本发明涉及一种木瓜蛋白酶溶液酶制备方法。
背景技术：
酶作为一类重要的生物催化剂，具有催化效率高、专一性强、反应条件温和、无污染等特点，被广泛地应用于制药、环保、食品、酿造等领域。但游离蛋白酶存在保存期短、稳定性差、不能回收等缺点，在工业上的应用受到一定限制。20世纪70年代兴起的固定化酶技术，为这些问题的解决提供了有效的手段，从而使酶的固定化成为当前酶工程的热门课题之一。酶的固定化技术是指采用吸附交联法、偶联法将酶固定于特定载体上的技术手段。酶固定化以后，既能保持酶的催化活性，又能克服游离酶存在的一些不足。固定化酶技术
能提高酶分子结构的稳定性，延长酶的使用期与保管期，并能与反应物及产物分开，有效控制生产过程，简化生产工艺，更重要的是固定化酶能在生产中反复连续使用，大幅度提高酶的利用率。固定化酶的上述优点为其在各个领域中的广泛应用开辟了新途径。
技术实现要素：
本发明提出一种木瓜蛋白酶溶液酶制备方法。
一种木瓜蛋白酶溶液酶制备方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）称取0.5g木瓜蛋白酶，溶于0.02mol／L，在pH7的磷酸缓冲溶液，并定容至50mL，得10mg／mL木瓜蛋白酶溶液备用；
（2）从木瓜蛋白酶溶液中取1mL酶液，用pH 7磷酸缓冲溶液定容至100mL，于30-50℃水浴中恒温2min，加入40℃恒温2min的2％酪蛋白溶液l mL，在40℃条件下反应10min后，再加入2mL三氯乙酸(TCA)终止反应。对照则先在沸水中灭酶10 min，立即加入TCA溶液2mL终止反应，再置于30-50℃水浴中加入2％酪蛋白溶液1mL反应10min，静置10min后过滤后即得固定化酶微球；
(3)取0.1g固定化酶微球，置于10mL小试管中，加入1.0mL激活剂和1.0mL酪蛋白溶液，反应5-15min，加入终止剂终止，保温10min后取出混合物过滤后即得。
优选地，所述步骤（2）中水浴温度为40℃。
优选地，所述步骤（3）反应时间为10min。
本发明所述方法制备的木瓜蛋白酶溶液酶，酶的活性强，制备工艺简单，实用性强，可工业化生产。
具体实施方式
实施例1。
一种木瓜蛋白酶溶液酶制备方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）称取0.5g木瓜蛋白酶，溶于0.02mol／L，在pH7的磷酸缓冲溶液，并定容至50mL，得10mg／mL木瓜蛋白酶溶液备用；
（2）从木瓜蛋白酶溶液中取1mL酶液，用pH 7磷酸缓冲溶液定容至100mL，于30-50℃水浴中恒温2min，加入40℃恒温2min的2％酪蛋白溶液l mL，在40℃条件下反应10min后，再加入2mL三氯乙酸(TCA)终止反应。对照则先在沸水中灭酶10 min，立即加入TCA溶液2mL终止反应，再置于30-50℃水浴中加入2％酪蛋白溶液1mL反应10min，静置10min后过滤后即得固定化酶微球；
(3)取0.1g固定化酶微球，置于10mL小试管中，加入1.0mL激活剂和1.0mL酪蛋白溶液，反应5-15min，加入终止剂终止，保温10min后取出混合物过滤后即得。
实施例2。
一种木瓜蛋白酶溶液酶制备方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）称取0.5g木瓜蛋白酶，溶于0.02mol／L，在pH7的磷酸缓冲溶液，并定容至50mL，得10mg／mL木瓜蛋白酶溶液备用；
（2）从木瓜蛋白酶溶液中取1mL酶液，用pH 7磷酸缓冲溶液定容至100mL，于30-50℃水浴中恒温2min，加入40℃恒温2min的2％酪蛋白溶液l mL，在40℃条件下反应10min后，再加入2mL三氯乙酸(TCA)终止反应。对照则先在沸水中灭酶10 min，立即加入TCA溶液2mL终止反应，再置于30-50℃水浴中加入2％酪蛋白溶液1mL反应10min，静置10min后过滤后即得固定化酶微球；
(3)取0.1g固定化酶微球，置于10mL小试管中，加入1.0mL激活剂和1.0mL酪蛋白溶液，反应5-15min，加入终止剂终止，保温10min后取出混合物过滤后即得。
优选地，所述步骤（2）中水浴温度为40℃。
实施例3。
一种木瓜蛋白酶溶液酶制备方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）称取0.5g木瓜蛋白酶，溶于0.02mol／L，在pH7的磷酸缓冲溶液，并定容至50mL，得10mg／mL木瓜蛋白酶溶液备用；
（2）从木瓜蛋白酶溶液中取1mL酶液，用pH 7磷酸缓冲溶液定容至100mL，于30-50℃水浴中恒温2min，加入40℃恒温2min的2％酪蛋白溶液l mL，在40℃条件下反应10min后，再加入2mL三氯乙酸(TCA)终止反应。对照则先在沸水中灭酶10 min，立即加入TCA溶液2mL终止反应，再置于30-50℃水浴中加入2％酪蛋白溶液1mL反应10min，静置10min后过滤后即得固定化酶微球；
(3)取0.1g固定化酶微球，置于10mL小试管中，加入1.0mL激活剂和1.0mL酪蛋白溶液，反应5-15min，加入终止剂终止，保温10min后取出混合物过滤后即得。
优选地，所述步骤（2）中水浴温度为40℃。
优选地，所述步骤（3）反应时间为10min。