H),7.61(d,1H,J＝7.8Hz),7.19(m,10H),4.83(s,2H),3.89(m,2H),3.71(m,2H)
13C NMR(100MHz,CDCl3):δ196.14,143.96,149.13,143.96,141.17,136.39,130.88,130.45,130.02,130.02,127.86,54.40,48.37,28.17
HRMS(ESI):calcd for C21H22N3O2S3；m/z([M+H]+)444.08647
实施例19：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-(2-α-萘胺基磺酰基)乙酯
参照实施例1，用α-萘胺代替丙胺，得淡黄色固体，产率13.2％，熔点142-146℃。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.50(m,2H),8.31(m,1H),7.95(d,1H,J＝7.6Hz),7.84(d,1H,J＝8.1Hz),7.67(d,1H,J＝7.8Hz),7.56(m,4H),7.36(m,1H),4.85(d,2H,J＝5.3Hz),3.65(dd,2H,J＝9.7,5.2Hz),3.51(d,2H,J＝9.6,5.3Hz)
13C NMR(100MHz,CDCl3):δ196.43,149.58,148.95,136.01,134.45,133.19,133.00,130.08,128.51,127.22,126.84,126.80,126.14,123.98,123.80,123.61,51.95,47.79,28.40
HRMS(ESI):calcd for C19H20N3O2S3；m/z([M+H]+)418.07122
实施例20：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-(2-邻甲氧基苄胺基磺酰基)乙酯
参照实施例1，用2-甲氧基苄胺代替丙胺，得淡黄色固体，产率29.2％，熔点117-119℃。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.36(m,2H),7.59(d,1H,J＝7.7Hz),7.20(m,2H),6.91-6.77(m,3H),4.82(s,2H),3.45(dd,2H,J＝13.0,6.2Hz),3.21(m,2H)
13C NMR(100MHz,CDCl3):δ196.95,157.44,149.33,148.91,136.27,132.36,129.86,129.66,124.91,123.71,120.81,110.54,55.41,52.16,48.15,43.65,28.63
HRMS(ESI):calcd for C17H22N3O2S3；m/z([M+H]+)412.08267
实施例21：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-(2-苄胺基磺酰基)乙酯
参照实施例1，用苄胺代替丙胺，得白色针状固体，产率19.2％，熔点129-131℃。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.84(m,2H),8.40(d,1H,J＝8.0Hz),8.00(dd,1H,J＝7.8,5.7Hz),7.91(t,1H,J＝6.2Hz),7.34(m,4H),4.98(d,2H,J＝5.4Hz),4.18(d,2H,J＝6.1Hz),3.50(dd,2H,J＝9.4,5.9Hz),3.28(dd,2H,J＝9.3,6.0Hz)
13C NMR(100MHz,DMSO-d6):δ196.95,143.91,141.71,141.44,138.18,136.72,128.34,127.63,127.22,126.58,50.94,46.43,45.94,27.96
HRMS(ESI):calcd for C16H20N3O2S3；m/z([M+H]+)382.07045
实施例22：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-{2-[(4-氟苄胺基)磺酰基]}乙酯
参照实施例1，用对氟苄胺代替丙胺，得到白色固体，产率67％， 熔点133-134℃。
1H NMR(400MHz,DMSO):δ3.27-3.31(m,2H),3.46-3.50(m,2H),4.16(s,2H),4.84(s,2H),7.14-7.18(m,1H),7.36-7.40(m,3H),7.69-7.71(m,1H),8.46-8.51(m,2H).
13C NMR(100MHz,DMSO):δ28.29,45.58,47.58,51.55,115.48,115.69,124.04,130.09,130.18,133.24,134.88,136.04,148.91,149.45,163.08,196.50.
Anal.Cald for C16H18FN3O2S3:C,48.10；H,4.54；N,10.52；Found:C,47.93；H,4.48；N,10.33.
实施例23：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-{2-[(3,4-二氯苄胺基)磺酰基]}乙酯
参照实施例1，用3,4-二氯苄胺代替丙胺，得到白色固体，产率72％，熔点145-146℃。
1H NMR(400MHz,DMSO):δ3.33-3.36(m,2H),3.49-3.51(m,2H),4.18(s,2H),4.84(s,2H),7.32-7.39(m,2H),7.58-7.70(m,3H),8.47-8.51(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO):δ28.27,45.02,47.57,51.45,124.06,128.36,129.93,130.22,131.02,131.41,133.23,136.05,140.14,148.92,149.45,196.44.
Anal.Cald for C16H17Cl2N3O2S3:C,42.66；H,3.80；N,9.33；Found:C,42.59；H,4.08；N,9.06.
实施例24：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-{2-[(4-甲氧基苄胺基)磺酰基]}乙酯
参照实施例1，用4-甲氧基苄胺代替丙胺，得到白色固体，产率51％，熔点136-138℃。
1H NMR(400MHz,DMSO):δ3.23-3.27(m,2H),3.45-3.49(m,2H),4.12(s,2H),4.86(s,2H),6.88-6.19(m,2H),7.25-7.39(m,3H),7.68-7.77(m,2H), 8.49-8.52(m,2H),10.62(bs,1H).
13C NMR(100MHz,DMSO):δ28.34,45.98,47.76,55.56,114.25,124.00,129.51,130.48,133.23,136.01,148.96,149.56,159.00,196.60.
Anal.Cald for C17H21N3O3S3:C,49.61；H,5.14；N,10.21；Found:C,49.52；H,5.08；N,10.21.
实施例25：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-{2-[(2-呋喃甲胺基)磺酰基]}乙酯
参照实施例1，用2-呋喃甲胺代替丙胺，得到白色固体，产率51％，熔点135-137℃。
1H NMR(400MHz,DMSO):δ3.22-3.26(m,2H),3.43-3.45(m,2H),4.17(s,2H),4.83(s,2H),6.32-6.40(m,2H),7.36-7.40(m,2H),7.36-7.39(m,1H),7.59-7.70(m,2H),8.47-8.50(m,2H).
13C NMR(100MHz,DMSO):δ28.22,40.53,47.56,51.71,99.92,108.44,111.05,124.04,136.03,143.09,148.90,149.44,151.58,196.47.
HRMS(ESI+)m/z calcd for C14H17N3O3S3(M+H)+,372.0432,found372.0508.
实施例26：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-{2-[(3-吡啶甲胺基)磺酰基]}乙酯
参照实施例1，用3-吡啶甲胺代替丙胺，得到白色固体，产率40％，熔点163-164℃。
1H NMR(400MHz,DMSO):δ3.34-3.54(m,4H),4.23(s,2H),4.85(s,2H),7.37-7.40(m,2H),7.69-7.93(m,3H),8.49-8.53(m,4H),10.64(bs,1H).
13C NMR(100MHz,DMSO):δ28.36,44.02,47.77,51.46,123.97,124.01,133.23,134.33,135.98,136.03,148.95,149.41,149.56,196.58.
Anal.Cald for C15H18N4O2S3:C,47.10；H,4.74；N,14.65；Found:C,47.34；H,4.86；N,14.67.
实施例27：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-[2-(苯胺基磺酰基)]乙酯
参照实施例1，用苯胺代替丙胺，得到白色固体，产率57％，熔点117-118℃。
1H NMR(400MHz,DMSO):δ3.34-3.54(m,4H),4.23(s,2H),4.85(s,2H),7.37-7.40(m,2H),7.69-7.93(m,3H),8.49-8.53(m,4H),10.64(bs,1H).
13C NMR(100MHz,DMSO):δ28.15,47.73,50.93,120.38,123.98,124.41,129.71,133.17,135.96,138.36,148.95,149.54,196.31.
HRMS(ESI+)m/z calcd for C15H17N3O2S3(M+H)+,368.0483,found368.0565.
实施例28：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-[2-[N-(喹啉-8-基)氨基磺酰基]]乙酯
参照实施例1，用8-氨基喹啉代替丙胺，得到淡黄色固体，产率13％，熔点108-109℃。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝3.53-3.56(m,4H),4.73(d,J＝5.60Hz,2H),7.14-7.18(m,1H),7.43-7.50(m,2H),7.55(d,J＝8.00Hz,2H),7.80(dd,J＝1.20,7.60Hz,1H),8.16(dd,J＝1.60,8.00Hz,1H),8.33(s,1H),8.78(dd,J＝1.60,8.40Hz,1H),8.93(t,J＝4.80Hz,2H),9.05(s,1H).
13C NMR(100MHz,CDCl3):δ＝28.39,48.08,50.79,115.12,122.26,122.76,123.78,127.01,128.42,132.39,133.73,136.30,136.47,138.70,148.73,149.01,149.15,196.40.
HRMS(ESI+)m/z Calcd for C18H19N4O2S3(M+H)+:419.06701,Found:419.06713.
实施例29：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-[2-[N-(4-(吗啉-1-基)苯基)氨基磺酰基]]乙酯
参照实施例1，用4-(4-吗啉基)苯胺代替丙胺，得到白色固体，产率10％，熔点147-148℃。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝3.05(t,J＝4.40Hz,4H),3.28-3.32(m,2H),3.50-3.54(m,2H),3.72(t,J＝4.40Hz,4H),4.82(d,J＝5.60Hz,2H),6.90(d,J＝9.20Hz,2H),7.13(d,J＝8.80Hz,2H),7.36-7.39(m,1H),7.68(d,J＝7.60Hz,1H),8.48-8.51(m,2H),9.55(s,1H),10.61(t,J＝5.20Hz,1H).
13C NMR(100MHz,DMSO-d6):δ＝27.22,47.25,48.58,50.01,66.05,115.68,123.18,123.54,128.99,132.76,135.63,148.34,148.49,148.94,195.92.
HRMS(ESI+)m/z Calcd for C19H25N4O3S3(M+H)+:453.10888,Found:453.10870.
实施例30：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-[2-[N-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基]氨基磺酰基]]乙酯
参照实施例1，用3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯胺代替丙胺，得到淡黄色固体，产率49％，熔点67-68℃。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝3.45(t,J＝7.20Hz,2H),3.64(t,J＝7.20Hz,2H),4.90(d,J＝5.20Hz,2H),5.20(s,2H),6.90(d,J＝9.20Hz,1H),7.15(dd,J＝2.40,8.80Hz,1H),7.22-7.25(m,2H),7.42(d,J＝2.40Hz,1H),7.61(d,J＝7.60Hz,1H),7.66(d,J＝7.60Hz,1H),7.23-7.77(m,1H),8.29(s,1H),8.44(d,J＝4.40Hz,1H),8.54(t,J＝5.20Hz,2H),8.73(t,J＝5.20Hz,1H).
13C NMR(100MHz,CDCl3):δ＝28.85,48.42,51.26,71.67,114.49,121.62, 122.66,123.13,123.79,124.00,125.32,130.31,132.88,136.56,137.37,148.97,149.17,149.26,152.24,156.46,196.89.
HRMS(ESI+)m/z Calcd for C21H22ClN4O3S3(M+H)+:509.05426,Found:509.05410.
实施例31：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-{2-(4-甲基哌嗪-1-基)磺酰基}乙酯
参照实施例1，用N-甲基哌嗪代替丙胺，得到白色固体，产率33.6％，熔点73-74℃。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.41(s,1H),8.32(s,1H),7.63(m,1H),7.23(m,1H),4.86(d,2H,J＝5.4Hz),3.52(m,2H),3.35(m,2H),3.01(m,2H),1.52(m,2H),0.86(t,3H,J＝7.4Hz).
13C NMR(100MHz,CDCl3):δ196.93,149.03,148.44,136.60,132.72,123.86,51.39,48.09,45.09,28.58,23.52,11.26
HRMS(ESI):calcd for C12H20N3O2S3；m/z([M+H]+)334.07050
实施例32：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-(2-(吗啉-1-基)磺酰基)乙酯
参照实施例1，用吗啉代替丙胺，得到白色固体，产率30.7％，熔点108-109℃。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.39(m,2H),7.64(d,1H,J＝7.8Hz),7.22(m,1H),4.86(s,2H),3.67(m,4H),3.54(m,2H),3.33(m,2H),3.27(m,4H)
13C NMR(100MHz,CDCl3):δ196.78,149.21,148.86,136.45,132.40,123.84,66.58,49.45,48.32,45.78,28.29
HRMS(ESI):calcd for C13H20N3O3S3；m/z([M+H]+)362.06613
实施例33：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-[2-(4-苯基哌嗪-1-基磺酰基)]乙酯
参照实施例1，用N-苯基哌嗪代替丙胺，得到白色固体，产率42％，熔点144-146°℃。
1H NMR(400MHz,DMSO):δ3.19-3.37(m,8H),3.46-3.57(m,4H),4.85(s,2H),6.80-6.97(m,3H),7.35-7.70(m,3H),7.68-7.70(m,1H),8.49-8.53(m,2H).
13C NMR(100MHz,DMSO):δ28.16,45.59,47.64,48.74,116.60,120.10,124.04,129.50,133.20,136.07,148.92,149.47,150.99,196.50.
Anal.Cald for C19H24N4O2S3:C,52.27；H,5.54；N,12.83；Found:C,52.29；H,5.74；N,12.67.
实施例34：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-[2-[(3,4-二氢异喹啉-2(1H)-基)磺酰基]]乙酯
参照实施例1，用1,2,3,4-四氢异喹啉代替丙胺，得到淡黄色固体，产率41％，熔点116-117℃。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝2.90(t,J＝5.60Hz,2H),3.47-3.57(m,6H),4.46(s,2H),4.84(d,J＝5.60Hz,2H),7.15-7.20(m,4H),7.35-7.39(m,1H),7.68-7.71(m,1H),8.48-8.52(m,2H),10.65(s,1H).
13C NMR(100MHz,DMSO-d6):δ＝27.68,28.48,42.96,46.51,47.32,48.71,123.52,126.12,126.29,126.59,128.85,132.19,132.72,133.32,135.59,148.44,149.05,196.03
HRMS(ESI+)m/z Calcd for C18H22N3O2S3(M+H)+:408.08741,Found:408.08735.
实施例35：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-2-{[4-(喹啉-8-基磺酰基)哌嗪-1-基]磺酰基}乙酯
参照实施例1，用8-(哌嗪-1-基磺酰基)喹啉盐酸盐代替丙胺，得到淡黄色固体，产率66％，熔点169-170℃。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝3.28-3.29(m,2H),3.35-3.48(m,10H),4.82(d,J＝5.20Hz,2H),7.38-7.41(m,1H),7.67-7.70(m,2H),7.77(d,J＝8.00Hz,1H),8.31-8.33(m,1H),8.39(dd,J＝1.20,7.60Hz,1H),8.49-8.54(m,3H),9.07(dd,J＝1.60,4.40Hz,1H),10.62(t,J＝5.60Hz,1H).
13C NMR(100MHz,DMSO-d6):δ＝25.57,45.36,45.88,47.28,48.79,122.53,123.52,125.72,128.75,132.58,132.72,134.23,135.59,135.85,136.86,143.16,148.44,149.06,151.45,195.96.
HRMS(ESI+)m/z Calcd for C22H26N5O4S4(M+H)+:552.08676,Found:552.08670.
实施例36：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-[2-[[4-[(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基)磺酰基]-1,4-二氮杂环庚烷-1-基]磺酰基]]乙酯
参照实施例1，用1-(2,3-二氢苯并[b][1,4]二氧杂环己烯-6-基磺酰基)-1,4-二氮杂环庚烷盐酸盐代替丙胺，得到淡黄色固体，产率29％，熔点126-128℃。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝1.80(t,J＝4.80Hz,2H),3.24-3.30(m,4H),3.37-3.51(m,8H),4.32(d,J＝4.00Hz,4H),4.85(d,J＝5.20Hz,2H),7.06(d,J＝8.40Hz,1H),7.25-7.27(m,2H),7.36-7.39(m,1H),7.69(d,J＝7.60Hz,1H),8.48-8.52(m,2H),10.64(s,1H).
13C NMR(100MHz,DMSO-d6):δ＝27.69,29.40,46.71,46.91,47.30,49.12,49.89,49.94,64.03,64.36,115.70,117.77,120.26,123.49,130.86,132.70, 135.51,143.46,147.20,148.47,149.08,196.03.
HRMS(ESI+)m/z Calcd for C22H29N4O6S4(M+H)+:573.09699,Found:573.09687.
实施例37：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-[2-[(3,4-二氢喹啉-1(2H)-基)磺酰基]]乙酯
参照实施例1，用1,2,3,4-四氢喹啉代替丙胺，得到淡黄色固体，产率20％，熔点124-125℃。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝1.90-1.97(m,2H),2.81(t,J＝6.40Hz,2H),3.51-3.59(m,4H),3.71(t,J＝6.00Hz,2H),4.81(d,J＝5.60Hz,2H),7.03-7.06(m,1H),7.15(t,J＝8.00Hz,2H),7.34-7.37(m,1H),7.51(d,J＝8.00Hz,1H),7.66(d,J＝8.00Hz,1H),8.47-8.50(m,2H),10.64(s,1H).
13C NMR(100MHz,DMSO-d6):δ＝22.22,26.40,27.69,46.13,47.30,51.04,121.85,123.51,123.93,126.25,129.31,129.65,132.68,135.52,136.61,148.50,149.10,195.85.
HRMS(ESI+)m/z Calcd for C18H22N3O2S3(M+H)+:408.08741,Found:408.08733.
实施例38：3-吡啶甲氨基二硫代甲酸-[2-[[4-[(2,6-二氟苯基)磺酰基]哌嗪-1-基]磺酰基]]乙酯
参照实施例1，用1-(2,6-二氟苯磺酰基)哌嗪代替丙胺，得到淡黄色 固体，产率36％，熔点182-183℃。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ＝3.24(s,4H),3.32-3.49(m,8H),4.83(d,J＝5.20Hz,2H),7.32-7.40(m,3H),7.68-7.80(m,2H),8.48-8.52(m,2H),10.64(t,J＝5.20Hz,1H).
13C NMR(100MHz,DMSO-d6):δ＝27.58,44.70,45.27,47.31,49.08,113.92,123.51,132.69,135.54,136.42,148.49,149.12,157.44,160.20,195.98.
HRMS(ESI+)m/z Calcd for C19H23F2N4O4S4(M+H)+:537.05702,Found:537.05716.
试验例1
采用贴壁细胞MTT法测定本发明实施例1-21和31-32中的化合物的活性，具体步骤如下所述。
体外培养肝癌细胞株Bel7402、前列腺癌细胞株PC3、结肠癌细胞株HCT116、乳腺癌细胞株MDA-MB-468和乳腺癌细胞株SKBr-3。细胞生长至对数生长期后，收集细胞，1000rpm离心5分钟，弃去上清液，用适量培养基进行悬浮，调整细胞浓度至3×104/ml。将细胞悬液接种到96孔细胞培养板中，每孔100μl，放入细胞培养箱(37℃，5％CO2)中培养24h后，加入待测药物(从10-4～102μM中选定八个浓度，为别为：1×10-4μM、1×10-3μM、1×10-2μM、1×10-1μM、1μM、10μM、1×101.5μM、1×102μM)。阴性对照组加入DMSO(终浓度为0.5％)，各组均设3个复孔。培养箱中培养72h后，每孔加入5mg/ml的MTT 20μl，于37℃放置3h。每孔加入150μl DMSO，37℃摇床振荡5min，492nm/620nm测吸光度(OD)。运用Prism Graphpad统计软件计算IC50值(以μM计)。所得结果汇总于下述表1中。
表1
试验例2
除采用口腔上皮癌细胞株KB代替前列腺癌细胞株PC3以外，采用与试验例1相同的方法对实施例22-30和33-38中的化合物的活性进行测试。所得结果汇总于下述表2中(针对实施例28-30和34-38中的化合物，仅列出对于结肠癌细胞株HCT116的测定结果)。
表2