本发明涉及化合物合成领域,具体涉及一种长链化合物的制备方法。
背景技术：
经典肽结构对体内的蛋白酶非常敏感，进入有机体后很快就被降解。采用长链化合物对活性肽进行改造，能降低活性肽对蛋白酶的敏感性，从而有效的延长其在有机体的半衰期，提高了活性肽成为临床药物的可能性。
虽然有不少使用长链化合物修饰活性肽的成功案例，但长链化合物的制备很少有文献报导。传统的制备方法是采用正交保护的策略，在完成主链的合成后再脱除支链上的保护基。该方法会导致中间体的溶解度降低，需要采用高沸点的溶剂进行反应，后处理比较麻烦，不利于规模化生产。
技术实现要素：
为了解决上述问题，本发明采用了一种不同于常规合成方法的简单合成方法，具体地，本发明一个方面提供了一种式i所示化合物的制备方法，
其中，r1为cooh；x为(ch2)m，m为10-20，优选为10、11、12、13、14、15、16、17或18；
r2为
其特征在于，包括以下步骤：
1)将h-r2与r5n-glu(or4)-or3进行缩合反应，其中，r3为羧基保护基，r4为羧基活化基，r5为氨基保护基；
获得式ii所示化合物
2)将式ii所示化合物的r3羧基保护基和r5氨基保护基脱除，获得式iii所示化合物
3)将式iii所示化合物与
进一步地，其中，当步骤1)中h-r2的n＝2时，其是通过将boc-aeea-oh和h-aeea-oh进行缩合反应，得到式iv所示化合物
再将式iv所示化合物的氨基保护基boc脱除，得到式v所示化合物
优选地，boc-aeea-oh和h-aeea-oh的缩合反应是将boc-aeea-oh中的羧基进行活化，形成活泼酯，然后再与h-aeea-oh进行反应。
进一步地，步骤1)中的r5n-glu(or4)-or3保护剂是通过对r5n-glu(oh)-or3中的羧基进行活化，形成活泼酯而获得的。
进一步地，步骤3)为先将
进一步地，对羧基进行活化，并形成活泼酯的过程是指将带有羧基的化合物与缩合催化剂进行反应，并形成活泼酯，优选地，所述缩合催化剂选自dcc、dic、edc.hcl、damp、hobt、hosu、honb、hoat、dcc-hobt、dcc-hosu、dcc-damp-hobt、dcc-damp-hosu及其组合；所述活泼酯为-obt、osu、-onb、-oat；形成活泼酯所用溶剂为thf或dcm；更优选地，boc-aeea-oh的活泼酯与h-aeea-oh进行反应以及
进一步地，r3为tbu、me或et，r5为boc；优选r3为tbu。
进一步地，脱除boc保护基的试剂为tfa或hcl/ea，优选tfa。
进一步地，脱除步骤2)中的氨基保护基和羧基保护基的试剂选自tfa、h2o、lioh、meoh、etoh及其组合，优选为tfa和h2o的组合(体积比为19-24：1)、lioh和meoh的组合，或lioh和etoh的组合。
进一步地，在步骤3)之后还包含重结晶的步骤，所述重结晶所用的溶剂为ea和etoh，或ea和meoh。
本发明的另一个方面提供了一种如前所述制备方法制备得到得式i所示化合物。
本发明采用最小保护策略进行合成，完成中间体的合成后，先将支链和主链中所有的保护基同时脱除，之后再进行后续的合成。该方法减少了脱保护次数，且所有反应能在低沸点溶剂中进行，后处理只需要简单的洗涤和重结晶即可以得到纯度较高的产品，适合规模化生产。
具体实施方式
实施例1
结构a
将boc-aeea-oh(26.4g，100mmol)和hosu(12.6g，110mmol)溶解在200ml四氢呋喃中，冰浴条件下滴加dic(13.9g，110mmol)，滴加完毕后恢复室温反应2h，tlc显示原料反应完全。真空浓缩，残留物用ea重结晶，得到boc-aeea-osu33.0g，收率：91％，纯度：96.7％，ms：361.4(m+1)。
将h-aeea-oh(9.8g，60mmol)和nahco3(8.4g，100mmol)溶解在100ml去离子水中，边搅拌边加入boc-aeea-osu(18.0g，50mmol)的thf(100ml)溶液，滴加完毕后继续反应4h，tlc显示boc-aeea-osu基本反应完全。真空浓缩掉有机溶剂，水相用ea洗涤(100ml*3)，用1nhcl调水相ph至3，ea萃取(100ml*2)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(100ml*3)，无水硫酸钠干燥，真空浓缩后得到17.6gboc-aeea-aeea-oh，收率：86％，纯度：95.8％，ms：409.4(m+1)。
实施例2
结构b
将boc-aeea-aeea-oh(17.6g，43mmol)溶解在tfa(200ml)中，室温搅拌反应1h，tlc显示原料反应完全，真空浓缩，得到18.0gh-aeea-aeea-oh.tfa，收率：99％，纯度：96.4％，ms：309.3(m+1)。
实施例3
结构c
将boc-glu-otbu(12g，40mmol)和honb(7.9g，44mmol)溶解在thf(100ml) 中，边搅拌边加入dcc(8.3g，40mmol)的thf(50ml)溶液，滴加完毕后继续室温反应2h，tlc显示原料基本反应完全，过滤，滤液真空浓缩，残留物用无水乙醚结晶，得到17.2gboc-glu(onb)-otbu，收率：89％，纯度：97.8％，ms：483.6(m+1)。
将h-aeea-aeea-oh.tfa(14.8g，35mmol)和na2co3(7.4g，70mmol)溶解在80ml去离子水中，边搅拌边加入boc-glu(onb)-otbu(17.2g，35mmol)的thf(60ml)溶液，滴加完毕后继续反应8h，tlc显示原料基本反应完全。真空浓缩掉有机溶剂，水相用ea洗涤(100ml*3)，用1nhcl调水相ph至3，ea萃取(100ml*2)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(100ml*3)，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，残留物用ea-正己烷结晶得到16.2gboc-glu(aeea-aeea)-otbu，收率：78％，纯度：98.7％，ms：594.7(m+1)。
实施例4
结构d
将boc-glu-(aeea-aeea)-otbu(16.2g，27mmol)溶解在tfa(95ml)和水(5ml)的混合溶液中，室温搅拌反应2h，tlc显示原料反应完全，真空浓缩得到14.7gh-glu(aeea-aeea)-oh.tfa收率：98.6％，纯度：98.9％，ms：438.4(m+1)。
实施例5
结构e
将十八烷二酸(1.57g，5mmol)、hosu(0.58g，5mmol)和dmap(3.1mg，0.025mmol)溶解在50mlthf中，搅拌30min后缓慢滴加dcc(1.03g，5mmol)的thf(20ml)，滴加完毕后室温搅拌过夜。过滤，滤液真空浓缩，残留物用甲醇重结晶，得到0.82g十八烷二酸单n-羟基琥珀酰亚胺酯，收率：40％，纯度96.8％，ms：412(m+1)。
将h-glu(aeea-aeea)-oh.tfa(1.10g，2mmol)和nahco3(0.67g，8mmol)溶解在thf(10ml)和水(10ml)的混合溶液中，边搅拌边滴加十八烷二酸单n-羟基琥珀酰亚胺酯(0.82g，2mmol)的thf(5ml)溶液，滴加完毕后继续搅拌反应4h，真空浓缩掉有机溶剂，加10ml水稀释，ea洗涤(2*20ml)，1nhcl调 ph至3，ea萃取(2*20ml)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(2*20ml)，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，残留物用meoh-h2o结晶，得到1.17g结构e所示化合物，收率：80％，纯度：98.7％，ms:734.9(m+1)。
实施例6
结构f
将十七烷二酸(1.50g，5mmol)、hosu(0.58g，5mmol)和dmap(3.1mg，0.025mmol)溶解在50mlthf中，搅拌30min后缓慢滴加dcc(1.03g，5mmol)的thf(20ml)，滴加完毕后室温搅拌过夜。过滤，滤液真空浓缩，残留物用甲醇重结晶，得到0.83g十七烷二酸单n-羟基琥珀酰亚胺酯，收率：43％，纯度96.2％，ms：398.5(m+1)。
将h-glu(aeea-aeea)-oh.tfa(1.10g，2mmol)和nahco3(0.67g，8mmol)溶解在thf(10ml)和水(10ml)的混合溶液中，边搅拌边滴加十七烷二酸单n-羟基琥珀酰亚胺酯(0.80g，2mmol)的thf(5ml)溶液，滴加完毕后继续搅拌反应4h，真空浓缩掉有机溶剂，加10ml水稀释，ea洗涤(2*20ml)，1nhcl调ph至3，ea萃取(2*20ml)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(2*20ml)，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，残留物用meoh-h2o结晶，得到1.08g结构f所示化合物，收率：75％，纯度：98.9％，ms:720.9(m+1)。
实施例7
结构g
将十六烷二酸(1.43g，5mmol)、hosu(0.58g，5mmol)和dmap(3.1mg，0.025mmol)溶解在50mlthf中，搅拌30min后缓慢滴加dcc(1.03g，5mmol)的thf(20ml)，滴加完毕后室温搅拌过夜。过滤，滤液真空浓缩，残留物用甲醇重结晶，得到0.79g十六烷二酸单n-羟基琥珀酰亚胺酯，收率：41％，纯度96.2％，ms：384.5(m+1)。
将h-glu(aeea-aeea)-oh.tfa(1.10g，2mmol)和nahco3(0.67g，8mmol)溶解在thf(10ml)和水(10ml)的混合溶液中，边搅拌边滴加十六烷二酸单n-羟基琥珀酰亚胺酯(0.77g，2mmol)的thf(5ml)溶液，滴加完毕后继续搅拌反 应4h，真空浓缩掉有机溶剂，加10ml水稀释，ea洗涤(2*20ml)，1nhcl调ph至3，ea萃取(2*20ml)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(2*20ml)，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，残留物用meoh-h2o结晶，得到1.12g结构g所示化合物，收率：79％，纯度：98.6％，ms:706.9(m+1)。
实施例8
结构h
将十九烷二酸(1.43g，5mmol)、hosu(0.58g，5mmol)和dmap(3.1mg，0.025mmol)溶解在50mlthf中，搅拌30min后缓慢滴加dcc(1.03g，5mmol)的thf(20ml)，滴加完毕后室温搅拌过夜。过滤，滤液真空浓缩，残留物用甲醇重结晶，得到0.94g十九烷二酸单n-羟基琥珀酰亚胺酯，收率：44％，纯度96.9％，ms：426.6(m+1)。
将h-glu(aeea-aeea)-oh.tfa(1.10g，2mmol)和nahco3(0.67g，8mmol)溶解在thf(10ml)和水(10ml)的混合溶液中，边搅拌边滴加十九烷二酸单n-羟基琥珀酰亚胺酯(0.85g，2mmol)的thf(5ml)溶液，滴加完毕后继续搅拌反应4h，真空浓缩掉有机溶剂，加10ml水稀释，ea洗涤(2*20ml)，1nhcl调ph至3，ea萃取(2*20ml)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(2*20ml)，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，残留物用meoh-h2o结晶，得到1.08g结构h所示化合物，收率：72％，纯度：98.5％，ms:748.9(m+1)。
实施例9
结构i
将二十烷二酸(1.71g，5mmol)、hosu(0.58g，5mmol)和dmap(3.1mg，0.025mmol)溶解在50mlthf中，搅拌30min后缓慢滴加dcc(1.03g，5mmol)的thf(20ml)，滴加完毕后室温搅拌过夜。过滤，滤液真空浓缩，残留物用甲醇重结晶，得到0.90g二十烷二酸单n-羟基琥珀酰亚胺酯，收率：41％，纯度95.8％，ms：440.6(m+1)。
将h-glu(aeea-aeea)-oh.tfa(1.10g，2mmol)和nahco3(0.67g，8mmol)溶解在thf(10ml)和水(10ml)的混合溶液中，边搅拌边滴加二十烷二酸单n- 羟基琥珀酰亚胺酯(0.88g，2mmol)的thf(5ml)溶液，滴加完毕后继续搅拌反应4h，真空浓缩掉有机溶剂，加10ml水稀释，ea洗涤(2*20ml)，1nhcl调ph至3，ea萃取(2*20ml)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(2*20ml)，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，残留物用meoh-h2o结晶，得到1.17g结构i所示化合物，收率：77％，纯度：99.0％，ms:762.9(m+1)。
实施例10
结构j
将boc-glu-otbu(6.0g，20mmol)和hobt(2.97g，22mmol)溶解在thf(50ml)中，边搅拌边加入dcc(4.13g，20mmol)的thf(25ml)溶液，滴加完毕后继续室温反应4h，tlc显示原料基本反应完全，过滤，滤液真空浓缩，残留物用dcm-et2o结晶，得到7.98gboc-glu(obt)-otbu，收率：91％，纯度：97.6％，ms：439.5(m+1)。
将h-aeea-oh(1.96g，12mmol)和nahco3(1.68g，20mmol)溶解在100ml去离子水中，边搅拌边加入boc-glu(obt)-otbu(4.39g，10mmol)的thf(20ml)溶液，滴加完毕后继续反应4h，tlc显示原料基本反应完全。真空浓缩掉有机溶剂，水相用ea洗涤(20ml*3)，用1nhcl调水相ph至3，ea萃取(20ml*2)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(20ml*3)，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，残留物用etoh结晶后得到3.41gboc-glu(aeea)-otbu，收率：87％，纯度：97.8％，ms：393.4(m+1)。
将boc-glu(aeea)-otbu(3.41g，8.7mmol)溶解在tfa(48ml)和h2o(2ml)的混合溶液中，室温搅拌反应2h，真空浓缩，残留物用正己烷洗涤2次，干燥后得到3.32结构j所示化合物h-glu(aeea)-oh.tfa，收率：94％，纯度：98.2％，ms：293.3(m+1)。
实施例11
结构k
将h-glu(aeea)-oh.tfa(0.81g，2mmol)和nahco3(0.67g，8mmol)溶解在thf(10ml)和水(10ml)的混合溶液中，边搅拌边滴加十八烷二酸单n-羟基琥珀酰亚胺酯(0.82g，2mmol)的thf(5ml)溶液，滴加完毕后继续搅拌反 应4h，真空浓缩掉有机溶剂，加10ml水稀释，ea洗涤(2*20ml)，1nhcl调ph至3，ea萃取(2*20ml)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(2*20ml)，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，残留物用meoh结晶，得到0.91g结构k所示化合物，收率：77％，纯度：98.5％，ms:589.7(m+1)。
实施例12
结构l
将h-glu(aeea)-oh.tfa(0.81g，2mmol)和nahco3(0.67g，8mmol)溶解在thf(10ml)和水(10ml)的混合溶液中，边搅拌边滴加十七烷二酸单n-羟基琥珀酰亚胺酯(0.79g，2mmol)的thf(5ml)溶液，滴加完毕后继续搅拌反应4h，真空浓缩掉有机溶剂，加10ml水稀释，ea洗涤(2*20ml)，1nhcl调ph至3，ea萃取(2*20ml)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(2*20ml)，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，残留物用etoh结晶，得到0.93g结构l所示化合物，收率：81％，纯度：98.9％，ms:575.7(m+1)。
实施例13
结构m
将h-glu(aeea)-oh.tfa(0.81g，2mmol)和nahco3(0.67g，8mmol)溶解在thf(10ml)和水(10ml)的混合溶液中，边搅拌边滴加十六烷二酸单n-羟基琥珀酰亚胺酯(0.77g，2mmol)的thf(5ml)溶液，滴加完毕后继续搅拌反应4h，真空浓缩掉有机溶剂，加10ml水稀释，ea洗涤(2*20ml)，1nhcl调ph至3，ea萃取(2*20ml)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(2*20ml)，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，残留物用etoh结晶，得到0.99g结构m所示
化合物，收率：88％，纯度：98.8％，ms:561.7(m+1)。
实施例14
结构n
将h-glu(aeea)-oh.tfa(0.81g，2mmol)和nahco3(0.67g，8mmol)溶解在thf(10ml)和水(10ml)的混合溶液中，边搅拌边滴加十九烷二酸单n-羟基琥珀酰亚胺酯(0.85g，2mmol)的thf(5ml)溶液，滴加完毕后继续搅拌反应4h，真空浓缩掉有机溶剂，加10ml水稀释，ea洗涤(2*20ml)，1nhcl调ph至3，ea萃取(2*20ml)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(2*20ml)，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，残留物用etoh结晶，得到0.95g结构n所示化合物，收率：79％，纯度：98.6％，ms:603.8(m+1)。
实施例15
结构o
将h-glu(aeea)-oh.tfa(0.81g，2mmol)和nahco3(0.67g，8mmol)溶解在thf(10ml)和水(10ml)的混合溶液中，边搅拌边滴加二十烷二酸单n-羟基琥珀酰亚胺酯(0.88g，2mmol)的thf(5ml)溶液，滴加完毕后继续搅拌反应4h，真空浓缩掉有机溶剂，加10ml水稀释，ea洗涤(2*20ml)，1nhcl调ph至3，ea萃取(2*20ml)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(2*20ml)，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，残留物用etoh结晶，得到1.01g结构o所示化合物，收率：82％，纯度：98.9％，ms:617.8(m+1)。
实施例16
结构p
将boc-glu-ome(10.5g，40mmol)和honb(7.9g，44mmol)溶解在thf(100ml)中，边搅拌边加入dcc(8.3g，40mmol)的thf(50ml)溶液，滴加完毕后继续室温反应2h，tlc显示原料基本反应完全，过滤，滤液真空浓缩，残留物用乙酸乙酯结晶，得到15.4gboc-glu(onb)-ome，收率：91％，纯度：96.9％，ms：423.5(m+1)。
将h-aeea-aeea-oh.tfa(14.8g，35mmol)和na2co3(7.4g，70mmol)溶解在80ml去离子水中，边搅拌边加入boc-glu(onb)-ome(14.8g，35mmol)的thf(60ml)溶液，滴加完毕后继续反应16h，tlc显示原料基本反应完全。真空浓缩掉有机溶剂，水相用ea洗涤(100ml*3)，用1nhcl调水相ph至3， ea萃取(100ml*2)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(100ml*3)，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，残留物用柱层析分离(meoh:dcm＝1:10),得到12.5gboc-glu(aeea-aeea)-ome，收率：65％，纯度：98.5％，ms：552.6(m+1)。
实施例17
结构q
将boc-glu-(aeea-aeea)-otm(12.5g，22.8mmol)溶解在tfa(95ml)和水(5ml)的混合溶液中，室温搅拌反应2h，tlc显示原料反应完全，真空浓缩得到12.4gh-glu(aeea-aeea)-ome.tfa收率：99.1％，纯度：98.1％，ms：452.5(m+1)。
实施例18
结构r
将h-glu(aeea-aeea)-ome.tfa(0.90g，2mmol)和nahco3(0.67g，8mmol)溶解在dmf(10ml)和水(10ml)的混合溶液中，边搅拌边滴加十八烷二酸单n-羟基琥珀酰亚胺酯(0.82g，2mmol，纯度96.8％，实施例5所述方法制备)的dmf(5ml)溶液，滴加完毕后继续搅拌反应4h，60℃真空浓缩掉溶剂，残留物用dcm(20ml)溶解，1nhcl洗涤(3*20ml)，饱和食盐水洗涤(2*20ml)，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，残留物用meoh-h2o结晶，得到1.22g结构r所示化合物，收率：82％，纯度：95.1％，ms:747.9(m+1)。
将化合物r(1.22g，1.64mmol)溶解在甲醇(20ml)和水(20ml)的混合溶液中，冰浴体系温度至10℃以下，加入lioh(0.16g，6.56mmol)，继续冰浴反应4h，真空浓缩掉有机溶剂，水相用1nhcl调ph至3，ea萃取(20ml*2)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(2*20ml)，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得到1.06g结构e所示化合物，总收率：72％，纯度：94.8％，ms:734.9(m+1)。