本发明涉及高分子化学领域，尤其涉及一种预活化聚苯乙烯微球的制备方法。
背景技术：
表面功能化聚合物微球由于表面羧基、氨基或者羟基等活性基团的存在而易于与酶、蛋白质、核酸等结合反应，使之在生物、化学、材料、医学等方面应用广泛。当前，制备粒径可控、单分散性功能化聚合物微球已成为高分子材料领域的一个研究热点。聚合物微球具有比表面积大，附性强，凝集作用大及表面反应能力强等特性，有着广泛的应用前景。微米级颗粒度均匀的聚合物微球，作为功能高分子材料，在分析化学、生物化学、免疫医学、标准计量以及某些高新技术领域中有着广泛的用途，因而对这类材料的研究越来越引起了重视。
因其稳定性问题，在使用之前，微球表面是未经活化的，没有吸附或化学胶连能力，在使用之前必须先经活化处理，才能与抗体或者抗原等蛋白质以吸附或化学方式结合在一起；活化时需要加入DEC试剂，活化完成后，需要对这个试剂进行洗脱处理，大致流程为活化、离心、洗涤、分散、加入蛋白结合、配成试剂。这个过程中，活化的效率不容易受控制；分散过程一般是用超声、压滤、超滤等办法，但都受制于设备的产能，每批生产量有限。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种预活化聚苯乙烯微球的制备方法，以苯乙烯(St)为单体，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)为分散稳定剂，30％乙醇水溶液为分散介质，偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂，用分散聚合工艺制备聚苯乙烯微球；再将聚苯乙烯微球加入到由乙磺酸(MES)，碳化二亚胺(EDAC)和N-经基丁二醜亚胺(NHS)配制成的微球预活化液中，制得预活化聚苯乙烯微球。
本发明的预活化聚苯乙烯微球的制备方法，包括以下步骤：
步骤一，聚苯乙烯微球的制备：
苯乙烯预处理，用10％的Na0H溶液进行碱洗三次，用50倍量的去离子水冲洗，减压蒸馏；
将聚乙烯吡咯烷酮PVP加入到30％乙醇水溶液中，搅拌形成均相体系后，通入N2排空容器中的氧气，300rpm的速率搅拌下开始缓慢滴加溶有偶氮二异丁腈的苯乙烯，滴加完毕后，保持N2气氛和300rpm的速率，在70℃下聚合反应10h，将反应液离心分离，弃去上层清液，用无水乙醇洗涤下层微球，再离心，再洗涤，如此重复3-5次，即得聚苯乙烯微球；
步骤二，微球预活化液的制备：
配制0.05mmol/L乙磺酸水溶液，用NaOH调节pH至6.0作为活化缓冲液；
在搅拌的环境下，缓慢分别向活化缓冲液中加入碳化二亚胺和N-经基丁二醜亚胺，配成碳化二亚胺6.0mg/ml、N-经基丁二醜亚胺8.0mg/ml溶液；水浴加热40℃，170rpm搅拌15min，得微球预活化液；
步骤三，在40℃温度，200rpm的速率搅拌下，将聚苯乙烯微球缓慢加入3倍量微球预活化液中，保持40℃温度，200rpm的速率搅拌4h，即得。
优选的，所述步骤二中的偶氮二异丁腈需要醇洗，将偶氮二异丁腈加入到10倍量的无水乙醇中，60℃加热搅拌使偶氮二异丁腈完全溶解，迅速抽滤，滤液干燥至无水乙醇全部挥发，置于棕色瓶中备用。本发明的优点：
本发明制备的预活化聚苯乙烯微球，微球的粒径较小，适合与抗体或者抗原等蛋白质结合，微球表面是经活化的，具有吸附或化学胶连能力，稳定性好，在使用之前无需先经活化处理，就能与抗体或者抗原等蛋白质很好的吸附结合在一起；适合批量生产。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作进一步说明：
聚苯乙烯微球的制备：
苯乙烯需要进行预处理，去除阻聚剂后再使用；对苯乙烯先以质量浓度约10％的Na0H溶液进行碱洗，静置分层，保留有机层，重复三次后，用大量去离子水洗至中性附近，再经减压蒸馏后备用。
将聚乙烯吡咯烷酮PVP加入到30％乙醇水溶液中，搅拌形成均相体系后，通入N2排空容器中的氧气，300rpm的速率搅拌下开始缓慢滴加溶有偶氮二异丁腈的苯乙烯，滴加完毕后，保持N2气氛和300rpm的速率，在70℃下聚合反应10h，将反应液离心分离，弃去上层清液，用无水乙醇洗涤下层微球，再离心，再洗涤，如此重复3-5次，即得聚苯乙烯微球；
在制备使用前，最好多偶氮二异丁腈进行醇洗，将偶氮二异丁腈加入到10倍量的无水乙醇中，60℃加热搅拌使偶氮二异丁腈完全溶解，迅速抽滤，滤液干燥至无水乙醇全部挥发，置于棕色瓶中备用。
微球预活化液的制备：
配制0.05mmol/L乙磺酸水溶液，用NaOH调节pH至6.0作为活化缓冲液；
在搅拌的环境下，缓慢分别向活化缓冲液中加入碳化二亚胺和N-经基丁二醜亚胺，配成碳化二亚胺6.0mg/ml、N-经基丁二醜亚胺8.0mg/ml溶液；水浴加热40℃，170rpm搅拌15min，得微球预活化液；
在40℃温度，200rpm的速率搅拌下，将聚苯乙烯微球缓慢加入3倍量微球预活化液中，保持40℃温度，200rpm的速率搅拌4h，即得。