1,6‑二磷酸果糖的制备方法与流程

技术特征：

1.一种1,6-二磷酸果糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)以淀粉或淀粉衍生物和焦磷酸为底物，加入含有淀粉磷酸化酶、磷酸葡萄糖变位酶、磷酸葡萄糖异构酶和焦磷酸依赖型磷酸果糖激酶的多酶催化物建立多酶催化反应体系，进行酶催化反应；(2)将酶催化反应产物分离、纯化，即得。

2.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述淀粉衍生物包括：部分水解淀粉、淀粉糊精、麦芽糊精、麦芽多糖或麦芽糖中的任意一种或多种；所述焦磷酸为焦磷酸盐，优选为焦磷酸钠。

3.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的多酶催化反应体系中：所述淀粉或淀粉衍生物的浓度为5-200g/L；优选的，所述淀粉或淀粉衍生物的浓度为20-100g/L，更优选为50g/L；所述焦磷酸的浓度为10-1000mM，优选的，所述焦磷酸的浓度为50-300mM；最优选的，淀粉或淀粉衍生物与焦磷酸的比例为5g/L淀粉或淀粉衍生物/25mM焦磷酸；

所述淀粉磷酸化酶的用量为0.1-10g/L，所述磷酸葡萄糖变位酶的用量为0.01-5g/L，所述磷酸葡萄糖异构酶的用量为0.01-5g/L，所述焦磷酸依赖型磷酸果糖激酶的用量为0.01-10g/L；优选的，每50g/L淀粉或淀粉衍生物，所述淀粉磷酸化酶的用量为0.5g/L，所述磷酸葡萄糖变位酶的用量为0.15g/L，所述磷酸葡萄糖异构酶的用量为0.1g/L，所述焦磷酸依赖型磷酸果糖激酶的用量为0.2g/L。

4.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述酶催化反应的条件是：20-90℃反应4-72小时，优选为80℃反应6-8小时。

5.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述多酶催化物中还包括(1)-(2)中的任何一种：

(1)淀粉去分支酶和麦芽糖磷酸化酶；优选的，在多酶催化反应体系中：每10g/L淀粉或淀粉衍生物，所述淀粉去分支酶的用量为0.01-1g/L，所述麦芽糖磷酸化酶的用量为0.01-0.5g/L；优选的，每50g/L淀粉或淀粉衍生物，所述淀粉去分支酶的用量为0.1g/L，所述麦芽糖磷酸化酶的用量为1U/mL；或者，

(2)淀粉去分支酶和葡聚糖转移酶；优选的，在多酶催化反应体系中：每10g/L淀粉或淀粉衍生物，所述淀粉去分支酶的用量为0.01-1g/L，所述葡聚糖转移酶的用量为0.01-0.5g/L；优选的，每50g/L淀粉或淀粉衍生物，所述淀粉去分支酶的用量为0.1g/L，所述葡聚糖转移酶的用量为0.1g/L；

其中，所述淀粉去分支酶为异淀粉酶或普鲁兰酶中的任意一种或两种。

6.按照权利要求1或5所述的制备方法，其特征在于，所述多酶催化反应体系中还包括：聚磷酸葡萄糖激酶和聚磷酸盐；

优选的，在多酶催化反应体系中，每10g/L淀粉或淀粉衍生物，所述聚磷酸葡萄糖激酶的用量为0.01-10g/L，所述聚磷酸盐的用量为1-1000mM；更优选的，在多酶催化反应体系中，每50g/L淀粉或淀粉衍生物，所述聚磷酸葡萄糖激酶的用量为0.1g/L，所述聚磷酸盐的用量为10mM；

加入聚磷酸葡萄糖激酶和聚磷酸盐后的反应条件为：45℃反应2h后，将温度提高到80℃反应2h。

7.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述多酶催化反应体系中还包括：缓冲液、无机磷酸盐和二价镁离子；其中，所述缓冲液为pH值4.5-8.5的磷酸缓冲液，优选为pH值7.0-7.5的磷酸缓冲液，更优选为pH值7.0-7.2的磷酸缓冲液；

优选的，各成分的用量为：磷酸缓冲液20-50mM、二价镁离子5-10mM。

8.按照权利要求6所述的制备方法，其特征在于：在酶催化反应结束后向反应产物中加入α淀粉酶；优选的，每10g/L淀粉或淀粉衍生物，α淀粉酶的用量为0.01g/L。

9.一种1,6-二磷酸果糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)以蔗糖和焦磷酸为底物，加入含有蔗糖磷酸化酶、磷酸葡萄糖变位酶、磷酸葡萄糖异构酶和焦磷酸依赖型磷酸果糖激酶的多酶催化物建立多酶催化反应体系进行酶催化反应；(2)将酶催化反应产物分离、纯化，即得。

10.按照权利要求9所述的制备方法，其特征在于：所述的多酶催化体系中，蔗糖的浓度为10-300g/L，焦磷酸的浓度为50-1000mM，蔗糖磷酸化酶的用量为0.01-1g/L每10g/L蔗糖，磷酸葡萄糖变位酶的用量为0.005-0.5g/L每10g/L蔗糖，磷酸葡萄糖异构酶的用量为0.005-0.5g/L每10g/L蔗糖，焦磷酸依赖型磷酸果糖激酶的用量为0.005-1g/L每10g/L蔗糖；

优选的，所述的多酶催化体系中，蔗糖的浓度为20g/L，焦磷酸的浓度为60mM；所述蔗糖磷酸化酶的用量为0.2g/L，所述磷酸葡萄糖变位酶的用量为0.15g/L，所述磷酸葡萄糖异构酶的用量为0.1g/L，所述焦磷酸依赖型磷酸果糖激酶的用量为0.2g/L。

11.按照权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述酶催化反应的条件是：40-90℃反应4-72h；优选为，55℃反应24h。

12.按照权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述多酶催化反应体系中还包括：缓冲液、无机磷酸盐和二价镁离子；其中，所述缓冲液为pH值5.0-9.0的磷酸缓冲液，优选为pH值7.0-7.5的磷酸缓冲液；更优选的，各成分的用量为：磷酸缓冲液20mM、二价镁离子10mM。

13.按照权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述多酶催化反应体系中还包括：葡萄糖异构酶、聚磷酸葡萄糖激酶和聚磷酸盐；

优选的，每20g/L蔗糖，葡萄糖异构酶的用量为0.1g/L，聚磷酸葡萄糖激酶的用量为0.1g/L，聚磷酸盐的用量为10mM；

其中，所述聚磷酸盐优选为聚磷酸钠。