本发明涉及b-raf激酶抑制剂，即5-(((1r，1as，6br)-1-(6-(三氟甲基)-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1a，6b-二氢-1h-环丙并[b]苯并呋喃-5-基)氧基)-3，4-二氢-1，8-二氮杂萘-2(1h)-酮(此后称为化合物1)的马来酸盐，特别是化合物1的倍半马来酸盐，和所述倍半马来酸盐的结晶形式(多晶型物)，以及其制备方法和用途。
背景技术：
：b-raf为对于细胞增殖和存活而言至关重要的raf-mek-erkmapk途径的一部分的激酶。b-raf突变已经发现于多于7％的人类癌症中，包括黑素瘤(43％)(参见h.davies等人，nature，417(2002)，949-54；d.r.english等人，cancerepidemiolbiomarkersprev，17(2008)，1774-80；g.v.long等人，lancetoncol.，13(2012)，1087-95)、甲状腺癌(27％)(参见y.cohen，jnatlcancerinst，95(2003)，625-7；e.t.kimura等人，cancerres，63(2003)，1454-7)、结肠直肠癌(14％)(参见h.davies等人，nature，417(2002)，949-54；d.r.english等人，cancerepidemiolbiomarkersprev，17(2008)，1774-80；s.ogino等人，gut，58(2009)，90-6；c.p.vaughn，geneschromosomescancer，50(2011)，307-12)、卵巢癌(15％)(参见h.davies等人，nature，417(2002)，949-54；s.e.russell，jpathol，203(2004)，617-9)和肺癌(2％)(参见m.s.brose等人，cancerres，62(2002)，6997-7000)。在黑素瘤中发现的多于90％的b-raf突变为在b-raf蛋白链的第600个氨基酸(v600e)上用谷氨酸取代缬氨酸，导致组成性激活。在黑素瘤患者中使用b-raf抑制剂诸如威罗菲尼(vemurafenib)和达拉菲尼(dabrafenib)的临床经验已经证实了有效性，其已经证实了靶标肿瘤依赖于b-raf和mapk信号传导的概念。在其肿瘤中具有b-rafv600e突变的黑素瘤患者中的选择性抑制得到了令人惊讶的客观反应率以及无进展生存期的延长。然而，第一代b-raf抑制剂包括威罗菲尼和达拉菲尼具有众多限制，例如：1)在突变或活化的ras背景下，由于通过诱导b-raf/c-raf异二聚体而导致mapk信号传导的反常增加，从而引起角化棘皮瘤或皮肤鳞状细胞癌的进展；和2)在具有b-rafv600e突变的黑素瘤之外(例如结肠直肠癌)的有限临床活性。因此，可在这些领域改善的第二代抑制剂是高度期望的。5-(((1r，1as，6br)-1-(6-(三氟甲基)-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1a，6b-二氢-1h-环丙并[b]苯并呋喃-5-基)氧基)-3，4-二氢-1，8-二氮杂萘-2(1h)-酮(游离碱，化合物1)已经披露为第二代b-raf抑制剂，其已经证实了针对丝氨酸/苏氨酸激酶的raf家族的有效抑制活性。参见wo2013/097224a1。化合物1为用于治疗具有在raf-mek-erk促分裂原活化蛋白激酶(mapk)途径中的畸变(包括b-raf突变和k-ras/n-ras突变)的癌症的分子靶标治疗剂，其作为单一疗法或与其他癌症疗法的组合。然而，化合物1的游离碱的相对较弱的口服吸收使其不适于药物产品开发。还已经发现基于图1的xrpd结果，化合物1的游离碱最初作为无定形固体获得，以及化合物1的游离碱在水中基本上不溶(＜loq，在0.001mg/ml)，且在0至80％rh为略微吸湿性的(2.2％水分增加)。此外，化合物1的合成不是有效的。各种因素，例如对于制备光学纯的异构体而言对手性hplc柱的需求以及无定形形式的化合物1的游离碱阻碍杂质由操作中排出的趋势，使得化合物1的大规模制备和纯化成为了一个挑战。实际上，很难确信地预测具体化合物的哪种盐是稳定的且适于药物加工。甚至更难预测的是具体化合物是否将会形成各种结晶固态形式以及这些结晶固态形式具有何种物理性质。因此，急需某些形式的化合物1，其具有显著更好的生物利用度且在该药物配制和储存过程中具有化学和物理稳定性，以及适于大规模制备具有良好质量和可再现性的化合物1的方法也是急需的。技术实现要素：本申请公开本发明以通过提供化合物1的稳定的盐及其结晶形式解决前述挑战和需求。在第一方面，本发明提供了5-(((1r，1as，6br)-1-(6-(三氟甲基)-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1a，6b-二氢-1h-环丙并[b]苯并呋喃-5-基)氧基)-3，4-二氢-1，8-二氮杂萘-2(1h)-酮(“化合物1”)的盐，其选自化合物1的盐酸盐、甲磺酸盐、2-羟基乙磺酸盐、l-酒石酸盐、马来酸盐和草酸盐。在一个实施方案中，所述盐为可药用的。在另一实施方案中，所述盐为固态。在一个优选的实施方案中，所述盐为结晶形式。本申请的盐为固体形式且显示出与化合物1的游离碱不同的结晶形式，这表明它们是潜在的盐候选物。本申请的结晶形式的盐具有适于药物制剂的优异的物理性质且可以高质量和良好的可再现性进行商业大规模制备。在化合物1的盐酸盐、甲磺酸盐、2-羟基乙磺酸盐、l-酒石酸盐、马来酸盐和草酸盐的结晶形式中，本发明的发明人预料不到地发现化合物1可形成马来酸盐，特别是结晶形式的倍半马来酸盐。具体地，令人惊讶地发现化合物1的马来酸盐(此后称为“化合物1马来酸盐(maleatesalt)”或“化合物1马来酸盐(maleate)”)可以多种结晶形式存在(多晶型物)，其在本申请中称为结晶形式a*、a**、a、b、c、d、e、f、g、h、i、j、k、l和m。化合物1马来酸盐及其结晶形式，特别是结晶形式a*和a，相比于其他盐而言具有优异的性质，诸如改善的溶解性和稳定性，特别是长期化学/物理稳定性，这使得它们成为制剂和临床应用的适当候选物。更具体地，相比于游离碱而言，化合物1马来酸盐的形式a*、a和其他形式的改善的溶解性和/或长期化学/物理稳定性给所述形式带来了体内和体外快速溶出，且由此带来了提高的生物利用度。在第二方面，本申请提供了式(i)的化合物，其为5-(((1r，1as，6br)-1-(6-(三氟甲基)-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1a，6b-二氢-1h-环丙并[b]苯并呋喃-5-基)氧基)-3，4-二氢-1，8-二氮杂萘-2(1h)-酮的马来酸盐：其中n为约0.3至约1.5的数字。在一个实施方案中，在式(i)的化合物中，n为选自以下的数字：0.5±0.05、1.0±0.1和1.5±0.2。在另一实施方案中，在式(i)的化合物中，n为0.5、1.0或1.5。在另一优选的实施方案中，式(i)的化合物为结晶形式。在另一优选的实施方案中，n为1.5，且化合物为式(ii)的5-(((1r，1as，6br)-1-(6-(三氟甲基)-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1a，6b-二氢-1h-环丙并[b]苯并呋喃-5-基)氧基)-3，4-二氢-1，8-二氮杂萘-2(1h)-酮的结晶倍半马来酸盐：在一个实施方案中，式(ii)的化合物为结晶形式a*，其特征在于其粉末x射线衍射图包括具有独立选自以下的2θ角值的7个或更多个衍射峰：6.3±0.2°、8.9±0.2°、9.4±0.2°、11.2±0.2°、12.6±0.2°、13.4±0.2°、17.9±0.2°、18.6±0.2°、18.8±0.2°、19.3±0.2°、20.1±0.2°、20.7±0.2°、21.2±0.2°、21.8±0.2°、22.4±0.2°、22.6±0.2°、23.3±0.2°、23.8±0.2°、24.7±0.2°、25.6±0.2°、26.1±0.2°、27.4±0.2°、28.3±0.2°、28.6±0.2°、29.0±0.2°、29.4±0.2°和30.4±0.2°。在另一实施方案中，式(ii)的化合物为结晶形式a**的单晶。在另一实施方案中，式(ii)的化合物为结晶形式a，其特征在于其粉末x射线衍射图包括具有独立选自以下的2θ角值的3个或更多个衍射峰：8.3±0.2°、11.2±0.2°、17.9±0.2°、18.4±0.2°、18.6±0.2°、19.3±0.2°、20.8±0.2°和22.5±0.2°。在另一实施方案中，式(i)的化合物为结晶形式b，其特征在于其粉末x射线衍射图包括具有独立选自以下的2θ角值的3个或更多个衍射峰：11.1±0.2°、15.8±0.2°、17.7±0.2°、18.4±0.2°、19.6±0.2°、22.3±0.2°、23.1±0.2°和28.8±0.2°。在另一实施方案中，式(i)的化合物为结晶形式c，其特征在于其粉末x射线衍射图包括具有独立选自以下的2θ角值的3个或更多个衍射峰：3.1±0.2°、8.8±0.2°、11.2±0.2°、17.8±0.2°、18.5±0.2°、19.3±0.2°、20.1±0.2°、20.7±0.2°、21.9±0.2°和22.4±0.2°。在另一实施方案中，式(i)的化合物为结晶形式d，其特征在于其粉末x射线衍射图包括具有独立选自以下的2θ角值的3个或更多个衍射峰：8.9±0.2°、14.9±0.2°、16.7±0.2°、17.8±0.2°、19.9±0.2°、20.4±0.2°、20.9±0.2°和26.9±0.2°。在另一实施方案中，式(i)的化合物为结晶形式f，其特征在于其粉末x射线衍射图包括具有独立选自以下的2θ角值的3个或更多个衍射峰：12.9±0.2°、17.0±0.2°、18.5±0.2°、19.4±0.2°、20.5±0.2°、22.5±0.2°和24.1±0.2°。在另一实施方案中，式(i)的化合物为结晶形式g，其特征在于其粉末x射线衍射图包括具有独立选自以下的2θ角值的7个或更多个衍射峰：3.4±0.2°、5.6±0.2°、7.0±0.2°、10.3±0.2°、10.9±0.2°、11.7±0.2°、12.4±0.2°、13.1±0.2°、14.0±0.2°、14.9±0.2°、16.4±0.2°、17.4±0.2°、18.6±0.2°、19.3±0.2°、20.1±0.2°、21.0±0.2°、21.9±0.2°、23.6±0.2°、24.2±0.2°、25.6±0.2°和26.4±0.2°。在另一实施方案中，式(i)的化合物为结晶形式h，其特征在于其粉末x射线衍射图包括具有独立选自以下的2θ角值的7个或更多个衍射峰：6.3±0.2°、9.0±0.2°、10.1±0.2°、11.2±0.2°、12.7±0.2°、14.5±0.2°、16.1±0.2°、16.6±0.2°、17.9±0.2°、18.1±0.2°、18.5±0.2°、19.0±0.2°、20.1±0.2°、21.9±0.2°、22.4±0.2°、23.9±0.2°、25.1±0.2°、26.2±0.2°和28.7±0.2°。在另一实施方案中，式(i)的化合物为结晶形式i，其特征在于其粉末x射线衍射图包括具有独立选自以下的2θ角值的5个或更多个衍射峰：3.1±0.2°、5.5±0.2°、6.8±0.2°、10.8±0.2°、11.5±0.2°、13.7±0.2°、16.1±0.2°、16.3±0.2°、17.8±0.2°、19.8±0.2°、21.5±0.2°、23.8±0.2°、24.4±0.2°和28.3±0.2°。在另一实施方案中，式(i)的化合物为结晶形式j，其特征在于其粉末x射线衍射图包括具有独立选自以下的2θ角值的7个或更多个衍射峰：5.5±0.2°、8.2±0.2°、10.9±0.2°、11.3±0.2°、13.6±0.2°、14.8±0.2°、15.8±0.2°、17.4±0.2°、18.0±0.2°、19.1±0.2°、19.8±0.2°、20.0±0.2°、20.4±0.2°、21.1±0.2°、21.9±0.2°、22.6±0.2°、23.4±0.2°、24.1±0.2°、25.0±0.2°、26.1±0.2°、26.9±0.2°、27.3±0.2°、28.4±0.2°、29.1±0.2°、33.1±0.2°和35.9±0.2°。在另一实施方案中，式(i)的化合物为结晶形式k，其特征在于其粉末x射线衍射图包括具有独立选自以下的2θ角值的7个或更多个衍射峰：3.1±0.2°、8.9±0.2°、9.3±0.2°、11.2±0.2°、16.7±0.2°、17.9±0.2°、18.6±0.2°、18.8±0.2°、19.4±0.2°、20.2°±0.2°、21.9±0.2°、22.4±0.2°、23.4±0.2°、23.9±0.2°、24.6±0.2°、26.2±0.2°、27.4±0.2°、28.5±0.2°、29.4±0.2°和30.4±0.2°。在另一实施方案中，式(i)的化合物为结晶形式l，其特征在于其粉末x射线衍射图包括具有以下2θ角值的衍射峰：9.7±0.2°和14.1±0.2°。在另一实施方案中，式(i)的化合物为结晶形式m，其特征在于其粉末x射线衍射图包括具有独立选自以下的2θ角值的7个或更多个衍射峰：5.0±0.2°、9.3±0.2°、11.3±0.2°、14.9±0.2°、15.9±0.2°、17.4±0.2°、18.0±0.2°、18.7±0.2°、19.4±0.2°、20.2°±0.2°、22.1±0.2°、23.4±0.2°、24.3±0.2°、25.4±0.2°、26.5±0.2°、27.5±0.2°、28.5±0.2°和29.3±0.2°。在某些实施方案中，在式(i)的化合物中，n为1，即化合物1马来酸盐(1∶1)。在其他实施方案中，本申请提供了化合物1马来酸盐(1∶1)结晶形式n，其特征在于其粉末x射线衍射图包括具有独立选自以下的2θ角值的7个或更多个衍射峰：3.30±0.2°、6.61±0.2°、9.88±0.2°、11.73±0.2°、13.14±0.2°、15.23±0.2°、16.56±0.2°、17.94±0.2°、18.72±0.2°、19.34±0.2°、19.93±0.2°、20.76±0.2°、22.04±0.2°、22.95±0.2°、23.86±0.2°、25.19±0.2°、26.61±0.2°、28.36±0.2°、30.13±0.2°、31.36±0.2°、33.49±0.2°和37.22±0.2°。在另一实施方案中，式(i)的化合物为结晶形式，其基本上特征在于选自以下的粉末x射线衍射图：图2、图16、图17、图18、图19、图20、图21、图22、图23、图24、图25、图26、图27、图28和图33。在一些实施方案中，化合物1马来酸盐(1∶1)结晶形式n为化学稳定的结晶形式，其基本上特征在于如图33所示的粉末x射线衍射图。在另一方面，本申请提供了制备式(i)的5-(((1r，1as，6br)-1-(6-(三氟甲基)-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1a，6b-二氢-1h-环丙并[b]苯并呋喃-5-基)氧基)-3，4-二氢-1，8-二氮杂萘-2(1h)-酮马来酸盐的结晶形式的方法，包括以下操作中的任一种：(a)将5-(((1r，1as，6br)-1-(6-(三氟甲基)-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1a，6b-二氢-1h-环丙并[b]苯并呋喃-5-基)氧基)-3，4-二氢-1，8-二氮杂萘-2(1h)-酮的游离碱或除了马来酸盐之外的盐溶于溶剂或溶剂混合物以形成溶液或混悬液；将所得溶液或混悬液与马来酸混合以形成混合物；并使5-(((1r，1as，6br)-1-(6-(三氟甲基)-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1a，6b-二氢-1h-环丙并[b]苯并呋喃-5-基)氧基)-3，4-二氢-1，8-二氮杂萘-2(1h)-酮马来酸盐以目标结晶形式沉淀析出；(b)将5-(((1r，1as，6br)-1-(6-(三氟甲基)-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1a，6b-二氢-1h-环丙并[b]苯并呋喃-5-基)氧基)-3，4-二氢-1，8-二氮杂萘-2(1h)-酮倍半马来酸盐溶解或混悬于溶剂或溶剂混合物；并使5-(((1r，1as，6br)-1-(6-(三氟甲基)-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1a，6b-二氢-1h-环丙并[b]苯并呋喃-5-基)氧基)-3，4-二氢-1，8-二氮杂萘-2(1h)-酮马来酸盐以目标结晶形式沉淀析出；(c)储存结晶5-(((1r，1as，6br)-1-(6-(三氟甲基)-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1a，6b-二氢-1h-环丙并[b]苯并呋喃-5-基)氧基)-3，4-二氢-1，8-二氮杂萘-2(1h)-酮倍半马来酸盐达较长的一段时间以获得目标结晶形式；(d)加热结晶或无定形5-(((1r，1as，6br)-1-(6-(三氟甲基)-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1a，6b-二氢-1h-环丙并[b]苯并呋喃-5-基)氧基)-3，4-二氢-1，8-二氮杂萘-2(1h)-酮倍半马来酸盐至某一高温，并冷却所述盐以获得目标结晶形式；和(e)使结晶或无定形5-(((1r，1as，6br)-1-(6-(三氟甲基)-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1a，6b-二氢-1h-环丙并[b]苯并呋喃-5-基)氧基)-3，4-二氢-1，8-二氮杂萘-2(1h)-酮马来酸盐暴露于溶剂的蒸汽以获得目标结晶形式。在该方面的一个实施方案中，操作(a)或(b)还包括独立选自以下的一个或多个操作：加热、过滤除去不溶杂质、蒸馏溶剂、添加反萃溶剂或溶剂混合物、添加晶种、添加一种或多种沉淀诱导剂、冷却、沉淀和过滤收集结晶产物。在该方面的另一个实施方案中，在操作(a)或(b)中，所述溶剂或溶剂混合物选自水、低级烷基醇、酮、醚、酯、低级脂族羧酸、低级脂族腈、任选卤代的芳香溶剂以及它们的组合。在该方面的另一个实施方案中，在操作(a)或(b)中，所述溶剂为异丙醇、乙醇、甲醇、丙酮、thf、1，4-二噁烷、乙酸、乙腈、水或它们的组合。在该方面的另一个实施方案中，在操作(a)中，所述游离碱为经分离且纯化的游离碱、经分离但未纯化的游离碱或含有游离碱的粗反应产物。在该方面的另一个实施方案中，在操作(c)中，所述较长的一段时间为至少三天、至少一周或至少两周，在该方面的另一个实施方案中，在操作(d)中，所述高温为至少40℃、至少60℃、至少80℃或至少100℃，但低于倍半马来酸盐的分解温度。在该方面的另一个实施方案中，在操作(e)中，所述蒸汽为乙酸的蒸汽。在该方面的另一个实施方案中，所述方法选自：1)操作(a)或(b)，其使用异丙醇-水(v/v＞60/40)作为溶剂以产生结晶形式a*；2)操作(a)或(b)，其使用丙酮作为溶剂以产生结晶形式a**；3)操作(a)或(b)，其使用ipa-水(v∶v＝4∶1)混合物作为溶剂以产生结晶形式a；4)操作(a)或(b)，其使用1，4-二噁烷作为溶剂以产生结晶形式b；5)操作(a)或(b)，其使用乙醇作为溶剂以产生结晶形式c；6)操作(a)或(b)，其使用甲醇作为溶剂以产生结晶形式d；7)操作(a)或(b)，其使用乙腈-水(v∶v＝1∶1)混合物作为溶剂以产生结晶形式f；8)操作(a)或(b)，其使用乙酸-水混合物作为溶剂以产生结晶形式g；9)操作(a)或(b)，其使用四氢呋喃(thf)作为溶剂以产生结晶形式h；10)操作(a)或(b)，其使用ipa-水(v∶v＝3∶1)混合物作为溶剂以产生结晶形式i；11)操作(c)，其在环境温度储存结晶形式d达两周以产生结晶形式k；12)操作(c)，其在环境温度储存结晶形式j达两周以产生结晶形式m；13)操作(d)，其加热结晶形式g至140℃，然后冷却至环境温度以产生结晶形式l；和14)操作(e)，其使结晶形式a与乙酸蒸汽相互作用以产生结晶形式j。在一些实施方案中，本申请提供了制备化合物1的倍半马来酸盐(此后有时称为“化合物1倍半马来酸盐(maleatesalt)”或“化合物1倍半马来酸盐(maleate)”)的结晶形式的方法，包括在低于回流温度的温度，例如在约50℃使化合物1和马来酸的混合物在i-proh和h2o的混合溶剂中混合；或在低于回流温度的温度，例如在约50℃使化合物1与马来酸在i-proh和h2o的混合溶剂中的混合物或混悬液或溶液混合，或在低于回流温度的温度，例如在约50℃使化合物1在i-proh和h2o的混合溶剂中的混合物或混悬液或溶液与马来酸混合，其中i-proh的量大于40vol％、优选60vol％且更优选90vol％，按照i-proh和水的总体积计。在某些优选的实施方案中，上面提及的混合溶剂用i-proh代替。在其他实施方案中，该方法还包括在冷却至室温后将晶种添加至所得混合物中，然后使所述混合物静置一段时间，诸如12小时、24小时、2、3或4天或1周、2周。在一些实施方案中，本申请提供了制备化合物1马来酸盐(1∶1)的结晶形式的方法，包括使化合物1倍半马来酸盐的结晶形式与甲醇混合。在一些实施方案中，上述混合在搅拌下进行。在一些实施方案中，化合物1马来酸盐(1∶1)的结晶形式为本申请披露的形式n。在一些实施方案中，化合物1马来酸盐的结晶形式为选自以下的任一种：结晶形式a*、a**、a、b、c、d、f、g、h、i、j、k、l和m。在一些实施方案中，上述混合进行约1天或2天或3天或4天、5天或6天或1周或2周。化合物1倍半马来酸盐(1∶1.5)转化至马来酸盐(1∶1)提供了一种制备和/或进一步纯化活性药物成分化合物1的有成本效益的方法，其具有非常简单的操作，例如通过在甲醇中在室温或高温简单搅拌化合物1倍半马来酸盐，例如结晶形式a*、a**和a中的任一种。已经发现该转化引起所得结晶物质(即化合物1马来酸盐(1∶1)结晶形式)的结晶粒度降低，其继而可提高药物产品的溶出速率并进一步提高药物产品的化学纯度。在此方面，已经预期该转化进一步简化药物产品的制备方法，例如不使用微粉化和碾压操作。在另一方面，本申请提供了药物组合物，其包含根据本申请所述的任一实施方案的式(i)或式(ii)的化合物和药用载体。在一个实施方案中，所述药物组合物适于口服给药。在另一实施方案中，所述药物组合物为片剂或胶囊剂的形式。在另一实施方案中，所述片剂或胶囊剂的单位剂量为5-80mg。在另一实施方案中，所述化合物在药物组合物中的重量百分比为1-99％。在另一方面，本申请提供了治疗或预防受试者诸如人类中疾病或病症的方法，包括对所述受试者给予治疗有效量的根据本申请所述的任一实施方案的式(i)或式(ii)的化合物或包含式(i)或式(ii)的化合物的药物组合物。在一个实施方案中，所述疾病或病症为选自以下的癌症：脑癌、肺癌、肾癌、骨癌、肝癌、膀胱癌、乳腺癌、头颈癌、卵巢癌、黑素瘤、皮肤癌、肾上腺癌、子宫颈癌、结肠直肠癌、淋巴瘤或甲状腺肿瘤以及它们的并发症。在另一实施方案中，所述疾病选自braf、nras和kras突变的脑癌、肺癌、肾癌、骨癌、肝癌、膀胱癌、乳腺癌、头颈癌、卵巢癌、黑素瘤、皮肤癌、肾上腺癌、子宫颈癌、结肠直肠癌、淋巴瘤或甲状腺肿瘤以及它们的并发症。在另一实施方案中，化合物的给药剂量为1-100mg/天，且给药频率为每日一至三次。在另一实施方案中，化合物的给药剂量为5-50mg/天，且给药频率为每日一至三次。在另一实施方案中，化合物的给药剂量为10-40mg/天，且给药频率为每日一次。在另一实施方案中，化合物为5-(((1r，1as，6br)-1-(6-(三氟甲基)-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1a，6b-二氢-1h-环丙并[b]苯并呋喃-5-基)氧基)-3，4-二氢-1，8-二氮杂萘-2(1h)-酮马来酸盐，其为选自以下的结晶形式：结晶形式a*、a**、a、b、c、d、f、g、h、i、j、k、l、m和n。在另一方面，本申请提供了根据本申请所述的任一实施方案的式(i)或式(ii)的化合物在制备用于治疗与braf、nras和kras活性相关的疾病或病症的药物中的用途。在优选的实施方案中，所述疾病为癌症。在另一优选的实施方案中，化合物为5-(((1r，1as，6br)-1-(6-(三氟甲基)-1h-苯并[d]咪唑-2-基)-1a，6b-二氢-1h-环丙并[b]苯并呋喃-5-基)氧基)-3，4-二氢-1，8-二氮杂萘-2(1h)-酮马来酸盐，其为选自以下的结晶形式：结晶形式a*、a**、a、b、c、d、f、g、h、i、j、k、l、m和n。本发明的这些和其他方面将在参照以下附图、具体实施方式和权利要求而得到更好的理解。附图说明图1显示了无定形形式的化合物1的x射线衍射图。图2显示了化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a*(从异丙醇/水中结晶)的x射线衍射图。图3显示了化合物1盐酸盐(1∶1)的x射线衍射图。图4显示了化合物1甲磺酸盐(1∶1)的x射线衍射图。图5显示了化合物12-羟基乙磺酸盐(1∶1)的x射线衍射图。图6显示了化合物1l-酒石酸盐(1∶1)的x射线衍射图。图7显示了化合物1草酸盐(1∶1)的x射线衍射图。图8显示了由化合物1分别与磷酸(1∶1)、甲苯磺酸(1∶1)、乙二磺酸(1∶1)、硫酸(1∶1)获得的固体、api浆液对照和api的x射线衍射图的叠加。图9显示了由化合物1分别与l-乳酸(1∶1)、l-苹果酸(1∶1)、丙二酸(1∶1)、烟酰胺(1∶1)、糖精(1∶1)、琥珀酸(1∶1)获得的固体、api浆液对照和api的x射线衍射图的叠加。图10显示了由化合物1分别与苯甲酸(1∶1)、柠檬酸(1∶1)、富马酸(1∶1)、龙胆酸(1∶1)、乙醇酸(1∶1)获得的固体、api浆液对照和api的x射线衍射图的叠加。图11显示了由化合物1与烟酸(1∶1)获得的固体、烟酸浆液对照、api浆液对照和api的x射线衍射图的叠加。图12显示了由化合物1与己二酸(1∶1)获得的固体、己二酸浆液对照、api浆液对照和api的x射线衍射图的叠加。图13显示了化合物1倍半马来酸盐的单晶形式a**(通过从丙酮中结晶获得的单晶)的绝对结构。图14示出了化合物1倍半马来酸盐的单晶形式a**的氢键。图15显示了化合物1倍半马来酸盐的单晶形式a**的晶体堆积。图16显示了使用mercury软件计算的化合物1倍半马来酸盐的单晶形式a**的理论xrpd图。图17显示了化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a(从异丙醇/水中重结晶获得)的x射线衍射图。图18显示了化合物1马来酸盐的结晶形式b的x射线衍射图。图19显示了化合物1马来酸盐的结晶形式c的x射线衍射图。图20显示了化合物1马来酸盐的结晶形式d的x射线衍射图。图21显示了化合物1马来酸盐的结晶形式f的x射线衍射图。图22显示了化合物1马来酸盐的结晶形式g的x射线衍射图。图23显示了化合物1马来酸盐的结晶形式h的x射线衍射图。图24显示了化合物1马来酸盐的结晶形式i的x射线衍射图。图25显示了化合物1马来酸盐的结晶形式j的x射线衍射图。图26显示了化合物1马来酸盐的结晶形式k的x射线衍射图。图27显示了化合物1马来酸盐的结晶形式l的x射线衍射图。图28显示了化合物1马来酸盐的结晶形式m的x射线衍射图。图29显示了化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a*的1h-nmr谱。图30显示了化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a*的13c-nmr谱。图31显示了通过dvs的化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a*的吸湿性(即水分吸收)。图32显示了化合物1马来酸盐(1∶1)的结晶形式n的1h-nmr谱。图33显示了化合物1马来酸盐(1∶1)的结晶形式n的x射线衍射图。图34显示了化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a的1h-nmr谱。图35显示了化合物1马来酸盐(1∶1.2)的结晶形式b的1h-nmr谱。图36显示了化合物1马来酸盐(1∶1.3)的结晶形式c的1h-nmr谱。图37显示了化合物1马来酸盐(1∶1)的结晶形式d的1h-nmr谱。图38显示了化合物1马来酸盐(1∶0.5)的结晶形式f的1h-nmr谱。图39显示了化合物1马来酸盐(1∶0.5)的结晶形式g的1h-nmr谱。图40显示了化合物1马来酸盐(1∶1)的结晶形式h的1h-nmr谱。图41显示了化合物1马来酸盐(1∶0.5)的结晶形式i的1h-nmr谱。图42显示了化合物1马来酸盐(1∶1)的结晶形式j的1h-nmr谱。图43显示了化合物1马来酸盐(1∶1)的结晶形式k的1h-nmr谱。图44显示了化合物1马来酸盐(1∶0.3)的结晶形式l的1h-nmr谱。图45显示了化合物1马来酸盐(1∶1.3)的结晶形式m的1h-nmr谱。具体实施方式在制备本发明的盐的过程中，研究了在制药工业中通常使用的许多盐形成剂。具体地，本发明研究的盐形成剂包括选自以下的25种酸或盐形成剂：盐酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、乙醇酸、1-乳酸、富马酸、1-酒石酸、柠檬酸、1-苹果酸、琥珀酸、马尿酸、马来酸、己二酸、苯甲酸、龙胆酸、丙二酸、乙二磺酸、甲苯磺酸、草酸、烟酸、烟酰胺和糖精。然而，化合物1与仅六种盐的反应显示出形成盐。具体地，化合物1与六种酸包括盐酸(图3)、甲磺酸(图4)、2-羟基乙磺酸(图5)、l-酒石酸(图6)、马来酸(图2、图17等)和草酸(图7)的盐的固体形式显示出与游离碱、api对照和固体酸对照不同的结晶形式。与本申请的以上六种结晶盐不同的是，其他盐无法结晶。在一个方面，本申请提供了化合物1倍半马来酸盐，其通过本申请披露的方法大量地制备。如在图2中所示，化合物1倍半马来酸盐为结晶形式(本申请称为结晶形式a*)并且其x射线粉末衍射图通常具有以下峰衍射角(其中“间距”在图2中显示为“d-值”)：表1.化合物1倍半马来酸盐(结晶形式a＊)的x射线衍射图化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a*为相当稳定的结晶形式。在微粉化以变为具有约1-10微米的平均粒度(d90)的均匀分布的精细颗粒后，其可容易地配制为药物产品以用于临床使用。在另一实施方案中，本申请提供了化合物1倍半马来酸盐的单晶形式a**。使用由通过在丙酮中缓慢冷却而生长得到的单晶采集的一组衍射数据确定化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a**的结构。结晶数据和结构精修列于表2。表2：化合物1倍半马来酸盐(结晶形式a＊＊)的单晶数据和结构精修图13所示的化合物1马来酸盐的单晶结构确定了倍半马来酸盐，其中游离碱分子的咪唑氮原子被质子化。如经0.1(5)的绝对结构参数所表明，极有可能地确定c1(s)、c2(r)和c3(r)的绝对构型。图14证实了氢键相互作用。该结构证实了处于bc平面的二维结构。化合物1的游离碱分子和马来酸根阴离子通过沿b轴的分子间相互作用(n3…n3)和氢键(n2-h2…o4)连接。然后带式结构(tapestructure)经马来酸根阴离子通过沿c轴的分子间相互作用(n3…o7和n4…o7)和氢键(n1-h1…o8)连接以形成二维结构。化合物1倍半马来酸盐的晶体堆积示于图15。使用mercury软件计算的化合物1倍半马来酸盐的单晶形式a**的理论pxrd图示于图16。在另一实施方案中，本申请提供了化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a。如图17所示，结晶形式a的x射线粉末衍射谱图通常具有以下峰衍射角(其中“间距”在图17中显示为“d-值”)：表3.化合物1倍半马来酸盐(结晶形式a)的x射线衍射图峰#衍射角(2θ)间距相对强度18.279.9060030.76211.2387.873447.95317.8814.96051100418.3534.8340811.84518.5694.7784714.65619.3364.5906424.76720.7574.279498.36822.5433.944179.52在另一实施方案中，本申请提供了化合物1马来酸盐的结晶形式b。如在图18中所示，结晶形式b的x射线粉末衍射谱图通常具有以下峰衍射角(其中“间距”在图18中显示为“d-值”)：表4.化合物1马来酸盐(结晶形式b)的x射线衍射图峰#衍射角(2θ)间距相对强度111.0647.9971125.70215.8305.5982423.75317.7355.0010660.43418.4334.81337100.00519.5694.5362949.28622.2983.9869515.61723.1363.8444011.05828.7723.102958.09在另一实施方案中，本申请提供了化合物1马来酸盐的结晶形式c。如在图19中所示，结晶形式c的x射线粉末衍射谱图通常具有以下峰衍射角(其中“间距”在图19中显示为“d-值”)：表5.化合物1马来酸盐(结晶形式c)的x射线衍射图在另一实施方案中，本申请提供了化合物1马来酸盐的结晶形式d。如在图20中所示，结晶形式d的x射线粉末衍射谱图通常具有以下峰衍射角(其中“间距”在图20中显示为“d-值”)：表6.化合物1马来酸盐(结晶形式d)的x射线衍射图峰#衍射角(2θ)间距相对强度18.88149.95688100214.8525.9647862.23316.6625.3206121.84417.8494.9693863.17519.8664.4692714.65620.4274.3477923.50720.8754.2553477.17826.9463.3088410.36在另一实施方案中，本申请提供了化合物1马来酸盐的结晶形式f。如在图21中所示，结晶形式f的x射线粉末衍射谱图通常具有以下峰衍射角(其中“间距”在图21中显示为“d-值”)：表7.化合物1马来酸盐(结晶形式f)的x射线衍射图峰#衍射角(2θ)间距相对强度112.89506.8649048.90217.0025.21500100.00318.5394.7859080.53419.3764.5809725.72520.5264.3269512.38622.4503.9602426.20724.1093.6913427.52在另一实施方案中，本申请提供了化合物1马来酸盐的结晶形式g。如在图22中所示，结晶形式g的x射线粉末衍射谱图通常具有以下峰衍射角(其中“间距”在图22中显示为“d-值”)：表8.化合物1马来酸盐(结晶形式g)的x射线衍射图峰#衍射角(2θ)间距相对强度13.35142226.3635714.4325.63847315.6742027.5436.99877512.6304767.95410.3297308.5638829.94510.9199208.1023223.42611.6943607.5674416.36712.3622607.1600522.10813.1127306.7519130.97913.9849106.3327228.841014.9433805.9286316.071116.4072705.4028174.551217.3760005.1037318.051318.5588104.7810316.171419.3086604.5970231.061520.1322704.41078100.001621.0120404.2280522.151721.8818104.0619223.111823.5649303.7754744.671924.1544003.6846551.532025.5870903.4814913.172126.3640103.3806321.61在另一实施方案中，本申请提供了化合物1马来酸盐的结晶形式h。如在图23中所示，结晶形式h的x射线粉末衍射谱图通常具有以下峰衍射角(其中“间距”在图23中显示为“d-值”)：表9.化合物1马来酸盐(结晶形式h)的x射线衍射图在另一实施方案中，本申请提供了化合物1马来酸盐的结晶形式i。如在图24中所示，结晶形式i的x射线粉末衍射谱图通常具有以下峰衍射角(其中“间距”在图24中显示为“d-值”)：表10.化合物1马来酸盐(结晶形式i)的x射线衍射图峰#衍射角(2θ)间距相对强度13.08656928.6251715.1225.52577015.9936347.9536.84536112.9131933.34410.7899308.1996414.63511.5280007.6762716.64613.7411506.4445112.46716.1401905.49161100.00816.3295105.4283753.02917.8372604.9727717.371019.8051204.4828919.751121.4908204.1349229.271223.7784803.7420424.241324.4306503.6436110.931428.3403903.1492114.75在另一实施方案中，本申请提供了化合物1马来酸盐的结晶形式j。如在图25中所示，结晶形式j的x射线粉末衍射谱图通常具有以下峰衍射角(其中“间距”在图25中显示为“d-值”)：表11.化合物1马来酸盐(结晶形式j)的x射线衍射图在另一实施方案中，本申请提供了化合物1马来酸盐的结晶形式k。如在图26中所示，结晶形式k的x射线粉末衍射谱图通常具有以下峰衍射角(其中“间距”在图26中显示为“d-值”)：表12.化合物1马来酸盐(结晶形式k)的x射线衍射图在另一实施方案中，本申请提供了化合物1马来酸盐的结晶形式l。如在图27中所示，结晶形式l的x射线粉末衍射谱图通常具有以下峰衍射角(其中“间距”在图27中显示为“d-值”)：表13.化合物1马来酸盐(结晶形式l)的x射线衍射图峰#衍射角(2θ)间距相对强度19.6981179.1201677.30214.0516106.30281100.00在另一实施方案中，本申请提供了化合物1马来酸盐的结晶形式m。如在图28中所示，结晶形式m的x射线粉末衍射谱图通常具有以下峰衍射角(其中“间距”在图28中显示为“d-值”)：表14.化合物1马来酸盐(结晶形式m)的x射线衍射图在另一实施方案中，本申请提供了化合物1马来酸盐(1∶1)结晶形式n。如在图33中所示，结晶形式n的x射线粉末衍射谱图通常具有以下峰衍射角(其中“间距”在图33中显示为“d-值”)：表15.化合物1马来酸盐(1∶1)(结晶形式n)的x射线衍射图对于如上所述的结晶形式a*、a**、a、b、c、d、f、g、h、i、j、k、l、m和n，仅汇总了主峰(即最具有特征性的、显著的、独特的和/或可重现的峰)；其他峰可经常规方法由衍射谱图获得。如上所述的主峰可在误差界限(在最后给出的小数位+或-2，或在指定值+或-0.2)内重现。在另一方面，本申请提供了制备式(i)或式(ii)的化合物的方法。在一个实施方案中，本申请提供了根据方案1所述的操作制备或纯化的化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a*。本申请披露的新的合成方法和结晶/重结晶方法克服了与先前报道的方法相关的许多问题，诸如制备了具有＞99％光学纯度的关键手性中间体，并且提供了优于现有方法的许多优势。值得注意的是，本申请披露的方法特别适于具有高质量和良好收率的化合物1倍半马来酸盐的可重现的、商业规模的制备。方案1化合物1倍半马来酸盐的结晶形式可通过以下一般方法制备：将化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a*与溶剂加热直到完全溶解。滤过后，冷却，结晶，滤过并干燥，获得相应的不同的结晶形式。制备化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a的结晶方法的实例描述于实施例3(如下)。上述结晶可在单一溶剂、有机溶剂混合物或水和有机溶剂混合物中进行。用于结晶的适当的有机溶剂可选自但不限于低级烷基醇、酮、醚、酯、卤代烃、烷、卤代苯、脂族腈和其他芳香溶剂。优选的溶剂包括例如异丙醇、乙酸乙酯、水、n，n-二甲基甲酰胺、甲醇、乙醇、丙酮、乙腈及其混合物。化合物1的游离碱最初作为无定形固体获得，其为略微吸湿性的，在0至80％rh具有2.2％水分增加。在动态蒸汽吸附(dvs)后未观察到形式转化。其显示出非-双折射现象，由偏振光显微镜显示出不规则形态。本申请披露了化合物1的盐酸盐、甲磺酸盐、2-羟基乙磺酸盐、l-酒石酸盐、马来酸盐和草酸盐，其中令人惊讶地发现，所述马来酸盐，具体地为倍半马来酸盐，具有药物候选物的期望的性质。例如，化合物1并未形成结晶酒石酸盐，且草酸盐具有较差的结晶性。尽管2-羟基乙磺酸盐、甲磺酸盐和hcl盐显示出在水中的相对良好的溶解性，但是hcl盐是化学不稳定的，其在60℃和40℃/75％rh保持一周后具有显著的降解，且2-羟基乙磺酸盐和甲磺酸盐均是吸湿性的，其在0至80％rh具有约4％的重量增加。2-羟基乙磺酸盐和甲磺酸盐也在60℃和40℃/75％rh保持一周后显示出降解，且由此预期缺乏期望的长期化学稳定性。另一方面，倍半马来酸盐(1∶1.5游离碱/马来酸)具有良好的结晶性，如经本申请披露的xrpd图所证实，其微溶于水且在60℃和40℃/75％rh保持一周后未显示出降解，这证实了可能的长期稳定性；因此，选择倍半马来酸盐用于进一步开发。如果期望或需要，化合物1倍半马来酸盐的纯度可通过经甲醇-浆液方法将倍半马来酸盐转化为马来酸盐(1∶1比例的游离碱/酸)而进一步改善。1∶1马来酸盐结晶盐的形成引起了杂质的有效排出。游离碱的无定形形式也可以高纯度通过如下制备：将1∶1马来酸盐用碱处理，然后用溶剂萃取。通过将游离碱用马来酸处理来制备具有显著更高纯度的倍半马来酸盐结晶盐(方案2)。方案2本申请的术语“低级烷基醇”包括直链或支链c1-c8，优选c1-c6，更优选c1-c4烷基醇。具体实例包括但不限于甲醇、乙醇、异丙醇和丁醇。除非另外说明，否则本申请使用的术语“约”是指数字(例如温度、ph、体积等)可在±10％，优选±5％内变化。本发明的结晶形式的结晶也可在含有至少一种溶剂的适当的溶剂系统中进行，其通过蒸发溶剂，冷却和/或添加抗溶剂(不能使化合物1倍半马来酸盐溶解的溶剂，包括但不限于本申请所述的那些)以实现在所述溶剂系统中的过饱和。结晶可使用或不使用晶种来进行，其描述于本发明中。本发明提供的各个结晶形式在具体条件下开发，这取决于结晶方法的具体的热力学和平衡性质。因此，本领域技术人员将认识到形成的结晶是结晶方法的动力学和热力学性质的结果。在某些条件(例如溶剂、温度、压力和化合物浓度)下，具体的结晶形式相比于其他结晶形式可为更稳定的(或者事实上相比于其他结晶形式是更稳定的)。然而，具体结晶的相对低的热力学稳定性可具有有利的动力学稳定性。除了动力学之外的其他因素，诸如时间、杂质分布、搅拌和存在或不存在晶种，也可影响结晶形式。在另一方面，本申请提供了药物组合物，其各自含有有效量的化合物1马来酸盐和药用载体，所述化合物1马来酸盐具有上述任一种结晶形式：a*、a**、a、b、c、d、f、g、h、i、j、k、l、m和n，具体地为化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a*。活性化合物可占所述组合物的1-99％(按重量计)，优选1-70％(按重量计)或更优选1-50％(按重量计)或最优选5-40％(按重量计)。药物组合物可以如下形式口服给药：诸如胶囊剂、片剂、丸剂、粉末、持续释放注射剂，诸如无菌溶液、混悬液或乳液的形式；经局部处理形式给药，诸如糊剂、乳膏剂或软膏剂；或经直肠形式给药，诸如栓剂。药物组合物可为适于精确给药应用的单位剂型。此外，药物组合物可包含其他活性成分。适当的药物载体包括水、各种有机溶剂和各种惰性稀释剂或填充剂。需要时，药物组合物可含有各种添加剂，诸如香料、粘合剂和赋形剂。对于口服给药，片剂和胶囊剂可含有各种赋形剂诸如柠檬酸；各种崩解剂诸如淀粉、海藻酸和一些硅酸盐；和各种粘合剂诸如蔗糖、明胶和阿拉伯胶。此外，通常在制备片剂中使用润滑剂，包括硬脂酸镁和滑石填充剂。相同类型的固体成分也可用于配制软和硬明胶胶囊。当口服给药需要水性混悬液时，活性化合物可与各种甜味剂或矫味剂、色素或染料组合混合。需要时，可采用各种乳化剂或产生混悬液；可采用稀释剂诸如水、乙醇、丙二醇、甘油或其组合。上述药物组合物优选口服给药。上述药物组合物优选为胶囊剂或片剂形式。在另一方面，本申请提供了本申请化合物(即化合物1马来酸盐和任一种上述结晶形式a*、a**、a、b、c、d、f、g、h、i、j、k、l、m和n)在制备用于治疗与抑制braf激酶或其他激酶诸如egfr、vegfr、epha、ephb等相关的癌症的药物中的用途。在一个实施方案中，本申请提供了本申请化合物(即化合物1马来酸盐和任一种上述结晶形式a*、a**、a、b、c、d、f、g、h、i、j、k、l、m和n)在制备用于治疗或预防哺乳动物胰腺炎、肾病、癌症、血管发生或血管发生相关疾病的药物中的用途。本申请的化合物1马来酸盐和任一种上述结晶形式a*、a**、a、b、c、d、f、g、h、i、j、k、l、m和n，或化合物1马来酸盐(1∶1)结晶形式n可用于治疗或预防选自但不限于以下的疾病：肿瘤血管发生；慢性炎性疾病诸如类风湿性关节炎、动脉粥样硬化；皮肤疾病诸如银屑病和硬皮病；糖尿病诱导的皮肤疾病、糖尿病视网膜病、早产儿视网膜病变、年龄相关的变性色斑、血管瘤、胶质瘤、卡波西内部肿瘤、卵巢癌、乳腺癌、肺癌、胰腺癌、淋巴瘤、前列腺癌、结肠癌和皮肤肿瘤，以及它们的并发症。在本申请提及的哺乳动物中，优选人类。上述治疗方法的靶标疾病优选选自b-raf、nras和k-ras突变体肿瘤诸如b-raf或nras或k-ras突变体非小细胞肺癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、骨癌、肝癌、膀胱癌、胸部癌、颈癌、食管癌、胃癌、结肠癌、直肠癌、乳腺癌、卵巢癌、黑素瘤、皮肤癌、肾上腺癌、子宫颈癌、淋巴瘤或甲状腺肿瘤，以及它们的并发症。上述方法可与任何化学疗法(例如mek抑制剂)、生物疗法或放射疗法组合使用。所给予的活性成分或化合物的剂量将由以下确定：待治疗患者的个体需求、给药途径、疾病或病症严重性、给药方案以及指定医生的评价和判断。然而，基于活性化合物，有效剂量的优选范围可为在单一或分开剂量中的约每日0.01-120mg/kg体重；或更优选每日0.1-10mg/kg体重。在一些情况下，更适当的是应用上述剂量范围的下限，而在其他情况下，可使用较大剂量而不引起有害副作用。本申请的另一方面提供用于临床应用的化合物1倍半马来酸盐。具体地，本发明涉及使用化合物1马来酸盐的临床治疗，其采用针对癌症患者的以下治疗选择：化合物1马来酸盐和/或结晶形式a*、a**、a、b、c、d、f、g、h、i、j、k、l、m和n的剂量可为1-100mg/天，给药频率为每日1-3次；优选剂量为5-50mg/天，给药频率为每日1-3次；更优选剂量为5-60mg/天，给药频率为1次/天；甚至更优选剂量为10-50mg/天，给药频率为每日1次。下述合成方法、具体实施例和效能测试进一步描述了本发明的某些方面。它们不应当以任何方式限制或限定本发明的范围。实施例如下实施例意在示例说明且着重于保证关于所使用的数字(例如量、温度等)的准确性，但应当考虑到一些实验误差和偏差。除非另作说明，否则温度以℃(摄氏度)计。试剂购自商业供应商诸如sigma-aldrich、alfaaesar或tci，且无需进一步纯化即可使用，除非另作说明。除非另作说明，否则下文阐述的反应在氮气或氩气的正压下或使用干燥管在无水溶剂中进行；反应烧瓶配备有用于经注射器引入底物和试剂的橡胶隔膜；且将玻璃器皿烘干和/或加热干燥。除非另作说明，否则柱色谱纯化在如下仪器中进行：具有硅胶柱的biotage系统(制造商：dyaxcorporation)或硅胶seppak柱(waters)；或使用预装填的硅胶柱的teledvneiscocombiflash纯化系统。1hnmr光谱和13cnmr记录于varian仪器上，其以400mhz操作，使用dmso-d6作为溶剂。获自无色板状结晶的x射线强度数据在173(2)k使用brukerapex-iiccd衍射仪(cukα辐射，)测量。偏振光显微镜照片在室温捕获。在以下实施例中，可使用以下缩写：acoh乙酸acn乙腈api活性药物成分，此后有时称为化合物1aq水性brine饱和氯化钠水溶液bn苄基bnbr苄基溴ch2cl2二氯甲烷dmfn，n-二甲基甲酰胺dppf1，1″-二(二苯基膦基)二茂铁dbu1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯diea或dipean，n-二异丙基乙基胺dmap4-n，n-二甲基氨基吡啶dmfn，n-二甲基甲酰胺dmso二甲基亚砜etoac乙酸乙酯etoh乙醇et2o或ether乙醚g克h或hr小时hatuo-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-n，n，n′，n′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐hcl盐酸hplc高效液相色谱ipa2-丙醇i-proh异丙醇mg毫克ml毫升mmol毫摩尔mecn乙腈meoh甲醇min分钟ms或ms质谱na2so4硫酸钠pe石油醚ppa多磷酸rt保留时间rt或rt室温tbaf四丁基氟化铵tbscl叔丁基二甲基氯硅烷tfa三氟乙酸thf四氢呋喃tlc薄层色谱tmscl三甲基氯硅烷μl微升实施例1：化合物1与各种盐形成剂的盐的形成实施例1a：化合物1的游离碱和化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a＊的制备步骤1：中间体1的合成在≤35℃的内部温度在氮气保护下向etona(154kg)在dmf(989kg)中的搅拌溶液中加入etsh(68.6kg)。将混合物在≤35℃的内部温度搅拌60～90min。加入5-甲氧基苯并呋喃(58.75kg)在dmf(55.0kg)中的溶液。将混合物加热至110-130℃，搅拌45小时，然后在低于90℃真空浓缩。在将混合物冷却至10～20℃后，逐滴加入2nhcl(1326kg)，随后在≤35℃的内部温度加入etoac(531kg)和h2o2(129kg)。将混合物搅拌30～60min。在分离有机层后，将水相用etoac萃取。将合并的有机相用饱和盐水洗涤两次，然后将溶剂蒸发干燥。在低于40℃将meoh和naoh(44.5kg)在水(185kg)中的溶液逐滴加入至残留物。将混合物在30～40℃搅拌5-7小时。加入用水(77kg)湿润的活性炭(74kg)。将混合物在30～40℃搅拌4-6小时并滤过；并将滤饼用meoh和水洗涤。将dcm加入至滤液中并在低于40℃将ph用35％aq.hcl调节为1。将水相用dcm萃取，并将有机相用25％nacl洗涤并在低于40℃浓缩。残留物直接用于下一步中。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δ9.14(s，1h)，7.86(d，j＝2.0hz，1h)，7.36(d，j＝8.8hz，1h)，6.94(d，j＝2.4hz，1h)，6.79(dd，j＝2.0，0.9hz，1h)，6.74(dd，j＝8.8，2.4hz，1h)ppm。ms：m/e135(m+1)+。步骤2：中间体2的合成在-5至0℃向苯并呋喃-5-醇(中间体1，33.1kg)和et3n(50.8kg)在dcm(155kg)中的搅拌溶液中逐滴加入tmscl(30.4kg)在dcm(50kg)中的溶液。将混合物温热至0～10℃并在该温度搅拌2小时(ipc检验的int-1/int-2＝37.4％)。将混合物冷却至-5至0℃并逐滴加入tmscl(10.6kg)在dcm(8kg)中的溶液，然后将混合物温热至0～10℃并在该温度搅拌1h。将混合物在低于40℃浓缩，并向该混合物中加入正庚烷。将混合物搅拌20-30分钟并滤过，并将滤饼用正庚烷洗涤。将溶剂由滤液蒸馏出以获得粗的中间体2(int-2％：62.7％，kf：0.01％)。在-5至0℃向上述粗的中间体2和et3n(8.6kg)在dcm(149kg)中的搅拌溶液中逐滴加入tmscl(9.0kg)在dcm(10kg)中的溶液。将混合物温热至0～10℃并在该温度搅拌1h(tlc显示反应完成)。将反应混合物在低于40℃浓缩，并向该混合物中加入正庚烷。将混合物搅拌20-30分钟，然后滤过，并将滤饼用正庚烷洗涤。将溶剂由滤液蒸馏出以获得中间体2(41.5kg，int-2％：98.1％)，其为无色油状物。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δ7.69(d，j＝2.0hz，1h)，7.21(d，j＝8.8hz，1h)，6.84(d，j＝2.5hz，1h)，6.61(d，j＝2.0hz，1h)，6.56(dd，j＝8.8，2.5hz，1h)，0.00(s，9h)ppm。步骤3：中间体3的合成将三氟甲磺酸亚铜(i)(与甲苯的2∶1复合物，0.41kg)和(s，s)-evans配体(0.552kg)在dcm(160kg)在环境温度在氮气气氛下搅拌1-2小时。加入中间体2(37.0kg)，随后在20～30℃缓慢加入重氮乙酸乙酯(58kg)在dcm(450kg)中的溶液。将反应混合物在20～30℃搅拌0.5～1h(ipc：int-2/int-3≤0.2％，残留n2chco2et：0.05％≤1.0％)。在40～50min内在20～30℃将edta二钠(0.05mol/l，150kg)溶液三次加入至反应混合物。将有机相用25％nacl水溶液在20～30℃洗涤两次并在低于30℃浓缩。将残留物减压蒸馏并将粗的中间体3(36.26kg，84.5％)在120～144℃采集。粗的化合物包括内型-对映异构体，其可在下一步除去。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δ6.79(d，j＝2.4hz，1h)，6.59(d，j＝8.4hz，1h)，6.42(dd，j＝8.4，2.4hz，1h)，4.95(dd，j＝5.4，1.0hz，1h)，3.08(dd，j＝5.4，3.2hz，1h)，1.02(dd，j＝3.1，1.2hz，1h)，0.00(s，9h)ppm。步骤4和5：中间体5和中间体6的合成在20～30℃向中间体4(36.3kg)在meoh(108kg)中的溶液中加入hcl/meoh溶液(5m，0.11kg)，并将混合物搅拌2-3小时(ipc：l/m：0.5％，手性纯度90.0％)。在20～30℃逐滴加入et3n(0.22kg)。将混合物浓缩并将残留物用正庚烷/etoac(4∶1)稀释，然后浓缩。在将温度调节至10～20℃并在10～20℃搅拌2～4小时后，将混合物滤过得到湿产物(中间体5：94.0％，手性纯度：90.5％)。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δ9.05(s，1h)，6.89(d，j＝2.4hz，1h)，6.72(d，j＝8.4hz，1h)，6.55(dd，j＝8.4，2.4hz，1h)，5.11(dd，j＝5.4，1.0hz，1h)，3.27(dd，j＝5.4，3.0hz，1h)，1.19-1.17(m，1h)ppm。将粗产物用正庚烷/etoac(20∶1)制成浆液三次得到浅黄色固体，将其在40～50℃干燥12～16小时得到16.55kg产物(中间体6：98.6％；手性纯度：99.3％)。步骤6和7：中间体7和中间体8的合成在40～60℃向中间体6(14kg)和5-氟-3，4-二氢-1，8-二氮杂萘-2(1h)-酮(sm2，11.2kg)在dmf(66kg)中的溶液中加入cs2co3(26kg)，并将混合物温热至110～120℃并在110～120℃搅拌3小时。将反应ph在25～35℃用乙酸(12.0kg)调节为6。加入水(520kg)并将混合物搅拌1～2小时。滤过后，将固体用ea(78kg)制成浆液得到湿产物(纯度：(中间体7+中间体8)％：98％)。将氢氧化钠水溶液(125kg，2m)加入至湿产物在thf(240kg)中的搅拌溶液中并在20～30℃搅拌2～3小时(ipc：int-7/int-8：0.9％)。将混合物在20～30℃用4nhcl(37kg)调节为ph4～5，然后搅拌0.5～1h。将混合物在低于50℃浓缩并将固体由溶液沉淀析出。滤过后，将湿产物在35～45℃在thf中重新制成浆液达1～2小时，然后滤过。将所得的湿产物在45～65℃干燥40小时得到标题化合物中间体8(18.95kg：化学纯度99％，手性纯度100％)。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δ12.59(s，1h)，10.43(s，1h)，7.92(d，j＝5.8hz，1h)，7.29(d，j＝2.4hz，1h)，6.97(d，j＝8.8hz，1h)，6.93(dd，j＝8.8，2.4hz，1h)，6.21(d，j＝5.8hz，1h)，5.21(dd，j＝5.4，1.0hz，1h)，3.27-3.25(m，1h)，2.89(t，j＝7.8hz，2h)，2.51(d，j＝8.8hz，2h)，1.19(dd，j＝3.0，1.0hz，1h)ppm。ms：m/e339(m+1)+。步骤8：中间体9的合成在0～15℃将中间体8(13.3kg)、dipea(16kg)和hatu(18.1kg)在dmf(167kg)中的溶液逐滴加入至4-(三氟甲基)苯-1，2-二胺(sm3，7.6kg)在dmf(74kg)中的混合物。将混合物在20～25℃搅拌4～6小时(ipc：int-9/int-9：未检测到)。将活性炭(5.3kg)在dmf(7.5kg)中的溶液加入至反应混合物，在40～45℃搅拌2～4小时，然后滤过。在15～30℃将水(846kg)逐滴加入至滤液，并在搅拌1～2小时时固体从溶液中沉淀析出。将析出物滤过并在20～30℃在etoh中制成浆液2-4小时。滤过后，将湿产物在45～60℃干燥37小时得到标题化合物中间体9(17.60kg：95.5％)。步骤9：化合物1的游离碱的合成将中间体9(17kg)和水(1.5kg)在acoh(360kg)中的溶液在65-70℃搅拌20小时(ipc：r/s≤1.0％)。将混合物在低于55℃浓缩干燥，并将活性炭(17kg)与meoh(32kg)加入至残留物。将混合物在约50℃搅拌1h。滤过后，在低于45℃将滤液浓缩除去溶剂。将ea(160kg)和水(330kg)加入至残留物，随后在20-30℃加入naoh水溶液(2mol/l)直到ph为8-9。分离有机层，并将水层用ea萃取。将合并的有机相用水洗涤两次，浓缩干燥得到化合物1，其为游离碱形式。1h-nmr(600mhz，dmso-d6)δ12.84(s，1h)，10.47(s，1h)，7.98(d，j＝5.8hz，1h)，7.86(d，j＝1.2hz，1h)，7.69(m，1h)，7.48(t，j＝6.2hz，1h)，7.38(d，j＝2.6hz，1h)，7.08(d，j＝8.7hz，1h)，7.02(dd，j＝8.7，2.6hz，1h)，6.29(d，j＝5.8hz，1h)，5.43(dd，j＝5.4，1.2hz，1h)，3.55(dd，j＝5.3，3.3hz，1h)，2.95(t，j＝7.7hz，2h)，2.55(t，j＝7.7hz，2h)，1.97(d，j＝1.3hz，1h)ppm。步骤10：化合物1倍半马来酸盐的合成将ipa(83kg)加入至步骤9的残留物。将马来酸(5kg)在水(29kg)中的溶液加入至混合物并在约50℃搅拌4小时，然后冷却至35℃并在该温度搅拌12小时。将所得的固体滤过，在40～60℃干燥，并在微粉磨机中微粉化得到白色粉末(化合物1倍半马来酸盐，8.36kg)，其粒度为d90＝4.1μm，d10＝1.5μm，d50＝2.4μm。粉末x射线衍射图方法用于表征结晶形式a*的结构，参见图2。化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a*的1h-nmr谱示于图29。化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a*的13c-nmr谱示于图30。溶解性研究显示出获得了比化合物1的游离碱(＜loq，0.001mg/ml)显著更好的化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a*的水溶性(0.020mg/ml)。发现化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a*为非吸湿性的，其仅具有暴露于95％rh的0.1801％的水摄取，如在图31中所示。实施例1b：化合物1与其他盐形成剂的盐的制备将约150mg化合物1的游离碱用2mlipa溶于40ml玻璃小瓶中。在磁力搅拌器上根据表16所列的摩尔比将适当的盐形成剂在ipa(将盐形成剂预先溶于ipa，对于不能溶解的那些盐形成剂而言，将混悬液加热溶解)中的溶液缓慢滴定至游离碱溶液中，然后在室温保持搅拌24小时，使固体沉淀析出。如果未获得固体，将抗溶剂(例如庚烷)缓慢加入至溶液中，导致沉淀。离心固体经xrpd确定，以确定是否获得新的结晶形式，然后在40℃真空干燥过夜以进一步表征。将混悬于ipa中的api和纯的固体酸用作api对照和纯的固体盐形成剂对照以区分api或固体盐形成剂的盐/共结晶形成和多晶型。除了用马来酸形成结晶盐之外，结晶形式的固体也由以下五种酸发现，包括盐酸(图3)、甲磺酸(图4)、2-羟基乙磺酸(图5)、l-酒石酸(图6，可能未形成实际的酒石酸盐且其恰为游离碱的多晶型物，这是因为未检测到酒石酸盐的化学位移)和草酸(图7)，其显示出与游离碱、api对照和固体酸对照不同的结晶形式。在形成的结晶盐中，2-羟基乙磺酸盐和马来酸盐相比于其他四种(盐酸、甲磺酸、l-酒石酸和草酸)而言具有更好的结晶性。由其他盐形成剂获得的固体均为无定形形式(图8、图9、图10)或具有纯的固体盐形成剂的相同形式(图11和图12)，这表明获得了游离形式或无定形盐或盐形成剂与游离形式的混合物。表16.化合物1与各种盐形成剂的盐形成汇总盐酸1∶1白色混悬液否结晶硫酸1∶1胶状物否无定形磷酸1∶1白色混悬液否无定形甲磺酸1∶1胶状物否结晶2-羟基乙磺酸1∶1白色混悬液否结晶苯磺酸1∶1胶状物否无定形乙醇酸1∶1白色沉淀是无定形l-乳酸1∶1白色沉淀是无定形富马酸1∶1白色沉淀是无定形l-酒石酸1∶1胶状物否结晶柠檬酸1∶1白色沉淀是无定形l-苹果酸1∶1白色沉淀是无定形琥珀酸1∶1白色沉淀是无定形马尿酸1∶1无沉淀是无定形己二酸1∶1白色沉淀是结晶(己二酸)苯甲酸1∶1白色沉淀是无定形龙胆酸1∶1白色沉淀是无定形丙二酸1∶1白色沉淀是无定形乙二磺酸1∶1白色混悬液否无定形甲苯磺酸1∶1胶状物否无定形草酸1∶1白色混悬液否结晶烟酸1∶1白色混悬液否结晶(烟酸)烟酰胺1∶1白色沉淀是无定形糖精1∶1白色沉淀是无定形实施例2：化合物1倍半马来酸盐的单晶形式a＊＊的制备单晶生长筛选在94种不同条件(通过改变溶剂、温度和重结晶方法)下进行，由此通过在丙酮中缓慢冷却获得了适于结构确定的单晶。实施例3：化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a的制备将化合物1的游离碱(145g)与63.5g马来酸(1.8当量)在1750mli-proh/h2o(v∶v＝4∶1)中混合。将混合物回流直到所有固体溶解。将澄清溶液冷却至室温，加入一些晶种，然后将混合物留置静置24小时。将白色固体沉淀并滤过。将滤饼用约500mli-proh/h2o(v∶v＝4∶1)洗涤并在50℃高真空干燥48小时得到标题产物(112g)，其为结晶。粉末x射线衍射图方法用于表征结晶形式a的结构；参见图17。tga结果表明在高达120℃重量损失为0.3wt％。dsc结果显示了在194.2℃的熔融吸热(起始温度)。1h-nmr光谱显示了游离碱/马来酸的化学计量比为1/1.5(参见图34)。实施例1a涉及化合物1倍半马来酸盐的结晶形式(即称为形式a*)的大量生产且实施例3涉及化合物1倍半马来酸盐的结晶形式(即称为形式a)的实验室制备。粉末x射线衍射图、1h-nmr谱和其他技术显示了结晶形式a*和结晶形式a两种结晶形式之间的一致性。实施例4：化合物1马来酸盐的结晶形式b的制备化合物1马来酸盐的结晶形式b通过将倍半马来酸盐的结晶形式a的1，4-二噁烷溶液以0.1℃/min的速率由60℃冷却至5℃来制备以用于结晶。操作：于3-ml玻璃小瓶中称重20.0mg形式a固体，并添加1ml1，4-二噁烷于小瓶中；在50℃以800rpm的速度磁力搅拌混合物；在60℃平衡2小时后使用0.45μm尼龙膜过滤样品；并以0.1℃/min的速率由60℃至5℃冷却滤液。将样品储存在5℃，之后分离。粉末x射线衍射图方法用于表征结晶形式b的结构；参见图18。tga结果表明在高达150℃重量损失为15.1wt％(含有晶体1，4-二噁烷溶剂化物/水合物的分子)。dsc结果显示在分解前多个重叠的吸热(181.4和189.6℃)。1h-nmr谱显示了游离碱/马来酸的化学计量比为约1/1.2(参见图35)。实施例5：化合物1马来酸盐的结晶形式c的制备化合物1马来酸盐的结晶形式c通过以0.1℃/min的速率将化合物1的乙醇溶液由60℃冷却至5℃来制备以用于结晶。操作：于3-ml玻璃小瓶中称重21.3mg形式a固体，并添加1ml乙醇至小瓶中；以800rpm的速度在50℃磁力搅拌混合物；在60℃平衡2小时后使用0.45μm尼龙膜过滤样品；并以0.1℃/min的速率由60℃至5℃冷却滤液。将样品储存在5℃，之后分离。粉末x射线衍射图方法用于表征结晶形式c的结构；参见图19。tga结果表明在高达180℃的重量损失为7.0wt％(含有晶体水合物的分子)。dsc结果显示出在分解前的四个吸热(107.5、162.7、179.3和196.0℃)。1h-nmr谱显示了游离碱/马来酸的化学计量比为约1/1.3(参见图36)。实施例6：化合物1马来酸盐的结晶形式d的制备化合物1马来酸盐的结晶形式d通过在[dmin]cf3coo离子液体的存在下在室温缓慢蒸发化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a的meoh溶液来制备。操作：于20-ml玻璃小瓶中称重150.2mg形式a固体，并添加10.2mlmeoh于小瓶中；使用0.45μm尼龙膜滤过混合物得到饱和储备溶液；添加2.8mg[dmin]cf3coo离子液体至1-mlmeoh储备溶液；并在室温搅拌以诱导沉淀。粉末x射线衍射图方法用于表征结晶形式d的结构；参见图20。tga结果表明在高达120℃的重量损失为6.3wt％(含有晶体水合物的分子)。dsc结果显示出在分解前的两个吸热(75.8和161.4℃)。1h-nmr谱显示了游离碱/马来酸的化学计量比为约1/1(参见图37)。实施例7：化合物1马来酸盐的结晶形式f的制备化合物1马来酸盐的结晶形式f通过将化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a由acn/h2o(1∶1，v/v)溶液结晶来制备。操作：于3-ml玻璃小瓶中称重18.9mg形式a固体，并添加1.5mlacn/h2o(1∶1，v/v)；并添加约2mg聚合物混合物(聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、聚乙烯醇(pva)、聚氯乙烯(pvc)、聚乙酸乙烯酯(pvac)、羟丙甲基纤维素(hpmc)和甲基纤维素(mc)，其质量比为1∶1∶1∶1∶1∶1)至混悬液中并在室温搅拌以诱导沉淀。粉末x射线衍射图方法用于表征结晶形式f的结构；参见图21。tga结果表明在高达130℃的重量损失为3.2wt％(含有acn溶剂化物/水合物的分子)。dsc结果显示出在分解前的三个吸热(62.4、156.9和169.3℃)。1h-nmr谱显示了游离碱/马来酸的化学计量比为约1/0.5(参见图38)。实施例8：化合物1马来酸盐的结晶形式g的制备化合物1马来酸盐的结晶形式g通过将水加入至化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a的乙酸溶液来制备。操作：于20-ml玻璃小瓶中称重20.2mg形式a固体；添加1.0ml乙酸至小瓶中并在室温搅拌得到澄清溶液；并逐滴添加5ml水于溶液以诱导沉淀。粉末x射线衍射图方法用于表征结晶形式g的结构；参见图22。tga结果表明在高达120℃的重量损失为11.0wt％(含有晶体水合物的分子)。dsc结果显示出在分解前的四个吸热(84.3、126.9、139.4和187.3℃)。1h-nmr谱显示了游离碱/马来酸的化学计量比为约1/0.5(参见图39)。实施例9：化合物1马来酸盐的结晶形式h的制备化合物1马来酸盐的结晶形式h通过将化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a在thf中在室温制成浆液来制备。操作：于1.5-ml小瓶中称重17.7mg形式a固体，并添加0.3mlthf至小瓶中得到混悬液；并以800rpm的速度在室温磁力搅拌混合物达3天。粉末x射线衍射图方法用于表征结晶形式h的结构；参见图23。tga结果表明在高达150℃的两个步骤的重量损失为13.0wt％(含有晶体thf溶剂化物/水合物的分子)。dsc结果显示了在分解前的2个吸热(124.5和178.0℃)。1h-nmr谱显示了游离碱/马来酸的化学计量比为约1/1(参见图40)。实施例10：化合物1马来酸盐的结晶形式i的制备化合物1马来酸盐的结晶形式i通过在室温缓慢蒸发化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a的ipa/h2o(3∶1，v/v)溶液来制备。操作：于3-ml玻璃小瓶中称重13.8mg形式a固体，并添加1.5mlipa/h2o(3∶1，v/v)至小瓶中以获得澄清溶液；在室温由溶液蒸发溶剂以诱导沉淀。粉末x射线衍射图方法用于表征结晶形式i的结构；参见图24。tga结果表明在高达180℃的两个步骤的重量损失为20.7wt％(含有晶体ipa溶剂化物/水合物的分子)。dsc结果显示出在分解前的四个重叠的吸热(85.8、115.1和138.2℃)。1h-nmr谱显示了游离碱/马来酸的化学计量比为约1/0.5(参见图41)。实施例11：化合物1马来酸盐的结晶形式j的制备化合物1马来酸盐的结晶形式j通过化合物1马来酸盐的结晶形式a的固体与乙酸蒸汽之间的相互作用来制备。操作：于3-ml玻璃小瓶中称重14.2mg形式a固体；密封3-ml小瓶于含有2ml乙酸的20-ml玻璃小瓶中；并保持系统在室温达8天，使得蒸汽与固体相互作用。粉末x射线衍射图方法用于表征结晶形式j的结构；参见图25。tga结果表明在高达130℃的重量损失为19.3wt％(含有晶体乙酸溶剂化物/水合物的分子)。dsc结果显示出在分解前的三个吸热(102.9、155.7和187.7℃)。1h-nmr谱显示了游离碱/马来酸的化学计量比为约1/1(参见图42)。实施例12：化合物1马来酸盐的结晶形式k的制备化合物1马来酸盐的结晶形式k在环境条件储存化合物1马来酸盐的结晶形式d达两周后获得。粉末x射线衍射图方法用于表征结晶形式k的结构；参见图26。tga结果表明在高达150℃的重量损失为4.2wt％(含有结晶水合物的分子)。dsc结果显示出在186.6℃(峰温度)熔化前的两个吸热(59.6和163.5℃)。1h-nmr谱显示了游离碱/马来酸的化学计量比为约1/1(参见图43)。实施例13：化合物1马来酸盐的结晶形式l的的制备化合物1马来酸盐的结晶形式l通过加热化合物1马来酸盐的结晶形式g至140℃并冷却至室温获得。粉末x射线衍射图方法用于表征结晶形式l的结构；参见图27。tga结果表明在高达120℃的重量损失为3.9wt％(含有晶体水合物的分子)。dsc结果显示出在183.9℃(峰温度)熔化前的一个吸热(141.1℃，起始温度)。1h-nmr谱显示了游离碱/马来酸的化学计量比为约1/0.3(参见图44)。实施例14：化合物1马来酸盐的结晶形式m的制备化合物1马来酸盐的结晶形式m在环境条件储存化合物1马来酸盐的结晶形式j达两周后获得。粉末x射线衍射图方法用于表征结晶形式l的结构；参见图28。tga结果表明在高达140℃的重量损失为1.4wt％(含有晶体乙酸水合物/水合物的分子)。dsc结果显示出多个吸热(123.0、156.5、171.9、176.1和195.3℃)。1h-nmr谱显示了游离碱/马来酸的化学计量比为约1/1.3(参见图45)。实施例15：筛选形成化合物1马来酸盐和倍半马来酸盐的条件条件1：化合物1与马来酸在etoac中反应。在室温向化合物1(47.8mg)在etoac(5ml)中的搅拌溶液中加入马来酸在etoac(0.2mol/l，vml)中的溶液。将混合物搅拌30min。将固体滤过并高真空干燥得到标题盐。令人惊讶的是，当使用0.5、0.9、1.8或3.0当量的马来酸时，在所有条件下均获得结晶化合物1倍半马来酸盐(1∶1.5)。条件2：化合物1与马来酸在etoh中反应。操作：将化合物1和马来酸在etoh中的混合物回流20min直到所有固体溶解。将溶液冷却至环境温度并静置3小时。白色固体沉淀析出，并滤过并高真空干燥得到标题化合物。令人惊讶地发现当使用1当量的马来酸时，获得结晶化合物1马来酸盐(1∶1)；但是当马来酸的量增加至1.3、1.5或3.5当量时，所有条件均获得结晶化合物1倍半马来酸盐(1∶1.5)作为产物。条件3：化合物1与马来酸在meoh中反应。操作：将化合物1和马来酸在meoh中的混合物回流20min直到所有固体溶解。将溶液冷却至环境温度并留置静置3小时。白色固体沉淀析出，并滤过并高真空干燥得到化合物1马来酸盐(1∶1)。令人惊讶的是，使用meoh作为溶剂，当使用1.0、1.5或3.5当量的马来酸时，产物均一致地为粉末化化合物1马来酸盐(1∶1)。条件4：化合物1与马来酸在i-proh/水中反应。操作：将化合物1(145g，0.3mol)和马来酸(63g，0.54mol)在混合溶剂(i-proh∶h2o＝4∶1，按体积计，1.7l)中的混合物回流直到所有固体溶解。将混合物冷却至室温，将一些晶种加入至溶液，并将混合物留置静置24小时。白色结晶沉淀析出并滤过。将滤饼用500ml所述混合溶剂洗涤，在50℃高真空干燥48小时得到化合物1倍半马来酸盐(112g，56.7％)，其为结晶针状物。有趣的是，当使用40vol％i-proh作为溶剂时，获得结晶化合物1半马来酸盐(1∶0.5)；而当60vol％i-proh、90vol％i-proh或100％i-proh用作溶剂时，所有条件均获得结晶化合物1倍半马来酸盐(1∶1.5)。条件5：化合物1与马来酸在其他溶剂在反应。当使用其他溶剂(thf、丙酮、dme、1，4-二噁烷)时，根据上述相似的操作，获得的产物一致地为化合物1倍半马来酸盐(1∶1.5)。条件6：化合物1倍半马来酸盐(1∶1.5)转化为马来酸盐(1∶1)。将化合物1倍半马来酸盐的晶体(1.0g，1.53mmol)混悬于meoh(20ml)并将混合物在室温搅拌1天。将白色固体滤过。将滤饼用meoh(10ml)洗涤，并在红外线灯下在50℃干燥16小时得到化合物1马来酸盐(1∶1)(820mg，90％)，其为白色结晶固体。1hnmr(400mhz，dmso)δ10.50(s，1h)，7.97(d，j＝5.6hz，1h)，7.86(s，1h)，7.68(d，j＝8.4hz，1h)，7.47(dd，j＝8.4，1.2hz，1h)，7.38(d，j＝2.4hz，1h)，7.08(d，j＝8.8hz，1h)，7.01(dd，j＝8.8，2.4hz，1h)，6.31-6.24(m，3h)，5.43(dd，j＝5.2，1.2hz，1h)，3.55(dd，j＝5.2，3.2hz，1h)，2.94(t，j＝7.6hz，2h)，2.54(t，j＝7.6hz，2h)，1.97(dd，j＝3.2，1.2hz，1h)(详细谱参见图32)。粉末x射线衍射图研究用于确定在条件6下且命名为化合物1马来酸盐(1∶1)结晶形式n的所得白色结晶固体的结构(图33)。条件7：化合物1马来酸盐(1∶1)转化为倍半马来酸盐。将化合物1马来酸盐(1∶1)(4.3g)和马来酸(0.67g，0.8当量的马来酸)在i-proh/h2o混合物(4∶1，v/v，50ml)中的混合物回流1小时。残留少量的固体。加入另外5ml所述混合溶剂并将所得的混合物回流30分钟，并且所有固体溶解。将混合物冷却至室温，然后留置静置16小时。白色结晶沉淀析出并滤过。将滤饼用20ml所述混合溶剂洗涤，在红外线灯下干燥24小时得到化合物1倍半马来酸盐(3.2g，68％)，其为结晶针状物。实施例16化合物1api的杂质排出：将28.5kg的第一个结晶的倍半马来酸盐(化学纯度＝98.82％)与甲醇在45-50℃搅拌4-5h。然后将浆液混合物在20-30℃冷却3-4h，滤过得到湿滤饼(30.3kg；化学纯度＝99.76％)。将湿滤饼与乙酸乙酯和水混合，用碳酸钠水溶液处理得到ph＝7-8，然后用水洗涤。在乙酸乙酯中获得化合物1的游离碱(16.2kg，化学纯度＝99.81％)。通过蒸馏将乙酸乙酯替换为异丙醇。将游离碱在i-proh中的溶液与马来酸和倍半马来酸盐晶种的水溶液搅拌。将混合物在40-50℃搅拌若干小时并在20-30℃搅拌若干小时。将所得的固体滤过得到第二个结晶的倍半马来酸盐(19.6kg；化学纯度＝99.82％；光学纯度＝100％)。实施例17：化合物1的盐或结晶形式的稳定性研究实施例17a：短期稳定性研究进行短期稳定性研究以评价hcl盐、甲磺酸盐、2-羟基乙磺酸盐和马来酸盐。分别在40ml玻璃小瓶中称重约2mg(对于xrpd：10mg)的上述各个盐。游离碱形式用作对照。将封闭的样品封盖并用石蜡膜密封，而将开放的样品用具有小孔的铝箔覆盖。将所有样品在相应条件(60℃和40℃/75％rh)下储存在稳定性室或干燥烘箱中达1周。在两种条件下在1周后hcl盐近乎为浅黄色粉末，2-羟基乙磺酸盐、甲磺酸盐和马来酸盐的外观通过视觉观察没有变化。xrpd结果显示针对所有盐样品未检测到结晶形式转化。化学稳定性结果汇总于表17。随着trs增加(hcl盐＞2-羟基乙磺酸盐＞甲磺酸盐＞马来酸盐＞游离碱)检测到可变降解。相反地，对于化合物1的盐形成，温度压力(temperaturestress)条件可能比湿度压力(humiditystress)条件具有更大的影响，这是因为盐样品的透射拉曼光谱(trs)在60℃增加更多。表17.短期稳定性研究的汇总实施例17b：长期稳定性研究化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a*的长期稳定性研究显示出当储存于25℃/60％rh达至多18个月(测定w/w：t0＝99.1％和t18＝98.8％)以及当储存于40℃/75％rh条件达至多6个月(测定w/w：t0＝99.1％和t6＝98.9％)时未出现显著的化学纯度变化。结果甚至显示出在25℃/75％rh的24个月稳定性研究后化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a*仍然保持98.5％的纯度。此外，当储存于25℃/60％rh达至多18个月且储存于40℃/75％rh条件达至多6个月时未观察到结晶形式和光学纯度的变化。效能测试测试1：化合物1倍半马来酸盐(测试的结晶形式a＊)对激酶的抑制和选择性方法：raf激酶测定：基于均相时间分辨荧光(htrf)方法(cisbiobioassays)，在激酶活性测定中针对来自lifetechnologies的重组体b-raf(v600e)(pv3849)、c-raf(y340d/y341d)(pv3805)和野生型braf(pv3848)测试化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a*。该测定在含有raf激酶、km浓度的atp、gst-标记的mek1(k97r)和化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a*或dmso的反应混合物于含有25mmtrisph7.4、10mmmgcl2、0.5mmegta、0.5mmna3vo4、5mmβ-甘油磷酸盐、0.01％tritonx-100、2.5mmdtt和0.1％bsa的缓冲液中进行。将激酶与化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a*在室温(rt)培养1小时并且反应通过加入atp和gst-mek1(具有k97r突变的全长蛋白，由细菌表达系统纯化的重组体蛋白)起始。在室温反应1小时后，根据制造商说明(cisbiobioassays)加入终止/检测溶液。所述终止/检测溶液含有于含有25mmtrisph7.4、400mmkf、50mmedta、0.1％bsa和0.01％tritonx-100的缓冲液中的eu3+穴状化合物结合的抗磷酸化(phospho)mek1/2(ser217/221)兔多克隆抗体和d2-结合的抗gst小鼠单克隆抗体。在1.5小时培养后，在pherastarfs板读取器(bmglabtech)上测量tr-fret信号(具有在337nm波长激发的在665nm的发射与在620nm的发射的荧光比)。mek1的磷酸化导致抗磷酸化mek1/2抗体与gst-mek1蛋白的结合，其将荧光供体(eu3+穴状化合物)置于与在抗-gst抗体上的受体d2的紧密接近的位置，由此导致由供体荧光基团(在620nm)向受体荧光基团(在665nm)的高度的荧光共振能量转移。化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a*的ic50通过由graphpadprism软件将剂量响应％抑制数据拟合至四参数逻辑模型衍生得到。egfr、epha2、pdgfr-β、txk、flt3、vegfr2、ret、btk、itk、tec和src的激酶测定根据制造商的说明，在来自cisbiobioassays的htrfkinease-tk测定中针对重组体egfr/epha2/btk(来自carnabiosciences)、itk/tec/src/pdgfr-β/txk/flt3/vegfr2/ret(来自lifetechnologies)和her2(aa676-1255，从昆虫表达系统中纯化的重组体蛋白)测试化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a*。该测定在含有激酶、km浓度的atp、生物素化肽底物(61tk0blc，cisbiobioassys)和化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a*的反应混合物中进行。将激酶与化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a*在室温培养1小时或2小时(对于egfr)并且反应通过加入atp和底物起始。反应后，根据制造商的说明加入终止/检测溶液。所述终止/检测溶液含有于含有25mmtrisph7.4、400mmkf、50mmedta、0.01％bsa、0.01％tritonx-100的缓冲液中的eu+穴状化合物结合的抗磷酸化酪氨酸抗体(61t66klb，cisbiobioassys)和抗生蛋白链菌素-xl665(610saxlb，cisbiobioassys)。培养1小时后，在pherastarfs板读取器(bmglabtech)上记录tr-fret信号(具有在337nm波长激发的在665nm的发射与在620nm的发射的荧光比)。生物素化肽底物的磷酸化导致eu+穴状化合物结合的抗磷酸化酪氨酸抗体和抗生蛋白链菌素-xl665两者均与生物素化肽结合。供体(eu+穴状化合物)与受体(xl665)荧光基团的紧密接近导致由供体荧光基团(在620nm)向受体荧光基团(在665nm)的高度的荧光共振能量转移。化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a*的ic50通过由graphpadprism软件将剂量响应％抑制数据拟合至四参数逻辑模型衍生得到。结果：化合物1倍半马来酸盐(结晶形式a*)为v600e突变体b-raf、野生型b-raf和c-raf酶的有效且可逆的抑制剂。此外，在目前为止已经测试的以下激酶中，化合物1倍半马来酸盐有效地抑制egfr、epha2、pdgfr-β、flt3、vegfr2和ret，而对her2、src和txk具有较弱抑制且对btk、itk和tec无抑制。化合物1倍半马来酸盐所抑制的许多这些激酶已经鉴定为对于抗癌疗法的可能的靶标且由此可提高潜在效能，以及将化合物1倍半马来酸盐的潜在应用扩大至宽范围的肿瘤。表18.化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a＊的酶抑制活性酶ic50(nm)酶ic50(nm)brafv600e(416-766)26tec＞10000crafy340，341d3.5her22573wt-braf69src917wt-egfr44pdgfr-β17epha261btk＞10,000itk＞10,000txk4800flt325ret18vegfr222测试2：化合物1倍半马来酸盐(测试的结晶形式a＊)对人肿瘤细胞系的体外生长抑制方法：a375、sk-mel-28、ht29、colo205、a431和hcc827细胞系购自美国标准培养收集所(americantypeculturecollection)。在细胞测定中使用的所有细胞系培养于指定的补充有10％胎牛血清(fbs，thermoscientific)、100个单位/ml青霉素(gibco)、0.1mg/ml链霉素(gibco)的培养基以及具有5％co2的潮湿的37℃环境。细胞系由购买的原始细胞在三代内传代的冷冻储备液复苏，且传代不超过30次。使用基于tr-fret的方法测量细胞磷酸化-erk和磷酸化-egfr。将细胞以96孔板的每孔3×104个接种并留置粘附16小时。然后将生长培养基替换为不含血清的100μl培养基。然后将细胞用化合物的10点滴定处理。在化合物处理1小时后，将50μl裂解缓冲液(cisbio)加入至各孔中。然后将板在室温在振摇下孵育30min。将来自96孔板的各孔的总计16μl的细胞裂解液转移至384孔小体积白板中。将来自各孔的裂解液与2μleu3+-或tb3+-穴状化合物(供体)标记的抗erk或抗egfr抗体(cisbio)和2μld2(受体)标记的抗磷酸化erk或抗磷酸化egfr抗体(cisbio)在室温培养2小时。使用pherastarfs板(bmglabtech)测量fret信号。使用graphpadprism软件确定对于erk或egfr磷酸化的ic50值。使用celltiter-glo发光法细胞活力测定(promega)确定化合物在一组黑素瘤、结肠癌、乳腺癌和肺癌细胞中的生长抑制活性。针对各细胞系优化接种于96孔板的每孔的细胞数目，以保证在3天处理期内的对数生长。将细胞留置粘附16小时，然后用10点连续稀释液处理，一式两份。在3天暴露于化合物后，加入与存在于各孔中的细胞培养基的体积相等的体积的celltiter-glo试剂。将混合物置于定轨振荡器上达2分钟以使得细胞裂解，随后在室温孵育10分钟以使得发光信号发展和稳定。使用pherastarfs读取器(bmglabtech)测量发光信号。使用graphpadprism软件确定细胞活力的ec50值。结果：细胞测定已经证实了化合物1倍半马来酸盐抑制众多raf下游的直接信号传导中间体。例如，化合物1倍半马来酸盐在b-rafv600e突变体诱导的黑素瘤a375和sk-mel-28细胞中抑制erk磷酸化，其中ic50为32和77nm。其也在b-rafv600e突变体诱导的ht29和colo205结肠直肠癌细胞中抑制erk磷酸化，其中ic50为103和53nm。此外，化合物1倍半马来酸盐在过表达a431的egfr和egfr突变体hcc827肺癌细胞系中抑制egfr磷酸化，其中ic50为385和161nm。在一组癌细胞系中已经评估了化合物1倍半马来酸盐的抗增殖活性。其显示出针对众多具有b-raf突变的细胞系的抗增殖活性(表19)。表19.化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a＊抑制brafv600e诱导的细胞增殖。细胞系braf状态化合物1ec50(平均值±sd)na375v600e137±0.52sk-mel-28v600e251±542ht-29v600e138±132colo-205v600e147±0.62测试3：化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a＊的体内药理学肿瘤移植方法：人癌细胞皮下接种于balb/c裸小鼠的右腋窝区域以产生肿瘤异种移植物。在植入当天，将细胞培养基替换为新鲜培养基。三小时后，移除培养基并采集细胞且重新混悬于冷的(4℃)pbs，之后接种。将每只小鼠的右腋窝区域用70％乙醇清洁，之后细胞接种。经26号注射针对每只动物皮下注射于200μl细胞混悬液中的期望细胞于右前侧。植入后，使用测径器在平面上每周两次测量肿瘤体积。使用下式计算肿瘤体积：v＝0.5×(axb2)，其中a和b分别为肿瘤的长径和短径。对于体内效能研究，当平均肿瘤尺寸达到100～200mm3时，使用分层随机化方法将动物分配于预期数目的组中，其中每组6-10只小鼠。所述组由对照组(无药物处理)和不同剂量水平的化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a*的治疗组(范围为1-20mg/kg)组成。所有剂量是基于游离碱的重量。通过口服管饲每日一次(qd)或两次(bid)给药；给药频率取决于肿瘤生长的个体情况。通过口服管饲(p.o.)以10ml/kg体重的体积给予治疗。在评估体重后立即给药且由此调节给予的体积。个体体重和肿瘤体积每周确定两次，其中在研究的持续时间内每日监测小鼠的毒性的临床体征。一旦它们的肿瘤体积达到≥2000mm3、肿瘤溃烂或体重损失超过20％，则使用二氧化碳对小鼠实施安乐死。使用t检验分析所有组的数据。如果p值为＜0.05，则认为其为统计学显著的。使用下式计算肿瘤生长抑制(tgi)：处理t＝在时间t处理的肿瘤体积处理t0＝在时间0处理的肿瘤体积安慰剂t＝在时间t的安慰剂肿瘤体积安慰剂t0＝在时间0的安慰剂肿瘤体积对于pd研究，当平均肿瘤尺寸达到140-900mm3，使用分层次随机化方法将动物分配于预期数目的组中，其中每组4只小鼠。所述组由对照组(无药物处理)和不同剂量水平的化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a*治疗组(范围为1-20mg/kg)组成。所有剂量是基于游离碱的重量。通过口服管饲每日一次(qd)或两次(bid)给药。通过口服管饲(p.o.)以10ml/kg体重的体积给予所有治疗。在评估体重后立即给药且由此调节给予的体积。在给药后的理想时间点使用二氧化碳对小鼠实施安乐死。在安乐死后立即解剖肿瘤组织，并使用液氮将其快速冷冻于预先填充有mp珠子的管中并在p-erk测定前储存在-80℃。将五百微升的完全裂解缓冲液加入至具有mp珠子的冷冻肿瘤中。在mp匀化设备中进行肿瘤组织的匀化，然后将裂解液在4℃以13,000rpm快速离心10min以除去不溶物质。通过p-erk1/2测定(perkinelmer)，两微克的蛋白裂解液用于测量磷酸化erk1/2水平。结果：化合物1倍半马来酸盐(结晶形式a*)具有针对b-rafv600e的有效的激酶抑制活性、在基于细胞的测定中的抗增殖活性以及在异种移植物模型中的抗肿瘤活性。化合物1倍半马来酸盐(结晶形式a*)具有针对裸小鼠中的人a375黑素瘤(b-rafv600e突变)、lox黑素瘤(b-rafv600e突变)、colo205结肠直肠癌(b-rafv600e突变)、ht29结肠直肠癌(b-rafv600e突变)、widr结肠直肠癌(b-rafv600e突变)、hcc827肺癌(egfr突变)和a431表皮样癌(egfr过表达)异种移植物的显著的抗肿瘤活性。此外，当与多西他赛(docetaxel)或mek抑制剂司美替尼(selumetinib)(azd6244)组合时，化合物1倍半马来酸盐(结晶形式a*)在人calu-6肺腺癌(k-ras突变)肿瘤中显示出显著的抗肿瘤活性。化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a*的口服给药在小鼠的a375异种移植物中引起对erk1/2磷酸化的时间依赖性和剂量依赖性抑制。肿瘤组织中的对p-erk水平的抑制与化合物1的血浆和肿瘤药物浓度很好地相关。此外，化合物1倍半马来酸盐(结晶形式a*)和mek抑制剂azd6244在calu-6k-ras突变体非小细胞肺腺癌异种移植物模型中证实了对抑制p-erk的强的协同作用。测试5：化合物1倍半马来酸盐(结晶形式a＊)的毒理学针对评价化合物1倍半马来酸盐(结晶形式a*)的临床前安全性进行了综合临床前毒性研究项目，包括在大鼠和犬中的28-天glp研究和若干调查研究。这些研究考虑了针对抗癌药物的临床前研究的可用监督指导。在这些研究中，化合物1倍半马来酸盐证实了有利的毒理学和安全性药理学分布。安全性药理学测试结果显示出化合物1倍半马来酸盐(结晶形式a*)对呼吸、血压和循环功能不具有影响，且对自主神经系统活性或中枢神经系统不具有影响。额外的毒性测试结果未显示出畸形形成、诱变和生殖毒性。测试6：化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a＊的药物动力学充分验证的lc-ms/ms方法很好地用于化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a*在sprague-dawley大鼠和beagle犬中在单一剂量和多个剂量给药后的药物动力学(pk)研究。化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a*在大鼠(51％至102％)和犬(41％至82％)中均具有高的口服生物利用度。其在口服给药后的消除半衰期在大鼠中的范围为4.4至9.4小时且在犬中的范围为3.3至4.9小时。动力学随着大鼠中0.5至15mg/kg的剂量范围以及犬中1.5至15mg/kg的剂量范围为线性的。在多次给药后，在大鼠中观察到略微累积(约2倍)。该略微累积在雌性大鼠中是统计学显著的，但在雄性大鼠中不是统计学显著的。在犬中多次给药后未观察到累积。测试7：化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a＊的adme化合物1广泛分布于各个组织中，但在脑组织中分布少，这表明药物无法容易地穿过血脑屏障。在大鼠肝中未发现对p450酶的显著诱导作用，未发现化合物1倍半马来酸盐对药物代谢酶的抑制活性，除了对cyp2c8(ic50＝1.03μm)和cyp2c19(ic50＝1.96μm)的弱的抑制之外。cyp3a为负责化合物1代谢的主要的cyp同工型，而cyp1a2、cyp2c8、cyp2c9、cyp2c19和cyp2d6以较小的程度促进化合物1的代谢。测试8：化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a＊和游离碱的药物动力学比较药物和试剂：化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a*，其在微粉化后具有的粒度为d90＝4.1um，d10＝1.5um，d50＝2.4um。物质含量(纯度)不低于98.0％。实验动物：雄性和雌性beagle犬。药物制备：称重适当量的各物质并分散于0.5％羧甲基纤维素钠(对于化合物1的游离碱)或0.5％甲基纤维素溶液(对于化合物1倍半马来酸盐)。制备预期浓度的化合物1的混悬液。在该研究中用游离碱计算化合物1的所有剂量和浓度。给药和样品采集：在剂量给予前新鲜制备给药溶液。相应地记录实际体重和注射的实际体积。使犬禁食过夜且允许在给药后4小时摄取食物。以0.5至15mg/kg的剂量范围对犬口服给药每种混悬液。血样(约1.0ml)在给药前以及给药后高达36小时的不同时间经头静脉丛采集。经离心加工全血并采集血浆样品且在分析前保持在冷冻器中。经蛋白沉淀加工血浆样品。使用经验证的液相色谱串联质谱(lc-ms/ms)方法确定血浆样品中的化合物1的浓度。使用非隔室模型使用pharsightwinnonlin分析血浆浓度-时间数据。表20.游离碱和盐形式的化合物1的cmax和浓度-时间曲线下面积以上实验显示出化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a*的cmax(ng/ml)和auc0-inf(ng·h/ml)约为游离碱形式的2-3倍。因此，化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a*相比于化合物1的游离碱(无定形形式的)而言具有显著更好的相对生物利用度。测试9：临床试验使用化合物1倍半马来酸盐的结晶形式a*制备胶囊，i期临床安全性研究在给予5、10、20、30、40和50mg的单一剂量的25名受试者中完成。结果显示出5-50mg单一剂量是安全的且良好耐受的。化合物1治疗引起brafv600e黑素瘤患者中的部分应答、brafv600eptc患者中的部分应答以及brafv600ecrc患者中的某些抗肿瘤活性。还招募并治疗了16名kras癌症患者，3pr和至少12名患者存活多于2.2个月(针对未治疗的kras癌症患者报道的平均pfs，参见oncotarget，5，19，2014)。这些初始数据证实了化合物1倍半马来酸盐(结晶形式a*)在治疗braf-和k-ras突变体癌症中是有效的。前述实施例和某些实施方案的描述应当理解为示例说明的，而不是如权利要求进行限定的那样限制本发明。将容易地认识到，可采用如上阐述的特征的各种变化和组合而不偏离如在权利要求中所阐述的本发明。所有此种变化意在包括在本发明的范围内。将所有引用的参考文献的全部内容通过引用的方式并入本申请。应当理解的是，如果任何现有技术公开在本申请中被引用，则此种引用并不构成以下承认：该公开在任何国家构成了本领域公知常识的一部分。在随后的权利要求以及先前的本发明的说明书中，除非由于表述语言或必要含义而需要对上下文另作说明，否则术语“包含”或其变化形式诸如“包括”或“含有”以包括在内的含义使用，即说明存在指定的特征，但不排除在本发明的各个实施方案中存在或添加其他特征。本申请通过识别引用所涉及的所有出版物、专利、专利申请和公开的专利申请的公开的全部内容通过引用的方式并入本申请。当前第1页12