一种7‑取代‑4‑芳基香豆素类化合物及其制备方法和应用与流程

文档序号:11893046阅读:368来源:国知局

本发明属于抗肿瘤药物技术领域,涉及一种7-取代-4-芳基香豆素类化合物及其制备方法和应用,为抗肿瘤药物的开发和应用提供了新的选择。



背景技术:

恶性肿瘤是严重威胁人类健康的疾病之一。根据2013年全国肿瘤登记结果,中国恶性肿瘤发病率为235/10万,肺癌和乳腺癌分别位居男、女性发病首位,十年来中国恶性肿瘤发病率呈上升趋势,发病率与世界水平接近。但是,恶性肿瘤死亡率高于世界水平,2012年中国恶性肿瘤发病人数为306.5万,约占全球发病的五分之一;恶性肿瘤死亡人数为220.5万,约占全球恶性肿瘤死亡人数的四分之一。在美国,恶性肿瘤患者的5年生存率大约在60%至70%,而我国恶性肿瘤患者5年生存率大约在30%左右。

目前,临床对于恶性肿瘤的治疗,一般有外科手术、放射治疗及药物化疗等。其中药物化疗可以针对局部性和扩散性癌变组织,临床上应用十分广泛。但是,传统的药物选择性较差,在杀死肿瘤细胞的同时也会杀死正常组织的细胞,导致明显的毒副作用。因此,研究开发新结构类型的抗肿瘤药物具有重要意义。

4-芳基香豆素是一类具有4-芳基-2H-苯并吡喃-2-酮结构的化合物,到2003年已有130种天然4-芳基香豆素被报道,它们主要分布在滕黄科、豆科、茜草科、菊科等的58种植物。此外,4-芳基香豆素类化合物在微生物中也有少量分布。研究表明4-芳基香豆素类化合物具有抗真菌、降血糖、抗氧化等多种生物活性,也具有抗肿瘤活性。Guilet,D.等从C.dispar分离得到12个4-苯基香豆素化合物,其中isodispar、disparinol D、disparinol B对人口腔表皮样癌KB细胞具有显示的增殖抑制活性,抑制50%KB细胞生长的最低浓度(ED50)分别为8μg/mL、21μg/mL和7μg/mL。Ito,A等从Exostema acuminatum分离得到的4-苯基香豆素具有广泛的细胞毒性,在体外对Lu1、M109、SKNSH等肿瘤细胞株的增殖具有明显的抑制作用。Christian Bailly等合成的4-苯基香豆素化合物4-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-5,6,7三甲氧基香豆素及4-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-5,7二甲氧基香豆素对CEM白血病细胞增殖具有抑制作用,IC50分别为0.52μmol/L、0.083μmol/L。并且,这两个化合物能够有效的抑制微管蛋白的组装,使细胞大量停滞在G2/M期,从而诱导细胞的凋亡。

因此,基于4-苯基香豆素的抗肿瘤活性,对其进行修饰改造,合成一系列新的具有抗肿瘤活性的待筛选4-芳基香豆素衍生物,对抗肿瘤药物的研究与开发及日后的临床应用具有十分重要的意义。



技术实现要素:

本发明的目的在于提供一种7-取代-4-芳基香豆素类化合物及其制备方法和应用,该类化合物通过对香豆素的4,7位进行修饰改造得到,具有良好的抗肿瘤活性,可应用于抗肿瘤药物的制备,而且其合成原料易得、合成方法容易实现。

为达到上述目的,本发明采用的技术方案为:

本发明提供了一种7取代-4-芳基香豆素类化合物,其结构式为:

其中,R1为甲基、乙基、丙基或氢;

R2为氢、单取代基或双取代基,其中单取代基为三氟甲氧基、三氟甲基、甲氧基、甲基、卤素或硝基,双取代基为三氟甲氧基、三氟甲基、甲氧基、甲基、卤素或硝基中的一种或两种;

R3为甲氧基、乙氧基、氨基、脂肪伯氨基、脂肪仲氨基、氮杂环、氨基酸或取代苯氨基;

X1、X2为C或N,且X1、X2不同时为N。

当X1、X2=C时,香豆素的4位取代基为苯基或取代苯基,其中取代苯基为单取代或双取代,取代基为三氟甲氧基、三氟甲基、甲氧基、甲基、卤素或硝基中的一种或两种;当X1=N、X2=C时,香豆素的4位取代基为3-吡啶基或取代3-吡啶基,其中取代3-吡啶基为单取代或双取代,取代基为三氟甲氧基、三氟甲基、甲氧基、甲基、卤素或硝基中的一种或两种;当X1=C、X2=N时,香豆素的4位取代基为4-吡啶基或取代4-吡啶基,其中取代4-吡啶基为单取代或双取代,取代基为三氟甲氧基、三氟甲基、甲氧基、甲基、卤素或硝基中的一种或两种。

所述R3中取代苯氨基中的取代基为2-甲基-5-硝基、3-甲氧羰基、4-甲氧羰基、乙氧羰基、甲氨基羰基、二乙氨基羰基、4-甲基哌嗪基羰基、4-吗啉基羰基、2-二甲氨基-1-乙氨基羰基,3-甲氨基磺酰基、4-甲氨基磺酰基、二乙氨基磺酰基、4-甲基哌嗪基磺酰基、4-吗啉基磺酰基或2-二甲氨基-1-乙氨基磺酰基。

所述的7-取代-4-芳基香豆素类化合物的制备方法,包括以下步骤:

步骤1:苯甲酸、取代苯甲酸、3-吡啶甲酸或4-吡啶甲酸,与乙醇经酯化反应生成酯,再与乙酸乙酯在NaOEt作用下发生Claisen酯缩合反应生成β酮酸酯;

步骤2:β酮酸酯与带有取代基的酚在酸催化作用下发生Pechmann缩合反应,得到4-芳基香豆素母核;

步骤3:4-芳基香豆素母核与氯乙酸乙酯通过Williamson反应生成带有4-芳基香豆素母核的醚,再经酯水解,得到带有4-芳基香豆素母核的酸;

步骤4:带有4-芳基香豆素母核的酸与醇、氨、脂肪伯胺、脂肪仲胺、氮杂环、氨基酸或取代苯胺经缩合反应得到7-取代-4-芳基香豆素类化合物。

所述步骤1的具体操作为:称取苯甲酸、取代苯甲酸、3-吡啶甲酸或4-吡啶甲酸,加入无水乙醇中溶解,然后向其中滴加浓H2SO4,加热回流反应,反应结束后旋蒸除去乙醇,调节pH值至8~9,再用乙酸乙酯萃取,萃取的有机相合并后用无水Na2SO4干燥,再旋蒸除去乙酸乙酯,得到苯甲酸乙酯、取代苯甲酸乙酯、3-吡啶甲酸乙酯或4-吡啶甲酸乙酯;

称取苯甲酸乙酯、取代苯甲酸乙酯、3-吡啶甲酸乙酯或4-吡啶甲酸乙酯,加入NaOEt和乙酸乙酯,加热回流反应,反应结束后旋蒸除去乙酸乙酯,调节pH值至8~9,再用乙酸乙酯萃取,萃取的有机相合并后用无水Na2SO4干燥,再经硅胶柱色谱分离纯化,得到β酮酸酯。

所述步骤2的具体操作为:称取β酮酸酯于反应容器中,加入带有取代基的酚和无水乙醇,冰浴条件下滴加浓H2SO4,室温下搅拌反应,反应结束后调节pH值至中性,析出固体,抽滤,滤饼烘干后重结晶,得到4-芳基香豆素母核。

所述步骤3的具体操作为:以4-芳基香豆素母核、氯乙酸乙酯和无水K2CO3为原料,丙酮为溶剂,加热回流反应,反应结束后旋蒸除去丙酮,再加入H2O,析出固体,抽滤,滤饼烘干,得到带有4-芳基香豆素母核的醚;

将带有4-芳基香豆素母核的醚用THF溶解,再加入LiOH·H2O和H2O,室温下搅拌反应,反应结束后旋蒸除去THF,加入冰水,用HCl酸化至pH值为2~3,析出固体,抽滤,滤饼烘干,得到带有4-芳基香豆素母核的酸。

所述步骤4的具体操作为:称取带有4-芳基香豆素母核的酸与醇、氨、脂肪伯胺、脂肪仲胺、氮杂环、氨基酸或取代苯胺,以二氯甲烷为溶剂,加入缩合剂DCC、EDCI或TBTU,室温下搅拌反应,反应结束后加入水,用二氯甲烷萃取,萃取的有机相用无水Na2SO4干燥,再经柱色谱分离纯化,得到7-取代-4-芳基香豆素类化合物。

所述的7-取代-4-芳基香豆素类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。

所述的7-取代-4-芳基香豆素类化合物在制备抗结肠癌药物、抗乳腺癌药物和/或抗肺癌药物中的应用。

所述的7-取代-4-芳基香豆素类化合物添加辅料制成片剂、胶囊剂、软胶囊剂或注射剂,其中每片、每粒或每支制剂中含有10~500mg的7-取代-4-芳基香豆素类化合物;所述的辅料包括添加剂、稳定剂、增溶剂、润滑剂、崩解剂中的一种或几种。

相对于现有技术,本发明的有益效果为:

本发明提供的7-取代-4-芳基香豆素类化合物,是一系列新的4-芳基香豆素衍生物,是通过对香豆素的4,7位进行修饰改造后得到的。药理学实验表明,本发明提供的7-取代-4-芳基香豆素类化合物在多种肿瘤细胞株上具有良好的抑制活性,具有较强的体外抗肿瘤活性,可应用于抗肿瘤药物的制备,为抗肿瘤药物的开发和应用提供了新的选择,还可进一步应用于抗肿瘤药物的设计与优化。

本发明提供的7-取代-4-芳基香豆素类化合物的制备方法,先以苯甲酸或吡啶甲酸等为起始化合物,先与乙醇经酯化反应生成酯,再与乙酸乙酯发生Claisen酯缩合反应生成β酮酸酯,β酮酸酯与酚发生Pechmann缩合反应得到4-芳基香豆素母核,4-芳基香豆素母核与氯乙酸乙酯通过Williamson反应生成醚,再经酯水解,得到酸,酸与胺基类化合物经缩合反应即得到目标产物。该方法具有原料易得、反应条件温和、合成方法容易实现、反应过程操作简单、所用试剂便宜、产率较高的优点。

进一步的,本发明提供的7-取代-4-芳基香豆素类化合物具有明显的抗肿瘤活性,尤其是化合物28(3-{2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-三氟甲氧基苯基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酰氨基}-N-(2-二甲氨基乙基)苯甲酰胺)对人结肠癌(HCT116)、乳腺癌(MCF-7)、肺癌(A549)细胞都具有很强的增殖抑制活性,对A549的作用与阳性药GDC-0941相当,对MCF-7的作用明显强于阳性药GDC-0941。

进一步的,本发明提供的7-取代-4-芳基香豆素类化合物,能够用于制备抗肿瘤药物制剂,其中每片、每粒或每支药物制剂中含有10-500mg 7-取代-4-芳基香豆素类化合物。在利用本发明的7-取代-4-芳基香豆素类化合物制备抗肿瘤药物制剂时,可以将该药物制成片剂、胶囊剂、软胶囊剂或注射剂。这些药物制剂可按照各种制剂的常规制备工艺制成。对于片剂或胶囊剂,优选的含量为20-150mg。并且本发明涉及的口服制剂中可含有药用辅料,包括添加剂、稳定剂、增溶剂、润滑剂、崩解剂等,如淀粉、糊精、葡萄糖、乳糖、纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、交联聚乙烯吡咯烷酮、果胶、环糊精、土温-80、聚乙烯醇、硬脂酸镁、滑石粉等。

附图说明

图1为本发明实施例1的合成路线图。

具体实施方式

本发明提供了一种7-取代-4-芳基香豆素类化合物及其制备方法和用途,具有原料易得、反应条件温和、反应过程操作简单的特点。本发明提供的7-取代-4-芳基香豆素类化合物具有较强的抗肿瘤活性,可进一步应用于抗肿瘤药物的设计与优化。

下面结合实施例对本发明做详细的说明,实施例仅用于说明本发明,而不是以任何方式限制本发明。尽管用较佳的实施例对本发明进行了详细的说明,但本领域的普通技术人员应当理解,在不脱离本发明的范围下可以对本发明进行修改、变形或等同替换,均属于本发明的保护范围。

实施例1 N-[2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酰基]-L-脯氨酰胺(T1)的制备

合成路线如图1所示:

(1)苯甲酰乙酸乙酯(β酮酸酯)的合成

称取苯甲酸,加入无水乙醇中溶解,缓慢滴加浓H2SO4,加热回流16h后停止反应,旋蒸除去乙醇,用饱和Na2CO3调pH至8-9,用乙酸乙酯萃取3次,合并有机相,无水Na2SO4干燥,旋蒸除去乙酸乙酯,得到无色油状液体(苯甲酸乙酯),直接用于下一步反应。

称取苯甲酸乙酯,加入NaOEt和乙酸乙酯,加热回流10h后停止反应,旋蒸除去乙酸乙酯,用2mol/L的HCl调pH至8-9,用乙酸乙酯萃取3次,合并有机相,无水Na2SO4干燥,硅胶柱色谱分离纯化,得无色油状液体,即为苯甲酰乙酸乙酯。

(2)7-羟基-8-甲基-4-苯基-2H-苯并吡喃-2-酮(4-芳基香豆素母核)的合成

称取2,6-二羟基甲苯1.24g(10mmol),苯甲酰乙酸乙酯1.92g(10mmol)于100mL茄形瓶中,加入无水乙醇15mL后,冰浴条件下滴加10mL浓H2SO4,室温下搅拌反应,反应结束后用NaOH调节pH值至中性,抽滤得黄色固体,烘干,无水乙醇重结晶,得淡黄色固体1.5g,产率59.52%,mp:286-288℃。

(3)2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸乙酯(带有4-芳基香豆素母核的醚)的合成

称取化合物7-羟基-8-甲基-4-苯基-2H-苯并吡喃-2-酮1.0g(4.0mmol)于100mL茄形瓶中,再加入丙酮30mL,搅拌下加入无水K2CO3 1.7g(12mmol),氯乙酸乙酯0.9mL(8mmol),加热回流反应6h,旋蒸除去丙酮,再加入20mL H2O,析出白色固体,抽滤,烘干得1.3g,产率:96.94%,mp:240~242℃。

(4)2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸(带有4-芳基香豆素母核的酸)的合成

称取化合物2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)-乙酸乙酯1.3g(3.8mmol)于100mL茄形瓶中,用THF 20mL溶解,再加入LiOH·H2O 0.32g(7.6mmol),5mL H2O,室温搅拌4h,旋蒸除去THF,体系加入10mL冰水,用2mol/L HCl酸化至pH为2-3,析出大量白色固体,抽滤烘干得1.1g,产率:92.28%,mp:252~253℃。

(5)N-[2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酰基]-L-脯氨酰胺(目标化合物7-取代-4-芳基香豆素类化合物)的合成

称取2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸0.4g(1.29mmol)于100mL茄形瓶中,加30mL DCM溶解,再加入TBTU 0.5g(1.55mmol)、DIPEA 0.45mL(2.58mmol),室温搅拌活化30min后加入L-脯氨酰胺0.3g(2.63mmol),室温过夜反应,TLC监测反应完后,加水,用二氯甲烷萃取,收集有机相,无水Na2SO4干燥,柱色谱分离纯化(氯仿/甲醇=20/1),得0.3g白色固体,产率:57.69%,mp:101~103℃。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.56-7.58(t,3H,Ar-H),7.51-7.53(t,2H,Ar-H),7.29-7.33(d,1H,J=13.6Hz,5’Ar-H),7.16-7.18(d,1H,J=8.8Hz,6’Ar-H),6.94-6.97(d,2H,J=9.2Hz,-CONH2),6.24(s,1H,3’Ar-H),4.98(s,2H,-CO-CH2-O-),3.49-3.62(m,2H,-CONCH2-),2.69(s,1H,-CONCH-),2.29(s,3H,Ar-CH3),1.88-2.04(m,4H,-CHCH2CH2CH2-)ppm。EI-MS(m/z):406(M+)。

实施例2 2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酰胺(T2)的制备

制备方法同实施例1,用氯化铵代替L-脯氨酰胺。产率:51.28%,mp:268~271℃。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.57-7.58(t,3H,Ar-H),7.46-7.53(m,4H,Ar-H),7.23-7.26(d,1H,J=8.8Hz,-CONH2),6.91-6.93(d,1H,J=8.8Hz,-CONH2),6.26(s,1H,Ar-H),4.60(s,2H,-CO-CH2-O-),2.32(s,3H,Ar-CH3)ppm。EI-MS(m/z):309(M+)。

实施例3 N-(2-(二甲氨基)乙基)-2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酰胺(T3)的制备

制备方法同实施例1,用N,N-二甲基-1,2-乙二胺代替L-脯氨酰胺。产率:61.22%,mp:238~241℃。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.92-7.94(t,1H,-CH2CONH-),7.56-7.58(t,3H,Ar-H),7.50-7.52(q,2H,Ar-H),7.22-7.24(d,1H,J=8.8Hz,5’Ar-H),6.93-6.95(d,1H,J=9.2Hz,6’Ar-H),6.26(s,1H,3’Ar-H),4.64(s,2H,-CO-CH2-O-),3.22-3.25(t,2H,-NHCH2CH2N(CH3)2),2.30-2.33(t,5H,-NHCH2CH2N(CH3)2和Ar-CH3),2.15(s,6H,-NHCH2CH2N(CH3)2)ppm。ESI-MS(m/z):381.2[M+H]+

实施例4 3-[2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酰氨基]苯甲酸乙酯(T4)的制备

(1)3-硝基苯甲酸乙酯的合成

称取3-硝基苯甲酸4g(23.9mmol)于250mL茄形瓶中,用40mL无水乙醇溶解,再滴入浓硫酸4mL(72mmol),加热回流,16h后停止反应,旋蒸除去乙醇,用饱和Na2CO3调pH至弱碱性,用EA萃取4次(4×40mL),合并有机相,无水Na2SO4干燥,柱色谱分离纯化(石油醚/乙酸乙酯=20/1),得到白色固体4.5g,产率:96.33%,mp:43~45℃。

(2)3-氨基苯甲酸乙酯的合成

称取3-硝基苯甲酸乙酯2g(10mmol)于250mL茄形瓶中,用30mL无水乙醇溶解,再加入还原Pd,H2保护下室温搅拌,4h后停止反应,抽滤,滤液旋蒸除去乙醇,得到1.5g淡黄色油状物,产率:88.61%。

制备方法同实施例1,用3-氨基苯甲酸乙酯代替L-脯氨酰胺。产率:33.92%,mp:284~285℃。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.43(s,1H,-CH2CONHAr),8.27-8.28(t,1H,B环2’Ar-H),7.85-7.87(t,1H,B环6’Ar-H),7.66-7.68(d,1H,J=8.0Hz,B环4’Ar-H),7.46-7.57(m,6H,Ar-H),7.25-7.27(d,1H,J=8.8Hz,5’Ar-H),6.97-6.99(d,1H,J=8.8Hz,6’Ar-H),6.26(s,1H,3’Ar-H),4.92(s,2H,-CO-CH2-O-),4.29-4.34(q,2H,-OCH2CH3),2.35(s,3H,Ar-CH3),1.30-1.33(t,3H,-OCH2CH3)ppm。EI-MS(m/z):458(M+)。

实施例5 N-(2-甲基-5-硝基苯基)-2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酰胺(T5)的制备

制备方法同实施例1,用2-甲基-5-硝基苯胺代替L-脯氨酰胺。产率:17.46%,mp:286~289℃。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.78(s,1H,-CH2CONHAr),8.51-8.52(d,1H,J=2.3Hz,B环6’Ar-H),7.97-7.99(dd,1H,J=2.4Hz和8.4Hz,B环4’Ar-H),7.51-7.58(m,6H,Ar-H),7.28-7.30(d,J=8.9Hz,1H,5’Ar-H),7.03-7.05(d,J=9.0Hz,1H,6’Ar-H),6.28(s,1H,3’Ar-H),5.00(s,2H,-CO-CH2-O-),2.37-2.37(d,6H,J=3.2Hz,Ar-CH3)ppm。EI-MS(m/z):444(M+)。

实施例6 2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)-N-(3-(吗啉-4-羰基)苯基)乙酰胺(T6)的制备

(1)(3-硝基苯基)(吗啉-4-基)甲酮的合成

称取3-硝基苯甲酸1g(6mmol)于250mL茄形瓶中,用50mL DCM溶解,搅拌下加入EDCI1.4g(7.2mmol),HOBt 1g(7.2mmol),室温搅拌1h后,加入吗啉1mL(12mmol),室温搅拌过夜反应,TLC监测反应完成后,用饱和Na2CO3溶液洗涤反应体系,收集DCM相,水相再用DCM萃取3次(3×40mL),合并DCM相,无水Na2SO4干燥,柱色谱分离纯化,洗脱剂:(氯仿:甲醇=40:1),得1.0g白色固体,产率70.76%,直接用于下一步反应。

(2)(3-氨基苯基)(吗啉-4-基)甲酮的合成

称取4-(3-硝基苯甲酰基)吗啉0.7g(2.8mmol)于250mL茄形瓶中,用30mL无水乙醇溶解,加热回流后加入铁粉1.6g(28.6mmol),冰醋酸1.6mL,继续回流6h,旋蒸除去乙醇,加饱和Na2CO3调pH至弱碱性,再加入EA 40mL,抽滤,收集滤液,分液收集EA相,水相再用EA萃取3次(3×40mL),合并EA相,无水Na2SO4干燥,旋蒸除去EA后,得到0.6g黄色固体,产率97.24%,直接用于下一步反应。

制备方法同实施例1,用(3-氨基苯基)(吗啉-4-基)甲酮代替L-脯氨酰胺。产率:15.63%,mp:290~293℃。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.33(s,1H,-CH2CONH-),7.71(s,1H,Ar-H),7.63-7.65(d,1H,J=8.0Hz,B环6’Ar-H),7.50-7.57(m,5H,Ar-H),7.38-7.42(t,1H,B环5’Ar-H),7.25-7.28(d,1H,J=9.2Hz,5’Ar-H),7.10-7.12(d,1H,J=7.6Hz,B环4’Ar-H),6.97-6.99(d,1H,J=8.8Hz,6’Ar-H),6.27(s,1H,3’Ar-H),4.91(s,2H,-CO-CH2-O-),3.56-3.61(t,8H,-N(CH2CH2)2O-),2.35(s,3H,Ar-H)ppm。EI-MS(m/z):498(M+)。

实施例7 2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)-N-(3-(4-甲基哌嗪-1-羰基)苯基)乙酰胺(T7)的制备

(3-氨基苯基)(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮的制备方法同实施例6,用1-甲基哌嗪代替吗啉。

制备方法同实施例1,用(3-氨基苯基)(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮代替L-脯氨酰胺。产率:60.61%,mp:119~122℃。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.32(s,1H,-CH2CONH-),7.69(s,1H,B环2’Ar-H),7.62-7.64(d,1H,J=8.4Hz,B环6’Ar-H),7.50-7.57(m,5H,Ar-H),7.37-7.41(t,1H,B环5’Ar-H),7.25-7.27(d,1H,J=9.2Hz,5’Ar-H),7.07-7.09(d,1H,J=7.6Hz,B环4’Ar-H),6.96-6.99(d,1H,J=9.2Hz,6’Ar-H),6.26(s,1H,3’Ar-H),4.91(s,2H,-CO-CH2-O-),3.60(s,2H,-N(CH2)2),3.31(s,2H,-N(CH2)2)2.35(s,4H,CH3N(CH2)2),2.26(s,3H,Ar-H),2.19(s,3H,CH3N(CH2)2)ppm。ESI-MS(m/z):512.2[M+H]+

实施例8 3-[2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酰氨基]-N,N-二乙基苯甲酰胺(T8)的制备

3-氨基-N,N-二乙基苯甲酰胺的制备方法同实施例6,用二乙胺代替吗啉。

制备方法同实施例1,用3-氨基-N,N-二乙基苯甲酰胺代替L-脯氨酰胺。产率:48.01%,mp:186~187℃。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.31(s,1H,-CH2CONHAr),7.68(s,1H,B环2’Ar-H),7.50-7.60(m,6H,Ar-H),7.36-7.40(t,1H,B环5’Ar-H)7.25-7.27(d,1H,J=8.8Hz,5’Ar-H),7.04-7.05(d,1H,J=7.6Hz,B环4’Ar-H),6.96-6.99(d,1H,J=9.2Hz,6’Ar-H),6.26(s,1H,3’Ar-H),4.91(s,2H,-CO-CH2-O-),3.41(s,2H,-NCH2)3.17(s,2H,-NCH2),2.35(s,3H,Ar-CH3),1.05-1.13(t,6H,-N(CH2CH3)2)ppm。EI-MS(m/z):484(M+)。

实施例9 3-[2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酰氨基]-N-(2-二甲氨基乙基)苯甲酰胺(T9)的制备

3-氨基-N-(2-二甲氨基乙基)苯甲酰胺的制备方法同实施例6,用2-二甲氨基乙胺代替吗啉。

制备方法同实施例1,用3-氨基-N-(2-二甲氨基乙基)苯甲酰胺代替L-脯氨酰胺。产率:31.25%,mp:172~76℃。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.38(s,1H,-CH2CONHAr),8.63-8.66(q,1H,ArCONH-),8.17(s,1H,B环2’Ar-H),7.71-7.73(t,1H,B环6’Ar-H),7.43-7.58(m,7H,Ar-H),7.26-7.28(d,1H,J=9.2Hz,5’Ar-H),6.97-7.00(d,1H,J=8.8Hz,6’Ar-H),6.28(s,1H,3’Ar-H),4.92(s,2H,-CO-CH2-O-),3.57-3.58(d,2H,-NHCH2CH2N(CH3)2),3.20-3.21(t,2H,-NHCH2CH2N(CH3)2),2.81(s,6H,-NHCH2CH2N(CH3)2),2.36(s,3H,Ar-CH3)ppm。ESI-MS(m/z):500.2[M+H]+

实施例10 N-甲基-3-[2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酰氨基]苯甲酰胺(T10)的制备

3-氨基-N-甲基苯甲酰胺的制备方法同实施例6,用甲胺代替吗啉。

制备方法同实施例1,用3-氨基-N-甲基苯甲酰胺代替L-脯氨酰胺。产率:52.54%,mp:241~244℃。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.32(s,1H,-CH2CONH-),8.41-8.42(d,1H,J=4.4Hz,-CONHCH3),8.06(s,1H,B环2’Ar-H),7.75-7.77(d,1H,J=8.0Hz,B环6’Ar-H),7.52-7.56(q,6H,Ar-H),7.38-7.42(t,1H,B环5’Ar-H),7.25-7.27(d,1H,J=8.8Hz,5’Ar-H),6.97-6.99(d,1H,J=9.2Hz,6’Ar-H),6.26(s,1H,3’Ar-H),4.91(s,2H,-CO-CH2-O-),2.77-2.78(d,3H,J=4.4Hz,-CONHCH3),2.35(s,3H,Ar-H)ppm。EI-MS(m/z):442(M+)。

实施例11 2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)-N-(3-(4-甲基哌嗪-1-磺酰基)苯基)乙酰胺(T11)的制备

(1)3-硝基苯磺酰氯的合成

称取4.5g(0.02mol)间硝基苯磺酸钠于100mL三口烧瓶中,加入20mL乙腈和0.6mL DMF,搅拌下滴加POCl3 7.3mL,升温至72~75℃,反应2h,将体系滴入冰浴下盛有40g碎冰的烧杯中(滴入过程中确保冰未完全融化),搅拌4min后,再补加20g碎冰,体系析出大量固体,抽滤,烘干得白色针状晶体4.1g,产率92.60%,mp:65~67℃,文献熔点:63~65℃。

(2)1-甲基-4-(3-硝基苯磺酰基)哌嗪的合成

称取N-甲基哌嗪1.2mL(10mmol)于100mL茄形瓶中,加入30mL DCM,三乙胺1.4mL(10mmol),再称取3-硝基苯磺酰氯1.2g(5mmol),加入10mL DCM溶解后滴入N-甲基哌嗪体系中,室温搅拌5h,体系加水萃取,收集有机相,无水Na2SO4干燥,旋蒸得淡黄色固体1.3g,产率:89.47%。

(3)1-甲基-4-(3-氨基苯磺酰基)哌嗪合成

合成方法同实施例4中3-氨基苯甲酸乙酯的合成,1-甲基-4-(3-硝基苯磺酰基)哌嗪1.3g(4.6mmol),钯碳加氢催化剂(Pd)0.4g,TLC监测反应完后,抽滤,滤液旋蒸除去乙醇,得1g黄色固体,产率:86.20%,直接用于下一步反应。

制备方法同实施例1,用1-甲基-4-(3-氨基苯磺酰基)哌嗪代替L-脯氨酰胺。产率:37.85%,mp:247~251℃。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.60(s,1H,-CH2CONHAr),8.10(s,1H,B环2’Ar-H),7.85-7.88(q,1H,B环6’Ar-H),7.60-7.64(t,1H,B环5’Ar-H),7.52-7.57(m,5H,Ar-H),7.42-7.44(d,1H,J=8.0Hz,B环4’Ar-H),7.26-7.28(d,1H,J=9.0Hz,5’Ar-H),6.98-7.00(d,1H,J=9.0Hz,6’Ar-H),6.27(s,1H,3’Ar-H),4.94(s,2H,-CO-CH2-O-),2.88(s,4H,-N(CH2)2,2.35(s,7H,Ar-CH3和CH3N(CH2)2),2.13(s,3H,CH3N(CH2)2)ppm。ESI-MS(m/z):548.1[M+H]+

实施例12 2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)-N-(3-(4-吗啉磺酰基)苯基)乙酰胺(T12)的制备

3-氨基苯磺酰基-4-吗啉的制备同实施例11,用吗啉代替N-甲基哌嗪。

制备方法同实施例1,用3-氨基苯磺酰基-4-吗啉代替L-脯氨酰胺。产率:43.50%,mp:大于280℃。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.62(s,1H,-CH2CONHAr),8.12(s,1H,B环2’Ar-H),7.88-7.90(d,1H,J=8.0Hz,B环6’Ar-H),7.61-7.65(t,1H,B环5’Ar-H),7.50-7.57(m,5H,Ar-H),7.43-7.45(d,1H,J=8.0Hz,B环4’Ar-H),7.25-7.28(d,1H,J=8.8Hz,5’Ar-H),6.98-7.00(d,1H,J=8.8Hz,6’Ar-H),6.27(s,1H,3’Ar-H),4.94(s,2H,-CO-CH2-O-),3.62-3.64(t,4H,-N(CH2)2),2.85-2.87(t,4H,-CH2OCH2-),2.35(s,3H,Ar-H)ppm。EI-MS(m/z):534(M+)。

实施例13 3-[2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酰氨基]-N-(2-二甲氨基乙基)苯磺酰胺(T13)的制备

3-氨基-N-(2-二甲氨基乙基)苯磺酰胺的制备同实施例11,用2-二甲氨基乙胺代替N-甲基哌嗪。

制备方法同实施例1,用3-氨基-N-(2-二甲氨基乙基)苯磺酰胺代替L-脯氨酰胺。产率:34.88%,mp:171~173℃。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.53(s,1H,-CH2CONHAr),8.17(s,1H,ArCONH-),7.78-7.80(d,1H,J=8.0Hz,B环6’Ar-H),7.50-7.57(m,8H,Ar-H),7.25-7.27(d,1H,J=9.2Hz,6’Ar-H),6.97-7.00(d,1H,J=9.2Hz,5’Ar-H),6.27(s,1H,3’Ar-H),4.94(s,2H,-CO-CH2-O-),2.80-2.84(t,2H,-NHCH2CH2N(CH3)2),2.35(s,3H,Ar-CH3),2.21-2.25(t,2H,-NHCH2CH2N(CH3)2),2.04(s,6H,-NHCH2CH2N(CH3)2)ppm。ESI-MS(m/z):536.1[M+H]+

实施例14 3-[2-(2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酰氨基]苯甲酸乙酯(T14)的制备

2-(2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸的合成方法同实施例1中2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸的合成,起始原料代替为间苯二酚和苯甲酰乙酸乙酯。

制备方法同实施例4,用2-(2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸代替2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸。产率:53.48%,mp:264~268℃。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.43(s,1H,-CH2CONHAr),8.30(s,1H,B环2’Ar-H),7.90-7.92(d,1H,J=7.6Hz,B环6’Ar-H),7.68-7.70(d,1H,J=7.6Hz,B环4’Ar-H),7.54-7.57(m,5H,Ar-H),7.47-7.51(t,1H,B环5’Ar-H),7.40-7.42(d,1H,J=8.8Hz,5’Ar-H),7.16(s,1H,8’Ar-H),7.04-7.06(dd,1H,J=2.0Hz,J=8.8Hz,6’Ar-H),6.28(s,1H,3’Ar-H),4.90(s,2H,-CO-CH2-O-),4.30-4.34(q,2H,-OCH2CH3),1.31-1.34(t,3H,-OCH2CH3)ppm。EI-MS(m/z):443(M+)。

实施例15 2-(2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)-N-(3-(4-甲基哌嗪-1-磺酰基)苯基)乙酰胺(T15)的制备

2-(2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸的合成方法同实施例1中2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸的合成,起始原料代替为间苯二酚和苯甲酰乙酸乙酯。

制备方法同实施例11,用2-(2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸代替2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸。产率:35.71%,mp:144~146℃。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.57(s,1H,-CH2CONHAr),8.13(s,1H,B环2’Ar-H),7.92-7.94(t,1H,B环6’Ar-H),7.61-7.65(t,1H,B环5’Ar-H),7.53-7.59(m,5H,Ar-H),7.44-7.45(d,1H,J=7.6Hz,B环4’Ar-H),7.40-7.42(d,1H,J=8.8Hz,5’Ar-H),7.17-7.18(s,1H,8’Ar-H),7.04-7.07(dd,1H,J=2.4Hz,8.8Hz,6’Ar-H),6.28(s,1H,3’Ar-H),4.92(s,2H,-CO-CH2-O-),2.89(s,4H,-N(CH2)2),2.360(s,4H,CH3N(CH2)2),2.14(s,3H,CH3N(CH2)2)ppm。ESI-MS(m/z):534.1[M+H]+

实施例16 3-[2-(2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酰氨基]-N-(2-二甲氨基乙基)苯甲酰胺(T16)的制备

2-(2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸的合成方法同实施例1中2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸的合成,起始原料代替为间苯二酚和苯甲酰乙酸乙酯。

制备方法同实施例9,用2-(2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸代替2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸。产率:24.31%,mp:264~268℃。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.34(s,1H,-CH2CONHAr),8.38-8.40(t,1H,ArCONH-),8.08(s,1H,B环2’Ar-H),7.80-7.82(d,1H,J=8.0Hz,B环6’Ar-H),7.53-7.59(m,6H,Ar-H),7.39-7.44(m,2H,8’和B环5’Ar-H),7.15-7.16(s,1H,8’Ar-H),7.04-7.06(dd,1H,J=2.4Hz,8.8Hz,6’Ar-H),6.28(s,1H,3’Ar-H),4.90(s,2H,-CO-CH2-O-),3.34-3.37(t,2H,-NHCH2CH2N(CH3)2),2.44-2.48(t,2H,-NHCH2CH2N(CH3)2),2.23(s,6H,-NHCH2CH2N(CH3)2)ppm。ESI-MS(m/z):486.2[M+H]+

实施例17 4-[2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酰氨基]苯甲酸乙酯(T17)的制备

制备方法同实施例4,用4-氨基苯甲酸乙酯代替3-氨基苯甲酸乙酯。产率:45.46%,mp:252~254℃。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.54(s,1H,-CH2CONHAr),7.92-7.94(d,2H,J=8.8Hz,B环2’,6’Ar-H),7.74-7.76(d,2H,J=8.4Hz,B环3’,5’Ar-H),7.50-7.57(m,5H,Ar-H),7.25-7.27(d,1H,J=9.2Hz,5’Ar-H),6.96-6.99(d,1H,J=9.2Hz,6’Ar-H),6.26(s,1H,3’Ar-H),4.94(s,2H,-CO-CH2-O-),4.26-4.31(q,2H,-OCH2CH3),2.35(s,3H,Ar-CH3),1.29-1.33(t,3H,-OCH2CH3)ppm。EI-MS(m/z):457(M+)。

实施例18 4-[2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酰氨基]-N-(2-二甲氨基乙基)苯甲酰胺(T18)的合成

制备方法同实施例9,用4-氨基-N-(2-二甲氨基乙基)苯甲酰胺代替3-氨基-N-(2-二甲氨基乙基)苯甲酰胺。产率:38.82%,mp:181~183℃。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.40(s,1H,-CH2CONHAr),8.27-8.30(q,1H,ArCONH-),7.80-7.83(d,2H,J=8.8Hz,B环2’,6’Ar-H),7.67-7.69(d,2H,J=8.8Hz,B环3’,5’Ar-H),7.50-7.57(m,5H,Ar-H),7.25-7.28(d,2H,J=8.8Hz,5’Ar-H),6.97-6.99(d,2H,J=9.2Hz,6’Ar-H),6.27(s,1H,3’Ar-H),4.93(s,2H,-CO-CH2-O-),3.33-3.35(d,2H,-NHCH2CH2N(CH3)2),2.37-2.40(t,2H,-NHCH2CH2N(CH3)2),2.35(s,3H,,Ar-CH3),2.17(s,6H,-NHCH2CH2N(CH3)2)ppm。ESI-MS(m/z):500.2[M+H]+

实施例19 3-{2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酰氨基}苯甲酸乙酯(T19)的制备

(1)3-吡啶甲酸乙酯的合成

称取3-吡啶甲酸2g(16mmol)于100mL茄形瓶中,加入无水乙醇40mL溶解,缓慢滴加浓H2SO4 2.6mL(48mmol),体系由浑浊变为澄清,加热回流,16h后停止反应,旋蒸除去乙醇,用饱和Na2CO3调pH至8-9,用EA萃取4次(4×40mL),合并有机相,无水Na2SO4干燥,旋蒸除去EA,得到2.5g无色油状液体,直接用于下一步反应。

(2)3-吡啶甲酰乙酸乙酯的合成

称取3-吡啶甲酸乙酯2.5g(16mmol)于250mL茄形瓶中,依次加入60mL EA,NaOEt 12g(176mmol),加热回流20h后停止反应,旋蒸除去EA,用2mol/L HCl调pH至8-9,用EA萃取3次(3×40mL),合并有机相,无水Na2SO4干燥,柱色谱分离纯化(石油醚/乙酸乙酯=3/1),得3g黄色油状液体,直接用于下一步反应。

(3)7-羟基-8-甲基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-2-酮的合成

称取3-吡啶甲酰乙酸乙酯1g(5mmol),2,6-二羟基甲苯0.64g(5mmol)于100mL茄形瓶中,再加入5mL无水乙醇,冰浴下滴加浓H2SO4 2.5mL,N2气保护下室温搅拌反应4h,用饱和Na2CO3调pH至近中性,析出大量黄色固体,抽滤,烘干,柱色谱分离纯化(氯仿/甲醇=40/1),得白色固体0.8g,产率61.03%,mp:大于280℃。

(4)2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸乙酯的合成

实验方法同化合物2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸乙酯的合成,7-羟基-8-甲基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-2-酮0.5g(2mmol),氯乙酸乙酯0.65mL(6mmol),无水K2CO31g(6mmol),加热回流反应5h,旋蒸除去丙酮,再加入10ml H2O,析出白色固体,抽滤,烘干得0.6g,产率:89.55%。

(5)2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸的合成

实验方法同化合物2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸的合成,2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸乙酯0.6g(1.8mmol),用THF 20mL溶解,再加入LiOH·H2O 0.23g(5.4mmol),5mL H2O,室温搅拌4h,旋蒸除去THF,体系加入10mL冰水,用2mol/L HCl酸化至pH为2-3,析出大量白色固体,抽滤烘干得0.5g,产率:89.30%。

制备方法同实施例4,用2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸代替2-(8-甲基-2-羰基-4-苯基-2H-苯并吡喃-7-氧)乙酸。产率:45.25%,mp:215~217℃。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.45(s,1H,-CH2CONHAr),8.74-8.76(dd,1H,J=1.6Hz和5.2Hz,A环4’Ar-H),8.71-8.72(d,1H,J=2.0Hz,A环2’Ar-H)8.27(s,1H,B环2’Ar-H),7.96-7.99(m,1H,A环6’Ar-H),7.84-7.86(t,1H,B环6’Ar-H),7.66-7.68(d,1H,J=8.0Hz,B环4’Ar-H),7.58-7.61(q,1H,A环5’Ar-H),7.46-7.50(t,1H,B环5’Ar-H),7.21-7.23(d,1H,J=8.8Hz,5’Ar-H),6.97-6.99(d,1H,J=9.2Hz,6’Ar-H),6.39(s,1H,3’Ar-H),4.93(s,2H,-CO-CH2-O-),4.28-4.34(q,2H,-OCH2CH3),2.35(s,3H,Ar-CH3),1.30-1.33(t,3H,-OCH2CH3)ppm。EI-MS(m/z):458(M+)。

实施例20 N-(2-甲基-5-硝基苯基)-2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酰胺(T20)的制备

制备方法同实施例19,用2-甲基-5-硝基苯胺代替3-氨基苯甲酸乙酯。产率:18.60%,mp:292~295℃。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.79(s,1H,-CH2CONHAr),8.76-8.77(dd,1H,J=1.6Hz和5.2Hz,A环4’Ar-H),8.73-8.73(s,1H,A环2’Ar-H),8.51-8.52(d,1H,J=2.4Hz,B环6’Ar-H),7.97-8.00(m,2H,B环4’和A环6’Ar-H),7.60-7.63(q,1H,A环5’Ar-H),7.53-7.55(d,1H,J=8.4Hz,B环3’Ar-H),7.24-7.26(d,1H,J=8.8Hz,5’Ar-H),7.03-7.05(d,1H,J=9.0Hz,6’Ar-H),6.41(s,1H,3’Ar-H),5.01(s,2H,-CO-CH2-O-),2.37-2.38(d,6H,J=4.5Hz,Ar-CH3)ppm。EI-MS(m/z):445(M+)。

实施例21 2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]-N-(3-(4-甲基哌嗪-1-磺酰基)苯基)乙酰胺(T21)的制备

制备方法同实施例19,用1-甲基-4-(3-氨基苯磺酰基)哌嗪代替3-氨基苯甲酸乙酯。产率:37.74%,mp:245~248℃。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.61(s,1H,-CH2CONHAr),8.74-8.76(dd,1H,J=1.6Hz和5.2Hz,A环4’Ar-H),8.72-8.72(s,1H,A环2’Ar-H)8.10(s,1H,B环2’Ar-H),7.96-7.99(m,1H,A环6’Ar-H),7.85-7.87(t,1H,B环6’Ar-H),7.58-7.63(m,2H,A环5’和B环5’Ar-H),7.42-7.44(d,1H,J=8.0Hz,B环4’Ar-H),7.21-7.23(d,1H,J=8.0Hz,5’Ar-H),6.98-7.00(d,1H,J=9.0Hz,4’Ar-H),6.40(s,1H,3’Ar-H),4.95(s,2H,-CO-CH2-O-),2.88(s,4H,-N(CH2)2,2.35(s,7H,Ar-CH3和CH3N(CH2)2),2.13(s,3H,CH3N(CH2)2)ppm。ESI-MS(m/z):549.1[M+H]+

实施例22 3-{2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酰氨基}-N-(2-二甲氨基乙基)苯甲酰胺(T22)的制备

制备方法同实施例19,用3-氨基-N-(2-二甲氨基乙基)苯甲酰胺代替3-氨基苯甲酸乙酯。产率:14.50%,mp:213~215℃。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.39(s,1H,-CH2CONHAr),8.75-8.77(dd,1H,J=1.6Hz和5.2Hz,A环4’Ar-H),8.72-8.7(s,1H,A环2’Ar-H),8.64-8.67(q,1H,ArCONH-),8.17(s,1H,B环2’Ar-H),7.97-7.99(m,1H,A环6’Ar-H),7.71-7.73(q,1H,B环6’Ar-H),7.58-7.62(q,1H,A环5’8Ar-H),7.55-7.57(d,1H,B环4’Ar-H),7.43-7.47(t,1H,B环5’Ar-H),7.21-7.24(d,1H,J=9.0Hz,5’Ar-H),6.98-7.00(d,1H,J=9.0Hz,6’Ar-H),6.41(s,1H,3’Ar-H),4.94(s,2H,-CO-CH2-O-),3.57-3.58(d,2H,-NHCH2CH2N(CH3)2),3.20-3.22(m,2H,-NHCH2CH2N(CH3)2),2.81(s,6H,-NHCH2CH2N(CH3)2),2.36(s,3H,,Ar-CH3)ppm。ESI-MS(m/z):501.2[M+H]+

实施例23 3-{2-[8-甲基-2-羰基-4-(4-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酰氨基}苯甲酸乙酯(T23)的制备

2-[8-甲基-2-羰基-4-(4-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸的合成方法同实施例19中2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸,用4-吡啶甲酸代替3-吡啶甲酸。

制备方法同实施例19,用2-[8-甲基-2-羰基-4-(4-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸代替2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸。产率:34.10%,mp:263~265℃。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.46(s,1H,-CH2CONHAr),8.75-8.77(t,2H,A环3’,5’Ar-H),8.27(s,1H,B环2’Ar-H),7.85-7.87(d,1H,J=8.0Hz,B环6’Ar-H),7.67-7.69(d,1H,J=7.6Hz,B环4’Ar-H),7.54-7.55(t,2H,A环2’,6’Ar-H),7.46-7.50(t,1H,B环5’Ar-H),7.19-7.21(d,1H,J=8.9Hz,5’Ar-H),6.96-6.98(d,1H,J=9.0Hz,6’Ar-H),6.38(s,1H,3’Ar-H),4.94(s,2H,-COCH2O-),4.29-4.34(q,2H,-OCH2CH3),2.35(s,3H,Ar-CH3),1.30-1.33(t,3H,-OCH2CH3)ppm。EI-MS(m/z):458(M+)。

实施例24 N-(2-甲基-5-硝基苯基)-2-[8-甲基-2-羰基-4-(4-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酰胺(T24)的制备

2-[8-甲基-2-羰基-4-(4-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸的合成方法同实施例19中2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸,用4-吡啶甲酸代替3-吡啶甲酸。

制备方法同实施例20,用2-[8-甲基-2-羰基-4-(4-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸代替2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸。产率:23.26%,mp:大于290℃。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.79(s,1H,-CH2CONHAr),8.77-8.78(d,J=6.0Hz,2H,A环3’,5’Ar-H),8.51(s,1H,B环6’Ar-H),7.97-8.00(dd,1H,J=2.4Hz和8.4Hz,B环4’Ar-H),7.53-7.56(m,3H,A环2’,6’和B环3’Ar-H),7.22-7.24(d,1H,J=9.2Hz,5’Ar-H),7.02-7.04(d,1H,J=9.2Hz,6’Ar-H),6.39(s,1H,3’Ar-H),5.01(s,2H,-CO-CH2-O-),2.37(s,6H,Ar-CH3)ppm。EI-MS(m/z):445(M+)。

实施例25 2-[8-甲基-2-羰基-4-(4-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]-N-(3-(4-甲基哌嗪-1-磺酰基)苯基)乙酰胺(T25)的制备

2-[8-甲基-2-羰基-4-(4-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸的合成方法同实施例19中2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸,用4-吡啶甲酸代替3-吡啶甲酸。

制备方法同实施例21,用2-[8-甲基-2-羰基-4-(4-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸代替2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸。产率:18.87%,mp:236~238℃。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.61(s,1H,-CH2CONHAr),8.76-8.77(d,2H,J=5.6Hz,A环3’,5’Ar-H),8.10(s,1H,B环2’Ar-H),7.85-7.87(d,1H,J=8.0Hz,B环6’Ar-H),7.60-7.64(t,1H,B环5’Ar-H),7.54-7.55(d,2H,J=6.0Hz,A环2’,6’Ar-H),7.42-7.44(d,1H,J=7.6Hz,B环4’Ar-H),7.19-7.21(d,1H,J=9.2Hz,5’Ar-H),6.97-6.99(d,1H,J=8.8Hz,6’Ar-H),6.38(s,1H,3’Ar-H),4.95(s,2H,-CO-CH2-O-),2.88(s,4H,-N(CH2)2,2.35(s,7H,Ar-CH3和CH3N(CH2)2),2.13(s,3H,CH3N(CH2)2)ppm。ESI-MS(m/z):549.1[M+H]+

实施例26 3-{2-[8-甲基-2-羰基-4-(4-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酰氨基}-N-(2-二甲氨基乙基)苯甲酰胺(T26)的合成

2-[8-甲基-2-羰基-4-(4-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸的合成方法同实施例19中2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸,用4-吡啶甲酸代替3-吡啶甲酸。

制备方法同实施例22,用2-[8-甲基-2-羰基-4-(4-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸代替2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸。产率:10.36%,mp:197~203℃。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.34(s,1H,-CH2CONHAr),8.76-8.77(d,2H,J=6.0Hz,A环3’,5’Ar-H),8.34-8.37(q,1H,ArCONH-),8.04(s,1H,B环2’Ar-H),7.75-7.77(d,1H,J=8.0Hz,B环6’Ar-H),7.52-7.55(m,3H,A环2’,6’和B环4’Ar-H),7.39-7.42(t,1H,B环5’Ar-H),7.19-7.22(d,1H,J=8.8Hz,5’Ar-H),6.97-6.99(d,1H,J=8.8Hz,6’Ar-H),6.37(s,1H,3’Ar-H),4.92(s,2H,-CO-CH2-O-),3.35(s,2H,-NHCH2CH2N(CH3)2),2.39-2.43(t,2H,-NHCH2CH2N(CH3)2),2.36(s,3H,,Ar-CH3),2.19(s,6H,-NHCH2CH2N(CH3)2)ppm。ESI-MS(m/z):501.2[M+H]+

实施例27 3-{2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-三氟甲氧基苯基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酰氨基}苯甲酸乙酯(T27)的制备

2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-三氟甲氧基苯基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸的合成方法同实施例19中2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸,用3-三氟甲氧基苯甲酸代替3-吡啶甲酸。

制备方法同实施例19,用2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-三氟甲氧基苯基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸代替2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸。产率:48.78%,mp:188~190℃。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.44(s,1H,-CH2CONHAr),8.27(s,1H,B环2’Ar-H),7.85-7.87(d,1H,J=8.0Hz,B环6’Ar-H),7.66-7.72(q,2H,A环5’和B环4’Ar-H),7.55-7.58(q,3H,A环2’,4’,6’Ar-H),7.46-7.50(t,1H,B环5’Ar-H),7.19-7.21(d,1H,J=8.8Hz,5’Ar-H),6.98-7.00(d,1H,J=9.2Hz,6’Ar-H),6.35(s,1H,3’Ar-H),4.93(s,2H,-CO-CH2-O-),4.29-4.34(q,2H,-OCH2CH3),2.35(s,3H,Ar-H),1.30-1.33(t,3H,-OCH2CH3)ppm。EI-MS(m/z):541(M+)。

实施例28 3-{2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-三氟甲氧基苯基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酰氨基}-N-(2-二甲氨基乙基)苯甲酰胺(T28)的制备

2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-三氟甲氧基苯基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸的合成方法同实施例19中2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸,用3-三氟甲氧基苯甲酸代替3-吡啶甲酸。

制备方法同实施例22,用2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-三氟甲氧基苯基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸代替2-[8-甲基-2-羰基-4-(3-吡啶基)-2H-苯并吡喃-7-氧]乙酸。产率:16.89%,mp:228~230℃。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.33(s,1H,-CH2CONHAr),8.34-8.37(t,1H,ArCONH-),8.04(s,1H,B环2’Ar-H),7.76-7.78(d,1H,J=8.0Hz,B环6’Ar-H),7.68-7.72(t,1H,A环5’Ar-H),7.52-7.58(m,4H,Ar-H),7.38-7.42(t,1H,B环5’Ar-H),7.19-7.21(d,1H,J=8.8Hz,5’Ar-H),6.98-7.00(d,1H,J=8.8Hz,6’Ar-H),6.35(s,1H,3’Ar-H),4.92(s,2H,-COCH2O-),3.31-3.35(t,2H,-NHCH2CH2N(CH3)2),2.37-2.40(t,2H,-NHCH2CH2N(CH3)2),2.35(s,3H,Ar-CH3),2.17(s,6H,-NHCH2CH2N(CH3)2)ppm。ESI-MS(m/z):584.2[M+H]+

药效学实验部分

目标化合物体外抑制肿瘤细胞增殖实验:采用MTT法评价化合物对人结肠癌(HCT116)、乳腺癌(MCF-7)、肺癌(A549)的增殖抑制活性。

具体操作步骤:

(1)复苏:从液氮罐中取出一支冻存的HCT116(或MCF-7和A549)细胞,迅速放入37℃温水中,将融化的冻存液加入15mL离心管中,加入8mL培养基,离心,弃上清,用5mL培养基将离心管中的细胞转移至培养瓶中,培养瓶置于含5%CO2的37℃培养箱中培养。

(2)传代:复苏后约1~2天细胞铺满培养瓶底,倾倒培养基,用PBS洗培养瓶内细胞2次,洗完后将PBS倒干净,加入1mL 0.25%胰蛋白酶,显微镜下观察,待细胞松动变圆后,加入带血清的培养基(2mL)终止,轻轻吹打瓶底,使细胞脱离,待细胞完全脱离瓶底时,转移至离心管中离心,倾倒上清液,用培养基将细胞吹打均匀后,转移至新的培养瓶中培养。

(3)MTT实验:当细胞处于对数生长期时,接种96孔培养板,每孔200μL细胞悬液,接种密度为结肠癌细胞HCT116 4500个/孔、乳腺癌细胞MCF-7为2000个/孔、肺腺癌细胞2000个/孔,置37℃、5%CO2的培养箱中培养24小时后给药。将96孔板分为空白组、阴性组、实验组和阳性对照组,首先给药浓度设为1×10-5mol/L以进行化合物的初步筛选,每个药设三个平行孔。给药后置于37℃,5%的CO2培养箱中孵育72h,然后每孔均加入5mg/mL的MTT溶液20μL,继续孵育4小时后,取出96孔板,小心吸取上清液,向各孔加入150μL DMSO,置于酶标仪中震荡10分钟,于490nm测定吸光度值(OD值),计算抑制率。

抑制率=[(阴性组OD平均值-给药组OD平均值)/阴性组OD平均值]×100%

(4)细胞水平的IC50评价:对于在给药浓度为1×10-5mol/L时的抑制率高于50%的化合物,设3×10-5、1×10-5、3×10-6、1×10-6、3×10-7、1×10-7mol/L mol/L 6个浓度梯度给药,按初筛相似方法分别测得OD值,半数抑制浓度IC50采用Graphpad Prism软件计算,各实验组均独立重复三次。

目标化合物对人结肠癌(HCT116)、乳腺癌(MCF-7)、肺癌(A549)的增殖抑制作用见表1和表2,其中化合物T1-T28分别为实施例1-28制得的产物。

表1目标化合物体外抗肿瘤活性

*:给药浓度为1×10-5mol/L。

表2筛选所得化合物体外细胞水平的抗肿瘤活性

由表1和表2可以看出,本发明制得的7-取代-4-芳基香豆素类化合物具有较强的体外抗肿瘤活性,其中化合物T9、T13、T17、T18、T28对HCT116的半数抑制浓度均小于10μmol/L,化合物T9、T13、T17、T18、T19、T28对A549的半数抑制浓度均小于10μmol/L,化合物T9、T13、T17、T18、T28对MCF-7的增殖抑制活性强于阳性药GDC-0941。尤其是化合物T28对三株人肿瘤细胞都具有很强的增殖抑制活性,对A549的作用与阳性药GDC-0941相当,对MCF-7的作用强于阳性药GDC-0941。

以上所述,仅是本发明的较佳实施例,并非对本发明作任何限制,凡是根据本发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效结构变换,均仍属于本发明技术方案的保护范围内。

当前第1页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1