用于生产异戊二烯的组合物和方法与流程

文档序号:17098852发布日期:2019-03-14 00:06阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种生产异戊二烯的方法,该方法包括

(a)在适于生产异戊二烯的培养条件下培养重组细菌或真菌细胞,其中所述细胞包含一种或多种核酸,所述核酸编码

(i)异戊二烯合酶多肽,其中所述异戊二烯合酶多肽由异源核酸编码,

(ii)异戊烯二磷酸δ异构酶(IDI)多肽,和

(iii)(A)1-脱氧木酮糖-5-磷酸合酶(DXS)多肽,和/或

(B)甲羟戊酸(MVA)途径多肽,所述甲羟戊酸途径多肽选自乙酰-CoA乙酰转移酶(AA-CoA硫解酶)、3-羟基-3-甲基戊二酰基-CoA合酶(HMG-CoA合酶)、3-羟基-3-甲基戊二酰基-CoA还原酶(HMG-CoA还原酶)、甲羟戊酸激酶(MVK)、磷酸甲羟戊酸激酶(PMK)和二磷酸甲羟戊酸脱羧酶(MVD)多肽,

其中所述细胞

(iv)产生大于400纳摩尔/gwcm/hr的异戊二烯;

(v)将细胞从细胞培养基中消耗的碳中大于0.002摩尔%的碳转化成异戊二烯;

(vi)具有大于0.1mg/L培养液/hr的异戊二烯平均体积生产力;或

(vii)其中细胞产生至少0.0037克异戊二烯/克干细胞质量(gdcm),和(b)生产异戊二烯。

2.权利要求1的方法,其中所述细胞产生至少500、600、700、800、900、1000、1250、1500、1750、2000、2500、3000、4000、5000、10000或12500纳摩尔/gwcm/hr的异戊二烯。

3.权利要求1的方法,其中所述细胞产生400纳摩尔/gwcm/hr到2.0x105纳摩尔/gwcm/hr的异戊二烯。

4.权利要求1的方法,其中所述异戊二烯合酶多肽是植物异戊二烯合酶多肽。

5.权利要求4的方法,其中所述植物异戊二烯合酶多肽是杨属(Populus)异戊二烯合酶多肽。

6.权利要求4的方法,其中所述异戊二烯合酶多肽是葛属(Pueraria)异戊二烯合酶多肽。

7.权利要求1的方法,其中编码(ii)的IDI多肽的核酸是编码IDI多肽的异源核酸。

8.权利要求7的方法,其中所述IDI多肽是酵母IDI多肽。

9.权利要求1的方法,其中编码(ii)的IDI多肽的核酸是编码IDI多肽的内源核酸的拷贝。

10.权利要求1的方法,其中编码(iii)的DXS多肽的核酸是编码DXS多肽的异源核酸。

11.权利要求1的方法,其中编码(iii)的DXS多肽的核酸是编码DXS多肽的内源核酸的拷贝。

12.权利要求1的方法,其包含编码MVA途径多肽的一种或多种异源核酸,所述MVA途径多肽选自乙酰-CoA乙酰转移酶(AA-CoA硫解酶)、3-羟基-3-甲基戊二酰基-CoA合酶(HMG-CoA合酶)、3-羟基-3-甲基戊二酰基-CoA还原酶(HMG-CoA还原酶)、甲羟戊酸激酶(MVK)、磷酸甲羟戊酸激酶(PMK)和二磷酸甲羟戊酸脱羧酶(MVD)多肽。

13.权利要求1的方法,其中编码(i)、(ii)、或(iii)任一种的多肽的一种或多种核酸的至少一种过表达。

14.权利要求13的方法,其中所述过表达的核酸被克隆到多拷贝质粒中。

15.权利要求13的方法,其中所述过表达的核酸被置于诱导型启动子或组成型启动子下。

16.权利要求1的方法,其中所述细胞是革兰氏阳性细菌细胞或革兰氏阴性细菌细胞。

17.权利要求1的方法,其中所述细胞选自大肠杆菌、柠檬泛菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、嗜碱性芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、凝固芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、白色链霉菌、浅青紫链霉菌、天蓝色链霉菌、灰色链霉菌和假单胞菌细胞。

18.权利要求17的方法,其中所述假单胞菌细胞是产碱假单胞菌细胞。

19.权利要求1的方法,其中所述细胞是真菌细胞。

20.权利要求19的方法,其中所述真菌细胞是曲霉属、酵母或木霉属细胞。

21.权利要求20的方法,其中所述酵母细胞是耶氏酵母属细胞。

22.权利要求20的方法,其中所述酵母细胞是酵母属(Saccharomyces sp.)、裂殖酵母(Schizosaccharomyces sp.)、毕氏酵母(Pichia sp.)或假丝酵母(Candida sp.)细胞。

23.权利要求19的方法,其中所述真菌细胞选自米曲霉、黑曲霉、酿酒酵母、粟酒裂殖酵母、里氏木霉、特异腐质霉、疏毛腐质霉、灰色腐质霉、C.iucknowense、酱油曲霉、日本曲霉、构巢曲霉、棘孢曲霉、泡盛曲霉、粉红镰孢、赤禾镰孢、F.cerealis、F.venenatum、粗糙脉胞菌、米黑毛霉、绿色木霉、尖镰孢和腐皮镰孢细胞。

24.权利要求1的方法,其中所述编码(i)、(ii)、或(iii)的多肽的一种或多种核酸的至少一种在载体上。

25.权利要求1的方法,其中所述编码(i)、(ii)、或(iii)的多肽的一种或多种核酸的至少一种整合到细胞的染色体中。

26.权利要求1的方法,其中所述细胞包含一种或多种核酸,所述核酸编码:

(iii)(A)DXS多肽和

(B)MVA途径多肽,所述MVA途径多肽选自乙酰-CoA乙酰转移酶(AA-CoA硫解酶)、3-羟基-3-甲基戊二酰基-CoA合酶(HMG-CoA合酶)、3-羟基-3-甲基戊二酰基-CoA还原酶(HMG-CoA还原酶)、甲羟戊酸激酶(MVK)、磷酸甲羟戊酸激酶(PMK)和二磷酸甲羟戊酸脱羧酶(MVD)多肽。

27.权利要求1-26任一项的方法,其中所述方法还包括:

(c)回收所述异戊二烯。

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