1.一种含有carRA基因和carB基因的耶罗维解脂酵母(Yarrowia lipotica)基因工程菌。
2.如权利要求1所述的耶罗维解脂酵母基因工程菌,其特征在于,所述的carRA基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.3所示;所述的carB基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.4所示。
3.如权利要求1所述的耶罗维解脂酵母基因工程菌,其特征在于,所述的耶罗维解脂酵母基因工程菌还进一步含有GGS基因。
4.如权利要求3所述的耶罗维解脂酵母基因工程菌,其特征在于,所述的GGS基因的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.2所示;或者,
所述的耶罗维解脂酵母基因工程菌的制备方法包括以下步骤:将包括采用含有carRA基因、carB基因和GGS基因的重组载体导入耶罗维解脂酵母即可;优选的,所述的含有carRA基因、carB基因和GGS基因的重组载体,由包括以下步骤的方法构建而得:克隆来源于三孢布拉霉的carRA基因、carB基因,在其上游和下游连接来源于耶罗维解脂酵母的启动子和终止子,使其成为完整的表达元件,并与GGS基因的表达元件整合到一个质粒上,即获得的重组载体;优选的,所述的重组载体是质粒pS-B-RA-GGS-F-U(L);或者,
所述的carB基因,carRA基因和GGS基因在所述的耶罗维解脂酵母基因工程菌中的拷贝数大于1个,较佳的为2-100个,甚至1000个。
5.如权利要求1或3所述的耶罗维解脂酵母基因工程菌,其特征在于,所述的耶罗维解脂酵母基因工程菌还进一步含有HMG-CoA还原酶的活性部位基因,优选HMG-CoA还原酶的催化部位。
6.如权利要求5所述的耶罗维解脂酵母基因工程菌,其特征在于,所述的耶罗维解脂酵母基因工程菌的制备方法包括以下步骤:用含有HMG-CoA还原酶活性部位基因的重组表达载体导入耶罗维解脂酵母即可;优选的,所述的重组表达载体是质粒pSK-Hmg(y)-Ura3-IntB,其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.6所示。
7.如权利要求1或5所述的耶罗维解脂酵母基因工程菌,其特征在于,所述的耶罗维解脂酵母基因工程菌还进一步敲除了Gut2基因;和/或,所述的耶罗维解脂酵母基因工程菌还进一步敲除了Pox2基因。
8.如权利要求7所述的耶罗维解脂酵母基因工程菌,其特征在于,所述的敲除方法包括以下步骤:采用质粒pS-B-RA-GGS-Gut2-U(L)敲除,该质粒的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.7所示。
9.如权利要求7所述的耶罗维解脂酵母基因工程菌,其特征在于,所述的敲除方法包括以下步骤:采用质粒pS-B-RA-GGS-Pox2-U(L)敲除,该质粒的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.8所示。
10.一种基因工程菌生产β-胡萝卜素的方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)制备如权利要求1所述的含有carRA基因与carB基因的耶罗维解脂酵母基因工程菌;
2)发酵培养步骤1)所得的耶罗维解脂酵母基因工程菌,从发酵液中获得β-胡萝卜素。