本发明涉及一种从动物胆汁中提取胆红素的方法，尤其涉及一种从牛胆汁中提取胆红素的方法。
背景技术：
：胆红素是胆色素的一种，它是胆汁中的主要色素，呈橙黄色，它是体内铁卟啉化合物的主要代谢产物，有毒性，可对大脑和神经系统引起不可逆的损害，但也有抗氧化剂功能，可以抑制亚油酸和磷脂的氧化，胆红素是临床上判定黄疸的重要依据，也是肝功能的重要指标。从胆红素的生理功能和药理作用来看，它是可以在医药、食品、保健品和化妆品中广泛应用的，胆红素作为在生理上有重要意义的抗氧化剂，它是一种具有防御疾病和抗衰老等作用的天然色素，它在食品中的应用，一方面可以作为着色剂，夭然食用色素，另一方面，可以用作防止脂肪、维生素A、C和E等氧化的抗氧化剂；胆红素-白蛋白复合物，胆红素的琼脂糖脂，牛磺酸，番红花色或红色的胆红素锌盐，红色的胆红素硒盐等，都可以在抗衰老的保健品或化妆品中应用，其鲜艳的颜色自然又是美容的佳品。近年来，随着胆红素的功能不断的被开发利用，各种提取方法也层出不穷，但是由于传统的提取方法成本投资高，工艺复杂不易掌握，并且由于提取方法的不合理导致从牛胆汁中提取的胆红素含量低，收率低，难以满足目前市场的巨大需求，因此，急需寻求一种能有效提高收率的提取方法。技术实现要素：本发明为解决上述技术问题，提供了一种从牛胆汁中提取胆红素的方法。具体是通过以下技术方案来实现的：一种从牛胆汁中提取胆红素的方法，包括以下步骤：(1)牛胆汁预处理：将新鲜牛胆汁加热至沸腾后，继续搅拌3～5min，关火静置10～15min后，加入牛胆汁质量的10～15％的杀菌液，搅拌20～25min，得初液，加入初液质量的3～5％的生物活性炭，搅匀后过滤，得母液，所述的杀菌液是将双氧水、乙蒜素、中药提取液按2∶0.3～0.5∶1.1～1.5的质量比混合。(2)母液预处理：20～25℃下，将母液碱化，调节PH值为10～12，加入母液质量的4～6％的还原剂，搅拌20～30min后，再将母液酸化，调节PH值为3.5～5.5，加入母液质量的7～10％的抗氧化剂，搅拌30～45min，再以400～500KHz的频率超声处理3.5～5min，再以2000～3000转/min的速度离心处理5～8min，取上清液备用。(3)二次酸化：将步骤(2)处理后得的上清液，加入氢氧化钠或氢氧化钾，调节PH值为6～7，搅拌15min，加入明矾过滤后，再加入柠檬酸或亚磺酸调节PH值为4～4.5，在0～5℃下密封静置15～20h，得酸化液。(4)萃取：加入酸化液质量的30～35％的混合液，浸提24～30h，减压蒸馏回收混合液，再以2000～3000转/min的速度离心处理10～15min，去除上清液后留下底液，加入底液质量的10～15％的三氯甲烷，浸提35～45min，减压蒸馏回收三氯甲烷，95～100℃水浴加热25～30min，再加入底液质量的4.5～5倍的乙醇，浸提45～65min，减压蒸馏回收乙醇，加入生物活性炭，抽滤即可。进一步，所述的中药提取液，由以下按重量份计的原料组成：马齿苋20～30、麦冬15～20、仙鹤草6～11、知母2～3、大青叶4～9、艾叶10～15、沉香5～8、菊花1～3、桑寄生11～16。进一步，所述的中药提取液，是将中药原料分别洗净后，冷水浸泡40～50min，加热至沸腾后，放入中药总质量的1.5～2％的生姜，小火维持微沸状态40～50min，过滤，将滤液浓缩至滤液体积的1/3即可。进一步，所述的还原剂，是将硫酸亚铁、氯化钠和酒石酸按1∶0.3～0.35∶2.5～3的质量比混合。进一步，所述的抗氧化剂，是将花青素、亚硫酸钠和没食子酸按0.1～0.2∶1.1～1.3∶0.3～0.35的质量比混合。进一步，所述的混合液，是由55％的乙醇和15％的丙酮按1.5～2∶0.4～0.55的质量比混合。进一步，所述的乙醇，其浓度为72～76％。综上所述，本发明的有益效果在于：采用本发明的提取方法，有效的提高牛胆汁中胆红素的收率，胆红素的收率达到0.0148～0.0160％，提高品质，有效的满足目前市场对胆红素的需求，有效利用胆红素的药用价值。其中，通过对新鲜牛胆汁的预处理步骤，将双氧水、乙蒜素、中药提取液按科学合理的配比混合制备的杀菌液，有效的对牛胆汁进行杀菌消毒，从源头上减少了病原菌的滋生，其中，通过具有杀菌功效的中药的加入，使得制备的胆红素更加安全无毒，提高了胆红素的品质。通过硫酸亚铁、氯化钠和酒石酸按合适配比制成的还原剂，有效的将牛胆汁中的胆绿素还原成胆红素，提高收率，同时通过抗氧化剂的加入，使得胆红素含量更稳定，收率更加稳定，为提高收率提供保证。采用二次酸化，有效的控制pH值，使得胆红素能够被完全萃取进入三氯甲烷溶液，而析出的胆酸不能进入有机层，溶液在二次酸化时，控制合适的酸性条件，使得胆红素充分进入三氯甲烷有机层而与胆酸分离，提高胆红素的收率，减少胆酸的混入，提高品质。具体实施方式下面对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明，但本发明并不局限于这些实施方式，任何在本实施例基本精神上的改进或代替，仍属于本发明权利要求所要求保护的范围。实施例1一种从牛胆汁中提取胆红素的方法，包括以下步骤：(1)牛胆汁预处理：将新鲜牛胆汁加热至沸腾后，继续搅拌3min，关火静置10min后，加入牛胆汁质量的10％的杀菌液，搅拌20min，得初液，加入初液质量的3％的生物活性炭，搅匀后过滤，得母液，所述的杀菌液是将双氧水、乙蒜素、中药提取液按2∶0.3∶1.1的质量比混合。(2)母液预处理：20℃下，将母液碱化，调节PH值为10，加入母液质量的4％的还原剂，搅拌20min后，再将母液酸化，调节PH值为3.5，加入母液质量的7％的抗氧化剂，搅拌30min，再以400KHz的频率超声处理3.5min，再以2000转/min的速度离心处理5min，取上清液备用。(3)二次酸化：将步骤(2)处理后得的上清液，加入氢氧化钠或氢氧化钾，调节PH值为6，搅拌15min，加入明矾过滤后，再加入柠檬酸或亚磺酸调节PH值为4，在0℃下密封静置15h，得酸化液。(4)萃取：加入酸化液质量的30％的混合液，浸提24h，减压蒸馏回收混合液，再以2000转/min的速度离心处理10min，去除上清液后留下底液，加入底液质量的10％的三氯甲烷，浸提35min，减压蒸馏回收三氯甲烷，95℃水浴加热25min，再加入底液质量的4.5倍的乙醇，浸提45min，减压蒸馏回收乙醇，加入生物活性炭，抽滤即可。所述的中药提取液，由以下按重量份计的原料组成：马齿苋20kg、麦冬15kg、仙鹤草6kg、知母2kg、大青叶4kg、艾叶10kg、沉香5kg、菊花1kg、桑寄生11kg。所述的还原剂，是将硫酸亚铁、氯化钠和酒石酸按1∶0.3∶2.5的质量比混合。所述的抗氧化剂，是将花青素、亚硫酸钠和没食子酸按0.1∶1.1∶0.3的质量比混合。所述的混合液，是由55％的乙醇和15％的丙酮按1.5∶0.4的质量比混合。所述的乙醇，其浓度为72％。实施例2一种从牛胆汁中提取胆红素的方法，包括以下步骤：(1)牛胆汁预处理：将新鲜牛胆汁加热至沸腾后，继续搅拌5min，关火静置15min后，加入牛胆汁质量的15％的杀菌液，搅拌25min，得初液，加入初液质量的5％的生物活性炭，搅匀后过滤，得母液，所述的杀菌液是将双氧水、乙蒜素、中药提取液按2∶0.5∶1.5的质量比混合。(2)母液预处理：25℃下，将母液碱化，调节PH值为12，加入母液质量的6％的还原剂，搅拌30min后，再将母液酸化，调节PH值为5.5，加入母液质量的10％的抗氧化剂，搅拌45min，再以500KHz的频率超声处理5min，再以3000转/min的速度离心处理8min，取上清液备用。(3)二次酸化：将步骤(2)处理后得的上清液，加入氢氧化钠或氢氧化钾，调节PH值为7，搅拌15min，加入明矾过滤后，再加入柠檬酸或亚磺酸调节PH值为4.5，在0～5℃下密封静置20h，得酸化液。(4)萃取：加入酸化液质量的35％的混合液，浸提30h，减压蒸馏回收混合液，再以3000转/min的速度离心处理15min，去除上清液后留下底液，加入底液质量的15％的三氯甲烷，浸提45min，减压蒸馏回收三氯甲烷，100℃水浴加热30min，再加入底液质量的5倍的乙醇，浸提65min，减压蒸馏回收乙醇，加入生物活性炭，抽滤即可。所述的中药提取液，由以下按重量份计的原料组成：马齿苋30kg、麦冬20kg、仙鹤草11kg、知母3kg、大青叶9kg、艾叶15kg、沉香8kg、菊花3kg、桑寄生16kg。所述的还原剂，是将硫酸亚铁、氯化钠和酒石酸按1∶0.35∶3的质量比混合。所述的抗氧化剂，是将花青素、亚硫酸钠和没食子酸按0.2∶1.3∶0.35的质量比混合。所述的混合液，是由55％的乙醇和15％的丙酮按2∶0.55的质量比混合。所述的乙醇，其浓度为76％。实施例3一种从牛胆汁中提取胆红素的方法，包括以下步骤：(1)牛胆汁预处理：将新鲜牛胆汁加热至沸腾后，继续搅拌4min，关火静置13min后，加入牛胆汁质量的13％的杀菌液，搅拌22min，得初液，加入初液质量的4％的生物活性炭，搅匀后过滤，得母液，所述的杀菌液是将双氧水、乙蒜素、中药提取液按2∶0.4∶1.3的质量比混合。(2)母液预处理：22℃下，将母液碱化，调节PH值为11，加入母液质量的5％的还原剂，搅拌25min后，再将母液酸化，调节PH值为4.5，加入母液质量的8％的抗氧化剂，搅拌35min，再以450KHz的频率超声处理4.1min，再以2500转/min的速度离心处理7min，取上清液备用。(3)二次酸化：将步骤(2)处理后得的上清液，加入氢氧化钠或氢氧化钾，调节PH值为6.5，搅拌15min，加入明矾过滤后，再加入柠檬酸或亚磺酸调节PH值为4.2，在3℃下密封静置18h，得酸化液。(4)萃取：加入酸化液质量的33％的混合液，浸提28h，减压蒸馏回收混合液，再以2500转/min的速度离心处理13min，去除上清液后留下底液，加入底液质量的13％的三氯甲烷，浸提40min，减压蒸馏回收三氯甲烷，98℃水浴加热28min，再加入底液质量的4.8倍的乙醇，浸提55min，减压蒸馏回收乙醇，加入生物活性炭，抽滤即可。所述的中药提取液，由以下按重量份计的原料组成：马齿苋25kg、麦冬18kg、仙鹤草8kg、知母2.5kg、大青叶6kg、艾叶13kg、沉香7kg、菊花2kg、桑寄生13kg。所述的还原剂，是将硫酸亚铁、氯化钠和酒石酸按1：0.33：2.8的质量比混合。所述的抗氧化剂，是将花青素、亚硫酸钠和没食子酸按0.15∶1.2∶0.33的质量比混合。所述的混合液，是由55％的乙醇和15％的丙酮按1.8∶0.5的质量比混合。所述的乙醇，其浓度为74％。实施例4一种从牛胆汁中提取胆红素的方法，包括以下步骤：(1)牛胆汁预处理：将新鲜牛胆汁加热至沸腾后，继续搅拌5min，关火静置10min后，加入牛胆汁质量的15％的杀菌液，搅拌25min，得初液，加入初液质量的5％的生物活性炭，搅匀后过滤，得母液，所述的杀菌液是将双氧水、乙蒜素、中药提取液按2∶0.3∶1.5的质量比混合。(2)母液预处理：25℃下，将母液碱化，调节PH值为12，加入母液质量的4％的还原剂，搅拌30min后，再将母液酸化，调节PH值为5.5，加入母液质量的10％的抗氧化剂，搅拌45min，再以500KHz的频率超声处理5min，再以2000转/min的速度离心处理5min，取上清液备用。(3)二次酸化：将步骤(2)处理后得的上清液，加入氢氧化钠或氢氧化钾，调节PH值为7，搅拌15min，加入明矾过滤后，再加入柠檬酸或亚磺酸调节PH值为4，在0℃下密封静置20h，得酸化液。(4)萃取：加入酸化液质量的30％的混合液，浸提30h，减压蒸馏回收混合液，再以2000转/min的速度离心处理15min，去除上清液后留下底液，加入底液质量的15％的三氯甲烷，浸提45min，减压蒸馏回收三氯甲烷，100℃水浴加热25min，再加入底液质量的4.5倍的乙醇，浸提45min，减压蒸馏回收乙醇，加入生物活性炭，抽滤即可。所述的中药提取液，由以下按重量份计的原料组成：马齿苋30kg、麦冬15kg、仙鹤草6kg、知母3kg、大青叶4kg、艾叶15kg、沉香8kg、菊花3kg、桑寄生11kg。所述的还原剂，是将硫酸亚铁、氯化钠和酒石酸按1∶0.35∶2.5的质量比混合。所述的抗氧化剂，是将花青素、亚硫酸钠和没食子酸按0.2∶1.1∶0.35的质量比混合。所述的混合液，是由55％的乙醇和15％的丙酮按1.5∶0.55的质量比混合。所述的乙醇，其浓度为76％。实施例5一种从牛胆汁中提取胆红素的方法，包括以下步骤：(1)牛胆汁预处理：将新鲜牛胆汁加热至沸腾后，继续搅拌5min，关火静置10min后，加入牛胆汁质量的10％的杀菌液，搅拌25min，得初液，加入初液质量的3％的生物活性炭，搅匀后过滤，得母液，所述的杀菌液是将双氧水、乙蒜素、中药提取液按2∶0.5∶1.1的质量比混合。(2)母液预处理：25℃下，将母液碱化，调节PH值为10，加入母液质量的4％的还原剂，搅拌30min后，再将母液酸化，调节PH值为3.5，加入母液质量的10％的抗氧化剂，搅拌45min，再以500KHz的频率超声处理5min，再以3000转/min的速度离心处理5min，取上清液备用。(3)二次酸化：将步骤(2)处理后得的上清液，加入氢氧化钠或氢氧化钾，调节PH值为6，搅拌15min，加入明矾过滤后，再加入柠檬酸或亚磺酸调节PH值为4，在0℃下密封静置20h，得酸化液。(4)萃取：加入酸化液质量的35％的混合液，浸提30h，减压蒸馏回收混合液，再以2000转/min的速度离心处理10min，去除上清液后留下底液，加入底液质量的10％的三氯甲烷，浸提45min，减压蒸馏回收三氯甲烷，95℃水浴加热25min，再加入底液质量的5倍的乙醇，浸提65min，减压蒸馏回收乙醇，加入生物活性炭，抽滤即可。所述的中药提取液，由以下按重量份计的原料组成：马齿苋30kg、麦冬15kg、仙鹤草11kg、知母2kg、大青叶9kg、艾叶10kg、沉香8kg、菊花1kg、桑寄生16kg。所述的还原剂，是将硫酸亚铁、氯化钠和酒石酸按1∶0.35∶2.5的质量比混合。所述的抗氧化剂，是将花青素、亚硫酸钠和没食子酸按0.1∶1.3∶0.35的质量比混合。所述的混合液，是由55％的乙醇和15％的丙酮按2∶0.4的质量比混合。所述的乙醇，其浓度为73％。实验例选取新鲜牛胆汁，平均分为6份，前5份对应实施例1～5的方法进行胆红素的提取，第6份作为对照采用传统的提取方法，对6份牛胆汁中的的胆红素的收率进行统计，结果如表1所示：表1对比项胆红素收率％实施例10.0148实施例20.151实施例30.0160实施例40.0155实施例50.0157对照组0.0083当前第1页1 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