本发明涉及医药原料领域，具体是涉及一种牛磺熊去氧胆酸合成方法。
背景技术：
牛磺熊去氧胆酸在1991年由意大利贝思迪大药厂研制，并首次在意大利上市，临床主要用于治疗胆囊胆固醇结石、原发硬化性胆管炎、原发胆汁性肝硬化和慢性丙型病毒性肝炎等。从分子结构看，牛磺熊去氧胆酸是由熊去氧胆酸和牛磺酸两部分通过酰胺键结合而成的，化学合成的关键步骤是两种物质中间形成酰胺键。
目前牛磺熊去氧胆酸的合成方法主要有三类：(1)以熊去氧胆酸为原料，先与氯乙酸乙酯形成混酐或活性酯，再与牛磺酸反应合成牛磺熊去氧胆酸；(2)熊去氧胆酸和牛磺酸在碱性条件下，使用缩合剂得到牛磺熊去氧胆酸；(3)熊去氧胆酸和2,2’-二硫二苯并噻唑在三乙胺和三苯基膦作用下缩合，再与牛磺酸反应获得牛磺熊去氧胆酸；然而，这三种方法均存在生产成本高、合成路线长和有关物质复杂等问题，同时每种方法也不同程度地存在一定的局限性：如第(1)种方法中存在使用有毒试剂、试剂不稳定等不足；第(2)种方法涉及使用价格昂贵的缩合剂；第(3)种方法放大工艺不稳定。因此，寻找低成本、工艺优良的牛磺熊去氧胆酸合成方法，是目前这一领域急需解决的热点问题。
技术实现要素：
本发明的目的是针对现有技术存在的不足，提供一种成本低廉、工艺简单可控、目标产物纯度高、有关物质可控及绿色环保的牛磺熊去氧胆酸合成方法。
为解决上述的技术问题，本发明采用如下技术方案：
一种牛磺熊去氧胆酸合成方法，包括的步骤如下：
(1)以家禽胆汁或者胆膏为原料，先将其溶解在溶剂中，再经溶解除杂、过滤、脱脂、除蛋白、酸化、过离子交换树脂，得到纯度大于95％的牛磺鹅去氧胆酸；
(2)将牛磺鹅去氧胆酸与选择性氧化剂反应得到3α-羟基-7-酮基-胆烷酰-n-牛磺酸；
(3)将3α-羟基-7-酮基-胆烷酰-n-牛磺酸与选择性还原剂反应得到3α,7β-二羟基胆烷酰-n-牛磺酸。
优选的，所述步骤(1)的溶解除杂为加入溶剂，所述溶剂为水或碱溶液，所述原料与溶剂的比例为1:5～15(w/v)。
优选的，所述碱溶液的浓度为0.05～0.2m。
优选的，所述步骤(1)的脱脂为加入脱脂溶剂，所述脱脂溶剂为乙酸乙酯或石油醚。
优选的，所述步骤(1)的除蛋白为加入蛋白沉淀剂，所述蛋白沉淀剂为乙醇。
优选的，所述步骤(1)的酸化的ph值为2～5。
所述步骤(2)中，将牛磺鹅去氧胆酸溶解在溶剂中，加入选择性氧化剂，搅拌溶解，室温反应2～6h，反应结束后，除去多余的选择性氧化剂，去除有机相溶剂，得到3α-羟基-7-酮基-胆烷酰-n-牛磺酸。
优选的，所述牛磺鹅去氧胆酸与选择性氧化剂的物料比为1：1～6(mol:mol)。
优选的，所述选择性氧化剂为n-溴代丁二酰亚胺，三氧化铬吡啶盐酸盐或次氯酸钠。
优选的，当所述选择性氧化剂为n-溴代丁二酰亚胺时，所述牛磺鹅去氧胆酸与n-溴代丁二酰亚胺的物料比为1:3(mol:mol)；所述溶剂可以为丙酮、四氢呋喃、二氧六环、吡啶、二甲亚砜、n,n-二甲基甲酰胺及它们的水溶液中的任意一种；所述水溶液中水与溶剂的体积比为：1:1～5(mol:mol)。
优选的，当所述选择性氧化剂为三氧化铬吡啶盐酸盐时，所述牛磺鹅去氧胆酸与三氧化铬吡啶盐酸盐的物料比为1：1.5～2(mol:mol)；所述溶剂为二氯甲烷、吡啶、二甲亚砜、n,n-二甲基甲酰胺。
优选的，当所述选择性氧化剂为次氯酸钠时，所述牛磺鹅去氧胆酸与次氯酸钠的物料比为1:3；所述溶剂可以为水，丙酮、四氢呋喃、二氧六环、吡啶、二甲亚砜、n,n-二甲基甲酰胺及它们的水溶液中的任意一种。
所述步骤(3)中，将3α-羟基-7-酮基-胆烷酰-n-牛磺酸溶解在溶剂中，加入选择性还原剂，反应结束后，调整溶剂水相的ph值至2～5，过滤生成的沉淀，去除溶剂，得到牛磺熊去氧胆酸粗品。
优选的，所述3α-羟基-7-酮基-胆烷酰-n-牛磺酸与选择性还原剂的物料比为1：5～30(mol:mol)。
所述3α-羟基-7-酮基-胆烷酰-n-牛磺酸与选择性还原剂的物料比最优为1：5(mol:mol)。
优选的，所述选择性还原剂为金属钠、硼氢化钠、硼氢化钾、叔丁醇钾、雷尼镍中的一种或两种以上。
优选的，所述溶剂为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇中的任意一种。
所述选择性还原剂最优为金属钠，当选择性还原剂为金属钠时，所述最优溶剂为丁醇。
优选的，所述牛磺熊去氧胆酸粗品溶解在丙酮与水的混合溶剂中，水与丙酮的体积比为1:5～15，加热至完全溶解，冷却至-5～5℃，静置析晶36h，过滤，滤饼用冰水洗涤，于60℃的条件下干燥，得到纯度大于98％的牛磺熊去氧胆酸。
所述水与丙酮的最优体积比为1：10～12。
本发明相对于现有技术具有如下的有益效果：以廉价的家禽胆汁或者胆膏为原料，通过两步反应制备得到高附加值的牛磺熊去氧胆酸，化学合成路线短，产率高，目标产物纯度高，工艺简单可控，杂质少，且减少酸和碱的排放，绿色环保，有利于实现产业化，在制药领域具有很好的应用前景。
具体实施例
为了更好地阐述本发明内容，下面用若干较佳的具体实施例进行说明。但这些具体实施例只是为了说明本发明的内容，而不是对本发明内容进行限制。
原理说明
本发明以家禽胆汁(胆膏)为原料，先通过溶解除杂、脱脂、除蛋白、酸化、过离子交换树脂等工艺步骤，获得高纯度牛磺鹅去氧胆酸；再通过牛磺鹅去氧胆酸的7-羟基选择性氧化，获得3α-羟基-7-酮基-胆烷酰-n-牛磺酸；通过将3α-羟基-7-酮基-胆烷酰-n-牛磺酸的7-酮基选择性还原，获得3α,7β-二羟基胆烷酰-n-牛磺酸，最后通过重结晶提纯，获得高纯度的牛磺熊去氧胆酸。
本发明的牛磺熊去氧胆酸合成方法通过7-羟基选择性氧化及7-酮基选择性还原，实现从家禽胆汁(胆膏)中直接提取牛磺鹅去氧胆酸，此方法还涉及牛磺鹅去氧胆酸的纯化技术以及水溶性甾体化合物的选择性氧化和选择性还原技术的突破，同时省去传统工艺中提取鹅去氧胆酸的皂化过程和后期缩合反应的费用。
本发明一种牛磺熊去氧胆酸合成方法的合成路线如下：
实施例1
(1)取鸡胆膏100g，加入500ml水，搅拌溶解，离心，过滤，滤液用乙酸乙酯洗涤三次(200ml*3)，收集下层溶液；滤液加入溶液量2～3倍乙醇，离心，过滤，滤液浓缩至干，再加入200ml乙醇，离心，过滤，滤液用盐酸调ph值至2～5，滤液蒸干，浓缩物加入纯水溶解完全，过强酸型离子交换树脂，收集纯度大于95％的牛磺鹅去氧胆酸组分，浓缩得牛磺鹅去氧胆酸约10.3g。
(2)将牛磺鹅去氧胆酸(10.0g,20.0mmol)用50ml的丙酮水溶液(丙酮(v)/水(v)＝4/1)溶解，待溶解完全后慢慢分批加入n-溴代丁二酰亚胺(5.6g,30mmol),室温搅拌4h；取样tlc点板，待原料点消失结束反应，减压蒸去丙酮，用乙酸乙酯萃取，分去有机层，水相浓缩干得3α-羟基-7-酮基-胆烷酰-n-牛磺酸粗品8.2g。
(3)将3α-羟基-7-酮基-胆烷酰-n-牛磺酸粗品(5.0g，12.8mmol)加入到250ml正丁醇中，搅拌升温至110℃，分次加入金属钠(3.0g，130mmol)，搅拌1～2h，取样tlc中控，待反应完全后；反应液降至室温，用浓盐酸调ph值至2～5，过滤出沉淀，慢慢加入少量水洗涤，正丁醇相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去正丁醇，得目标产物牛磺熊去氧胆酸粗品4.3g。牛磺熊去氧胆酸粗品用水/丙酮(1：12(v：v))混合溶剂重结晶，得纯度大于98％的牛磺熊去氧胆酸。
所述重结晶过程为：所述牛磺熊去氧胆酸粗品溶解在丙酮与水的混合溶剂中，加热至完全溶解，冷却至-5～5℃，静置析晶36h，过滤，滤饼用冰水洗涤，于60℃的条件下干燥。
实施例2
(1)取鸡胆膏100g，加入0.1m的氢氧化钠水溶液500ml，搅拌溶解，离心，过滤，滤液用乙酸乙酯洗涤三次(200ml*3)，收集下层溶液；滤液加入溶液量2～3倍量的乙醇，离心，过滤，滤液浓缩至干，再加入200ml乙醇，离心，过滤，滤液用盐酸调ph值至2～5，滤液蒸干，浓缩物加入纯水溶解完全，过强酸型离子交换树脂，收集纯度大于95％的牛磺鹅去氧胆酸组分，浓缩得牛磺鹅去氧胆酸约10.2g。
(2)步骤同实施例1的(2)步骤。
(3)步骤同实施例1的(3)步骤。
实施例3
(1)取鸡胆膏100g，加入500ml水，搅拌溶解，离心，过滤，滤液用石油醚洗涤三次(200ml*3)，收集下层；滤液加入溶液量2～3倍的乙醇，离心，过滤，滤液浓缩至干，再加入200ml乙醇，离心，过滤，滤液用盐酸调ph值至2～5，滤液蒸干，浓缩物加入纯水溶解完全，过强酸型离子交换树脂，收集纯度大于95％的牛磺鹅去氧胆酸组分，浓缩得牛磺鹅去氧胆酸约9.8g。
(2)步骤同实施例1的(2)步骤。
(3)步骤同实施例1的(3)步骤。
实施例4
(1)取鸡胆膏100g，加入0.1m的氢氧化钠水溶液500ml，搅拌溶解，离心，过滤，滤液用石油醚洗涤三次(200ml*3)，收集下层；滤液加入溶液量2～3倍的乙醇，离心，过滤，滤液浓缩至干，再加入200ml乙醇，离心，过滤，滤液用盐酸调ph值至2～5，滤液蒸干，浓缩物加入纯水溶解完全，过强酸型离子交换树脂，收集纯度大于95％的牛磺鹅去氧胆酸组分，浓缩得牛磺鹅去氧胆酸约9.6g。
(2)步骤同实施例1的(2)步骤。
(3)步骤同实施例1的(3)步骤。
实施例5
(1)同实施例1的(1)步骤。
(2)将牛磺鹅去氧胆酸(10.0g,20.0mmol)用50ml的丙酮水溶液(丙酮(v)/水(v)＝4/1)溶解，待溶解完全后慢慢分批加入n-溴代丁二酰亚胺(11.2g,60mmol),室温搅拌4h；取样tlc点板，待原料点消失结束反应，减压蒸去丙酮，用乙酸乙酯萃取(20ml*2)，分去有机层，水相浓缩干得3α-羟基-7-酮基-胆烷酰-n-牛磺酸粗品8.6g。
(3)同实施例1的(3)步骤。
实施例6
(1)同实施例1的(1)步骤。
(2)将牛磺鹅去氧胆酸(10.0g,20.0mmol)用50ml的丙酮水溶液(丙酮(v)/水(v)＝4/1)溶解，待溶解完全后慢慢分批加入n-溴代丁二酰亚胺(18.7g,100mmol),室温搅拌2h；取样tlc点板，待原料点消失结束反应，减压蒸去丙酮，用乙酸乙酯萃取，分去有机层，水相浓缩干得3α-羟基-7-酮基-胆烷酰-n-牛磺酸粗品8.5g。
(3)同实施例1的(3)步骤。
实施例7
(1)同实施例1的(1)步骤。
(2)将牛磺鹅去氧胆酸(10.0g,20.0mmol)用25ml的吡啶溶解，待溶解完全后慢慢分批加入三氧化铬吡啶盐酸盐(12.9g,60mmol),室温搅拌2h；取样tlc点板，待原料点消失结束反应，过滤，除去吡啶，浓缩物加乙醇溶解，过滤掉沉淀，粘稠物用水/丙酮(1:12(v：v))混合溶剂重结晶，得3α-羟基-7-酮基-胆烷酰-n-牛磺酸粗品7.2g。
(3)同实施例1的(3)步骤。
实施例8
(1)同实施例1的(1)步骤。
(2)将牛磺鹅去氧胆酸(10.0g,20.0mmol)用25ml的水溶解，待溶解完全后慢慢分批加入次氯酸钠(4.5g,60mmol),室温搅拌4h；取样tlc点板，待原料点消失结束反应，调ph＝2-5,浓缩，浓缩物加乙醇溶解，过滤掉沉淀，粘稠物用水/丙酮(1:12(v：v))混合溶剂重结晶，得3α-羟基-7-酮基-胆烷酰-n-牛磺酸粗品7.3g。
(3)同实施例1的(3)步骤。
实施例9
(1)同实施例1的(1)步骤。
(2)同实施例1的(2)步骤。
(3)将3α-羟基-7-酮基-胆烷酰-n-牛磺酸粗品(5.0g，12.8mmol)加入到250ml正丁醇中，搅拌升温至110℃，分次加入金属钠(4.5g，196mmol)，加完之后搅拌，取样tlc中控，待反应完全后；反应液降至室温，用浓盐酸调ph值至2～5，过滤出沉淀，慢慢加入少量水洗涤，正丁醇相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去正丁醇，得目标产物牛磺熊去氧胆酸粗品4.3g。牛磺熊去氧胆酸粗品用水/丙酮(1:12(v：v))混合溶剂重结晶，得纯度大于98％的牛磺熊去氧胆酸。
重结晶过程同实施例1的(3)步骤。
实施例10
(1)同实施例1的(1)步骤。
(2)同实施例1的(2)步骤。
(3)将3α-羟基-7-酮基-胆烷酰-n-牛磺酸粗品(5.0g，12.8mmol)加入到250ml正丁醇中，搅拌升温至110℃，分次加入金属钠(6.0g，260mmol)，加完之后搅拌，取样tlc中控，待反应完全后；反应液降至室温，用浓盐酸调ph值至2～5，过滤出沉淀，慢慢加入少量水洗涤，正丁醇相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去正丁醇，得目标产物牛磺熊去氧胆酸粗品4.2g。牛磺熊去氧胆酸粗品用水/丙酮(1:12(v：v))混合溶剂重结晶，得纯度大于98％的牛磺熊去氧胆酸。
重结晶过程同实施例1的(3)步骤。
实施例11
(1)同实施例1的(1)步骤。
(2)同实施例1的(2)步骤。
(3)将3α-羟基-7-酮基-胆烷酰-n-牛磺酸粗品(5.0g，12.8mmol)加入到250ml正丁醇中，加入硼氢化钾(1.1g，20mmol)、叔丁醇钾(1.7g,16mmol)及雷尼镍(0.6g,10mmol)，搅拌，通氮气保护，在40℃条件下搅拌反应，取样tlc中控，待反应完全后；反应液降至室温，用浓盐酸调ph值至2～5，过滤出沉淀，慢慢加入少量水洗涤，正丁醇相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去正丁醇，得目标产物牛磺熊去氧胆酸粗品干燥，得3.5g牛磺熊去氧胆酸粗品，牛磺熊去氧胆酸粗品用水/丙酮(1:12(v：v))混合溶剂重结晶，得纯度大于98％的牛磺熊去氧胆酸。
重结晶过程同实施例1的(3)步骤。
实施例12
(1)同实施例1的(1)步骤。
(2)同实施例1的(2)步骤。
(3)将3α-羟基-7-酮基-胆烷酰-n-牛磺酸粗品(5.0g，12.8mmol)加入到250ml正丁醇中，搅拌，分次加入硼氢化钠(4.8g，128mmol)，加完之后搅拌，取样tlc中控，待反应完全后；反应液降至室温，用浓盐酸调ph值至2～5，过滤出沉淀，慢慢加入少量水洗涤，正丁醇相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去正丁醇，得目标产物牛磺熊去氧胆酸粗品3.6g。牛磺熊去氧胆酸粗品用水/丙酮(1:12(v：v))混合溶剂重结晶，得纯度大于98％的牛磺熊去氧胆酸。
重结晶过程同实施例1(3)。。
经检测，上述实施例得到的牛磺熊去氧胆酸的结构确证数据如下：1hnmr(dmso-d6)δ:0.58(s，3h，24-ch3)，0.85(s，6h，18，19-ch3)，2.60-2.63(t，j＝7.2，2h，3,7-ch)，3.25-3.30(m，4h，ch2ch2so3h)。ir(kbr,ν/cm-1):3612,3547,3275,2973,2936,2861,1656,1633,1364,1051。ms(apci+)m/z:463.5[m-2h2o]+。比旋光度：+44.6°(c＝2.0,etoh)。
上述实施例中，也可以是鸡胆汁，得到的产品也是一样的。另外上述实施例中的原料也可是鸭、鹅等家禽或者飞鸟的胆汁或者胆膏，其处理步骤与上述实施例相同，得到的效果也是一样的。
值得注意的是，本发明使用的原料和试剂的来源均为市售，本发明未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件进行，或厂商建议的条件进行。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。