1.抗螟虫抗草甘膦转基因水稻RCRC02的T-DNA区核苷酸序列,其特征在于,所述T-DNA区核苷酸序列为如SEQ ID NO:1所示、或其互补序列或与其同源性达到90%以上的核苷酸序列;所述T-DNA区核苷酸序列的左边界侧翼序列为如SEQ ID NO:2所示、或其互补序列或与其同源性达到90%以上的核苷酸序列。
2.抗螟虫抗草甘膦转基因水稻RCRC02的T-DNA区核苷酸序列,其特征在于,所述T-DNA区核苷酸序列为如SEQ ID NO:1所示、或其互补序列或与其同源性达到90%以上的核苷酸序列;所述T-DNA区核苷酸序列的右边界侧翼序列为如SEQ ID NO:3所示、或其互补序列或与其同源性达到90%以上的核苷酸序列。
3.用于普通PCR定性检测RCRC02转化事件及基因型的特异性引物对,包括:
LBF:TTTGTTTGTTACTGCCGTCGC;
LBR:CAGTACATTAAAAACGTCCGCAAT;
RBR:ATAATTAGCATGTGTTTCCCTC。
4.用于Realtime-PCR定量检测RCRC02转化事件的特异性引物对,包括:
LBF:TTTGTTTGTTACTGCCGTCGC;
LBR:CAGTACATTAAAAACGTCCGCAAT。
5.抗螟虫抗草甘膦转基因水稻RCRC02的检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)提取待测转基因水稻的总DNA;
2)以步骤1)的DNA为模板,利用权利要求3和权利要求4所述的特异性引物对进行普通PCR或Realtime-PCR扩增;
3)分析PCR扩增产物或Realtime-PCR扩增曲线。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,DNA模板用量在 8pg以上。
7.权利要求5所述检测方法在判断RCRC02转化事件的基因型中的应用,其特征在于,
只有一条111bp大小带型的材料为RCRC02纯合基因型的材料;
只有一条293bp大小带型的材料为不含RCRC02事件的材料;
有两条带型且大小分别为111bp和293bp的材料为RCRC02杂合基因型的材料。
8.抗螟虫抗草甘膦转基因水稻RCRC02的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)人工合成草甘膦和螟虫抗性基因cp4 epsps和cry1C;
(2)将步骤(1)中合成的基因构建到同一遗传转化载体pZHZH15003中;
(3)将步骤(2)中获得的重组载体通过农杆菌介导法导入到水稻品种‘R187’中;
(4)对步骤(3)的转化体进行分子鉴定,筛选单拷贝插入且无载体骨架的T0代转化植株,种植并收获T1代种子;
(5)待步骤(4)的T1代种子发芽15天后喷施草甘膦,选取具有草甘膦抗性且符合孟德尔遗传规律的转基因水稻株系,检测外源基因型,筛选纯合株收获T2代种子;
(6)种植步骤(5)的T2代种子,在植株不同生长阶段鉴定其对水稻螟虫的抗性,筛选抗虫性好的株系收获T3代种子;
(7)将步骤(6)的T3代种子培育成植株,评估株系的农艺性状,选取农艺性状优良的株系检测T-DNA区核苷酸序列,筛选具有T-DNA区单拷贝的转基因水稻植株;所述T-DNA区核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示,或其互补序列或与其同源性达到90%以上的核苷酸序列;
(8)利用权利要求5所述检测方法对步骤(7)的转基因水稻植 株进行验证,最终获得抗螟虫抗草甘膦转基因水稻;
所述抗螟虫抗草甘膦转基因水稻,其T-DNA左边界侧翼序列如SEQ ID NO:2所示,或其互补序列或与其同源性达到90%以上的核苷酸序列;其T-DNA右边界侧翼序列如SEQ ID NO:3所示,或其互补序列或与其同源性达到90%以上的核苷酸序列。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述步骤5)中草甘膦的喷施浓度范围为0.3%-9%V/V。
10.权利要求8所述的方法在杂草控制和害虫防治方面的应用。