本发明涉及一种核苷类似物及其中间体的制备方法。
背景技术：
式(I)所示的化合物是替诺福韦的一种前药，首次公开于WO2002008241，可通过直接竞争性地与天然脱氧核糖底物相结合而抑制病毒聚合酶，用于治疗HIV和HBV感染。与替诺福韦酯相比，化合物(I)增加了血浆中的稳定性，从而增加了外周血单核细胞(PBMCs)中活性代谢物替诺福韦的累积浓度，提高了治疗效果。目前国内外已公开的合成化合物(I)的方法主要有以下几条：1)CN1443189A公开了以9-(2-(膦酰基甲氧基)丙基]腺嘌呤(PMPA)为起始原料，制备非对映异构体混合物GS-7171，GS-7171通过色谱法或者重结晶的方法纯化得到化合物(I)。其中，制备GS-7171路线如下：2)WO2013052094公开了制备路线中16所示的化合物即本发明中的化合物(I)，路线如下：该路线采用通过将丙氨酸异丙酯氨酸盐碱性游离后得到丙氨酸异丙酯，然后将丙氨酸异丙酯低温-20℃保存。丙氨酸异丙酯盐酸盐在游离时候容易发生水解反应，生成的异丙醇与化合物13a发生取代反应得到副产物，且游离的丙氨酸异丙酯室温放置稳定性不高，易水解，需要现制现用。本发明可采用L-丙氨酸异丙酯盐与化合物(III)反应，与WO2013052094中公开的采用游离的丙氨酸异丙酯，具有减少游离的中和反应的特点，且克服了游离的丙氨酸异丙酯稳定性的缺点。目前公开的合成方法中关键中间体[2-(6-氨基嘌呤-9-基)-1-甲基-乙氧基]甲基-苯氧基-单磷酸(一苯基PMPA)中的腺嘌呤基团的氨基裸露，该中间体极性大、水溶性好，不易分离纯化。
技术实现要素：
本发明涉及一种式(I)所示的化合物及其中间体的制备方法，该方法具有反应产率高产品纯度高，操作简便，后处理方便，适合于工业化生产。其中化合物(III)为制得高纯度的化合物(I)的关键中间体，化合物(III)中取代基的定义与说明书中的定义相同。具体而言，本发明提供一种式(III)所示的化合物的制备方法：50℃～110℃和甲苯溶剂中，化合物(IV)与卤代试剂发生卤代反应生成化合物(III)；其中，化合物(III)的非对映异构体纯度至少大于等于90％；R1和R2各自独立选自叔丁氧基羰基或氢，条件是R1和R2不同时为氢；所述的卤代试剂选自二氯亚砜。本发明优选方案，反应温度优选50℃～90℃，进一步优选70℃～90℃。本发明优选方案，反应期间，通过HPLC监控化合物(III)的非对映异构体纯度，非对映异构体纯度大于等于90％后，停止反应，反应时间优选48小时～96小时。本发明优选方案，一种式(III)所示的化合物的制备方法：甲苯溶剂中，化合物(IV)与二氯亚砜发生卤代反应生成化合物(III)；其中，化合物(III)的非对映异构体纯度至少大于等于90％；R1和R2各自独立选自叔丁氧基羰基或氢，条件是R1和R2不同时为氢；反应温度选自50℃～110℃，优选50℃～90℃，进一步优选70℃～90℃；二氯亚砜的用量为化合物(IV)的摩尔量的3～12倍，优选5～10倍；二氯亚砜的反应浓度为0.5～2mol/L，优选0.8～1.5mol/L；反应期间，通过HPLC监控化合物(III)的非对映异构体纯度，非对映异构体纯度大于等于90％后，停止反应，反应时间优选48小时～96小时。本发明同时提供一种式(I)所示的化合物的制备方法：-50℃～30℃和甲苯与二氯甲烷的混合溶剂中，化合物(III)与化合物(II)发生取代反应生成化合物(I)；其中，所述的A选自盐酸、甲磺酸、对甲苯磺酸或苯磺酸，优选盐酸。本发明优选方案，一种式(I)所示的化合物的制备方法：甲苯与二氯甲烷的混合溶剂中，化合物(III)与化合物(II)发生取代反应生成化合物(I)；其中，A的定义如前所述；反应可选择性的加入碱性试剂三乙胺；反应的温度为-30℃～30℃；化合物(I)的非对映异构体纯度至少大于等于90％。本发明优选方案，甲苯与二氯甲烷的混合溶剂体积比可以为任何比例，优选1:0.6～1:2，更优选1:0.6～1:1。本发明优选方案，化合物(II)的用量优选地为化合物(III)的摩尔量的1～5倍，更优选1～3倍，进一步优选2～3倍。本发明同时提供另外一种制备式(I)所示的化合物方法：-40℃～30℃和甲苯与二氯甲烷的混合溶剂中，化合物(III)与化合物(IX)发生取代反应生成化合物(I)；其中化合物(I)的非对映异构体纯度至少大于等于90％。本发明优选方案，甲苯与二氯甲烷的混合溶剂体积比可以为任何比例，优选1:1～1:2，更优选1:1～1:1.5；理论分析，化合物(IX)的用量为化合物(III)的摩尔量的1倍，考虑到反应中有氢氯酸生成，氢氯酸的存在不利于反应进行，而化合物(IX)为一种有机胺，可中和反应中生成的氢氯酸，从而促进反应的进行，故化合物(IX)的用量为大于化合物(III)的摩尔量1倍，一般的讲，过量的化合物(IX)有利于化合物(I)的生成，化合物(IX)的用量优选地为化合物(III)的摩尔量的1～10倍，更优选2～7倍，进一步优选3～5倍；化合物(I)的非对映异构体纯度至少大于等于90％。该方法中，反应过程无需加入碱性试剂如三乙胺调节反应液体系的pH值，操作更简单。本发明提供一种式(I)所示的化合物的制备方法，所述的方法包括以下步骤：a.乙腈溶剂中，化合物(VIII)与卤代试剂发生卤代反应生成化合物(VII)，所述的卤代试剂选自二氯亚砜或草酰氯，所述的卤代反应可选择性地加入催化剂，催化剂选自N,N-二甲基甲酰胺；b.二氯甲烷溶剂中，化合物(VII)与苯酚在碱性试剂三乙胺的作用下发生取代反应生成化合物(VI)；c.四氢呋喃溶剂中，化合物(VI)与氨基保护试剂二碳酸二叔丁酯反应生成化合物(V)，反应中加入催化剂4-二甲氨基吡啶；d.溶剂中，化合物(V)与碱性试剂发生水解反应生成化合物(IV)，所述的溶剂选自乙腈和水中的一种或其组合，所述的碱性试剂选自三乙胺和氨水中的一种或其组合；e.甲苯溶剂中，化合物(IV)与卤代试剂二氯亚砜发生卤代反应生成化合物(III)，化合物(III)的非对映异构体纯度大于等于90％；f.二氯甲烷和甲苯的混合溶剂中，化合物(III)与化合物(II)丙氨酸异丙酯盐发生取代反应生成化合物(I)，反应可选择性的加入碱性试剂三乙胺，化合物(I)的非对映异构体纯度大于等于90％；或者g.二氯甲烷和甲苯的混合溶剂中，化合物(III)与化合物(IX)丙氨酸异丙酯发生取代反应生成化合物(I)，化合物(I)的非对映异构体纯度大于等于90％；其中，R1、R2和A的定义如如前所述。本发明的一种优选方案，一种式(I)所示的化合物的制备方法，所述的方法包括以下步骤：a.在75℃～85℃下和乙腈中，化合物(VIII)与卤代试剂发生卤代反应生成化合物(VII)，所述的卤代试剂选自二氯亚砜或草酰氯，所述的卤代反应可选择性地加入催化剂，催化剂选自N,N-二甲基甲酰胺，二氯亚砜的用量为化合物(VIII)的摩尔量的4～10倍，反应3～4小时；b.在-30℃～室温下和二氯甲烷中，化合物(VII)与苯酚在碱性试剂三乙胺的作用下发生取代反应生成化合物(VI)，苯酚的用量为化合物(VII)的摩尔量的2～3倍，三乙胺的用量为化合物(VII)的摩尔量的6～10倍，反应10～14小时；c.在60℃～70℃下和四氢呋喃中，化合物(VI)与氨基保护试剂二碳酸二叔丁酯反应生成化合物(V)，反应中加入二碳酸二叔丁酯的用量为化合物(VI)的摩尔量的2～4倍，催化剂4-二甲氨基吡啶的用量为化合物(VI)的摩尔量的0.2～0.5倍，反应2～4小时；d.在50℃～60℃下和乙腈-水的混合溶剂中，化合物(V)与碱性试剂三乙胺发生水解反应生成化合物(IV)，三乙胺的用量为化合物(V)的摩尔量的1～5倍，反应10～14小时；e.在70℃～90℃下和甲苯溶剂中，化合物(IV)与卤代试剂二氯亚砜发生卤代反应生成化合物(III)，化合物(III)的非对映异构体纯度大于等于90％，二氯亚砜的的用量为化合物(IV)的摩尔量的5～10倍，反应48～96小时；f.在-30℃～30℃下和二氯甲烷与甲苯的混合溶剂中，化合物(III)与化合物(II)丙氨酸异丙酯盐发生取代反应生成化合物(I)，反应可选择性的加入碱性试剂三乙胺，化合物(II)的用量为化合物(III)的摩尔量的1～3倍，反应1～2小时，化合物(I)的非对映异构体纯度大于等于90％；或者g.在-40℃～30℃下和二氯甲烷与甲苯的混合溶剂中，化合物(III)与化合物(IX)丙氨酸异丙酯发生取代反应生成化合物(I),化合物(IX)的用量为化合物(III)的摩尔量的3～5倍，反应1～2小时，化合物(I)的非对映异构体纯度大于等于90％；其中，R1、R2和A的定义如如前所述。本发明提供一种式(V)所示的化合物，其特征在于：其中，R1和R2的定义如前所述。本发明的详细说明：除非有相反的陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。本发明所述基团和化合物中所涉及的元素碳、氢、氧、氮或卤素均包括它们的同位素情况，及本发明所述基团和化合物中所涉及的元素碳、氢、氧、硫或氮任选进一步被1至5个它们对应的同位素所替代，其中碳的同位素包括12C、13C和14C，氢的同位素包括氕(H)、氘(D，又叫重氢)、氚(T，又叫超重氢)，氧的同位素包括16O、17O和18O，氮的同位素包括14N和15N，氟的同位素19F，氯的同位素包括35Cl和37Cl。“芳烃类溶剂”是指分子结构中含有芳环的溶剂，非限制性实施例包括苯、甲苯、乙苯、二甲苯或氯苯等。"可选择性地"意味着随后所描述地事件或环境可以但不必发生，包括该事件或环境发生或不发生的场合。例如，“卤代反应可选择性地加入催化剂”意味着催化剂可以加入反应但不必须加入反应。具体实施方式以下通过具体实施例详细说明本发明的实施过程和产生的有益效果，旨在帮助阅读者更好地理解本发明的实质和特点，不作为对本案可实施范围的限定。化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或(和)质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用(BrukerAvanceIII400和BrukerAvance300)核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代氯仿(CDCl3)，氘代甲醇(CD3OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)，外标为85％磷酸水溶液。MS的测定用(Agilent6120B(ESI)和Agilent6120B(APCI))。HPLC的测定使用安捷伦1260DAD高压液相色谱仪(ZorbaxSB-C18100×4.6mm)。本发明的己知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买于泰坦科技、安耐吉化学、上海德默、成都科龙化工、韶远化学科技、百灵威科技等公司。实施例中无特殊说明，反应在氮气氛下进行。实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。实施例中无特殊说明，反应的温度为室温。室温为最适宜的温度，为20℃～30℃。M为摩尔每升。Boc为叔丁基氧基羰基。实施例1：[(1R)-2-[6-[二(叔丁基氧羰基)氨基]嘌呤-9-基]-1-甲基-乙氧基]甲基-苯氧基-单磷酸(化合物1)[(1R)-2-[6-[bis(tert-butoxycarbonyl)amino]purin-9-yl]-1-methyl-ethoxy]methyl-phenoxy-phosphinicacid第一步：6-氨基-9-[(2R)-2-(二氯磷酰基甲氧基)丙基]嘌呤(1B)9-[2-(dichlorophosphorylmethoxy)propyl]purin-6-amine将[[(1R)-2-(6-氨基嘌呤-9-基)-1-甲基乙氧基]甲基]磷酸(PMPA，Tenofovir)(1kg,3.48mol)溶于乙腈(5.0L)中，室温下滴加二氯亚砜(1.65kg,13.92mol)，升温至回流反应4小时。将反应液冷却至室温，减压浓缩得到黄色固体状的目标产物6-氨基-9-[(2R)-2-(二氯磷酰基甲氧基)丙基]嘌呤(1B)，粗品重量1.60kg，直接投下一步反应。第二步：6-氨基-9-[(2R)-2-(二苯氧基磷酰基甲氧基)丙基]嘌呤(1C)9-[(2R)-2-(diphenoxyphosphorylmethoxy)propyl]purin-6-amine将6-氨基-9-[(2R)-2-(二氯磷酰基甲氧基)丙基]嘌呤(1B)(粗品重量1.6kg)溶于二氯甲烷(7.0L)中，加入苯酚(725g,7.70mol),冷却至-30℃,加入三乙胺调节pH>7，升温至室温反应过夜。反应液中加入水(3.0L),萃取分层，水相再用二氯甲烷(1.0L×2)萃取，合并有机相，加入无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，浓缩残余物加入4M盐酸水溶液(3.0L)，充分搅拌，然后加入乙酸乙酯(1.0L×2)萃取，水相冷却至0℃，加入氨水调节pH>7，然后加入乙酸乙酯(2.0L×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到黄色固体状的目标产物6-氨基-9-[(2R)-2-(二苯氧基磷酰基甲氧基)丙基]嘌呤(1C)(850g,两步总产率55.8％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.33(s,1H),7.87(s,1H),7.34–7.26(m,4H),7.21–7.13(m,4H),7.10–7.05(m,2H),5.86(s,2H),4.35(dd,1H),4.19–4.10(m,2H),4.08–3.98(m,1H),3.90(dd,1H),1.25(d,3H)。第三步：N-叔丁基氧基-N-[9-[(2R)-2-(二苯氧基磷酰基甲氧基)丙基]嘌呤-6-基]氨基甲酸叔丁酯(1D)Tert-butylN-tert-butoxycarbonyl-N-[9-[(2R)-2-(diphenoxyphosphorylmethoxy)propyl]purin-6-yl]carbamate将6-氨基-9-[(2R)-2-(二苯氧基磷酰基甲氧基)丙基]嘌呤(1C)(850g,1.93mol)溶于四氢呋喃(4.0L)中，加入二碳酸二叔丁酯(1266g,5.80mol)，分三批加入4-二甲氨基吡啶(47g,0.38mol)，升温至回流反应2小时。反应液冷却至室温后减压浓缩除去四氢呋喃，浓缩残余物加入到乙酸乙酯(3.0L)中溶解，然后加入0.24M盐酸水溶液(2.5L×1)洗涤，萃取分层，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到黑色油状的目标产物N-叔丁基氧基-N-[9-[(2R)-2-(二苯氧基磷酰基甲氧基)丙基]嘌呤-6-基]氨基甲酸叔丁酯(1D)，粗品重量1.4kg，直接用于下一步反应。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.83(s,1H),8.17(s,1H),7.37–7.28(m,4H),7.25–7.13(m,6H),4.48–4.39(m,1H),4.28(dd,1H),4.15(dd,1H),4.09–4.00(m,1H),4.01–3.91(m,1H),1.51–1.39(m,18H),1.22(d,3H)。第四步：[(1R)-2-[6-[二(叔丁基氧羰基)氨基]嘌呤-9-基]-1-甲基-乙氧基]甲基-苯氧基-单磷酸(化合物1)[(1R)-2-[6-[bis(tert-butoxycarbonyl)amino]purin-9-yl]-1-methyl-ethoxy]methyl-phenoxy-phosphinicacid将N-叔丁基氧基-N-[9-[(2R)-2-(二苯氧基磷酰基甲氧基)丙基]嘌呤-6-基]氨基甲酸叔丁酯(1D)(粗品1.4kg)溶于乙腈(3.2L)和水(0.8L，乙腈：水(v:v)＝4:1)中，加入三乙胺(979g,9.67mol)，升温至50℃反应过夜。反应液冷却至室温，减压浓缩除去乙腈，浓缩残余物中加入0.5％的氨水溶液(5L)，充分搅拌，然后用乙酸乙酯(1.5L×3)萃取分层，水相冷却0℃，滴加3M盐酸水溶液调节pH＝1～3，然后用二氯甲烷(3L×2)萃取，合并二氯甲烷相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到暗红色油状的目标产物[(1R)-2-[6-[二(叔丁基氧羰基)氨基]嘌呤-9-基]-1-甲基-乙氧基]甲基-苯氧基-单磷酸(化合物1)(850g,两步总产率78％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ12.53(s,1H),8.81(s,1H),8.59(s,1H),7.29–7.19(m,4H),7.02(m,1H),4.43(d,1H),4.23(dd,1H),3.91(m,2H),3.66–3.61(m,1H),1.42(s,18H),1.09(d,3H)。31PNMR(162MHz,CDCl3)δ15.05。实施例26-氨基-9-[(2R)-2-[[氯(苯氧基)膦酰基]甲氧基]异丙基]嘌呤(化合物2)9-[(2R)-2-[[chloro(phenoxy)phosphoryl]methoxy]propyl]purin-6-amine将[(1R)-2-[6-[二(叔丁基氧羰基)氨基]嘌呤-9-基]-1-甲基-乙氧基]甲基-苯氧基-单磷酸(化合物1)(200g,0.355mol)溶于甲苯(2.0L)中，加入二氯亚砜(422g,3.55mol)，升温至90℃反应时间48小时后，反应期间，通过HPLC监控化合物2的非对映异构体纯度，非对映异构体纯度大于等于90％后，停止反应。反应液减压蒸馏得到黄色固体状的标题产物6-氨基-9-[(2R)-2-[[氯(苯氧基)膦酰基]甲氧基]异丙基]嘌呤(化合物2)，粗品150g，直接用于下一步反应。实施例36-氨基-9-[(2R)-2-[[氯(苯氧基)膦酰基]甲氧基]异丙基]嘌呤(化合物2)9-[(2R)-2-[[chloro(phenoxy)phosphoryl]methoxy]propyl]purin-6-amine将[(1R)-2-[6-[二(叔丁基氧羰基)氨基]嘌呤-9-基]-1-甲基-乙氧基]甲基-苯氧基-单磷酸(化合物1)(1500g,2.66mol)溶于甲苯(15.0L)中，加入二氯亚砜(1582.7g,13.3mol)，升温至90℃反应时间48小时，反应期间，通过HPLC监控化合物2的非对映异构体纯度，非对映异构体纯度大于等于90％后，停止反应。反应液减压蒸馏得到黄色固体状的标题产物6-氨基-9-[(2R)-2-[[氯(苯氧基)膦酰基]甲氧基]异丙基]嘌呤(化合物2)，粗品1015g，直接用于下一步反应。实施例4(2S)-2-[[[(1R)-2-(6-氨基嘌呤-9-基)-1-甲基-乙氧基]甲基-苯氧基-磷基]氨基]丙酸异丙酯(化合物3)Isopropyl(2S)-2-[[[(1R)-2-(6-aminopurin-9-yl)-1-methyl-ethoxy]methyl-phenoxy-phosphoryl]amino]propanoateL-丙氨酸异丙酯盐酸盐(52.5g,0.314mol)溶于二氯甲烷(200mL)溶液中，然后将6-氨基-9-[(2R)-2-[[氯(苯氧基)膦酰基]甲氧基]异丙基]嘌呤(化合物2)(粗品60g)的甲苯(300mL)溶液加入到反应液中，加入完毕，冷却至-25℃，滴加三乙胺(31.8g，0.314mol)，滴完后继续搅拌反应1小时后结束反应。向反应液中加入10％磷酸二氢钠水溶液(400mL)，充分搅拌萃取分层，有机相中加入15％碳酸氢钾水溶液(170mL)萃取分层后，有机相依次用用去离子水(150mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到(2S)-2-[[[(1R)-2-(6-氨基嘌呤-9-基)-1-甲基-乙氧基]甲基-苯氧基-磷基]氨基]丙酸异丙酯(化合物3)的粗品。将化合物3粗品加入到乙腈(12mL)与甲苯(108mL)的混合溶剂(乙腈/甲苯(v/v)＝1:9)中，室温搅拌6小时后，固体充分析出，过滤，滤饼用甲苯(200mL)洗涤，滤饼干燥得到纯化的产品化合物3(30g，产率35％，HPLC纯度为95.10％，手性HPLC非对映异构体纯度96.04％)。根据需要，若要得到更高非对映异构体纯度的化合物3，可继续进行如下操作：将化合物3(30g)加入到乙腈(120mL)中，升温至回流1小时，然后自然冷却至常温搅拌6小时后，固体充分析出，过滤，滤饼用乙腈(40mL)洗涤，滤饼干燥得到纯化的产品化合物3(15g，HPLC纯度为99.40％，手性HPLC非对映异构体纯度为99.79％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.33(s,1H),7.99(s,1H),7.19(m,2H),7.10(m,1H),7.00(m,2H),6.18(bs,2H),5.01(m,1H),4.33(dd,1H),4.12(m,3H),3.88(m,2H),3.67(m,1H),1.28(d,3H),1.22(m,9H)。31PNMR(162MHz,CDCl3)δ22.5。实施例5(2S)-2-[[[(1R)-2-(6-氨基嘌呤-9-基)-1-甲基-乙氧基]甲基-苯氧基-磷基]氨基]丙酸异丙酯(化合物3)Isopropyl(2S)-2-[[[(1R)-2-(6-aminopurin-9-yl)-1-methyl-ethoxy]methyl-phenoxy-phosphoryl]amino]propanoateL-丙氨酸异丙酯(232.5g,1.78mol)溶于二氯甲烷(1000mL)溶液中，冷却至-25℃，然后将6-氨基-9-[(2R)-2-[[氯(苯氧基)膦酰基]甲氧基]异丙基]嘌呤(化合物2)(粗品149g)的甲苯(600mL)溶液加入到反应液中，加入完毕，继续搅拌反应1小时后结束反应。向反应液中加入10％磷酸二氢钠水溶液(1.2L)，充分搅拌萃取分层，有机相中加入15％碳酸氢钾水溶液(0.5L)萃取分层后，有机相依次用用去离子水(0.5L×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到(2S)-2-[[[(1R)-2-(6-氨基嘌呤-9-基)-1-甲基-乙氧基]甲基-苯氧基-磷基]氨基]丙酸异丙酯(化合物3)的粗品。将化合物3粗品加入到乙腈(40mL)与甲苯(360mL)的混合溶剂(乙腈/甲苯(v/v)＝1:9)中，室温搅拌6小时后，固体充分析出，过滤，滤饼用甲苯(400mL)洗涤，滤饼干燥得到纯化的产品化合物3(120g，产率71％，HPLC纯度为99.39％，手性HPLC非对映异构体纯度96.05％)。根据需要，若要得到更高非对映异构体纯度的化合物3，可继续进行如下操作：将化合物3加入到乙腈(600mL)中，升温至回流1小时，然后自然冷却至常温搅拌6小时后，固体充分析出，过滤，滤饼用乙腈(200mL)洗涤，滤饼干燥得到纯化的产品化合物3(102g，HPLC纯度为99.86％，手性HPLC非对映异构体纯度为98.98％)。实施例6(2S)-2-[[[(1R)-2-(6-氨基嘌呤-9-基)-1-甲基-乙氧基]甲基-苯氧基-磷基]氨基]丙酸异丙酯(化合物3)Isopropyl(2S)-2-[[[(1R)-2-(6-aminopurin-9-yl)-1-methyl-ethoxy]methyl-phenoxy-phosphoryl]amino]propanoateL-丙氨酸异丙酯(1742g,13.3mol)溶于二氯甲烷(7.0L)溶液中，冷却至-25℃，然后将6-氨基-9-[(2R)-2-[[氯(苯氧基)膦酰基]甲氧基]异丙基]嘌呤(化合物2)(粗品1015g)的甲苯(6.0L)溶液加入到反应液中，加入完毕，继续搅拌反应1小时后结束反应。向反应液中加入10％磷酸二氢钠水溶液(9.0L)，充分搅拌萃取分层，有机相中加入15％碳酸氢钾水溶液(3.75L)萃取分层后，有机相依次用用去离子水(3.75L×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到(2S)-2-[[[(1R)-2-(6-氨基嘌呤-9-基)-1-甲基-乙氧基]甲基-苯氧基-磷基]氨基]丙酸异丙酯(化合物3)的粗品。将化合物3粗品加入到乙腈(0.24L)与甲苯(2.16L)的混合溶剂(乙腈/甲苯(v/v)＝1:9)中，室温搅拌6小时后，固体充分析出，过滤，滤饼用甲苯(3.0L)洗涤，滤饼干燥得到纯化的产品化合物3(700g，产率55％，HPLC纯度为97.97％，手性HPLC非对映异构体纯度94.28％)。根据需要，若要得到更高非对映异构体纯度的化合物3，可继续进行如下操作：将化合物3加入到乙腈(3.5L)中，升温至回流1小时，然后自然冷却至常温搅拌6小时后，固体充分析出，过滤，滤饼用乙腈(500mL)洗涤，滤饼干燥得到纯化的产品化合物3(500g，手性HPLC分析显示非对映异构体纯度99.29％)。