1.一种用于胃癌诊断的环状RNA分子标记物,其特征在于:该环状RNA为hsa_circ-_0074362,其在基因组上的定位为:chr5:142264862-142311690,相应的线性基因为ARHGAP26(NM_015071),该环状RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.根据权利要求1所述的用于胃癌诊断的环状RNA分子标记物,其特征在于:所述hsa_circ_0074362在胃癌患者癌组织中的特异性表达水平下调。
3.一种检测如权利要求1所述的环状RNA分子标记物的方法,其特征在于所述的方法包括如下步骤:
(1)采集胃癌组织,称取组织,提取组织中的总RNA;
(2)将总RNA逆转录成cDNA;
(3)将cDNA进行荧光染料法实时定量PCR检测,反应结束后检测样品中环状RNAhsa_circ_0074362和看家基因GAPDH的Ct值;
(4)根据Ct值,通过看家基因GAPDH的表达水平来均一化circRNA的水平,计算得到hsa_circ_0074362的相对表达水平,并使用2ΔCt公式来计算hsa_circ_0074362的PCR相对定量值,式中ΔCt=Ct hsa_circ_0074362-CtGAPDH;
(5)当样本中的hsa_circ_0074362生物标志物的PCR相对定量值ΔCt小于或等于12.17时,则认为是非胃癌样本;大于12.17时,则认为是胃癌样本。
4.根据权利要求3所述的检测环状RNA分子标记物的方法,其特征在于,所述步骤(3)中的hsa_circ_0074362的特异性背对背引物为:
P1:5’-AGCTTTGTCGGAAGAGGACC-3’;
P2:5’-TCCTTGGCCAGTTCGTAACC-3’。
5.根据权利要求3所述的检测环状RNA分子标记物的方法,其特征在于,所述步骤(3)中的看家基因GAPDH的特异性扩增上下游引物为:
P3:5’-ACCCACTCCTCCACCTTTGAC-3’;
P4:5’-TGTTGCTGTAGCCAAATTCGTT-3’。
6.根据权利要求3所述的检测环状RNA分子标记物的方法,其特征在于,
所述步骤(1)中提取胃癌组织中总RNA的过程如下:
a.收集组织:胃癌组织收集在加入了RNA保存液的无菌离心管中,不用时存放在-80℃超低温冰箱中;
b.释放RNA:称取约20mg组织放置于2mL离心管中,置于冰上加入1mL TRIzol,将组织充分匀浆至无固体,室温静置10分钟,使组织中的RNA充分释放至溶液中;
c.氯仿提取:加入0.2mL三氯甲烷,涡旋震荡混匀,室温静置10分钟;4℃下,13000rpm离心10分钟,此时液体分层,其中上层水相中富集了RNA,小心吸取上层水相至1.5mL RNase-free离心管中;
d.异丙醇沉淀:加入等体积异丙醇,涡旋震荡混匀,4℃下静置30分钟,12000rpm在4℃下离心10分钟,弃上清;
e,乙醇洗涤:加入1mL75%的乙醇,混匀,12000rpm在4℃下离心5分钟,弃上清,最后加入适量RNase-free水溶解沉淀,即为组织中总RNA提取液,-80℃保存备用。
7.根据权利要求3所述的检测胃组织中环状RNA分子标记物的方法,其特征在于,所述步骤(3)中荧光定量PCR反应条件如下:先95℃预变性5分钟;然后95℃变性15秒,58℃退火30秒,72℃延伸30秒,40个循环;最后95℃变性1分钟,55℃退火30秒,95℃酶变性30秒,4℃保温。
8.一种根据权利要求1所述的环状RNA分子标记物在制备胃癌辅助诊断试剂盒中的应用。