C‑C趋化因子受体9型(CCR9)的抑制剂和抗ALHA4BETA7整联蛋白阻断抗体的组合治疗的制作方法

相关申请的交叉引用

本申请要求2014年10月6日提交的美国临时专利申请系列号62/060,454的优先权，出于所有目的其全部内容通过引用并入本文。

发明背景

炎性肠病(ibd)是影响部分或全部胃肠(gi)道(如口腔、食管、胃、小肠、大肠(结肠)、直肠和肛门)的一组慢性炎性病症。ibd包括克罗恩病(crohn’sdisease)(cd)、溃疡性结肠炎(uc)和不确定的结肠炎。cd和uc可以通过临床、内镜和病理特征来区分。

cd是慢性炎症的一种疾病，可累及胃肠道的任何部位。该病的特征性症状包括严重腹痛、频繁腹泻、直肠出血、直肠紧迫感和右下腹部肿胀。

uc是结肠的慢性间歇缓解型炎性疾病。该疾病的特征在于炎症的重复发作，主要涉及延伸通过直肠和向上通过结肠的表面粘膜病变。急性发作的特征是慢性腹泻或便秘、直肠出血、痉挛和腹部疼痛。

ibd的特征在于白细胞(如淋巴细胞、粒细胞、单核细胞和巨噬细胞)从血液到肠的粘膜或上皮内层的渗透和炎症。包括淋巴细胞、嗜中性粒细胞、巨噬细胞和树突状细胞在内的多种炎性细胞类型有助于ibd。例如，t淋巴细胞通过t淋巴细胞表面上的粘附分子与内皮上的同源配体之间的协调相互作用而渗透胃肠道的粘膜。例如，在一些t淋巴细胞和b淋巴细胞表面表达的α4β7整联蛋白通过与胃肠道内皮细胞上的一种配体，粘膜地址素细胞粘附分子1(madcam-1)，结合而引导这些细胞的迁移。趋化因子受体和配体，例如受体ccr9及其配体ccl25也在炎性细胞的迁移中起作用，例如效应记忆t辅助细胞进入ibd中的肠上皮。

用于治疗ibd的当前疗法包括外科手术或使用抗肿瘤坏死因子(抗tnfα)抗体，例如英夫利昔单抗和阿达木单抗、氨基水杨酸盐、全身皮质类固醇、免疫抑制剂，例如，硫嘌呤和甲氨蝶呤、以及它们的组合。不幸的是，一些ibd患者不响应或不能耐受这样的药物治疗。

鉴于上述情况，很明显，对ibd有效的治疗方案，其能够阻断与淋巴细胞渗透有关的多种细胞类型和/或多种途径，可用于治疗所述疾病。本发明提供了这样的疗法以及药物组合物和相关的治疗方法。

发明概要

在一个方面，本公开内容提供了治疗或减轻哺乳动物中炎性肠病的发展的方法，所述方法包括施用合适量的ccr9趋化因子受体抑制剂和抗-α4β7整联蛋白阻断抗体。在一些实施方式中，所述炎性肠病是克罗恩病(cd)或溃疡性结肠炎(uc)。

在一些实施方式中，所述ccr9趋化因子受体抑制剂是具有分子量小于1500的小分子受体抑制剂。所述ccr9小分子受体抑制剂可具有约1495、1450、1400、1300、1200、1100、1000、900、800、700、600、500或更小的分子量。

在一些实施方式中，所述ccr9趋化因子受体抑制剂是具有分子量小于750的小分子受体抑制剂。所述ccr9小分子受体抑制剂可具有约745、700、650、600、550、500、450、400、350、300或更小的分子量。

在一些实施方式中，本文提供的所述ccr9小分子抑制剂可以通过式(i)或其盐表示：

其中r¹、r²、r³、r⁴、r⁵、r⁶、l、a¹、a²、a³、a⁴、a⁵、a⁶、a⁷和a⁸如下所定义。

在一些实施方式中，所述抗-α4β7整联蛋白阻断抗体是维多珠单抗(vedolizumab)或其生物类似物、生物更优物(biobetter)、生物等效物。在其它实施方式中，所述抗-α4β7整联蛋白阻断抗体是维多珠单抗(vedolizumab)

在一些实施方式中，所述ccr9趋化因子受体抑制剂和所述抗-α4β7整联蛋白阻断抗体以组合制剂施用。在其它实施方式中，依次施用所述ccr9趋化因子受体抑制剂和所述抗-α4β7整联蛋白阻断抗体。在还有的其它实施方式中，先施用所述ccr9趋化因子受体抑制剂，再施用所述抗-α4β7整联蛋白阻断抗体。在另一实施方式中，先施用所述抗-α4β7整联蛋白阻断抗体，再施用所述ccr9趋化因子受体抑制剂。

在一些实施方式中，所述ccr9趋化因子受体抑制剂是具有下式的化合物：

在另一方面，本公开提供了用于治疗或减少哺乳动物中炎性肠病发展的组合物，所述组合物包含治疗有效量的ccr9趋化因子受体抑制剂、治疗有效量的抗-α4β7整联蛋白阻断抗体，和药学上可接受的载体或赋形剂。

在一些实施方式中，所述炎性肠病是克罗恩病(cd)或溃疡性结肠炎(uc)。

在一些实施方式中，所述ccr9趋化因子受体抑制剂是具有分子量小于1500的小分子受体抑制剂。在其它实施方式中，所述ccr9趋化因子受体抑制剂是具有分子量小于750的小分子受体抑制剂。所述ccr9趋化因子受体抑制剂化合物可以由式(i)或其盐表示，如本文所述。

在一些实施方式中，所述抗-α4β7整联蛋白阻断抗体是维多珠单抗(vedolizumab)或其生物类似物、生物更优物、生物等效物。在其它实施方式中，所述抗-α4β7整联蛋白阻断抗体是维多珠单抗(vedolizumab)

在还有另一方面，本公开提供了用于治疗或减少哺乳动物中炎性肠病发展的试剂盒，所述试剂盒包含治疗有效量的ccr9趋化因子受体抑制剂、治疗有效量的抗-α4β7整联蛋白阻断抗体和有效施用的说明书。

在一些实施方式中，将所述ccr9趋化因子受体抑制剂和所述抗-α4β7整联蛋白阻断抗体配制为用于依次施用。在其它实施方式中，将所述ccr9趋化因子受体抑制剂和所述抗-α4β7整联蛋白阻断抗体配制为用于伴随施用。

在一些实施方式中，所述ccr9趋化因子受体抑制剂是具有分子量小于1500的小分子受体抑制剂。在其它实施方式中，所述ccr9趋化因子受体抑制剂是具有分子量小于750的小分子受体抑制剂。所述ccr9趋化因子受体抑制剂化合物可以由式(i)或其盐表示，如本文所述。在一些情况下，所述小分子受体抑制剂是维瑟浓(vercirnon，traficet-en^tm)或ccx507。

在一些实施方式中，所述抗-α4β7整联蛋白阻断抗体是维多珠单抗(vedolizumab)或其生物仿制药、生物更优物、生物等效物。在其它实施方式中，所述抗-α4β7整联蛋白阻断抗体是维多珠单抗(vedolizumab)

从下面的详细说明和附图，本发明的其它目的、特征和优点对本领域技术人员是显而易见的。

附图说明

图1a和1b显示ccr9(ccx507)的小分子抑制剂限制视黄酸分化的人t细胞与madcam-1的结合。图1a显示在视黄酸和il-12的存在下，cd3ε和cd28活化人pbmc。肠道因子ccr9和α4β7的表达被描绘为两个参数点图。显示了ccr9⁺α4β7⁺细胞的百分比。图1b显示体外分化的人ccr9⁺α4β7⁺t细胞的静态结合试验的数据。简言之，在有或没有1μmccx507存在下，混合ccr9⁺α4β7⁺细胞与500nm的hccl25，并加到madcam-1-fc包被的平板。采用定量测定各条件下粘附于madcam-1的细胞数量，并将其描绘为相对荧光单位(rfu)。

图2a、2b和2c说明ccx507在过继性t细胞转移的小鼠模型中的体内药效学效果。图2a显示了用于确定在短期t细胞运输模型中ccx507的体内药效学范围的实验设计。在5-30mg/kg的ccx507存在下，ot-i衍生的cd8⁺上皮内淋巴细胞(iels)的数目示于图2b，在抗-α4β7整联蛋白阻断抗体的存在下，ot-i衍生的cd8⁺上皮内淋巴细胞(iels)的数目示于图2c，作为条形图。

图3显示了在回肠和结肠中人ccr9基因表达的关联。获得了克罗恩病患者的活检样本。标准化基因表达来源于末端回肠和结肠样品。图3描绘了与ccr9的表达水平相比，所选基因的表达水平的热图。

图4a、4b、4c和4d显示，与单一治疗方案相比，ccx507和抗-α4β7整联蛋白阻断抗体的组合赋予更大的抵御大肠炎的保护作用。图4a显示了抗-α4β7整联蛋白阻断抗体和抗-tnfα抗体的给药方案。图4b提供了描绘野生型小鼠(fvb)和接受赋形剂对照(1％hpmc)、大鼠igg2a同种型对照、ccx507、抗-α4β7整联蛋白阻断抗体以及ccx507和抗-α4β7整联蛋白阻断抗体组合的小鼠的结肠的代表性照片。ccx507/抗-α4β7整联蛋白阻断抗体(图4c)和ccx507/抗-tnfα阻断抗体(图4d)的定量结肠vs重量比显示为散点图。

图5a和5b显示了小鼠的结肠组织的组织学分析的结果。图5a显示各小鼠的近端和远端结肠的代表性图像，代表各组的平均组织病理评分。ccx507和抗-α4β7抗体的组合如右图所示。图5b提供了研究中所有小鼠的组织学得分总和。

发明详述

i.引言

本公开部分基于意外的发现，即ccr9抑制剂(例如ccr9的小分子抑制剂)和抗α4β7整联蛋白的抗体的组合疗法可以在炎性肠病(例如克罗恩病、溃疡性结肠炎和不确定的结肠炎)的治疗中协同作用。本文提供了用于在所需患者(例如人或动物)中治疗ibd的方法、组合物和试剂盒。在一些实施方式中，所述方法包括向ibd患者施用治疗有效量的ccx507(维瑟浓)和维迪利珠单抗(vedirizumab)以引发临床反应或维持患者的临床缓解。

ii.定义

当描述本发明的化合物、组合物、方法和工艺时，除非另有说明，以下术语具有以下含义。

如本文使用的术语“一个”、“一种”或“该”不仅包括具有一个成员的方面，而且还包括具有多个成员的方面。例如，除非上下文另有明确规定，单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数指示物。因此，例如，提及“细胞”包括多个这样的细胞，并且提及“药剂”包括本领域技术人员已知的一种或多种药剂等。

术语“约”和“大约”通常是指考虑到测量的性质或精度，所测量的量的可接受程度的误差。典型的，示例的误差的程度在给定值或值范围的20％以内，优选10％以内，更优选在5％以内。或者，特别是在生物系统中，术语“约”和“大约”可以表示在一个数量级内的数值，优选在给定值的5倍以内，更优选在给定值的2倍以内。除非另有说明，此处给出的数值量是近似值，这意味着当没有明确说明时可以推断术语“约”或“大约”。

术语“炎性肠病”或“ibd”包括胃肠道疾病，例如克罗恩病(cd)、溃疡性结肠炎(uc)、不确定的结肠炎(ic)以及对于cd与uc不确定的ibd(“不确定的”)。炎性肠病(例如cd、uc、ic和不确定的)与所有其他疾病、综合征和胃肠道的异常(包括肠易激综合征(ibs))是不同的。ibd相关疾病的实例包括胶原性结肠炎和淋巴细胞性结肠炎。

术语“溃疡性结肠炎”或“uc”是指结肠或大肠的慢性间歇性和复发性炎性肠病(ibd)，其特征在于表面粘膜损伤，其延伸通过直肠并向上游发展。不同类型的溃疡性结肠炎根据炎症的位置和程度进行分类。uc的实例包括但不限于溃疡性直肠炎、直肠乙状结肠炎、左侧结肠炎和泛溃疡性(总)结肠炎。

术语“克罗恩病”或“cd”是指可以涉及胃肠道的任何部分的慢性炎症疾病。通常，小肠的远端部分，即回肠和盲肠受到影响。在其他情况下，该疾病限于小肠、结肠或肛门直肠区域。cd偶尔涉及十二指肠和胃，更罕见地涉及食道和口腔。uc的实例包括但不限于回肠结肠炎、回肠炎、胃十二指肠克罗恩病、空肠回肠炎和克罗恩(肉芽肿)结肠炎。

术语“患者”、“个体”或“病人”是指诸如哺乳动物的动物，包括但不限于灵长类动物(例如人)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠等。

术语“c-c趋化因子受体9型”、“ccr9”或“ccr9趋化因子受体”是指趋化因子ccl25的受体，也称为teck和scya25。人ccr9多肽序列列于例如genbank登录号np_001243298、np_006632、np_112477和xp_011531614中。人ccr9mrna(编码)序列列于例如genbank登录号nm_001256369、nm_006641、nm_031200和xm_011533312中。

术语“c-c趋化因子受体9抑制剂”、“ccr9抑制剂”或“ccr9趋化因子受体抑制剂”是指ccr9受体多肽、其变体或其片段的抑制剂或拮抗剂。

术语“小分子抑制剂”是指灭活、抑制或拮抗目标分子、生物分子、蛋白质或其他生物制品的小分子或低分子量有机化合物。

术语“α4β7整联蛋白”是指包含两个不同链(例如α4链和β7链)的异源二聚体整联蛋白分子。人整联蛋白α4链多肽序列列于例如genbank登录号np_000876中。人整联蛋白α4链mrna(编码)序列列于例如genbank登录号nm_000885中。人整联蛋白β7链多肽序列列于例如genbank登录号np_000880、xp_005268908和xp_005268909中。人整联蛋白β7链mrna(编码)序列列于例如genbank登录号nm_000889、xm_05268851和xm_05268852中。它也被称为lpam。

术语“抗-α4β7整联蛋白阻断抗体”或“抗-α4β7整联蛋白中和抗体”是指特异性结合于α4β7整联蛋白(α4β7整联蛋白异二聚体)多肽或其片段的抗体或其片段。在一些情况下，抗整联蛋白α4β7阻断抗体阻断α4β7整联蛋白与其任一配体的相互作用。

术语“生物类似物”是指与fda批准的生物制品(参考产品)高度相似的生物制品，且在药代动力学、安全性和功效方面与参考产品没有临床意义上的差异。

术语“生物等效物”是指与fda批准的生物制品(参考产品)在药学上等同且具有相似的生物利用度的生物产品。例如，根据fda，术语生物等效性被定义为“在适当设计的研究中，在类似的情况下，当以相同摩尔剂量施用时，药物等效物或药物替代物中的活性成分或活性部分在药物作用部位上获得的速率和程度方面无显著差异”(美国食品和药物管理局，“行业指南：口服药物产品的生物利用度和生物等效性研究-一般注意事项”，2003年，药物评估和研究中心)。

术语“生物更优物”是指与fda批准的生物制品(参考产品)处于同一类别但不完全相同的生物产品，且就安全性、有效性、稳定性等而言超过参考产品得到改善。

术语“治疗有效量”是指足以改善目标病症或症状的治疗剂的量。例如，对于给定参数，治疗有效量将显示出至少5％、10％、15％、20％、25％、40％、50％、60％、75％、80％、90％或至少100％的增加或减少。治疗效果也可以表示为“倍”的增加或减少。例如，治疗有效量可以比对照具有至少1.2倍、1.5倍、2倍、5倍或更多的效果。

术语“施用”或“给药”及其衍生术语是指可用于使药剂或组合物能够递送至所需生物作用部位的方法。这些方法包括但不限于：肠胃外给药(例如静脉内、皮下的、腹膜内、肌内、血管内、鞘内、鼻内、玻璃体内、输注和局部注射)、经粘膜注射、口服给药、栓剂给药和局部给药。本领域技术人员将知道用于施用治疗有效量的本发明化合物用于预防或缓解与疾病相关的一种或多种症状的其它方法。

术语“治疗的”或“治疗”是指对患者例如哺乳动物(特别是人或动物)中的疾病或医学状况(例如炎症)的治疗或治疗方法，其包括：改善疾病或医学状况，即消除或导致患者疾病或医学状况的消退；抑制疾病或医学状况，即减缓或阻止患者的疾病或医学状况的发展；或减轻患者的疾病或医学状况的症状。该术语包括疾病的预防性治疗以预防或降低获得或产生特定疾病的风险，或预防或降低疾病复发的风险。

“烷基”本身或作为另一个取代基的一部分是指可以是具有指定碳原子数(即，c1-8表示1-8个碳原子)的直链、环状或支链或其组合的烃基。术语“环烷基”本身或作为另一取代基的一部分是指具有指定碳数的环烷基，是术语“烷基”的子集。术语“烷基”的其它子集包括“直链”和“支链”烷基，其指无环烷基的两个不同类型。烷基的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、环己基、环戊基、(环己基)甲基、环丙基甲基、双环[2.2.1]庚烷、双环[2.2.2]辛烷等。在此列实例中，甲基、乙基、正丙基和正丁基烷基实例也是“直链烷基”基团的实例。类似地，异丙基和叔丁基也是“直链烷基”基团的实例。类似地，异丙基和叔丁基也是“支链烷基”基团的实例。环戊基、环己基、(环己基)甲基、环丙基甲基、双环[2.2.1]庚烷、双环[2.2.2]辛烷是“环烷基”基团的实例。在一些实施方式中，环丙基可以用作两个其它部分之间的桥连基团，并且被表示为-ch(ch2)ch-。除非另有说明，烷基基团可以是取代或未取代的。取代的烷基的实例包括卤代烷基、硫代烷基、氨基烷基等。适合的取代的烷基的其它实例包括但不限于：羟基异丙基、-c(ch3)2-oh、氨基甲基、2-硝基乙基、4-氰基丁基、2,3-二氯戊基和3-羟基-5-羧基己基、2-氨基乙基、五氯乙基、三氟甲基、2-二乙基氨基乙基、2-二甲基氨基丙基、乙氧基羰基甲基、甲基硫烷基甲基、甲氧基甲基、3-羟基戊基、2-羧基丁基、4-氯丁基和五氟乙基。取代烷基的合适取代基包括卤素、–cn、–co2r’、–c(o)r’、–c(o)nr’r”、氧代(＝o或–o^-)、–or’、–oc(o)r’、–oc(o)nr’r”–no2、–nr’c(o)r”、–nr”’c(o)nr’r”、–nr’r”、–nr’co2r”、–nr’s(o)r”、–nr’s(o)2r”’、–nr”’s(o)nr’r”、–nr”’s(o)2nr’r”、–sr’、–s(o)r’、–s(o)2r’、–s(o)2nr’r”、–nr’–c(nhr”)＝nr”’、–sir’r”r”‘、–osir’r”r”‘、–n3、取代或未取代的c6-10芳基、取代或未取代的5-10元杂芳基、以及取代或未取代的3-10元杂环基。可能的取代基的数目为0至(2m’+1)，其中m’是这种基团中碳原子的总数。对于取代的烷基，r’，r”和r”‘各自独立地是指各种基团，包括氢、取代或未取代的c1-8烷基、取代或未取代的c2-8烯基、取代或未取代的c2-8炔基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的芳氧基烷基。当r’和r”连接到同一氮原子时，它们可以与氮原子结合形成3-、4-、5-、6-或7-元环(例如，-nr’r”包括1-吡咯烷基和4-吗啉基)。此外，r’和r”，r”和r”‘或r’和r”‘可以与它们所连接的原子一起形成取代或未取代的5-、6-或7-元环。

“烷氧基”是指-o-烷基。烷氧基的实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基等。

“烯基”是指可以是直链、环状或支链或其组合的不饱和烃基。具有2-8个碳原子的烯基是优选的。烯基可以含有1、2或3个碳-碳双键。烯基的实例包括乙烯基、正丙烯基、异丙烯基、正丁基-2-烯基、正己基-3-烯基、环己烯基、环戊烯基等。除非另有说明，烯基可以是取代或未取代的。

“炔基”是指可以是直链、环状或支链或其组合的不饱和烃基。具有2-8个碳原子的炔基是优选的。炔基可以含有1、2或3个碳-碳三键。炔基的实例包括乙炔基、正丙炔基、正丁-2-炔基、正己基-3-炔基等。除非另有说明，炔基可以是取代或未取代的。

“烷基氨基”是指-n(烷基)2或-nh(烷基)。当烷基氨基含有两个烷基时，烷基可以组合在一起形成碳环或杂环。应当理解，烷基氨基的烷基可以是取代的或未取代的。烷基氨基的实例包括甲基氨基、叔丁基氨基、二甲基氨基、二异丙基氨基、吗啉基等。

作为取代的烷基，“氨基烷基”是指单氨基烷基或多氨基烷基，最常见被1-2个氨基取代。实例包括氨基甲基、2-氨基乙基、2-二乙基氨基乙基等。

“芳基”是指具有单环(双环)或多个环(优选双环)的多不饱和芳族烃基，其可以共价稠合或共价连接。具有6-10个碳原子的芳基是优选的，其中例如碳原子数可以指定为c6-10。芳基的实例包括苯基和萘-1-基、萘-2-基、联苯基等。芳基可以是取代的或未取代的，除非另有说明。取代的芳基可以被一个或多个取代基取代。芳基的合适取代基包括取代或未取代的c1-8烷基和如上取代烷基所述的那些取代基。

“卤”或“卤素”本身或作为取代基的一部分是指氯、溴、碘或氟原子。

作为取代的烷基，“卤代烷基”是指一卤代烷基或多卤代烷基，最通常被1-3个卤素原子取代。实例包括1-氯乙基、3-溴丙基、三氟甲基等。

“杂环基”是指含有至少一个选自氮、氧或硫的杂原子(通常为1至5个杂原子)的饱和或不饱和的非芳族基团。优选地，这些基团含有0-5个氮原子、0-2个硫原子和0-2个氧原子。更优选地，这些基团含有0-3个氮原子、0-1个硫原子和0-1个氧原子。杂环基的实例包括：吡咯烷、哌啶、咪唑烷、吡唑烷、丁内酰胺、戊内酰胺、咪唑啉酮、乙内酰脲、二氧戊环、邻苯二甲酰亚胺、哌啶、1,4-二恶烷、吗啉、硫代吗啉、硫代吗啉-s-氧化物、硫代吗啉-s、s-二氧化物、哌嗪、吡喃、吡啶酮、3-吡咯啉、噻喃、吡喃酮、四氢呋喃、四氢噻吩、奎宁环等。优选的杂环基是单环，尽管它们可以是稠合或共价连接到芳基或杂芳基环系统。

示例性的杂环基团可以由下式(aa)表示：

其中式(aa)通过m¹或m²上的自由价键连接；m¹表示o、nr^e或s(o)^l；m²表示cr^fr^g、o、s(o)^l或nr^e；其中可能需要省略一个r^f、r^g或r^e以在m¹或m²上产生游离价，例如cr^f、cr^g或n；l为0、1或2；j为1、2或3，且k为1、2或3，条件是j+k为3、4或5；并且r^a、r^b、r^c、r^d、r^e、r^f和r^g独立地选自下组：氢、卤素、未取代或取代的c1-8烷基、未取代或取代的c2-8烯基、未取代或取代的c2-8炔基、—cor^h、—co2r^h、—conr^hrⁱ、—nr^hcorⁱ、—so2r^h—so2nr^hrⁱ、—nr^hso2rⁱ—nr^hrⁱ、—or^h、–sir^hrⁱr^j、–osir^hrⁱr^j、–q¹cor^h、–q¹co2r^h、–q¹conr^hrⁱ、–q¹nr^hcorⁱ、–q¹so2r^h、–q¹so2nr^hrⁱ、–q¹nr^hso2rⁱ、–q¹nr^hrⁱ、–q¹or^h，其中q¹选自下组：c1-4亚烷基、c2-4亚烯基和c2-4亚炔基，且r^h、rⁱ和r^j独立地选自下组：氢和c1-8烷基，并且其中每个r^a、r^b、r^c、r^d、r^e、r^f、r^g、r^h、r^i和r取代基的脂族部分任选被1至3个选自下组的基团取代：卤素、—oh、—orⁿ、—oc(o)nhrⁿ、—oc(o)nrⁿr^o、—sh、—srⁿ、—s(o)rⁿ、—s(o)2rⁿ—s(o)2nhrⁿ、—s(o)2nrⁿr^o、—nhs(o)2rⁿ、—nrⁿs(o)2r^o、—c(o)nh2、—c(o)nhrⁿ、—c(o)nrⁿr^o、—c(o)rⁿ、—nhc(o)r^o、—nrⁿc(o)r^o、—nhc(o)nh2、—nrⁿc(o)nh2、—nrⁿc(o)nhr^o、—nhc(o)nhrⁿ、—nrⁿc(o)nr^or^p、—nhc(o)nrⁿr^o、—co2h、—co2rⁿ、—nhco2rⁿ、—nrⁿco2r^o、—cn、—no2、—nh2、—nhrⁿ、—nrⁿr^o、—nrⁿs(o)nh2和—nrⁿs(o)2nhr^o，其中rⁿ、r^o和r^p独立为未取代的c1-8烷基。此外，r^a、r^b、r^c、r^d、r^e、r^f和r^g中的任何两个可以组合形成桥环或螺环系。

优选地，r^a+r^b+r^c+r^d，除了氢的基团的数目是0、1或2。更优选地，r^a、r^b、r^c、r^d、r^e、r^f和r^g独立地选自下组：氢、卤素、未取代或取代的c1-8烷基、—c(o)r^h、—co2r^h、—c(o)nr^hr^h、—nr^hcorⁱ、—so2r^h、—so2nr^hrⁱ、—nso2r^hrⁱ、—nr^hrⁱ和—or^h，其中r^h和rⁱ独立地选自下组：氢和未取代的c1-8烷基；并且其中各r^a、r^b、r^c、r^d、r^e、r^f和r^g的取代基的脂族部分任选地被一至三个选自下组的基团取代：卤素、—oh、—orⁿ、—oc(o)nhrⁿ、—oc(o)nrⁿr^o、—sh、—srⁿ、—s(o)r^o、—so2rⁿ、—so2nh2、—so2nhrⁿ、—so2nrⁿor^o、—nhso2rⁿ、—nrⁿso2r^o、—c(o)nh2、—c(o)nhrⁿ、—c(o)nrⁿr^o、—c(o)rⁿ、—nhc(o)rⁿ、—nrⁿc(o)r^o、—nhc(o)nh2、—nrⁿc(o)nh2、—nrⁿc(o)nhr^o、—nhc(o)nhrⁿ、—nrⁿc(o)nrⁿr^o、—nhc(o)nrⁿr^o、—co2h、—co2rⁿ、—nhco2rⁿ、—nrⁿco2r^o、—cn、—no2、—nh2、—nhrⁿ、—nrⁿr^o、—nrⁿs(o)nh2和—nrⁿs(o)2nhr^o，其中rⁿ、r^o和r^p独立地为未取代的c1-8烷基。

更优选地，r^a、r^b、r^c、r^d、r^e、r^f和r^g独立地为氢或c1-4烷基。在另一个优选的实施方式中，r^a、r^b、r^c、r^d、r^e、r^f和r^g中的至少三个是氢。

“杂芳基”是指含有至少一个杂原子的芳族基团。实例包括：吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基、喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、酞嗪基、苯并三嗪基、嘌呤基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并异恶唑基、异苯并呋喃基、异吲哚基、吲哚嗪基、苯并三嗪基、噻吩并吡啶基、噻吩并嘧啶基、吡唑并嘧啶基、咪唑并吡啶基、苯并噻唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、异噻唑基、吡唑基、吲唑基、蝶啶基、咪唑基、三唑基、四唑基、恶唑基、异恶唑基、恶二唑基、噻二唑基、吡咯基、噻唑基、呋喃基或噻吩基。优选的杂芳基是具有至少一个芳环氮原子的那些，例如喹啉基、喹喔啉基、嘌呤基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并噻唑基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基等。优选的6-环杂芳基系统包括吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基等。优选的5-环杂芳基体系包括异噻唑基、吡唑基、咪唑基、噻吩基、呋喃基、三唑基、四唑基、恶唑基、异恶唑基、恶二唑基、噻二唑基、吡咯基、噻唑基等。

杂环基和杂芳基可以在任何可用的环碳或杂原子上连接。每个杂环基和杂芳基可以具有一个或多个环。当存在多个环时，它们可以稠合在一起或共价连接。每个杂环基和杂芳基必须含有至少一个选自氮、氧或硫的杂原子(通常为1至5个杂原子)。优选地，这些基团含有0-5个氮原子、0-2个硫原子和0-2个氧原子。更优选地，这些基团含有0-3个氮原子、0-1个硫原子和0-1个氧原子。除非另有说明，杂环基和杂芳基可以是取代或未取代的。对于取代的基团，取代基可以在碳或杂原子上。例如，当取代基为氧代(＝o或o-)时，所得基团可以具有羰基(-c(o))或n-氧化物(—n⁺—o^-)或—s(o)—或—s(o)2—。

取代烷基、取代烯基和取代炔基的合适取代基包括卤素、—cn、—co2r′、—c(o)r′、—c(o)nr′r″、氧代(═o或—o^-)、—or′、—oc(o)r′、—oc(o)nr′r″—no2、—nr′c(o)r″、—nr′″c(o)nr′r″、—nr′r″、—nr′co2r″、—nr′s(o)2r′″、—sr′、—s(o)r′、—s(o)2r′、—s(o)2nr′r″、—sir′r″r′″、—n3、取代或未取代的c6-10芳基、取代或未取代的5至10元杂芳基、和取代或未取代的3至10元杂环基，其数目为0至(2m’+1)，其中m’是这种基团中碳原子的总数。

取代的芳基、取代的杂芳基和取代的杂环基的合适取代基包括卤素、—cn、—co2r′、—c(o)r′、—c(o)nr′r″、氧代(═o或—o^-)、—or′、—oc(o)r′、—oc(o)nr′r″、—no2、—nr′c(o)r″、—nr′c(o)nr″r′″、—nr′r″、—nr′co2r″、—nr′s(o)2r″、—sr′、—s(o)r′、—s(o)2r′、—s(o)2nr′r″、—nr′—c(nhr″)═nr′″、—sir′r″r′″、—n3、取代或未取代的c1-8烷基、取代或未取代的c2-8烯基、取代或未取代的c2-8炔基、取代或未取代的c6-10芳基、取代或未取代的5至10元杂芳基、和取代或未取代的3至10元杂环基。可能的取代基的数目范围从零到芳族环系统上的开放价数的总数。

如上所述，r’、r″和r′″各自独立地表示各种基团，包括：氢、取代或未取代的c1-8烷基、取代或未取代的c2-8烯基、取代或未取代的c2-8炔基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳烷基和取代或未取代的芳氧基烷基。当r’和r″连接到同一氮原子时，它们可以与氮原子结合形成3、4、5、6或7元环(例如，-nr’r″包括1-吡咯烷基和4-吗啉基)。此外，r’和r″、r”和r′″或r’和r″可以与它们所连接的原子一起形成取代或未取代的5、6或7元环。

芳基或杂芳基环的相邻原子上的两个取代基可以任选地被式-t-c(o)—(ch2)q—u—的取代基取代，其中t和u独立地为—nr″″—、—o—、—ch2—或单键，且q为0至2的整数。或者，芳基或杂芳基环的相邻原子上的两个取代基可以任选地被式-a′-(ch2)r—b′—的取代基取代，其中a’和b’独立地为—ch2—、—o—、—nr″″—、—s—、—s(o)—、—s(o)2—、—s(o)2nr″″—或单键，且r为1至3的整数。如此形成的新环的单键之一可任选地被双键取代。或者，芳基或杂芳基环的相邻原子上的两个取代基可以任选地被式—(ch2)s—x—(ch2)t—的取代基取代，其中s和t独立地为0至3的整数，且x是—o—、—nr″″—、—s—、—s(o)—、—s(o)2—、或—s(o)2nr′—。—nr″″—和—s(o)2nr″″—中的取代基r″″是氢或未取代的c1-8烷基。

“杂原子”意在包括氧(o)、氮(n)、硫(s)和硅(si)。

“药学上可接受的”载体、稀释剂、或赋形剂是载体、稀释剂、或与制剂中的其它成分相容且不会有害于其接受者的赋形剂。

“药学上可接受的盐”是指对于给药到患者(例如哺乳动物)的可接受的盐(例如，对于给定剂量方案具有可接受的哺乳动物安全性的盐)。取决于本文所述化合物上发现的特定取代基，这样的盐可以衍生自药学上可接受的无机或有机碱和药学上可接受的无机或有机酸。当本发明的化合物含有相对酸性的官能团时，可以通过将这种化合物的中性形式与足量的所需碱(纯的或在合适的惰性溶剂中)接触来获得碱加成盐。衍生自药学上可接受的无机碱的盐包括：铝、铵、钙、铜、铁、亚铁、锂、镁、锰、亚锰、钾、钠、锌等。衍生自药学上可接受的有机碱的盐包括：伯胺、仲胺、叔胺和季胺的盐，包括取代胺、环胺、天然存在的胺等，例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、n,n′-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、n-乙基吗啉、n-乙基哌啶、葡糖胺、葡萄糖胺、组氨酸、海巴明(hydrabamine)、异丙胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、多胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等。当本发明的化合物含有相对碱性的官能团时，可以通过将这种化合物的中性形式与足量的所需酸(纯的或在合适的惰性溶剂中)接触来获得酸加成盐。衍生自药学上可接受的酸的盐包括：乙酸、抗坏血酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、葡糖酸、葡萄糖酸、谷氨酸、马尿酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、乳糖酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、萘磺酸、烟酸、硝酸、帕莫酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸等。

还包括氨基酸例如精氨酸等的盐，和诸如葡萄糖醛或半乳糖醛酸等有机酸的盐(参见，例如，berges.m.,等，“药用盐”，j.pharmaceuticalscience，1977年，66：1-19)。本发明的某些特定化合物含有碱性和酸性官能团，使得该化合物可被转化为碱或酸加成盐。

所述化合物的中性形式可以通过将所述盐与碱或酸接触，并以常规方式分离母体化合物来再生。在某些物理性质(如在极性溶剂中的溶解度)方面，该化合物的母体形式与各种盐形式不同，但是其它方面该盐等同于用于本发明的目的的化合物的母体形式。

“其盐”是指当酸的氢被诸如金属阳离子或有机阳离子等的阳离子代替时形成的化合物。优选地，所述盐是药学上可接受的盐，但这对于不打算用于给予患者的中间体化合物的盐而言不是必须的。

除了盐形式之外，本发明提供了前药形式的化合物。前药通常是有用的，因为在某些情况下，它们可能比母体药物更易于施用。例如，它们可以通过口服给药而具有生物利用度，而母体药物不是。前药在药物组合物中的溶解度也可以优于母体药物。多种前药衍生物是本领域已知的，例如依赖于前药的水解裂解或氧化活化的那些。前药的一个例子(但不限于)为作为酯施用的本发明化合物(“前药”)，然后被代谢水解成羧酸，即活性物质。另外的实例包括本发明化合物的肽(酰)基衍生物。

本文所述化合物的前药是那些在生理条件下容易发生化学变化以提供本发明化合物的化合物。此外，前药可以通过化学或生物化学方法在离体环境中转化为本发明的化合物。例如，当放置在具有合适的酶或化学试剂的透皮贴剂储库中时，前药可以被缓慢地转化成本发明的化合物。

前药可以以这样的方式(即以常规操作或在体内将修饰物裂解得到母体化合物)通过修饰化合物中的官能团来制备。前药包括多种化合物，其中羟基、氨基、巯基或羧基结合到任何基团，当向哺乳动物受试者施用时，其分别裂解以形成游离羟基、氨基、巯基或羧基。前药的实例包括但不限于本发明化合物中的醇和胺官能团的乙酸盐、甲酸盐和苯甲酸盐衍生物。在美国化学会研讨会系列第14卷t.higuchi和v.stella的“pro-drugsasnoveldeliverysystems”、1985年elsevier的h.bundgaard版的“designofprodrugs”和在1987年americanpharmaceuticalassociationandpergamonpress的edwardb.roche版的drugdesign在bioreversiblecarriers中讨论了前药的制备、选择和使用，其各自的全部内容通过引用并入本文。

本发明的化合物可以其药学上可接受的代谢物的形式存在。术语“代谢物”是指本发明化合物(或其盐)的代谢衍生物的药学上可接受的形式。在一些方面，代谢物可以是在体内易于转化为活性化合物的化合物的功能性衍生物。在其它方面，代谢物可以是活性化合物。

除非另有说明，术语“酸电子等排物”是指可以替代羧酸的基团，其具有酸性官能度和提供与羧酸类似的活性水平(或其他化合物特性如溶解度)的空间和电子特性。代表性的酸电子等排物包括：异羟肟酸、磺酸、亚磺酸、磺酰胺、酰基磺酰胺、膦酸、次膦酸、磷酸、四唑和氧代恶二唑。

本发明的某些化合物可以存在非溶剂化形式以及溶剂化形式，包括水合形式。通常，溶剂化形式和非溶剂化形式均包括在本发明的范围内。本发明的某些化合物可以以多晶型或无定形形式(即多晶型物)存在。通常，所有物理形式对于本发明预期的用途是等同的，并且应包括在本发明的范围内。

本发明的某些化合物具有不对称碳原子(光学中心)或双键；外消旋体、非对映异构体、几何异构体和单个异构体(例如，分离的对映异构体)都应包括在本发明的范围内。本发明的化合物还可以在构成这些化合物的一个或多个原子上含有非天然比例的原子同位素。例如，所述化合物可以用放射性同位素(例如氚(³h)、碘-125(¹²⁵i)或碳-14(¹⁴c))放射标记。本发明化合物的所有同位素变化，无论放射性的与否，均意图包括在本发明的范围内。

本发明的化合物可以包括可检测标记。可检测的标记是在低浓度(通常小于微摩尔，可能小于纳摩尔并且可能小于皮摩尔)下可检测的标记，并且可以容易地与其它分子区分，这是由于分子性质(例如分子量、质荷比、放射性、氧化还原电位、发光、荧光、电磁特性、结合性等)的差异。可检测的标记可以通过光谱、光化学、生化、免疫化学、电、磁、电磁、光学或化学手段等来检测。

多种可检测标记在本发明的范围内，包括：半抗原标记(例如生物素或与可检测抗体如辣根过氧化物酶抗体结合使用的标记)，质量标签标记(例如，稳定同位素标记)，放射性同位素标记(包括³h、¹²⁵i、³⁵s、¹⁴c或³²p)，金属螯合标记，发光标记包括荧光标记(如荧光素、异硫氰酸酯、德克萨斯红、罗丹明、绿色荧光蛋白等)、磷光标记和化学发光标记，通常具有大于0.1的量子产率，电活性和电子转移标记，酶调节器标记包括辅酶、有机金属催化剂辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶和通常用于elisa的其它，光敏剂标记，磁珠标记包括dynabeads，诸如胶体金、银、硒或其它金属和金属溶胶标记的比色标记(参见美国专利号5,120,643，出于所有目的其全部内容通过引用并入本文)或有色玻璃或塑料(例如聚苯乙烯、聚丙烯、胶乳等)珠标记，和炭黑标记。教导这些可检测标记的使用的专利包括美国专利号3,817,837、3,850,752、3,939,350、3,996,345、4,277,437、4,275,149、4,366,241、6,312,914、5,990,479、6,207,392、6,423,551、6,251,303、6,306,610、6,322,901、6,319,426、6,326,144和6,444,143，出于所有目的其全部内容通过引用并入本文。

可检测标记是可商购的或可以如本领域技术人员已知的那样制备。可检测标记可以使用反应性官能团共价连接到化合物上，其可以位于任何适当的位置。用于连接可检测标记的方法是本领域技术人员已知的。当反应性基团连接到烷基或与芳基核连接的取代的烷基链时，所述反应性基团可以位于烷基链的末端。

具体实施方式

a.使用组合疗法治疗炎性肠病

本公开提供了基于包含ccr9抑制剂和抗-α4β7整联蛋白抗体的组合疗法的方法、组合物和试剂盒。该疗法对于治疗受试者中的诸如克罗恩病(cd)和溃疡性结肠炎(uc)等ibd是有用的。本发明部分地基于意外发现，ccr9抑制剂和抗-α4β7整联蛋白抗体的协同组合在治疗ibd方面是有效的。

1.克罗恩病

本发明的组合物、方法和试剂盒可用于患有cd(包括所有类型的cd)的受试者。可以以有效量施用ccr9抑制剂和抗-α4β7整联蛋白抗体的组合疗法以诱导患有cd的受试者的临床反应或维持临床缓解。在一些实施方式中，该组合疗法减轻、减少或最小化cd的一种或多种症状的严重性。

cd的症状包括：腹泻、发烧、疲劳、腹痛或痉挛、大便血、口疮、食欲降低、体重减轻和肛周疾病。cd的额外症状或特征可以通过内窥镜检查(例如食管胃十二指肠镜检查、结肠镜检查、乙状结肠镜检查、内窥镜逆行胰胆管造影、内镜超声和气囊内窥镜检查以及由胃肠道组织活检)来评价。疾病的严重程度可分为轻度至中度、中度至重度和严重/突发性疾病。关于cd的附加描述可见于例如，lichtenstein等，amjgastroenterol，2009，104(2)：2465-83。

可以使用临床指数(例如克罗恩病活动指数或cdai(best等，gastroenterology，1976,70：439-44))来确定cd的严重程度以及对组合疗法的临床反应。该指数用于量化cd患者的症状。cdai可用于定义cd的临床反应或缓解。cdai由八个因素组成，每个因素在加权因子或乘数调整后加在一起(相加)。八个因素包括液体粪便数量、腹痛、总体幸福感、肠外并发症、止泻药物、腹部肿块、血细胞比容和体重。克罗恩病的缓解通常定义为cdai的下降或低于150点。严重疾病通常定义为大于450点的值。在某些方面，克罗恩病患者对特定药物的反应定义为cdai从基线(治疗第0周)大于70点的下降。

临床指数如cdai可用于确定本文所述的组合疗法是否在克罗恩病患者中引起临床反应或临床缓解。在一些实施方式中，如果患者的cdai评分在接受组合疗法时从基线降低70点或更多，则患者具有临床反应。如果患者的cdai评分在治疗诱导阶段结束时降低到小于150点，则患者是临床缓解cd。

2.溃疡性结肠炎

本发明的组合物、方法和试剂盒可以用于患有uc(包括所有类型的uc)的受试者。可以以有效量施用ccr9抑制剂和抗-α4β7整联蛋白抗体的组合疗法以诱导患有uc的受试者的临床应答或维持临床缓解。在一些实施方式中，所述组合疗法减轻、减少或最小化uc的一种或多种症状的严重性。

uc的症状包括但不限于：腹泻、腹痛和痉挛、直肠疼痛、直肠出血、紧迫性排便、无法排便、体重减轻、疲劳、发热或贫血。疾病的严重程度可分为轻度至中度、中度至重度和严重/突发性疾病。参见例如kornbluth等，amjgastroenterol，2004,99(7)：1371-85。

uc的疾病活动和对治疗的反应可以通过使用复合指数评分系统的定量分析来评估。通常，临床医生在评估uc疾病活动时至少考虑四个因素或变量：临床症状、生活质量、内镜评估和组织学评估。例如，结肠炎活动指数(cai)是结合以下疾病症状的定量测量：基于结肠镜检查的结肠炎症、腹泻、腹痛和痉挛以及血便。标准化的内镜评分系统(如uc严重程度的内镜指数(uceis))对于建立患者疾病指数评分是有用的。其他有用的疾病活动指数包括梅奥诊所评分(themayoclinicscore)(参见例如，rutgeert等，nengjmed，2005,353(23)：2462-76)和修改的梅奥病活动指数(mayodiseaseactivityindex)(mmdai；参见例如，schroeder等，nengjmed，1987,317(26)：1625-9)。梅奥诊所评分系统中使用的四个因素包括：粪便(肠)频率、直肠出血、内镜检查结果和医师对疾病严重程度的全面评估(例如每日腹部不适和幸福感一般)。

与梅奥诊所评分相比，mmdai包括从内镜检查评分1中除去“脆碎度”。因此，脆碎度的存在反映了2或3的内镜评分。mmdai评估4个小分(肠频率、直肠出血、内镜外观和医师的全面评估)，每个范围为0到3，最高总分为12分。

在一些实施方式中，患有uc的受试者对本文提供的组合疗法的临床反应对应于mmdai评分中与基线相比降低2分或更多，并且与基线相比减少25％或更大，和/或在直肠出血小分中与基线相比减少1点或更多。在其他实施方式中，临床反应对应于梅奥诊所评分中与基线相比降低3点或更高和30％。

施用所述组合疗法的uc受试者的临床缓解可以对应于直肠出血的0分，并且使用mmdai子量表的肠频率和医师评估的组合评分为2分或更低。在其他实施方式中，患有uc的受试者的临床缓解指的是具有2分或更少的梅奥诊所评分，并且没有超过1点的单个小分(肠频率、直肠出血、内镜外观和医师的全面评估)。

b.ccr9抑制剂和抗-α4β7整联蛋白抗体的组合疗法

本文提供了利用ccr9抑制剂和抗-α4β7整联蛋白抗体在减轻ibd受试者的炎症中的协同作用的方法、组合物和试剂盒。包括ccr9抑制剂和抗-α4β7整联蛋白抗体的组合治疗与单独的化合物/抗体相比，治疗ibd的一种或多种症状更有效。

1.趋化因子受体类型(ccr9)抑制剂

本发明提供调节ccr9活性的化合物。具体地，本发明提供具有抗炎或免疫调节活性的化合物。据信，本发明的化合物通过特异性调节或抑制趋化因子受体功能来干扰不适当的t细胞运输。趋化因子受体是与细胞外配体，例如趋化因子相互作用并且介导对配体的细胞反应(例如趋化性、增加的细胞内钙离子浓度等)的整合膜蛋白。因此，趋化因子受体功能的调节，如干扰趋化因子受体-配体相互作用，可以抑制或减少趋化因子受体介导的应答，以及治疗或预防趋化因子受体介导的病症或疾病。

不受任何特定理论的约束，认为本文提供的化合物干扰ccr9与其配体ccl25之间的相互作用。例如，本发明的化合物作为有效的ccr9拮抗剂，并且在用于ccr9的标志性疾病状态之一，炎症的动物试验中进一步证实了该拮抗活性。本发明考虑的化合物包括但不限于本文提供的示例性化合物及其盐。

例如，作为有效的ccr9拮抗剂的有用的化合物，并且这种拮抗活性已经在用于ccr9的标志性疾病状态之一的炎症的动物试验中进一步证实。因此，本文提供的化合物在用于治疗炎性肠病(例如溃疡性结肠炎和克罗恩病)的药物组合物和方法中是有用的。

在一些实施方式中，ccr9抑制剂，例如本公开的ccr9小分子抑制剂由式(i)或其盐表示：

其中r¹选自下组：取代或未取代的c2-8烷基、取代或未取代的c^1-8烷氧基、取代或未取代的c1-8烷基氨基和取代或未取代的c3-10杂环基，和

r²是h、f、cl或取代或未取代的c1-8烷氧基；或者

r¹和r²与它们所连接的碳原子一起形成非芳族碳环或杂环；

r³是h、取代或未取代的c1-8烷基、取代或未取代的c1-8烷氧基、或卤素；

r⁴是h或f；

r⁵是h、f、cl或-ch³；

r⁶是h、卤素、-cn、-co²r^a、-conh2、-nh2、取代或未取代的c1-8烷基、取代或未取代的c1-8烷氧基或取代或未取代的c1-8氨基烷基；

r^a是h或取代或未取代的c1-8烷基；

其中r⁵和r⁶可以一起形成碳环；

l是键、-ch2-、或-ch(ch3)-；

a¹、a²、a³、a⁴、a⁵、a⁶、a⁷和a⁸各自独立地选自下组：n、n-o和-cr⁸-；其中a¹、a²、a³、a⁴、a⁵、a⁶、a⁷和a⁸中至少一个且不超过两个是n或n-o；

r⁸各自独立地选自下组：h、卤素、-cn、-oh、氧代、取代或未取代的c1-8烷基、取代或未取代的c1-8烷氧基和-nr²⁰r²¹、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基和取代或未取代的杂环基；和

r²⁰和r²¹各自独立地为h或取代或未取代的c1-8烷基。

在式(i)的一些实施方式中，a¹或a²中的一个为n或n-o，a¹、a²、a³、a⁴、a⁵、a⁶、a⁷和a⁸的剩余的为-cr⁸-，其中每个r⁸是独立选择的。

在一些实施方式中，a²、a³、a⁴、a⁵中的两个为n或n-o，a¹、a²、a³、a⁴、a⁵、a⁶、a⁷和a⁸的剩余的为-cr⁸-，其中每个r⁸是独立选择的。

在一些实施方式中，式(i)的化合物或组合物由式(ii)或其盐表示：

其中r¹选自下组：取代或未取代的c2-8烷基、取代或未取代的c1-8烷氧基、取代或未取代的c1-8烷基氨基和取代或未取代的c3-10杂环基；

r²是h、f、cl或取代或未取代的c1-8烷氧基；或者

r¹和r²与它们所连接的碳原子一起形成非芳族碳环或杂环；

r³是h、取代或未取代的c1-8烷基、取代或未取代的c1-8烷氧基、或卤素；

r⁴是h或f；

r⁵是h、f、cl或-ch³；

r⁶是h、卤素、-cn、-co²r^a、-conh2、-nh2、取代或未取代的c1-8氨基烷基、取代或未取代的c1-8烷基、或取代或未取代的c1-8烷氧基；

r^a是h或取代或未取代的c1-8烷基；

其中r⁵和r⁶可以一起形成碳环；

l是键、-ch2-、或-ch(ch3)-；和

z选自下组：

和其n-氧化物；

其中z基团可以是未取代的或被1至3个独立选择的r⁸取代基取代的；

r⁸各自独立地选自下组：h、卤素、-cn、-oh、氧代、取代或未取代的c1-8烷基、取代或未取代的c1-8烷氧基和-nr²⁰r²¹、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基和取代或未取代的杂环基；和

r²⁰和r²¹各自独立地为h或取代或未取代的c1-8烷基。

在式(ii)的一些实施方式中，z选自下组：取代或未取代的喹啉基、取代或未取代的异喹啉基、取代或未取代的1,6-萘啶基、取代或未取代的噌啉基、取代或未取代的酞嗪基、取代或未取代的喹唑啉基。

在一个实施方式中，本文提供的式(i)化合物或组合物由式(iiia)或(iiib)或其盐表示：

其中r¹选自下组：取代或未取代的c2-8烷基、取代或未取代的c1-8烷氧基、取代或未取代的c1-8烷基氨基和取代或未取代的c3-10杂环基；

r²是h、f、cl或取代或未取代的c1-8烷氧基；或者

r¹和r²与它们所连接的碳原子一起形成非芳族碳环或杂环；

r³是h、取代或未取代的c1-8烷基、取代或未取代的c1-8烷氧基、或卤素；

r⁴是h或f；

r⁵是h、f、cl或-ch³；

r⁶是h、卤素、-cn、-co²r^a、-conh2、-nh2、取代或未取代的c1-8氨基烷基、取代或未取代的c1-8烷基、或取代或未取代的c1-8烷氧基；

r^a是h或取代或未取代的c1-8烷基；

或者其中r⁵和r⁶与它们所连接的碳原子一起形成碳环；

r⁸各自独立地选自下组：h、卤素、-cn、-oh、氧代、取代或未取代的c1-8烷基、取代或未取代的c1-8烷氧基和-nr²⁰r²¹、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基和取代或未取代的杂环基；

r²⁰和r²¹各自独立地为h或取代或未取代的c1-8烷基；和

n为0,1,2或3。

在式(iiia)或(iiib)或其盐的一个实施方式中，r¹选自下组：—ch2ch3、—ch(ch3)2、—c(ch3)3、—c(ch3)2ch2ch3、—c(ch2ch2)cn、—c(oh)(ch3)2、—och3、—och2ch3、—och(ch3)2、—oc(ch3)3、—och2ch(ch3)2、—ocf3和吗啉；r²是h、f或cl；或者r¹和r²可以一起形成—oc(ch3)2ch2—或者—c(ch3)2ch2ch2—；r³是h、—ch3、或者—och3；r⁴是h或f；r⁵是h；r⁶是h、—ch3、—ch2ch3、—ch(ch3)2、—c3h7、—ch2f、—chf2、—cf2ch3、—cf3、—ch2och3、—ch2oh、—ch2cn、—cn、或者—conh2；并且每个r⁸独立地选自下组：h、f、cl、br、—ch3、—oh、—och3、—och2ch3、—nh2、—n(ch3)2、和—cn。在一些情况下，r¹是—c(ch3)3。

在式(iiia)或式(iiib)的其它实施方式中，r²是h或f；r³为h；r⁴是h；并且r⁶是—ch3、—ch2f、—chf2、或—cf3。

在一个实施方式中，式(iiia)或(iiib)的化合物和组合物或其盐选自下组：

在一些实施方式中，ccr9抑制剂，例如本文提供的ccr9小分子抑制剂化合物和组合物选自下组：

其n-氧化物。

在一些实施方式中，优选的r¹取代基如下。在式(i、ii、iiia和iiib)中，r¹选自下组：取代或未取代的c2-8烷基、取代或未取代的c1-8烷氧基、取代或未取代的c1-8烷基氨基和取代或未取代的c3-10杂环基。当r¹为取代烷基时，烷基优选被卤素或羟基取代。当r¹是取代的烷氧基时，烷氧基优选被卤素取代。r¹优选为未取代的c2-8烷基，包括c3-8环烷基、c2-8卤代烷基、c1-8羟基烷基、未取代的c1-8烷氧基、c1-8卤代烷氧基和c1-8烷基氨基；更优选未取代的c2-8烷基、c2-8卤代烷基、未取代的c1-8烷氧基和c1-8烷基氨基；甚至更优选未取代的c2-8烷基、未取代的c1-8烷氧基和吗啉；更优选未取代的c2-8(烷基)；和最优选叔丁基。

在一些实施方式中，优选的r⁶取代基如下。在式(i、ii、iiia和iiib)中，r⁶是h、卤素、-cn、-co2ra、-conh2、-nh2、取代或未取代的c1-8烷基、取代或未取代的c1-8烷氧基、或取代或未取代的c1-8氨基烷基。当r⁶为取代烷基时，烷基优选被卤素、羟基、烷氧基或氰基取代。r⁶优选为-cn、-conh2、-nh2、未取代的c1-8烷基、未取代的c1-8卤代烷基和未取代的c1-8烷氧基；更优选未取代的c1-8烷基、或未取代的c1-8卤代烷基，更优选未取代的c1-8烷基；最优选甲基。

在一些实施方式中，本发明的ccr9小分子抑制剂化合物是

在一个实施方式中，所述ccr9小分子抑制剂为维瑟浓(traficet-en^tm)或ccx507。

本文提供的ccr9抑制剂化合物的详细描述及其制备方法见例如美国专利号8,916,601和美国专利申请公开号2013/0267492、2013/0059893、2012/0245138、2012/0165303、2011/0021523、2010/0191302、2010/0227902、2010/0190762、2010/0152186、2010/0056509、2009/0163498和2009/0005410，出于所有目的将其公开内容通过引用全部并入本文。

本文提供的化合物可以使用各种标准的有机化学转化来合成。实施例中总结了本发明中广泛用于合成目标化合物的某些一般反应类型。具体来说，描述了磺胺形成和氮杂-芳基n-氧化物形成的通用方法并且被常规地使用。

虽然不是穷尽的，但是可以用于制备本发明化合物的代表性合成有机转化包括在本文中。这些代表性的转化包括：标准功能基团操作，如硝基至氨基的还原，包括醇和氮杂芳基的官能团的氧化，通过ipso或其他机理进行芳基以取代引入各种基团(包括腈、甲基和卤素)，保护基团引入和去除，grignard形成和与亲电试剂的反应，包括但不限于buckwald、suzuki和sonigashira反应的金属介导的交叉偶联，卤化和其他亲电芳烃取代反应，重氮盐形成和与这些物质的反应，醚化，循环冷凝、脱水、氧化和还原导致杂芳基，芳基金属化和转移金属与随后的芳基-金属物种和亲电体(如酰氯或weinreb酰胺)的反应，酰胺化，酯化，亲核取代反应，烷基化，酰化，磺酰胺形成，氯磺酰化，酯和相关水解等。

本专利中要求保护的某些分子可以以不同的对映体和非对映体形式存在，并且这些化合物的所有这些变体都在本发明的范围内。特别地，当r⁸是oh并且与氮原子相邻时，虽然由式-n＝c(oh)表示，但应理解的是，互变异构形式-nh-c(o)-也在该式的范围内。

在以下综述中，从商业来源获得一些前体。这些商业来源包括aldrichchemicalco.、acrosorganics、ryanscientificincorporated、oakwoodproductsincorporated、lancasterchemicals、sigmachemicalco.、lancasterchemicalco.、tci-america、alfaaesar、davoschemicals和gfschemicals。

2.ccr9抑制剂的药物制剂

在另一方面，本公开提供调节ccr9活性的组合物或制剂。通常，用于调节受试者(例如人或动物)的趋化因子受体活性的所述组合物或制剂将包含本文提供的化合物和药学上可接受的赋形剂或稀释剂。

本文使用的术语“组合物”旨在包括包含指定量的特定成分的产品，以及直接或间接地由所述指定量的特定成分的组合产生的任何产品。“药学上可接受的”是指所述载体、稀释剂或赋形剂必须与制剂的其它成分相容且对其接受者无害。

用于施用本发明化合物的药物组合物可以方便地以单位剂量形式存在，并且可以通过药学领域熟知的任何方法制备。所有方法包括：使活性成分与构成一种或多种辅助成分的载体结合的步骤。通常，所述药物组合物通过均匀且紧密地将活性成分与液体载体或细碎固体载体或两者结合，并且然后，如果需要的话，将产物成形为所需制剂而制得。在所述药物组合物中，所述活性物质化合物的含量足以产生疾病过程或病症所需的效果。

在一些实施方式中，本公开的ccr9抑制剂是具有结晶形式的药物化合物。ccr9抑制剂的这种结晶形式的非限制性实例描述于例如美国专利号9,133,124中，出于所有目的其全部内容通过引用并入本文。

包含活性成分的药物组合物可以是适合于口服使用的形式，例如，如美国专利号6,451,399中所述的片剂、锭剂、含片、水性或油性悬浮液、可分散粉末或颗粒、乳液和自乳化剂，硬胶囊或软胶囊、或糖浆或酏剂。用于口服使用的组合物可以根据本领域已知的制备药物组合物的任何方法来制备。这样的组合物可以含有一种或多种选自：甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂的试剂，以提供药学上精致和可口的制剂。片剂含有与适用于制造片剂的其它无毒的药学上可接受的赋形剂混合的活性成分。这些赋形剂可以是例如惰性稀释剂(如纤维素、二氧化硅、氧化铝、碳酸钙、碳酸钠、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、乳糖、磷酸钙或磷酸钠)、造粒和崩解剂(例如玉米淀粉或海藻酸)、粘合剂(例如pvp、纤维素、peg、淀粉、明胶或阿拉伯胶)、以及润滑剂(例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石)。所述片剂可以是未包衣的，或者它们可以通过已知技术以内包衣或其他方式以延迟在胃肠道中的崩解和吸收，从而在较长时间内提供持续的作用。例如，可以使用延时材料，例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。它们也可以通过美国专利号4,256,108、4,166,452和4,265,874中描述的技术包衣以形成用于控制释放的渗透治疗片剂。

用于口服使用的制剂也可以作为硬明胶胶囊存在，其中活性成分与惰性固体稀释剂(例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混合，或作为软明胶胶囊存在，其中活性成分与水或油介质(例如花生油、液体石蜡或橄榄油)混合。另外，乳液可以用非水混溶性成分如油制备，并用表面活性剂(例如单甘油二酯、peg酯等)来稳定。

水性悬浮液含有与适用于制备水性悬浮液的赋形剂混合的活性物质。这种赋形剂是悬浮剂(例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯胶)、分散剂或润湿剂可以是天然存在的磷脂(例如卵磷脂)、或环氧烷与脂肪酸的缩合产物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)、或环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物(例如十七烷基乙氧基鲸蜡醇)、或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇(如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯)的偏酯的缩合产物、或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物(例如聚乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯)。所述水性悬浮液还可以含有一种或多种防腐剂(例如乙基、或正丙基、对羟基苯甲酸酯)、一种或多种着色剂、一种或多种调味剂和一种或多种甜味剂(例如蔗糖或糖精)。

油性悬浮液可以通过将活性成分悬浮在植物油(例如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油)或矿物油(如液体石蜡)中来配制。所述油性悬浮液可以含有增稠剂(例如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇)。可以加入如上所述的甜味剂和调味剂以提供可口的口服制剂。这些组合物可以通过加入抗氧化剂(如抗坏血酸)来保存。

适于通过加入水制备水性悬浮液的分散粉末和颗粒提供与分散剂或润湿剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂混合的活性成分。合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂以上述已经提到的那些为例。还可以存在另外的赋形剂(例如甜味剂、调味剂和着色剂)。

本发明的药物组合物也可以是水包油乳液的形式。油相可以是植物油(例如橄榄油或花生油)或矿物油(例如液体石蜡或它们的混合物)。合适的乳化剂可以是天然存在的树胶(例如阿拉伯胶或黄蓍胶)、天然存在的磷脂(例如大豆、卵磷脂)以及衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯(例如山梨醇单油酸酯)和所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物(例如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯)。所述乳液还可以含有甜味剂和调味剂。

糖浆和酏剂可以用甜味剂(例如甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖)配制。这种制剂还可含有缓和剂、防腐剂、调味剂和着色剂。口服溶液可以与例如环糊精、peg和表面活性剂组合制备。

所述药物组合物可以是无菌可注射的水性或油性悬浮液的形式。该悬浮液可以根据已知技术使用上述已经提及的那些合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂配制。所述无菌可注射制剂还可以是无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如作为1,3-丁二醇中的溶液。在可接受的载体和溶剂中，可以使用的是水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌轴油(axedoils)通常被用作溶剂或悬浮介质。为此，可以使用任何温和的固定油(包括合成的单甘油酯或甘油二酯)。此外，脂肪酸(如油酸)可用于制备注射剂。

本文公开的化合物还可以以栓剂的形式施用，用于直肠给药。这些组合物可以通过将药物与合适的非刺激性赋形剂混合来制备，所述赋形剂在常温下为固体但在直肠温度下为液体，因此将在直肠中熔化以释放药物。这些材料是可可脂和聚乙二醇。此外，所述化合物可以通过溶液或软膏通过眼睛递送施用。此外，本发明化合物的透皮递送可以通过离子电渗贴片等实现。

对于局部使用，使用含有本发明化合物的霜剂、软膏、凝胶剂、溶液或悬浮液。如本文所用，局部应用也意在包括漱口水和漱口剂的使用。

本发明的药物组合物和方法还可包含本文所述的其它治疗性活性化合物，例如在治疗上述病理状况中使用的那些。

3.抗-α4β7整联蛋白阻断抗体

适用于治疗炎性肠病(例如克罗恩病和溃疡性结肠炎)的抗-α4β7整联蛋白抗体包括源自抑制α4β7整联蛋白与其任一配体(如黏膜地址素(madcam-1)、纤连蛋白、血管细胞粘附分子(vcam)和类似物)结合的任何所需来源的抗体。抗-α4β7整联蛋白抗体可以是人抗体、小鼠抗体、兔抗体、工程化抗体(例如嵌合抗体、人源化抗体以及抗体的抗原结合片段(例如fab、fv、scfv、fab’和f(ab’)2片段。

在一些实施方式中，抗-α4β7整联蛋白抗体结合到α4链上的表位、β7链上的表位或通过α4链和β7链的缔合形成的复合表位。在一些情况下，抗-α4β7整联蛋白抗体结合到由α4和β7链缔合形成的表位，并且如果α4和β7链不缔合或不复合在一起，则不结合到α4链或β7链上的表位。

用于本文所述方法的抗-α4β7整联蛋白抗体的非限制性实例包括：维多珠单抗那他珠单抗amg181(安进-amgen)以及例如国际专利公开号wo2012/151248、美国专利号7,147,851、7,402,410、8,444,981、8,454,961、8,454,962、8,871,490和美国专利申请公开号2015/0086563中所描述的，出于所有目的其公开的内容通过引用全部并入本文。另外有用的抗-α4β7整联蛋白抗体包括：本文所述的任何抗-α4β7整联蛋白抗体的生物等效物、生物类似物和生物更优物。

在一些实施方式中，本公开的抗-α4β7整联蛋白抗体是具有氨基酸序列的抗体，所述氨基酸序列与抗-α4β7整联蛋白参考抗体(例如维多珠单抗、amg181或本领域技术人员已知的其他抗-α4β7整联蛋白抗体)相比具有至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或更多序列同一性。在一些情况下，所述抗体变体在参比抗体的某些氨基酸位置具有一个或多个氨基酸取代、缺失和/或添加，但保留抗原结合活性。

本领域技术人员认识到：可以通过在比较窗口或序列的指定区域比较两个最佳比对序列来确定“序列同一性的百分比”，其中，与参考序列(其不包括添加或缺失)相比，在比较窗口中所述多肽序列的部分可以包括添加或缺失(如间隙)，用于两个序列的最佳比对。该百分比可以通过确定相同核酸碱基或氨基酸残基出现在两个序列中以产生匹配位置的数目的位置的数目、将匹配位置的数量除以在比较窗口中的位置的总数并将结果乘以100以产生序列同一性的百分比来计算。序列同一性百分比可以使用blast或blast2.0序列比较算法进行测量，用默认参数，或通过手动对准和目视检查。

可以使用本领域技术人员认可的各种标准方法生成抗体、其片段、其变体及其衍生物。参见例如harlow，e.和lanedp.抗体：实验室手册，冷泉港：冷泉港实验室出版社，1988。抗原结合片段如fab和f(ab’)²片段可以通过基因工程产生。用于生产嵌合和进一步工程化的单克隆抗体的方法包括在riechmann等，nature，1988,332：323、liu等，proc.nat.acad.sci.usa，1987,84：3439，larrick等，bio/technology,1989,7:934和winter等，tips，1993,14：139中描述的那些。用于人或部分人抗体的生产的转基因动物的生产和使用的技术的实例被描述在例如davis等，2003，“从转基因小鼠生产人抗体”productionofhumanantibodiesfromtransgenicmice刊于lo编.《抗体工程方法和方案》(antibodyengineeringmethodsandprotocols),休玛娜出版社(humanapress),新泽西:191-200。

4.抗-α4β7整联蛋白抗体的药物制剂

本文提供抗-α4β7整联蛋白抗体的制剂，其可以稳定抗体、减少抗体聚集体的形成、延缓抗体的降解和/或最大程度降低抗体的免疫原性。所述制剂可以包括抗氧化剂或螯合剂、至少一种游离氨基酸、表面活性剂、非还原糖和/或缓冲剂。

所述抗氧化剂或螯合剂可以是柠檬酸盐、乙二胺四乙酸(edta)、乙二醇四乙酸(egta)、二巯基丙醇、二亚乙基三胺五乙酸或n,n-双(羧甲基)甘氨酸；优选柠檬酸盐或edta。游离氨基酸可以是组氨酸、丙氨酸、精氨酸、甘氨酸、谷氨酸及其组合。表面活性剂可以是聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、triton(叔辛基苯氧基聚乙氧基乙醇、非离子洗涤剂，十二烷基硫酸钠(sds)，月桂基硫酸钠，辛基辛酸钠，月桂基、肉豆蔻基-、亚油基-(linoleyl-)或硬脂基-磺基甜菜碱，月桂基-、肉豆蔻基-、亚油基-或硬脂基-肌氨酸，亚油基-、肉豆蔻基-或鲸蜡基-甜菜碱，月桂酰胺丙基-、椰油酰胺丙基-、亚油酰氨基丙基-、肉豆蔻酰氨基丙基-、棕榈丙基-或异硬脂酰胺丙基-甜菜碱(如月桂酰氨基丙基)，肉豆蔻酰氨基丙基-、棕榈丙基-或异硬脂酰胺丙基-二甲胺，椰油基甲基钠或油基-牛磺酸甲酯二钠，山梨醇单棕榈酸酯，聚乙二醇(peg)、聚丙二醇(ppg)和聚氧乙烯与聚氧丙烯二醇的共聚物，优选聚山梨醇酯80。

缓冲剂可以是可将制剂的ph调节至约5.0至约7.5，至约ph5.5至约7.5，至约ph6.0至约7.0，或约6.3至约6.5的ph的缓冲剂。缓冲剂的非限制性实例包括：乙酸盐、琥珀酸盐、葡糖酸盐、组氨酸、柠檬酸盐、磷酸盐、马来酸盐、二甲胂酸盐、2-[n-吗啉]乙磺酸(mes)、双(2-羟乙基)亚氨基三(羟甲基)甲烷(bis-tris)、n-[2-乙酰氨基]-2-亚氨基二乙酸(ada)、甘氨酰甘氨酸和其它有机酸缓冲液，优选组氨酸或柠檬酸盐。

在一些实施方式中，抗-α4β7整联蛋白抗体处于冻干制剂中，例如干燥形式。在一些情况下，所述冻干制剂包括所述抗-α4β7整联蛋白抗体和一种或多种赋形剂(例如非还原糖、缓冲剂、游离氨基酸和/或表面活性剂)。

在一些情况下，所述冻干制剂含有至少约50mg，至少约60mg，至少约70mg，至少约80mg，至少约90mg，至少约100mg，至少约120mg，至少约140mg，至少约180mg，至少约200mg，至少约220mg，至少约240mg，至少约280mg，至少约300mg，至少约400mg，至少约500mg，至少约600mg，至少约700mg，至少约800mg，至少约900mg的抗-α4β7整联蛋白抗体。在一些情况下，将所述冻干制剂以单剂量存储在一个小瓶中。

在一些实施方式中，所述抗-α4β7整联蛋白抗体是液体制剂。这样的制剂可以包括所述抗-α4β7整联蛋白抗体、缓冲剂、非还原糖和/或游离氨基酸。

存在于液体制剂中的抗体的量可以是至少约25mg/ml至约200mg/ml抗-α4β7整联蛋白抗体，例如25mg/ml至约200mg/ml，25mg/ml至约150mg/ml，25mg/ml至约100mg/ml，50mg/ml至约200mg/ml，50mg/ml至约150mg/ml，50mg/ml至约100mg/ml，100mg/ml至约200mg/ml，或150mg/ml至约200mg/ml抗-α4β7整联蛋白抗体。

所述非还原糖可以是但不限于：甘露糖醇、山梨醇、蔗糖、海藻糖、棉子糖、水苏糖、松三糖、葡聚糖、麦芽糖醇、乳糖醇、异麦芽酮糖、异麦芽糖醇(palatinit)及其组合。在一些实施方式中，所述非还原糖与所述抗-α4β7整联蛋白抗体的比例为至少400:1(摩尔：摩尔)，至少400:1(摩尔：摩尔)，至少400:1(摩尔：摩尔)摩尔)，至少600:1(摩尔：摩尔)，至少625:1(摩尔：摩尔)，至少650:1(摩尔：摩尔)，至少700:1(摩尔：摩尔)，至少750:1(摩尔：摩尔)，至少800:1(摩尔：摩尔)，至少1000:1(摩尔：摩尔)，至少1100:1(摩尔：摩尔)，至少1200:1(摩尔：摩尔))，至少1300:1(摩尔：摩尔)，至少1400:1(摩尔：摩尔)，至少1500:1(摩尔：摩尔)，至少1600:1(摩尔：摩尔)，至少1700:1(摩尔：摩尔)，至少1800：1(摩尔：摩尔)，至少1900：1(摩尔：摩尔)或至少2000：1(摩尔：摩尔)。

所述抗-α4β7整联蛋白抗体的示例性制剂包括但不限于：例如在美国专利申请公开号2012/0282249、2014/0377251和2014/0341885中所述的那些，出于所有目的其公开内容通过引用全部并入本文。

c.组合疗法的施用方法

在另一方面，本公开提供了用于治疗ibd(例如cd和uc)的组合疗法。所述组合疗法包括治疗有效量的ccr9抑制剂和治疗有效量的抗-α4β7整联蛋白阻断抗体。所述治疗剂的组合可以协同作用以实现各种疾病的治疗或预防。使用这种方法，可以使用较低剂量的每种药剂来实现治疗功效，从而减少不良副作用的可能性。

术语“治疗有效量”是指研究者、兽医、医生或其他治疗提供者正在寻求的引发细胞、组织、系统或动物(例如人)的生物或医学反应的化合物的量。

根据疾病状态和受试者的状况，本公开的化合物、抗体和制剂可以通过口服、肠胃外(例如肌肉内、腹膜内、静脉内、icv、脑内注射或输注、皮下注射或植入物)、吸入、鼻、阴道、直肠、舌下或局部给药途径施用。此外，所述化合物和抗体可以单独或一起以合适的剂量单位配制成含有常规无毒的药学上可接受的载体、佐剂和适合于每次给药唤醒的载体的制剂。本公开还考虑以长效制剂施用本公开的化合物和抗体。

在ibd(如克罗恩病和uc)的治疗中，ccr9抑制剂的合适剂量水平通常为每千克患者体重每天约0.001至100mg，其可以单剂量或多剂量施用。优选地，所述剂量水平为每天约0.01至约50mg/kg；更优选每天约0.05至约10mg/kg。合适的剂量水平可以是每天约0.01至50mg/kg，约0.05至10mg/kg，或约0.1至5mg/kg。在该范围内，所述剂量可以为每天0.005至0.05mg/kg，每天0.05至0.5mg/kg，每天0.5至5.0mg/kg，或每天5.0至50mg/kg。

对于口服给药，所述ccr9抑制剂优选以含有1.0-1000毫克活性成分，特别是1.0mg、5.0mg、10.0mg、15.0mg、20.0mg、25.0mg、50.0mg、75.0mg、100.0mg、150.0mg、200.0mg、250.0mg、300.0mg、400.0mg、500.0mg、600.0mg、750.0mg、800.0mg、900.0mg和1000.0mg的所述活性成分的片剂形式用于对待治疗患者的剂量的症状调整。

所述ccr9抑制剂可以每天1至4次的方案施用，优选每天一次或两次。

在ibd(如克罗恩病和uc)的治疗中，合适剂量水平的抗-α4β7整联蛋白抗体提供有效量的抗体或其制剂，从而在人类患者中诱导ibd的缓解。在一些实施方式中，所述治疗有效量的抗-α4β7整联蛋白抗体足以在诱导阶段结束时达到约5μg/ml至约60μg/ml的抗-α4β7整联蛋白抗体的平均谷值血清浓度，例如在诱导阶段结束时约5μg/ml至约60μg/ml，约10μg/ml至约50μg/ml，约15μg/ml至约45μg/ml，约20μg/ml至约30μg/ml，约25μg/ml至约35μg/ml，或约30μg/ml至约60μg/ml的抗-α4β7整联蛋白抗体的平均谷值血清浓度。

抗体的合适剂量可以从约0.1mg/kg，约0.3mg/kg，约0.5mg/kg，约1mg/kg，约2mg/kg，约3mg/kg，约4mg/kg，约5mg/kg，约6mg/kg，约7mg/kg，约8mg/kg，约9mg/kg或约10mg/kg施用。

在一些实施方式中，总剂量为约6mg，约10mg，约20mg，约30mg，约40mg，约50mg，约60mg，约70mg，约80mg，约90mg，约100mg，约125mg，约150mg，约175mg，约200mg，约225mg，约250mg，约275mg，约300mg，约325mg，约350mg，约375mg，约400mg，约425mg，约450mg，约475mg，约500mg，约525mg，约550mg，约575mg，约650mg或更多。

在一些实施方式中，所述诱导期为至少约2周，至少约3周，至少约4周，至少约5周，至少约6周，至少约7周，至少约8周，至少约9周，或至少约10周的治疗。

诱导阶段期间的治疗方案可包括施用高剂量、频繁施用、或高剂量和频繁施用的组合的所述抗-α4β7整联蛋白抗体或其制剂。在某些情况下，在诱导阶段，每天、每隔一天、每两天、每三天一次、每周一次、每十天、每两周一次、每三周一次、或每月一次施用一剂量。

在一些实施方式中，所述诱导给药在治疗开始(第0天)提供一次和在治疗开始后约两周提供一次。诱导期持续时间可达6周。在其他实施方式中，诱导期持续时间为6周，并且在头两周内施用多个诱导剂量。在实例中，当患者具有严重的ibd或对抗-tnfα治疗无反应时，相比于患有轻度至中度ibd的患者，诱导期具有更长的持续时间。

另外，在ibd的治疗中，合适剂量水平的抗-α4β7整联蛋白抗体提供有效量的抗体或其制剂，以维持人类患者中ibd的缓解。因此，在治疗的维持阶段期间，抗-α4β7整联蛋白抗体的治疗有效量足以在维持期达到约1μg/ml至约25μg/ml的抗-α4β7整联蛋白抗体的平均稳态谷底血清浓度，在诱导阶段末期例如约1μg/ml至约25μg/ml，约1μg/ml至约20μg/ml，约1μg/ml至约15μg/ml，约1μg/ml至约10μg/ml，约1μg/ml至约5μg/ml，约5μg/ml至约25μg/ml，约5μg/ml至约20μg/ml，约5μg/ml至约15μg/ml，约5μg/ml至约10μg/ml，约15μg/ml至约25μg/ml，约15μg/ml至约20μg/ml，约10μg/ml至约25μg/ml，约10μg/ml至约20μg/ml，约10μg/ml至约15μg/ml，或约20μg/ml至约25μg/ml的抗-α4β7整联蛋白抗体的平均稳态谷底血清浓度。

维持剂量可以每周一次，每隔一周一次，每三周一次，每四周一次，每5周一次，每6周一次，每7周一次，每8周一次，每9周一次，或每10周一次施用。在维持阶段的一些实施方式中，施用相同的给药量。在维持阶段的其它实施方式中，在维持阶段施用一种或多种不同的给药量。另外，根据病程，可以增加给药频率。

抗-α4β7整联蛋白抗体或其制剂可以通过注射给药，例如静脉内注射、肌内注射、皮下注射、动脉内注射、腹膜内注射、玻璃体内注射等。如果所述制剂是固体或冻干形式，则施用抗体的方法可包括将干燥制剂重建成液体制剂。在一些实施方式中，可以局部施用抗体或其制剂，例如以贴剂、霜剂、气雾剂或栓剂施用。在其它实施方式中，局部施用途径包括鼻、吸入或透皮给药。

然而，应当理解，任何特定患者的具体剂量水平和剂量频率可以变化，并且将取决于多种因素(包括所用特定化合物的活性、代谢稳定性和该化合物的作用时间、年龄、体重、遗传特征、总体健康、性别、饮食、给药方式和时间、排泄速率、药物组合、特定病情的严重程度以及宿主经历的治疗)。

本文所述的ccr9抑制剂与本公开的抗-α4β7整联蛋白抗体的重量比可以变化并且将取决于每种成分的有效剂量。通常，将使用每种的有效剂量。因此，例如，其中ccr9抑制剂是与抗-α4β7整联蛋白抗体组合的，所述ccr9抑制剂与所述抗-α4β7整联蛋白抗体的重量比通常为约1000:1至约1:1000，优选约200：1至约1：200。

组合疗法包括共施用ccr9抑制剂和抗-α4β7整联蛋白抗体，顺序施用ccr9抑制剂和抗-α4β7整联蛋白抗体，施用含有ccr9抑制剂和抗-α4β7整联蛋白抗体的组合物，或同时施用单独的组合物使得一种组合物含有ccr9抑制剂且另一种组合物含有抗-α4β7整联蛋白抗体。

共同施用包括在本发明的抗-α4β7整联蛋白抗体的0.5、1、2、4、6、8、10、12、16、20或24小时内施用本发明的ccr9抑制剂。共同施用还包括同时、大致同时(例如在的约1、5、10、15、20或30分钟内)，或以任何顺序依次施用。此外，所述ccr9抑制剂和所述抗-α4β7整联蛋白抗体可以各自每天施用一次或每天施用两次、三次或更多次，以提供每天优选的剂量水平。

组合疗法可以在治疗方案的诱导期或维持期施用。在诱导阶段，组合疗法可以有效量施用以诱导对治疗抗体的免疫耐受，诱导临床应答和/或改善ibd的一种或多种症状。另外，如果在维持阶段期间，出现ibd的一种或多种症状的复发，或者如果疾病缓解复发，患者可以给予相当于诱导期治疗的量。在维持阶段期间，可以以有效量施用组合疗法以维持在诱导治疗期间达到的应答和/或防止症状复发或ibd复发。

在一些实施方式中，一种或多种另外的活性成分(例如抗炎化合物(例如柳氮磺吡啶、硫唑嘌呤、6-巯基嘌呤、含有抗炎剂的5-氨基水杨酸、非甾体抗炎化合物和甾体抗炎化合物)、通常用于控制ibd的抗生素(例如环丙沙星和甲硝唑)、或另一种生物制剂(例如tnfα拮抗剂))可以与本文公开的组合疗法联合施用。

d.试剂盒

在一些方面，本文提供的是含有本文所公开的ccr9抑制剂和抗-α4β7整联蛋白抗体的试剂盒，其用于治疗以胃肠道炎症为特征的疾病或病症，例如ibd，包括cd、uc和不确定性结肠炎。试剂盒可以包含含有ccr9抑制剂化合物(例如ccr9的小分子抑制剂)的药物组合物和含有抗-α4β7整联蛋白抗体的药物组合物。在一些实施方式中，所述ccr9抑制剂化合物是维瑟浓(traficet-en^tm)或ccx507。在一些实施方式中，所述抗-α4β7整联蛋白抗体是维多珠单抗。在一些情况下，所述试剂盒包括书面材料，例如所述化合物、抗体或其药物组合物的使用说明书。不限于此，所述试剂盒可以包括缓冲液、稀释剂、过滤器、针、注射器和包装插入物以及用于执行本文公开的任何方法的说明书。

iv.实施例

提供以下实施例来说明而非限制所要求保护的发明。

实施例1：使用ccr9抑制剂和抗-α4β7整联蛋白抗体的组合疗法来治疗炎性肠病

a.引言

循环细胞进入各种组织的归巢是涉及特定趋化因子受体和细胞粘附分子的高度协调的过程。细胞进入肠道的传输需要趋化因子受体ccr9介导的趋向称为ccl25的趋化因子。ccl25活化的ccr9也触发了细胞表面α4β7整联蛋白与表达madcam的肠微血管内皮的高亲和力结合，导致牢固停滞和血细胞渗出进入肠道组织。

从患有结肠克罗恩病患者获得的人结肠活检分析显示ccr9基因表达与tnf-α基因以及α4和β7整联蛋白的表达之间呈强正相关。这些结果表明，与肠炎相关的基因的调节在结肠中是高度相关并且严格调控的。维多珠单抗是α4β7整联蛋白的人源化抗体，最近被批准用于治疗中度至重度溃疡性结肠炎和克罗恩病的患者。然而，其与肠道归巢趋化因子受体ccr9的拮抗剂组合的作用尚未被探索。

b.方法

进行如下粘附测定。在1μm视黄酸(sigma)和1ng/ml人il12(r&d系统)的存在下，从总pbmc中分离人淋巴细胞，并用α-cd3ε/α-cd28(1μg/ml；r&d系统)活化。在1μm视黄酸(ra)和1ng/ml人il12存在下，将体外活化的t细胞进一步扩增5天。将扩增的细胞用抗ccr9apc联合的抗体(目录号248621；r&d系统)和联合的抗-α4β7整联蛋白抗体(act-1)染色。通过流式细胞仪分析染色的细胞。ccr9和α4β7整联蛋白在扩增的t细胞中的表达被描绘为图1a中的2参数散点图。

在以下条件的存在下将体外活化的t细胞加入到用0.3μg/mlmadcam-1-fc融合蛋白(r&d系统)包被过夜的96孔板中：仅dmso，仅500ng人ccl25(hccl25；ccr9配体)，仅1μmccx507(ccr9小分子抑制剂)，或500nghccl25和1μmccx507。使用细胞增殖测定(thermofisher)定量贴壁细胞。结果示于图1b。数据显示：ccx507限制ra分化人t细胞与madcam-1的结合，madcam-1可以结合α4β7整联蛋白并有助于引导淋巴细胞传输。

进行如下体内药效学测定。图2a描绘了在实验中使用的过继t细胞转移模型。该方法的详细描述在例如tubo等，plosone，2012,7(11)：e50498中找到。简言之，从供体ot-1tcr转基因小鼠(b6.cd45.2)分离cd8⁺t细胞。从脾脏和淋巴结中分离白细胞。将分离的cd8⁺t细胞过继转移到野生型小鼠(b6.cd45.1)中。1x10⁶-1x10⁷原初cd8⁺t细胞腹膜内注射入受体小鼠。

转移后24小时，受体cd45.1小鼠口服单用霍乱毒素或霍乱毒素和卵清蛋白进行攻击。将霍乱毒素攻击的小鼠用作肠道炎症的小鼠模型。96小时后，从脾脏、淋巴结、小肠、结肠、血液和肝脏分离白细胞。在攻击后96小时通过流式细胞仪测定小肠中供体来源的cd8⁺t细胞的数量。该方法的详细描述在例如tubo等，plosone，2012,7(11)：e50498中找到。

另外，向霍乱毒素攻击的小鼠施用5-30mg/kg的ccx507或一剂抗-α4β7整联蛋白抗体。计数供体来源的(ot-1衍生的)cd8⁺上皮内淋巴细胞(iel)的数目。结果示于图2b。

进行如下plex测定(affymetrix)。克罗恩病患者的匹配回肠和结肠活检在液氮中快速冷冻。根据制造商的方案将样品均化。使用定制的37-plex的面板(affymetrix公司)进行分析的基因的表达，其表达根据管家基因亲环蛋白进行归一化。图3提供了ccr9表达水平与所选基因的表达水平的比较。

如下产生吡罗昔康加速的结肠炎(化学诱导的结肠炎)的小鼠模型。将7周龄的mdr1a^-/-小鼠和fvb对照品系在粉末饮食喂养罐(dyets公司)中提供给与粉末状食物(食品)混合的200ppm吡罗昔康(sigma)10-12天。在实验期间将正常食物置于线棒盖中。以每只小鼠100μg腹腔注射(ip)给予抗-α4β7整联蛋白阻断抗体(datk32)，q2d(每隔一天通过腹膜内注射)。在头11天，吡罗昔康被加入到粉末状食物中时，抗-tnfα抗体(xt3.11)以每只小鼠300μg腹腔注射(ip)施用，qd(每天腹膜内注射)。在除去吡罗昔康后，以每只小鼠300μg腹腔注射(ip)施用抗tnfα抗体(xt3.11)，q2d。在研究期间，以30mg/kg皮下注射(sc)施用ccx507(ccr9小分子抑制剂)，qd(每天皮下注射)。研究中的小鼠经iacuc批准观察和处理。图4a描绘了所述实验设计。

图4b显示接受以下物质的小鼠结肠的代表性图像：载体对照(1％hpmc)或大鼠igg2a同种型对照，单独的ccx507(ccr9小分子抑制剂)，单独的抗-α4β7整联蛋白阻断抗体，或ccx507加之抗-α4β7整联蛋白阻断抗体。不同处理条件的定量结肠对重量比在图4c和4d中描绘。ccx507和抗-α4β7整联蛋白阻断抗体的组合疗法示于图4c。ccx507和抗-tnfα阻断抗体的组合疗法示于图4d。使用graphpad(graphpad软件)进行统计学分析，p值以下列方式表示：*p<0.05、**p<0.01、***p<0.001、****p<0.0001。

在尸检时由独立的、盲性病理学家对福尔马林固定的结肠组织进行组织病理学评估。总组织学得分来自炎症、腺体上皮损失和侵蚀的组合组织学评分。这些评分基于每个部分受影响组织的百分比，每个小鼠切割总共6个切片。

图5a显示来自各个小鼠的近端和远端结肠的代表性图像，代表每组的平均组织病理评分。ccx507加之抗-α4β7抗体的组合如右图所示。

研究中所有小鼠的总组织学得分如图5b所示。通过graphpadprism进行统计学分析，p值表示为*p<0.05，****p<0.0001。

虽然出于清楚理解的目的，已经通过说明和实施例的方式对前述发明进行了详细描述，但是本领域技术人员将会理解，在所附权利要求的范围内可以实施某些改变和修改。此外，本文提供的每个参考文献通过引用全部并入本文，就如同每个参考文献通过引用单独并入一样。