一株乳杆菌及提高稀有皂苷的人参发酵方法与流程

本发明属于发酵食品技术领域，尤其涉及一株乳杆菌及提高稀有皂苷的人参发酵方法。

背景技术：

人参被誉为“百草之王”，广泛生长于我国的黑龙江、吉林、辽宁，特别是长白山地区。人参在我国一直作为名贵中草药，其营养价值丰富，具有补脾益气的特点。人参的主要化学成分是人参皂苷、人参多糖、人参多肽和挥发油等，除此之外，它还含有多种氨基酸、微量元素、脂肪酸和维生素等营养成分。人参皂苷是由苷元骨架与糖基通过糖苷键相连构成的糖苷类化合物。根据皂苷的结构不同，可分为齐墩果烷型五环三萜皂苷和达玛烷型四环三萜皂苷。齐墩果烷型五环三萜皂苷主要存在于三萜类皂苷的植物中，在自然界中不常见。达玛烷型皂苷包括原人参二醇皂苷如Rb1、Rb2、Rc、Rd、F2等，原人参三醇皂苷如Re、Rf、Rg1、Rg2等。其中，Rg1、Rg3、Rh1、Rh2、F2等含量极少，主要存在于红参中，称为稀有人参皂苷。近年来研究发现，人参皂苷Rg3具有明显的抗疲劳、抗氧化损伤和增强机体免疫、抗炎、抗氧化和免疫佐剂作用。另外，人参皂苷Rg3具有抑制肿瘤细胞的粘附、浸润、增殖以及抗肿瘤新生血管的形成，从而具有显著的抗肿瘤作用。稀有人参皂苷F2是一种稀有的次级人参皂苷，具有抑制肿瘤，抗衰老，抗疲劳等方面的作用，另外对治疗心神不安，惊悸失眠、健忘等方面也有显著提高。

技术实现要素：

本发明的目的是提高人参的稀有皂苷的含量，而提供一种发酵乳杆菌发酵人参液方法。

一株乳杆菌，它的保藏编号为：CCTCC M 2016372。

一株乳杆菌在提高发酵人参液稀有皂苷的含量中的应用。

提高稀有皂苷的人参发酵方法，它包括：将保藏编号为CCTCC M 2016372发酵乳杆菌的种子发酵液，按1-6%接种量接种于人参液，发酵条件为：33-40℃摇床培养，转速为70-160r/min，发酵18-72h；所述的人参液为人参加水打浆。

所述的人参液为选取新鲜人参清洗后晾干，置于高压灭菌锅内，121℃维持40min，打开灭菌锅取出人参；按人参：水=1：1打浆，121℃，20min灭菌；

所述的发酵条件为：36-38℃摇床培养，转速为80-120r/min，发酵18-48h。

本发明提供了一株乳杆菌及提高稀有皂苷的人参发酵方法，它包括：将保藏编号为CCTCC M 2016372乳杆菌的种子发酵液，按1-6%接种量接种于人参液，发酵条件为：33-40℃摇床培养，转速为70-160r/min，发酵18-72h；所述的人参液为人参加水打浆。与普通乳杆菌相比，人参发酵液Rh1+Rg2、F1、Rh2、20（S）-Rg3、R0的含量都有很大的提高。

附图说明

图1菌株的革兰氏染色形态；

图2菌株的PCR 扩增片段图谱；

图3 菌株的同源性比对数据分析；

图4 HPLC-PDA法测定的人参皂苷含量。

具体实施方式

实施例1 乳杆菌的分离与鉴定

（1）乳杆菌的分离

将朝鲜族泡菜（采购于吉林省长春市中东大市场）浸泡于液体灭菌MRS培养基中，37℃恒温培养20-24h，将菌液用划线法涂于MRS固体培养基，37℃恒温培养2d，挑取单独菌落进行生理生化鉴定及16srDNA鉴定，确定为发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum），于2016年7月4日，保存于中国典型培养物保藏中心，地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内，武汉大学保藏中心，邮政编码：430072，编号为CCTCC M 2016372；将发酵乳杆菌CCTCC M 2016372接种于液体的无菌MRS培养基，在37℃温度下培养20-24h，活化后继续传代两次，每次接种量为3%，待菌种充分活化后，4℃冷藏待用。

（2）乳杆菌的鉴定

从朝鲜族泡菜中筛选的菌株革兰氏染色结果为革兰氏阳性菌，如图1所示，形态为短杆状；通过上海申工公司对菌液进行PCR，扩增后的产物经过琼脂糖凝胶电泳，如图2所示，在1200bp至1500处存在特异性条带。然后对扩增、纯化后的16S rDNA进行测序鉴定，测定该序列长为1354bp；该菌株的16S rDNA序列在核糖体数据库http://rdp.cme.msu.edu/index.jsp上进行同源性比对，结果如图3所示，结果该菌株的16S rDNA 与Lactobacillus fermentum strain的16S rDNA具有较高的同源性，证实该菌株为发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentum）。

实施例2 利用菌株发酵提取人参皂苷

1） 人参液的制备

选取新鲜人参清洗后晾干，置于高压灭菌锅内，121℃维持40min，打开灭菌锅取出人参；按人参：水=1：1打浆，121℃，20min灭菌冷藏。

2） 利用发酵乳杆菌发酵人参液

将实施例1中获取的发酵乳杆菌CCTCC M 2016372种子发酵液按3%接种量接种于人参液，进行发酵。发酵条件为：37℃摇床培养，转速为80-120r/min，时间为18-48h。人参发酵液冻干成粉末，待用。

3）人参皂苷的提取

取发酵人参粉末约1g，精密称定，置索氏提取装置中，加三氯甲烷加热回流3小时，弃去三氯甲烷溶液，药渣挥干溶剂，连同滤纸筒移入100ml锥形瓶中，精密加水饱和正丁醇50ml，密塞，放置过夜，超声处理（功率250W，频率50Hz）30分钟，过滤，精密称取滤液25ml，置于蒸发皿中蒸干，残渣加95%甲醇溶液4ml，溶解并转移至5ml容量瓶中，加入95%甲醇稀释至刻度，摇匀，既得人参皂苷样品。

4）人参皂苷含量测定

采用上述方法，对未发酵的人参液、利用发酵乳杆菌标准株CICC 22556和利用发酵乳杆菌CCTCC M 2016372人参发酵液进行皂苷提取，采用二极管阵列检测器高效液相法（HPLC-PDA）测定人参中人参皂苷单体的含量，用Unitary C18色谱柱（4.6mmX250mm，5μm），以乙腈(A)-0.05%磷酸水溶液(B)梯度洗脱(见表1)，流速为1.3ml/min，柱温为30℃，检测波长203nm，结果如图4所示，发酵乳杆菌CCTCC M 2016372人参发酵液中Rh1+Rg2的含量比未发酵的人参液提高了1倍；发酵乳杆菌CCTCC M 2016372人参发酵液中F1的含量比未发酵的人参液提高了1倍；发酵乳杆菌CCTCC M 2016372人参发酵液中Rh2的含量比未发酵的人参液提高了2.1倍；发酵乳杆菌CCTCC M 2016372人参发酵液中20（S）-Rg3的含量比未发酵的人参液提高了2倍且含量高达0.18%；发酵乳杆菌CCTCC M 2016372人参发酵液中R0的含量比未发酵的人参液提高了10倍且含量高达0.31%。

<110> 吉林农业大学

<120> 一株乳杆菌及提高稀有皂苷的人参发酵方法

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<212> DNA

<213> 人工

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