用于治疗乙型肝炎病毒(HBV)感染的试剂及其用途的制作方法

相关申请数据本申请要求2015年5月6日提交的澳大利亚临时申请号2015901617和2016年4月8日提交的美国临时申请号62/319,971的优先权，其全部内容通过引用整体并入本文。本公开涉及用于治疗乙型肝炎病毒(hbv)感染的rna干扰(rnai)试剂、包含所述试剂的组合物及其用于治疗感染hbv的个体的用途。背景hbv是一种严重且常见的肝脏传染病，影响着全世界数百万人。hbv是属于肝病毒科(hepadnaviridae)的嗜肝dna病毒。病毒基因组全长约3.2kb，并且它具有四个开放阅读框(orf)，包括表面抗原(“s基因”)、核心抗原(“c基因”)、dna聚合酶(“p基因”)和称为“x基因”的未确定功能的基因。全世界超过20亿人在其生命中的某个时间感染了hbv，并且这些中约3.5亿-4亿人保持长期感染，并且是病毒携带者。hbv感染可引起急性和慢性乙型肝炎，并可能最终导致慢性肝功能不全、肝硬化和肝细胞癌的发展。此外，hbv携带者可以传播该疾病多年。慢性hbv感染者(即携带者)与非携带者相比具有至少高12倍的发展肝细胞癌的风险，并且hbv引起全世界原发性肝癌的60-80％。因此，hbv作为已知的人致癌物排名仅次于烟草。虽然针对hbv的疫苗是可用的，但人群中hbv感染率仍然较高。此外，目前用于慢性hbv感染的疗法在大多数慢性感染患者中对病毒基因表达和复制的抑制作用有限。现有的慢性hbv感染疗法的另一个限制是病毒发展出对药物的抗性。由于这些原因，仍然需要新型治疗剂来治疗hbv感染。概述本公开部分地基于认识到用于治疗和/或预防hbv感染的现有疫苗和治疗剂在其功效上受到限制，如在必需长期治疗的情况下，例如由于病毒对疗法的抗性的形成和/或hbv基因型之间对疗法的响应性的变化。本公开提供了靶向由hbv基因组产生的rna转录物的一种或多种保守区域，即在多种不同hbv基因型之间保守的区域的rnai试剂。发明人已经显示了，这些rnai试剂在用hbv感染的细胞中有效抑制hbv基因例如hbvpol基因的表达。例如，已经显示本发明的示例性rnai试剂在含有活性hbv的hepg2.2.15细胞中抑制或降低hbv基因转录物的表达。还已经显示本发明的示例性rnai试剂在接种了hbv的人肝细胞中以及感染hbv的pxb嵌合小鼠中抑制或降低hbv基因转录物的表达，减少细胞内和细胞外hbvdna，并减少hbv共价闭合环状dna(cccdna)。本发明人的这些发现提供了抑制或减少由hbv表达的核酸和/或蛋白质的表达的新化合物以及此类化合物的用途，例如用于治疗受试者中的hbv感染。因此，本公开提供了包含长度为至少17个核苷酸的效应子序列和效应子补体序列的rna，其中效应子序列与由hbv基因组的区域编码的rna转录物基本上互补，其中该区域包含seqidno:1-10中任一项中列出的序列。例如，效应子序列长度小于30个核苷酸。例如，合适的效应子序列的长度可以在17-29个核苷酸的范围内。效应子序列可以包含相对于与效应子序列基本上互补的seqidno:1-10中任一项中列出的序列的4个碱基对错配。在另一个实例中，效应子序列包含相对于与效应子序列基本上互补的seqidno:1-10中任一项中列出的序列的3个碱基对错配。在另一个实例中，效应子序列包含相对于与效应子序列基本上互补的seqidno:1-10中任一项中列出的序列的2个碱基对错配。在另一个实例中，效应子序列包含相对于与效应子序列基本上互补的seqidno:1-10中任一项中列出的序列的1个碱基对错配。在另一个实例中，效应子序列与seqidno:1-10中任一项中列出的序列内等同长度的区域是100％互补的。在一个实例中，rna可以选自由以下组成的组：rna，其包含：(i)与seqidno:12中列出的序列互补的效应子序列，任选地除1、2、3或4个碱基错配之外，条件是效应子序列能够与seqidno:12中列出的序列形成双链体；和(ii)效应子补体序列，其包含与所述效应子序列基本上互补的序列；rna，其包含：(i)与seqidno:14中列出的序列互补的效应子序列，任选地除1、2、3或4个碱基错配之外，条件是效应子序列能够与seqidno:14中列出的序列形成双链体；和(ii)效应子补体序列，其包含与所述效应子序列基本上互补的序列；rna，其包含：(i)与seqidno:16中列出的序列互补的效应子序列，任选地除1、2、3或4个碱基错配之外，条件是效应子序列能够与seqidno:16中列出的序列形成双链体；和(ii)效应子补体序列，其包含与所述效应子序列基本上互补的序列；rna，其包含：(i)与seqidno:18中列出的序列互补的效应子序列，任选地除1、2、3或4个碱基错配之外，条件是效应子序列能够与seqidno:18中列出的序列形成双链体；和(ii)效应子补体序列，其包含与所述效应子序列基本上互补的序列；rna，其包含：(i)与seqidno:20中列出的序列互补的效应子序列，任选地除1、2、3或4个碱基错配之外，条件是效应子序列能够与seqidno:20中列出的序列形成双链体；和(ii)效应子补体序列，其包含与所述效应子序列基本上互补的序列；rna，其包含：(i)与seqidno:22中列出的序列互补的效应子序列，任选地除1、2、3或4个碱基错配之外，条件是效应子序列能够与seqidno:22中列出的序列形成双链体；和(ii)效应子补体序列，其包含与所述效应子序列基本上互补的序列；rna，其包含：(i)与seqidno:24中列出的序列互补的效应子序列，任选地除1、2、3或4个碱基错配之外，条件是效应子序列能够与seqidno:24中列出的序列形成双链体；和(ii)效应子补体序列，其包含与所述效应子序列基本上互补的序列；rna，其包含：(i)与seqidno:26中列出的序列互补的效应子序列，任选地除1、2、3或4个碱基错配之外，条件是效应子序列能够与seqidno:26中列出的序列形成双链体；和(ii)效应子补体序列，其包含与所述效应子序列基本上互补的序列；rna，其包含：(i)与seqidno:28中列出的序列互补的效应子序列，任选地除1、2、3或4个碱基错配之外，条件是效应子序列能够形成具有seqidno:28中列出的序列的双链体；和(ii)效应子补体序列，其包含与所述效应子序列基本上互补的序列；rna，其包含：(i)与seqidno:30中列出的序列互补的效应子序列，任选地除1、2、3或4个碱基错配之外，条件是效应子序列能够与seqidno:30中列出的序列形成双链体；和(ii)效应子补体序列，其包含与所述效应子序列基本上互补的序列；rna，其包含：(i)与seqidno:32中列出的序列互补的效应子序列，任选地除1、2、3或4个碱基错配之外，条件是效应子序列能够与seqidno:32中列出的序列形成双链体；和(ii)效应子补体序列，其包含与所述效应子序列基本上互补的序列；rna，其包含：(i)与seqidno:34中列出的序列互补的效应子序列，任选地除1、2、3或4个碱基错配之外，条件是效应子序列能够形成具有seqidno:34中列出的序列的双链体；和(ii)效应子补体序列，其包含与所述效应子序列基本上互补的序列；rna，其包含：(i)与seqidno:36中列出的序列互补的效应子序列，任选地除1、2、3或4个碱基错配之外，条件是效应子序列能够与seqidno:36中列出的序列形成双链体；和(ii)效应子补体序列，其包含与所述效应子序列基本上互补的序列；rna，其包含：(i)与seqidno:38中列出的序列互补的效应子序列，任选地除1、2、3或4个碱基错配之外，条件是效应子序列能够与seqidno:38中列出的序列形成双链体；和(ii)效应子补体序列，其包含与所述效应子序列基本上互补的序列；rna，其包含：(i)与seqidno:40中列出的序列互补的效应子序列，任选地除1、2、3或4个碱基错配之外，条件是效应子序列能够形成具有seqidno:40中列出的序列的双链体；和(ii)效应子补体序列，其包含与所述效应子序列基本上互补的序列；rna，其包含：(i)与seqidno:42中列出的序列互补的效应子序列，任选地除1、2、3或4个碱基错配之外，条件是效应子序列能够与seqidno:42中列出的序列形成双链体；和(ii)效应子补体序列，其包含与所述效应子序列基本上互补的序列；rna，其包含：(i)与seqidno:44中列出的序列互补的效应子序列，任选地除1、2、3或4个碱基错配之外，条件是效应子序列能够与seqidno:44中列出的序列形成双链体；和(ii)效应子补体序列，其包含与所述效应子序列基本上互补的序列；rna，其包含：(i)与seqidno:46中列出的序列互补的效应子序列，任选地除1、2、3或4个碱基错配之外，条件是效应子序列能够与seqidno:46中列出的序列形成双链体；和(ii)效应子补体序列，其包含与所述效应子序列基本上互补的序列；rna，其包含：(i)与seqidno:48中列出的序列互补的效应子序列，任选地除1、2、3或4个碱基错配之外，条件是效应子序列能够与seqidno:48中列出的序列形成双链体；和(ii)效应子补体序列，其包含与所述效应子序列基本上互补的序列；rna，其包含：(i)与seqidno:50中列出的序列互补的效应子序列，任选地除1、2、3或4个碱基错配之外，条件是效应子序列能够与seqidno:50中列出的序列形成双链体；和(ii)效应子补体序列，其包含与所述效应子序列基本上互补的序列；和rna，其包含：(i)与seqidno:52中列出的序列互补的效应子序列，任选地除1、2、3或4个碱基错配之外，条件是效应子序列能够与seqidno:52中列出的序列形成双链体；和(ii)包含与所述效应子序列基本上互补的序列的效应子补体序列。在另一个实例中，rna可以选自由以下组成的组：rna，其包含seqidno:11中列出的效应子序列以及与seqidno:11中列出的序列基本上互补且能够与其形成双链体的效应子补体序列；rna，其包含seqidno:13中列出的效应子序列以及与seqidno:13中列出的序列基本上互补且能够与其形成双链体的效应子补体序列；rna，其包含seqidno:15中列出的效应子序列以及与seqidno:15中列出的序列基本上互补且能够与其形成双链体的效应子补体序列；rna，其包含seqidno:17中列出的效应子序列以及与seqidno:17中列出的序列基本上互补且能够与其形成双链体的效应子补体序列；rna，其包含seqidno:19中列出的效应子序列以及与seqidno:19中列出的序列基本上互补且能够与其形成双链体的效应子补体序列；rna，其包含seqidno:21中列出的效应子序列以及与seqidno:21中列出的序列基本上互补且能够与其形成双链体的效应子补体序列；rna，其包含seqidno:23中列出的效应子序列以及与seqidno:23中列出的序列基本上互补且能够与其形成双链体的效应子补体序列；rna，其包含seqidno:25中列出的效应子序列以及与seqidno:25中列出的序列基本上互补且能够与其形成双链体的效应子补体序列；rna，其包含seqidno:27中列出的效应子序列以及与seqidno:27中列出的序列基本上互补且能够与其形成双链体的效应子补体序列；rna，其包含seqidno:29中列出的效应子序列以及与seqidno:29中列出的序列基本上互补且能够与其形成双链体的效应子补体序列；rna，其包含seqidno:31中列出的效应子序列以及与seqidno:31中列出的序列基本上互补且能够与其形成双链体的效应子补体序列；rna，其包含seqidno:33中列出的效应子序列以及与seqidno:33中列出的序列基本上互补且能够与其形成双链体的效应子补体序列；rna，其包含seqidno:35中列出的效应子序列以及与seqidno:35中列出的序列基本上互补且能够与其形成双链体的效应子补体序列；rna，其包含seqidno:37中列出的效应子序列以及与seqidno:37中列出的序列基本上互补且能够与其形成双链体的效应子补体序列；rna，其包含seqidno:39中列出的效应子序列以及与seqidno:39中列出的序列基本上互补且能够与其形成双链体的效应子补体序列；rna，其包含seqidno:41中列出的效应子序列以及与seqidno:41中列出的序列基本上互补且能够与其形成双链体的效应子补体序列；rna，其包含seqidno:43中列出的效应子序列以及与seqidno:43中列出的序列基本上互补且能够与其形成双链体的效应子补体序列；rna，其包含seqidno:45中列出的效应子序列以及与seqidno:45中列出的序列基本上互补且能够与其形成双链体的效应子补体序列；rna，其包含seqidno:47中列出的效应子序列以及与seqidno:47中列出的序列基本上互补且能够与其形成双链体的效应子补体序列；rna，其包含seqidno:49中列出的效应子序列以及与seqidno:49中列出的序列基本上互补且能够与其形成双链体的效应子补体序列；rna，其包含seqidno:51中列出的效应子序列以及与seqidno:51中列出的序列基本上互补且能够与其形成双链体的效应子补体序列；例如，本公开的rna的效应子补体序列可以相对于相应的效应子序列包含1、2、3或4个错配，条件是关联的效应子和效应子补体序列能够形成双链体。在另一个实例中，rna可以选自由以下组成的组：包含seqidno:11中列出的效应子序列和seqidno:12中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:13中列出的效应子序列和seqidno:14中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:15中列出的效应子序列和seqidno:16中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:17中列出的效应子序列和seqidno:18中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:19中列出的效应子序列和seqidno:20中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:21中列出的效应子序列和seqidno:22中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:23中列出的效应子序列和seqidno:24中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:25中列出的效应子序列和seqidno:26中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:27中列出的效应子序列和seqidno:28中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:29中列出的效应子序列和seqidno:30中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:31中列出的效应子序列和seqidno:32中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:33中列出的效应子序列和seqidno:34中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:35中列出的效应子序列和seqidno:36中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:37中列出的效应子序列和seqidno:38中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:39中列出的效应子序列和seqidno:40中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:41中列出的效应子序列和seqidno:42中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:43中列出的效应子序列和seqidno:44中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:45中列出的效应子序列和seqidno:46中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:47中列出的效应子序列和seqidno:48中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:49中列出的效应子序列和seqidno:50中列出的效应子补体序列的rna；和包含seqidno:51中列出的效应子序列和seqidno:52中列出的效应子补体序列的rna。在一个实例中，rna是rnai试剂。本公开的rna可以以短发夹rna(shrna)的形式提供。当作为shrna提供时，本公开的rna可以包含位于效应子序列和效应子补体序列之间的环序列。合适的环序列可以选自本领域已知的环序列。例如，根据本公开的shrna可以包含seqidno:65-98中任一项中列出的序列。或者，本公开的rna可以以短干扰rna(sirna)双链体或双链rna(dsrna)的形式提供。本领域技术人员将理解，根据本公开的rna可以与用于治疗hbv的其它治疗剂组合或结合使用。因此，本公开提供了如本文所述的rna与一种或多种用于治疗hbv的其它试剂的组合。在一个实例中，提供了多种rna，其包含：(a)至少一种如本文所述的rna；和(b)至少一种选自以下的rna：(i)根据本文所述的rna的rna；或(ii)包含长度为至少17个核苷酸的效应子序列和效应子补体序列的rna，其中所述效应子序列与seqidno:54、56、58、60、62和64中任一项中列出的rna序列基本上互补；其中(a)处的rna和(b)处的rna包含不同的效应子序列。在一个实例中，本公开的多种rna包含：(a)至少一种选自以下的rna：包含seqidno:11中列出的效应子序列和seqidno:12中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:13中列出的效应子序列和seqidno:14中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:15中列出的效应子序列和seqidno:16中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:17中列出的效应子序列和seqidno:18中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:19中列出的效应子序列和seqidno:20中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:21中列出的效应子序列和seqidno:22中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:23中列出的效应子序列和seqidno:24中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:25中列出的效应子序列和seqidno:26中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:27中列出的效应子序列和seqidno:28中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:29中列出的效应子序列和seqidno:30中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:31中列出的效应子序列和seqidno:32中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:33中列出的效应子序列和seqidno:34中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:35中列出的效应子序列和seqidno:36中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:37中列出的效应子序列和seqidno:38中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:39中列出的效应子序列和seqidno:40中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:41中列出的效应子序列和seqidno:42中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:43中列出的效应子序列和seqidno:44中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:45中列出的效应子序列和seqidno:46中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:47中列出的效应子序列和seqidno:48中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:49中列出的效应子序列和seqidno:50中列出的效应子补体序列的rna；和包含seqidno:51中列出的效应子序列和seqidno:52所示的效应子补体序列的rna；和(b)至少一种选自以下的rna：(i)选自(a)处所述的组的rna；或(ii)包含长度为至少17个核苷酸的效应子序列和效应子补体序列的rna，其中所述效应子序列与seqidno:54、56、58、60、62和64中任一项中列出的rna序列基本上互补；其中(a)处的rna和(b)处的rna包含不同的效应子序列。例如，与seqidno:54、56、58、60、62和64中任一项中列出的rna序列基本上互补的效应子序列的长度小于30个核苷酸。例如，合适的效应子序列的长度可以在17-29个核苷酸的范围内。根据本公开的多种rna可以包含多达10种rna，如2种rna或3种rna或4种rna或5种rna或6种rna或7种rna或8种rna或9种rna或10种rna。在一个实例中，多种rna包含本文所述的2种rna。在另一个实例中，多种rna包含本文所述的3种rna。在一个实例中，多种rna包含本文所述的4种rna。在一个实例中，多种rna包含本文所述的5种rna。在一个实例中，多种rna包含本文所述的6种rna。在一个实例中，多种rna包含本文所述的7种rna。在一个实例中，多种rna包含本文所述的8种rna。在一个实例中，多种rna包含本文所述的9种rna。在一个实例中，多种rna包含本文所述的10种rna。在一个实例中，本文所述的多种rna以单一组合物提供。在另一个实例中，本文所述的多种rna作为多种组合物提供。例如，可以分开提供多种中的每种rna。或者，可以分开提供多种中的至少一种rna，并且在组合物中一起提供多种中的两种或更多种。如本文所述，包含与seqidno:54、56、58、60、62和64中任一项中列出的rna序列基本上互补的效应子序列的rna可以选自由以下组成的组：包含seqidno:53中列出的效应子序列和seqidno:54中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:55中列出的效应子序列和seqidno:56中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:57中列出的效应子序列和seqidno:58中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:59中列出的效应子序列和seqidno:60中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:61中列出的效应子序列和seqidno:62中列出的效应子补体序列的rna；和包含seqidno:63中列出的效应子序列和seqidno:64中列出的效应子补体序列的rna。本文所述的多种rna中的至少一种或每种rna可以以shrna的形式存在。例如，本公开可以提供多种shrna。因此，多种rna中的一种或多种rna可以包含位于相应的效应子序列和效应子补体序列之间的环序列。合适的环序列可以选自本领域已知的环序列。或者，可以从头形成合适的茎环。在一个实例中，根据本公开的多种rna可以包含：(a)至少一种rna，其是包含seqidno:65-98中任一项中列出的序列的shrna；和(b)至少一种选自以下的rna：(i)rna，其是包含seqidno:65-98中任一项中列出的序列的shrna；或(ii)包含seqidno:99-104中任一项中列出的序列的shrna；和其中(a)处的shrna和(b)处的shrna是不同的。本公开还提供了包含编码如本文所述的一种或多种rna的序列的核酸。在一个实例中，核酸包含dna序列。在一个实例中，核酸是dna。本公开还提供了多种核酸，其包含：(a)第一核酸，其包含编码如本文所述rna的序列；和(b)第二核酸，其包含编码选自以下的rna的序列：(i)如本文所述的rna；或(ii)包含长度为至少17个核苷酸的效应子序列和效应子补体序列的rna，其中所述效应子序列与seqidno:54、56、58、60、62和64中任一项中列出的rna序列基本上互补；且其中由所述第一和第二核酸编码的rna包含不同的效应子序列。例如，由第二核酸编码的rna包含长度小于30个核苷酸的效应子序列。例如，合适的效应子序列的长度可以在17-29个核苷酸的范围内。在一个实例中，第一和第二核酸形成相同多核苷酸的分开部分(即，一系列共价连接的核苷酸残基)。在另一个实例中，第一和第二核酸形成不同多核苷酸的部分。如本文所述，包含与seqidno:54、56、58、60、62和64中任一项中列出的rna序列基本上互补的效应子序列的rna可以选自由以下组成的组：包含seqidno:53中列出的效应子序列和seqidno:54中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:55中列出的效应子序列和seqidno:56中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:57中列出的效应子序列和seqidno:58中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:59中列出的效应子序列和seqidno:60中列出的效应子补体序列的rna；包含seqidno:61中列出的效应子序列和seqidno:62中列出的效应子补体序列的rna；和包含seqidno:63中列出的效应子序列和seqidno:64中列出的效应子补体序列的rna。在一个实例中，一种或多种核酸编码shrna。例如，每种核酸编码shrna。在一个实例中，所述或每种核酸还编码位于效应子序列和效应子补体序列之间的环序列。合适的环序列对于本领域技术人员将是显而易见的和/或在本文描述的。在一个实例中，多种核酸包含：(a)第一核酸，其包含编码包含seqidno:65-98中任一项中列出的序列的shrna的序列；和(b)第二核酸，其包含编码选自以下的shrna的序列：(i)包含seqidno:65-98中任一项中列出的序列的shrna；或(ii)包含seqidno:99-104中任一项中列出的序列的shrna；且其中由第一和第二核酸编码的shrna是不同的。根据本公开的所述或每种核酸可以包含一种或多种转录终止子序列或与一种或多种转录终止子序列可操作连接。例如，所述或每种核酸可以在编码rna的序列的3’末端包含转录终止子序列。此类序列对于本领域技术人员是已知的，但可以包括“ttttt”或“tttttt”。或者/另外，根据本公开的所述或每种核酸可以包含转录起始序列或与转录起始序列可操作连接。例如，所述或每种核酸可以在编码rna的序列的5’末端包含转录起始序列。此类序列将是本领域技术人员已知的，但是可以包括“g”。或者/另外，根据本公开的所述或每种核酸可以包含一个或多个限制性位点，例如以便于将核酸克隆到克隆或表达载体中。例如，本文所述的核酸可以包括编码本公开的rna的序列的上游和/或下游的限制性位点。合适的限制酶识别序列将是本领域技术人员已知的。然而，在一个实例中，本公开的核酸可包括在5’末端，即编码rna的序列上游的bamh1限制性位点(ggatcc)和3’末端，即编码rna的序列下游的ecor1限制性位点(gaattc)。根据本公开的核酸还可以以dna定向的rna干扰(ddrnai)构建体的形式提供或被包含在dna定向的rna干扰(ddrnai)构建体中，所述dna定向的rna干扰构建体能够表达由核酸编码的本公开的一种或多种rna。在这方面，还提供了包含本公开的核酸的一种或多种ddrnai构建体。在另一个实例中，提供了多种各自编码本文所述的shrna的ddrnai构建体，其中：(a)多种ddrnai构建体中的至少一种包含本文所述的多种核酸的第一核酸；和(b)多种ddrnai构建体中的至少一种包含本文所述的多种核酸的第二核酸；且其中所述第一和第二核酸彼此不同。在另一个实例中，本公开的ddrnai构建体编码至少两种shrna，其中ddrnai构建体包含：(a)编码包含seqidno:65-98中任一项中列出的序列的第一shrna的核酸；和(b)包含编码第二shrna的dna序列的核酸，其中第二shrna包含长度至少17个核苷酸的效应子序列和效应子补体序列，其中所述效应子序列与由乙型肝炎病毒基因组编码的rna转录物的区域基本上互补；且其中所述第一和第二shrna是不同的。例如，第二shrna包含长度小于30个核苷酸的效应子序列。例如，合适的效应子序列的长度可以在17-29个核苷酸的范围内。在一个实例中，编码至少两种shrna的ddrnai构建体包含本文所述的多种核酸。在另一个实例中，编码至少两种shrna的ddrnai构建体包含含有编码第三shrna的dna序列的核酸，其中第三shrna包含长度至少17个核苷酸的效应子序列和效应子补体序列，其中效应子序列与由乙型肝炎病毒的基因组编码的rna转录物的区域基本上互补，且其中第三shrna不同于第一和第二shrna。例如，第三shrna包含长度小于30个核苷酸的效应子序列。例如，合适的效应子序列的长度可以在17-29个核苷酸的范围内。在本公开的示例性形式中，编码第三shrna的核酸是选自本文所述的多种核酸中的任一种核酸的核酸。本公开的ddrnai构建体的一个实例包含：(a)编码包含seqidno:92中列出的序列或由seqidno:92中列出的序列组成的shrna的核酸：(b)选自本文所述的多种核酸中的任一种核酸的核酸；和(c)编码包含seqidno:78中列出的序列或由seqidno:78中列出的序列组成的shrna的核酸；其中(b)处的核酸编码与(a)和(c)处的核酸编码的shrna不同的shrna。在另一个实例中，本公开的ddrnai构建体包含：(a)编码包含seqidno:92中列出的序列或由seqidno:92中列出的序列组成的shrna的第一核酸：(b)编码包含seqidno:101中列出的序列或由seqidno:101中列出的序列组成的shrna的第二核酸；和(c)编码包含seqidno:78中列出的序列或由seqidno:78中列出的序列组成的shrna的第三核酸。在另一个实例中，本公开的ddrnai构建体包含：(a)编码包含seqidno:92中列出的序列或由seqidno:92中列出的序列组成的shrna的第一核酸：(b)编码包含seqidno:79中列出的序列或由seqidno:79中列出的序列组成的shrna的第二核酸；和(c)编码包含seqidno:78中列出的序列或由seqidno:78中列出的序列组成的shrna的第三核酸。本公开的示例性ddrnai构建体在5’至3’方向包含：(a)编码包含seqidno:78中列出的序列或由seqidno:78中列出的序列组成的shrna的第一核酸：(b)编码包含seqidno:101中列出的序列或由seqidno:101中列出的序列组成的shrna的第二核酸；和(c)编码包含seqidno:92中列出的序列或由seqidno:92中列出的序列组成的shrna的第三核酸。本公开的ddrnai构建体的进一步示例在5’至3’方向包含：(a)编码包含seqidno:78中列出的序列或由seqidno:78中列出的序列组成的shrna的第一核酸：(b)编码包含seqidno:79中列出的序列或由seqidno:79中列出的序列组成的shrna的第二核酸；和(c)编码包含seqidno:92中列出的序列或由seqidno:92中列出的序列组成的shrna的第三核酸。在一个实例中，如本文所述的ddrnai构建体包含与编码本公开的shrna的所述或每种核酸可操作连接的单个启动子。在另一个实例中，编码本公开的shrna的每种核酸与分开的启动子可操作连接。例如，启动子位于编码shrna的相应核酸的上游。在包含多种启动子的ddrnai构建体中，启动子可以相同或不同。示例性的启动子是rnapoliii启动子，如例如u6和h1启动子。在包含各自与分开的启动子连接的编码三种shrna的核酸的ddrnai构建体的一个实例中，与两种核酸连接的启动子是相同的，并且与第三种核酸连接的启动子是不同的。例如，在包含编码shrna的三种核酸的上述ddrnai构建体的上下文中，第一和第三核酸连接到相同的分开的启动子，并且第二核酸连接到不同的启动子。在包含各自与分开的启动子连接的编码三种shrna的核酸的ddrnai构建体的一个实例中，所有启动子都是相同的。本公开的示例性ddrnai构建体在5’至3’方向包含：(a)与u6启动子可操作连接的编码shrna的第一核酸，所述shrna包含seqidno:78中列出的序列或由seqidno:78中列出的序列组成；(b)与u6启动子可操作连接的编码shrna的第二核酸，所述shrna包含seqidno:101中列出的序列或由seqidno:101中列出的序列组成；和(c)与u6启动子可操作连接的编码shrna的第三核酸，所述shrna包含seqidno:92中列出的序列或由seqidno:92中列出的序列组成。本公开的ddrnai构建体的进一步示例在5’至3’方向包含：(a)与u6启动子可操作连接的编码shrna的第一核酸，所述shrna包含seqidno:78中列出的序列或由seqidno:78中列出的序列组成；(b)与u6启动子可操作连接的编码shrna的第二核酸，所述shrna包含seqidno:79中列出的序列或由seqidno:79中列出的序列组成；和(c)与u6启动子可操作连接的编码shrna的第三核酸，所述shrna包含seqidno:92中列出的序列或由seqidno:92中列出的序列组成。本公开还提供了包含本公开的ddrnai构建体的表达载体。本公开还提供了多种表达载体，每种表达载体包含本公开的ddrnai构建体。例如，多种表达载体中的一种或多种包含如本文公开的多种ddrnai构建体。在另一个实例中，多种表达载体中的每种包含如本文所公开的多种ddrnai构建体。在另一个实例中，多种表达载体中的每种包含如本文所述的单个ddrnai构建体。按照本段所述的任何上述方式，多种表达载体可以共同表达根据本公开的多种shrna。在一个实例中，所述或每种表达载体是质粒或微型环(minicircle)。在一个实例中，质粒或微型环或表达载体或ddrnai构建体与阳离子dna结合聚合物复合。在另一个实例中，所述或每种表达载体是病毒载体。例如，病毒载体选自由以下组成的组：腺相关病毒(aav)载体、逆转录病毒载体、腺病毒载体(adv)和慢病毒(lv)载体。本公开还提供了包含如本文所述的ddrnai构建体和/或表达载体的组合物。在一个实例中，组合物还可以包含一种或多种药学可接受的载体和/或稀释剂。本公开还提供了治疗受试者中的hbv感染的方法，所述方法包括对受试者施用治疗有效量的本文所述的rna、多种rna、核酸、多种核酸、ddrnai构建体、多种ddrnai构建体、表达载体、多种表达载体和/或组合物。本公开还提供了在感染hbv的受试者中降低hbv病毒载量的方法，所述方法包括对受试者施用治疗有效量的本文所述的rna、多种rna、核酸、多种核酸、ddrnai构建体、多种ddrnai构建体、表达载体、多种表达载体和/或组合物。本公开还提供了在患有hbv感染的受试者中降低与hbv感染有关的一种或多种症状的严重性的方法，所述方法包括对受试者施用治疗有效量的本文所述的rna、多种rna、核酸、多种核酸、ddrnai构建体、多种ddrnai构建体、表达载体、多种表达载体和/或组合物。本公开还提供了在感染hbv的受试者中降低hbv的感染性的方法，所述方法包括对受试者施用治疗有效量的本文所述的rna、多种rna、核酸、多种核酸、ddrnai构建体、多种ddrnai构建体、表达载体、多种表达载体和/或组合物。本公开还提供了降低患有hbv感染的受试者形成慢性肝功能不全、肝硬化和/或肝细胞癌的风险的方法，所述方法包括对受试者施用治疗有效量的本文所述的rna、多种rna、核酸、多种核酸、ddrnai构建体、多种ddrnai构建体、表达载体、多种表达载体和/或组合物。根据本文所述的任何方法，在一个实例中，受试者患有急性hbv感染。或者，在一个实例中，受试者患有慢性hbv感染。在一个实例中，本文所述的方法包括抑制受试者中由hbv基因组编码的一个或多个转录物的表达。在一个实例中，接受本公开的rna、多种rna、核酸、多种核酸、ddrnai构建体、多种ddrnai构建体、表达载体、多种表达载体和/或组合物的受试者已经接受另一种用于治疗hbv感染的治疗剂的治疗。例如，受试者和/或hbv对于用其它已知用于治疗hbv感染的药剂的治疗是难治的或有抗性的。在另一个实例中，将本公开的rna、多种rna、核酸、多种核酸、ddrnai构建体、多种ddrnai构建体、表达载体、多种表达载体和/或组合物与另一种已知用于治疗hbv感染的治疗剂组合施用，即作为辅助疗法。在一个实例中，在试剂盒中提供本公开的组合物。例如，本公开的组合物与已知用于治疗hbv感染的一种或多种其它治疗剂一起包装。此类其它治疗剂将是本领域技术人员已知的。在另一实例中，组合物包装有用于本公开的方法的说明书。本公开还提供了本文所述的rna、多种rna、核酸、多种核酸、ddrnai构建体、多种ddrnai构建体、表达载体、多种表达载体和/或组合物在制备药物中的用途，所述药物例如用于治疗受试者中的hbv感染和/或本文公开的方法。在一个实例中，受试者患有急性hbv感染。在备选的实例中，受试者患有慢性hbv感染。本公开还提供了在疗法中使用的本文所述的rna、多种rna、核酸、多种核酸、ddrnai构建体、多种ddrnai构建体、表达载体、多种表达载体和/或组合物。例如，rna、多种rna、核酸、多种核酸、ddrnai构建体、多种ddrnai构建体、表达载体、多种表达载体和/或组合物可用于治疗受试者中的hbv感染和/或本文公开的方法。受试者可以患有急性hbv感染。在备选的实例中，受试者可以患有慢性hbv感染。根据本文所述的任何实例的hbv的治疗可以包括下列一项或多项：降低受试者中的hbv病毒载量、降低与hbv感染相关的症状的严重性和/或降低受试者中hbv的感染性。在一个实例中，药物将减少接受药物施用的受试者中的hbv基因转录产物。附图说明图1显示了hbv基因组的图谱和sirna靶区的位置。内部圆圈代表hbv基因组，这些周围的框代表指定的蛋白质编码序列，并且外部弯曲箭头代表hbvmrna。表1中列出的高度保守区域(区域1至区域10)的位置以及由表4中的shrna(shrna3、8和11)靶向的区域的位置用虚线标示。图2显示了在荧光素酶报告物测定系统中分别具有shrna9、shrna15和shrna27的反义和有义序列的sirna的hbv抑制活性。图3显示了分别具有shrna9、shrna27和shrna27的反向和有义序列的sirna在hepg2.2.15细胞中抑制来自与hbv抗原hbsag、hbcag和hbxag对应的区域的hbv转录物的活性。图4显示了相对于聚合酶基因和相应的hbv抗原hbsag、hbcag和hbxag的hbvsirna的位置。图5(a)-(b)显示了称为shrna1、shrna4、shrna15、shrna18、shrna35、shrna36和shrna39的shrna在荧光素酶报告物测定系统中抑制荧光素酶蛋白表达的能力；(c)-(d)显示了称为shrna5、shrna6、shrna7、shrna8、shrna35、shrna26、shrna27、shrna30和shrna40的shrna在荧光素酶报告物测定中抑制荧光素酶蛋白表达的能力；并且(e)-(f)显示了称为shrna9、shrna10、shrna11、shrna12、shrna33、shrna34、shrna19、shrna20、shrna23和shrna24的shrna在荧光素酶报告物测定中抑制荧光素酶蛋白表达的能力。图6(a)-(j)显示了称为shrna1、shrna15、shrna40、shrna27、shrna30、shrna9和shrna20的shrna以剂量依赖性方式抑制荧光素酶报告物测定系统中荧光素酶蛋白的表达。图7(a)-(j)显示了称为shrna1、shrna15、shrna40、shrna27、shrna30、shrna9和shrna20的shrna以剂量依赖性方式抑制荧光素酶报告物测定系统中荧光素酶蛋白表达的能力。图8(a)-(j)显示了称为shrna1、shrna15、shrna40、shrna27、shrna30、shrna9和shrna20的shrna在hek293细胞中以剂量依赖性方式抑制荧光素酶报告物测定系统中荧光素酶蛋白的表达的能力，所述hek293细胞用非特异性填充质粒转染以确保将恒定水平的dna转染入细胞。图9(a)-(b)显示了表达称为shrna9、shrna13、shrna14、shrna20、shrna21和shrna22的shrna的ddrnai构建体抑制荧光素酶报告物测定系统中荧光素酶蛋白表达的能力。图10显示了通过qpcr获得的标准曲线，测定在用hbvadv转导后每个细胞表达的shrna数目。图11(a)-(d)分别显示了在以下各项中分别称为shrna14、shrna15、shrna37和shrna28的shrna的表达水平：(i)以各种moi单独用表达相应shrna的hbvshrnaadv载体转导的hepg2.2.15细胞；(ii)以各种moi用表达分别称为shrna14、shrna37和shrna28的shrna的三种hbvshrnaadv载体同时转导的hepg2.2.15细胞；和(iii)以各种moi用表达分别称为shrna14、shrna15和shrna28的shrna的三种hbvshrnaadv载体同时转导的hepg2.2.15细胞。图12(a)-(f)显示了在下述hepg2.2.15细胞中相对于gapdh表达，在与hbv抗原hbsag、hbcag和hbxag对应的区域处hbv转录物的抑制水平，所述hepg2.2.15细胞用以下各项转导：(a)表达shrna14的hbvshrnaadv载体；(b)表达shrna15的hbvshrnaadv载体；(c)表达shrna37的hbvshrnaadv载体；(d)表达shrna28的hbvshrnaadv载体；(e)在各种moi下的表达分别称为shrna14、shrna37和shrna28的shrna的三种hbvshrnaadv载体；和(f)在各种moi下的分别表达称为shrna14、shrna15和shrna28的shrna的三种hbvshrnaadv载体。图13(a)-(d)显示了在以下各项中分别称为shrna14、shrna15、shrna37和shrna28的shrna的表达水平：(i)以moi100单独用表达相应shrna14、shrna15、shrna37或shrna28的hbvshrnaadv载体转导的hepg2.2.15细胞；(ii)以moi100用表达分别称为shrna14、shrna37和shrna28的三种shrna的三重hbvshrnaadv载体转导的hepg2.2.15细胞；和(iii)以moi100用表达分别称为shrna14、shrna15和shrna28的三种shrna的三重hbvshrnaadv载体转导的hepg2.2.15细胞。图14(a)-(f)显示了在下述hepg2.2.15细胞中相对于gapdh表达，在与hbv抗原hbsag、hbcag和hbxag对应的区域处hbv转录物的抑制水平，所述hepg2.2.15细胞用以下各项转导：(a)表达shrna14的hbvshrnaadv载体；(b)表达shrna15的hbvshrnaadv载体；(c)表达shrna37的hbvshrnaadv载体；(d)表达shrna28的hbvshrnaadv载体；(e)表达称为shrna14、shrna37和shrna28的三种shrna的三重hbvshrnaadv载体；和(f)表达称为shrna14、shrna15和shrna28的三种shrna的三重hbvshrnaadv载体。图15显示了用hbv接种并且以moi10用三重hbvshrnaadv载体处理的人肝细胞的下列各项，所述三重hbvshrnaadv载体表达称为shrna14、shrna37和shrna28的三种shrna：(a)称为shrna14、shrna37和shrna28的shrna的表达水平；(b)对应于hbv抗原hbsag、hbcag和hbxag的区域处hbv转录物的抑制水平；(c)细胞内和细胞外hbvdna的水平；(d)对应于hbv抗原hbcag和hbsag的区域处的细胞外hbv转录物水平；和(e)cccdna的水平。图16是显示在56天的过程内动物中的细胞外hbvdna的血清水平(以log拷贝/ml表示)的图，所述动物来自(i)仅用盐水处理的组1(对照)、(ii)用中等剂量的三重hbvshrnaadv载体处理的组2、和(iii)用高剂量的三重hbvshrnaadv载体处理的组3。图17是显示在56天的过程内动物中的细胞外hbvdna的血清水平(以拷贝/ml表示)的图，所述动物来自(i)仅用盐水处理的组1(对照)、(ii)用中等剂量的三重hbvshrnaadv载体处理的组2、和(iii)用高剂量的三重hbvshrnaadv载体处理的组3。图18是在56天的过程内显示动物中的hbsag的血清水平(iu/ml)的图，所述动物来自(i)仅用盐水处理的组1(对照)、(ii)用中等剂量的三重hbvshrnaadv载体处理的组2、和(iii)用高剂量的三重hbvshrnaadv载体处理的组3。图19是显示在56天的过程内动物中的hbeag的血清水平(iu/ml)的图，所述动物来自(i)仅用盐水处理的组1(对照)、(ii)用中等剂量的三重hbvshrnaadv载体处理的组2、和(iii)用高剂量的三重hbvshrnaadv载体处理的组3。图20显示了处理后56天，动物中的细胞内hbvdna的水平(细胞内hbvdna的拷贝/100ngdna)，所述动物来自(i)仅用盐水处理的组1(对照)、(ii)用中等剂量的三重hbvshrnaadv载体处理的组2、和(iii)用高剂量的三重hbvshrnaadv载体处理的组3。该图显示了相对于对照盐水处理，通过中等剂量和高剂量的三重hbvshrnaadv载体对细胞内hbvdna的抑制水平。图21显示了处理后56天，动物中的细胞内cccdna的水平(hbvcccdna的拷贝/100ngdna)，所述动物来自(i)仅用盐水处理的组1(对照)、(ii)用中等剂量的三重hbvshrnaadv载体处理的组2，和(iii)用高剂量的三重hbvshrnaadv载体处理的组3。此图显示了相对于对照盐水处理，通过中等剂量和高剂量的三重hbvshrnaadv载体对hbvcccdna的抑制水平。图22显示了在以中等剂量和高剂量用三重hbvshrnaadv载体处理后56天，与由三重hbvshrnaadv载体(分别为shrna14、shrna37和shrna28)表达的shrna对应的hbv病毒转录物的抑制水平。序列表的索引seqidno:1：称为区域1的hbv基因组内靶区域的dna序列。seqidno:2：称为区域2的hbv基因组内靶区域的dna序列。seqidno:3：称为区域3的hbv基因组内靶区域的dna序列。seqidno:4：称为区域4的hbv基因组内靶区域的dna序列。seqidno:5：称为区域5的hbv基因组内靶区域的dna序列。seqidno:6：称为区域6的hbv基因组内靶区域的dna序列。seqidno:7：称为区域7的hbv基因组内靶区域的dna序列。seqidno:8：称为区域8的hbv基因组内靶区域的dna序列。seqidno:9：称为区域9的hbv基因组内靶区域的dna序列。seqidno:10：称为区域10的hbv基因组内靶区域的dna序列。seqidno:11：称为shrna1和shrna4的shrna的rna效应子序列。seqidno:12：称为shrna1和shrna4的shrna的rna效应子补体序列。seqidno:13：称为shrna2的shrna的rna效应子序列。seqidno:14：称为shrna2的shrna的rna效应子补体序列。seqidno:15：称为shrna3的shrna的rna效应子序列。seqidno:16：称为shrna3的shrna的rna效应子补体序列。seqidno:17：称为shrna5和shrna6的shrna的rna效应子序列。seqidno:18：称为shrna5和shrna6的shrna的rna效应子补体序列。seqidno:19：称为shrna7和shrna8的shrna的rna效应子序列。seqidno:20：称为shrna7和shrna8的shrna的rna效应子补体序列。seqidno:21：称为shrna9和shrna10的shrna的rna效应子序列。seqidno:22：称为shrna9和shrna10的shrna的rna效应子补体序列。seqidno:23：称为shrna11和shrna12的shrna的rna效应子序列。seqidno:24：称为shrna11和shrna12的shrna的rna效应子补体序列。seqidno:25：称为shrna13的shrna的rna效应子序列。seqidno:26：称为shrna13的shrna的rna效应子补体序列。seqidno:27：称为shrna14的shrna的rna效应子序列。seqidno:28：称为shrna14的shrna的rna效应子补体序列。seqidno:29：称为shrna15和shrna18的shrna的rna效应子序列。seqidno:30：称为shrna15和shrna18的shrna的rna效应子补体序列。seqidno:31：称为shrna16的shrna的rna效应子序列。seqidno:32：称为shrna16的shrna的rna效应子补体序列。seqidno:33：称为shrna17的shrna的rna效应子序列。seqidno:34：称为shrna17的shrna的rna效应子补体序列。seqidno:35：称为shrna19和shrna20的shrna的rna效应子序列。seqidno:36：称为shrna19和shrna20的shrna的rna效应子补体序列。seqidno:37：称为shrna21的shrna的rna效应子序列。seqidno:38：称为shrna21的shrna的rna效应子补体序列。seqidno:39：称为shrna22的shrna的rna效应子序列。seqidno:40：称为shrna22的shrna的rna效应子补体序列。seqidno:41：称为shrna23和shrna24的shrna的rna效应子序列。seqidno:42：称为shrna23和shrna24的shrna的rna效应子补体序列。seqidno:43：称为shrna25和shrna26的shrna的rna效应子序列。seqidno:44：称为shrna25和shrna26的shrna的rna效应子补体序列。seqidno:45：称为shrna27和shrna30的shrna的rna效应子序列。seqidno:46：称为shrna27和shrna30的shrna的rna效应子补体序列。seqidno:47：称为shrna28和shrna31的shrna的rna效应子序列。seqidno:48：称为shrna28和shrna31的shrna的rna效应子补体序列。seqidno:49：称为shrna29和shrna32的shrna的rna效应子序列。seqidno:50：称为shrna29和shrna32的shrna的rna效应子补体序列。seqidno:51：称为shrna33和shrna34的shrna的rna效应子序列。seqidno:52：称为shrna33和shrna34的shrna的rna效应子补体序列。seqidno:53：称为shrna35的shrna的rna效应子序列。seqidno:54：称为shrna35的shrna的rna效应子补体序列。seqidno:55：称为shrna36的shrna的rna效应子序列。seqidno:56：称为shrna35的shrna的rna效应子补体序列。seqidno:57：称为shrna37的shrna的rna效应子序列。seqidno:58：称为shrna37的shrna的rna效应子补体序列。seqidno:59：称为shrna38的shrna的rna效应子序列。seqidno:60：称为shrna38的shrna的rna效应子补体序列。seqidno:61：称为shrna39的shrna的rna效应子序列。seqidno:62：称为shrna39的shrna的rna效应子补体序列。seqidno:63：称为shrna40的shrna的rna效应子序列。seqidno:64：称为shrna40的shrna的rna效应子补体序列。seqidno:65：称为shrna1的shrna的rna序列。seqidno:66：称为shrna2的shrna的rna序列seqidno:67：称为shrna3的shrna的rna序列seqidno:68：称为shrna4的shrna的rna序列seqidno:69：称为shrna5的shrna的rna序列seqidno:70：称为shrna6的shrna的rna序列seqidno:71：称为shrna7的shrna的rna序列seqidno:72：称为shrna8的shrna的rna序列seqidno:73：称为shrna9的shrna的rna序列seqidno:74：称为shrna10的shrna的rna序列seqidno:75：称为shrna11的shrna的rna序列seqidno:76：称为shrna12的shrna的rna序列seqidno:77：称为shrna13的shrna的rna序列seqidno:78：称为shrna14的shrna的rna序列seqidno:79：称为shrna15的shrna的rna序列seqidno:80：称为shrna16的shrna的rna序列seqidno:81：称为shrna17的shrna的rna序列seqidno:82：称为shrna18的shrna的rna序列seqidno:83：称为shrna19的shrna的rna序列seqidno:84：称为shrna20的shrna的rna序列seqidno:85：称为shrna21的shrna的rna序列seqidno:86：称为shrna22的shrna的rna序列seqidno:87：称为shrna23的shrna的rna序列seqidno:88：称为shrna24的shrna的rna序列seqidno:89：称为shrna25的shrna的rna序列seqidno:90：称为shrna26的shrna的rna序列seqidno:91：称为shrna27的shrna的rna序列seqidno:92：称为shrna28的shrna的rna序列seqidno:93：称为shrna29的shrna的rna序列seqidno:94：称为shrna30的shrna的rna序列seqidno:95：称为shrna31的shrna的rna序列seqidno:96：称为shrna32的shrna的rna序列seqidno:97：称为shrna33的shrna的rna序列seqidno:98：称为shrna34的shrna的rna序列seqidno:99：称为shrna35的shrna的rna序列seqidno:100：称为shrna36的shrna的rna序列seqidno:101：称为shrna37的shrna的rna序列seqidno:102：称为shrna38的shrna的rna序列seqidno:103：称为shrna39的shrna的rna序列seqidno:104：称为shrna40的shrna的rna序列seqidno:105：pbl183_hbv_triple_v2的dna序列seqidno:106：pbl183_hbv_triple_v1的dna序列具体实施方式概述在整个说明书中，除非另有明确规定或上下文另有要求，提及单个步骤、特征、物质组成、步骤组或特征或物质组成的组应当理解为包括那些步骤、特征、物质组成、步骤组或特征或物质组成的组中的一个和多个(即一个以上)。本领域技术人员将理解，本公开易于除具体描述的那些之外的变化和修改。应当理解，本公开包括所有此类变化和修改。本公开还包括在本说明书中单独或共同提及或指示的所有步骤、特征、组合物和化合物，以及所述步骤或特征的任何和所有组合或任何两种或更多种。本公开的范围不限于本文所述的具体实例，其仅意图为了举例的目的。功能等同的产品、组合物和方法显然在本公开的范围内。除非另有明确规定，本文的本公开的任何实例应当理解为在必要修改后适用于本公开的任何其它实例。除非另有具体定义，本文使用的所有技术和科学术语应理解为具有与本领域(例如，在细胞培养、分子遗传学、免疫学、免疫组织化学、蛋白质化学和生物化学中)普通技术人员通常理解的相同的含义。除非另有指示，本公开中使用的重组dna、重组蛋白、细胞培养和免疫技术是本领域技术人员公知的标准方法。贯穿来源文献描述并且解释了此类技术，如j.perbal,apracticalguidetomolecularcloning,johnwileyandsons(1984),j.sambrook等人molecularcloning:alaboratorymanual,coldspringharborlaboratorypress(1989),t.a.brown(编),essentialmolecularbiology:apracticalapproach,第1和2卷,irlpress(1991),d.m.glover和b.d.hames(编),dnacloning:apracticalapproach,第1-4卷,irlpress(1995和1996)，以及f.m.ausubel等人(编),currentprotocolsinmolecularbiology,greenepub.associatesandwiley-interscience(1988，包括到目前为止的所有更新)，edharlow和davidlane(编)antibodies:alaboratorymanual,coldspringharborlaboratory,(1988)，以及j.e.coligan等人(编)currentprotocolsinimmunology,johnwiley&sons(包括到目前为止的所有更新)。在整个说明书中，除非上下文另有要求，词语“包含”或变型理解为暗示包括所述的步骤或要素或整数或步骤或元件或整数的组，但不排除任何其它步骤或要素或整数或要素或整数的组。术语“和/或”，例如“x和/或y”应理解为“x和y”或“x或y”，并且应当理解为对这两种含义或任一含义提供明确的支持。选择的定义“rna”是指包含至少一个核糖核苷酸残基的分子。“核糖核苷酸”是指在β-d-核糖-呋喃糖部分的2’位处具有羟基的核苷酸。术语包括双链rna、单链rna、分离的rna如部分纯化的rna、基本上纯的rna、合成的rna、重组产生的rna，以及通过添加、缺失、取代和/或改变一个或多个核苷酸而与天然存在的rna不同的改变的rna。此类改变可以包括将非核苷酸材料添加到诸如sina的末端或内部，例如在rna的一个或多个核苷酸处。本公开的rna分子中的核苷酸还可以包含非标准核苷酸，如非天然存在的核苷酸或化学合成的核苷酸或脱氧核苷酸。这些改变的rna可以称为类似物或天然存在的rna的类似物。在一个实例中，rna中的所有残基都是核糖核苷酸。如本文所用，术语“rnai试剂”是指能够引发“rna干扰”或“rnai”的rna。术语“rna干扰”或“rnai”通常指细胞的细胞质中由双链rna(dsrna)分子引发的基因表达的rna依赖性沉默。dsrna分子降低或抑制靶核酸序列的转录产物，从而使基因沉默。如本文所用，术语“双链rna”或“dsrna”是指具有双链体结构并且包含彼此具有相似长度的效应子序列和效应子补体序列的rna分子。效应子序列和效应子补体序列可以在单个rna链或分开的rna链中。“效应子序列”(通常被称为“前导链”)与靶序列基本上互补，在本案中，所述靶序列是hbv基因组的rna转录产物的区域。“效应子序列”也可以称为“反义序列”。“效应子补体序列”将与效应子序列具有足够的互补性，使得其可以与效应子序列退火以形成双链体。在这方面，效应子补体序列将与靶序列的区域基本上同源。如本领域技术人员将显而易见的，术语“效应子补体序列”也可以称为“效应子序列的互补物”或有义序列。如本文所用，术语“双链体”是指在两个互补或基本上互补的核酸(例如rna)或单链核酸(例如rna)的两个互补或基本上互补的区域中通过watson-crick碱基配对或允许互补或基本上互补的核苷酸序列之间的稳定化双链体的任何其它方式彼此形成碱基对的区域。技术人员将理解，在双链体区域内，不需要100％的互补性；可允许基本上互补。基本上互补可以包括79％或更大的互补性。例如，由19个碱基对(即18个碱基对和1个错配)组成的双链体区域中的单一错配导致94.7％的互补性，使双链体区域为基本上互补的。在另一个实例中，由19个碱基对(即17个碱基对和2个错配)组成的双链体区域中的两个错配导致89.5％的互补性，使双链体区域为基本上互补的。在另一个实例中，由19个碱基对(即16个碱基对和3个错配)组成的双链体区域中的3个错配导致84.2％的互补性，使双链体区域为基本上互补的，等等。dsrna可以作为发夹或茎环结构提供，双链体区域由通过称为茎环的至少2个核苷酸序列连接的效应子序列和效应子补体序列组成。当dsrna作为发夹或茎环结构提供时，它可以称为“发夹rna”或“短发夹rnai剂”或“shrna”。如本文所用，关于序列的术语“互补”是指通过watson-crick碱基配对的序列的互补物，其中鸟嘌呤(g)与胞嘧啶(c)配对，并且腺嘌呤(a)与尿嘧啶(u)或胸腺嘧啶(t)配对。序列可以与另一序列的整个长度互补，或者它可以与另一序列的规定部分或长度互补。本领域技术人员将认识到u可存在于rna中，并且t可存在于dna中。因此，rna或dna序列之一内的a可以与rna序列中的u或dna序列中的t配对。如本文所用，术语“基本上互补”用于指示足够程度的互补性或精确配对，使得在核酸序列之间，例如在效应子序列和效应子补体序列之间或在效应子序列和靶序列之间发生稳定且特异性的结合。应当理解，核酸的序列不需要与其靶标或互补物的序列是100％互补的。该术语包括除突出端之外与另一序列互补的序列。在某些情况下，除1-2个错配之外，序列与其它序列互补。在某些情况下，除1个错配之外，序列是互补的。在某些情况下，除2个错配之外，序列是互补的。在其它情况下，除3个错配之外，序列是互补的。在其它情况下，除4个错配之外，序列是互补的。如本公开的rna的上下文中所用，术语“编码”应理解为意指rna能够从dna模板转录。因此，编码本公开的rna的核酸将包含充当相应rna转录的模板的dna序列。术语“dna定向的rnai构建体”或“ddrnai构建体”是指包含dna序列的核酸，所述dna序列在转录时产生引发rnai的rna分子。ddrnai构建体可以包含核酸，所述核酸被转录为能够自身退火成具有通过至少2个核苷酸的茎环连接的双链体区域的发夹结构的单一rna(即shrna)，或者具有多种shrna的单一rna或多种rna转录物，每种能够分别作为单一shrna折叠。ddrnai构建体可以在表达载体，即“ddrnai表达构建体”内，例如与启动子可操作连接。在一个实例中，ddrnai构建体仅包含dna。如本文所用，术语“可操作连接的”或“可操作的键联”(或类似的)是指编码核酸序列以促进编码序列表达的方式与调节序列(例如启动子)连接或缔合。调控序列包括启动子、增强子和其它表达控制元件，其是公认的并且选择用于指导编码序列的表达。“载体”将理解为指用于将核酸导入细胞中的载体。载体包括但不限于质粒、噬菌粒、病毒、细菌、和源自病毒或细菌来源的媒介物。“质粒”是环状的双链dna分子。根据本公开使用的有用的载体类型是病毒载体，其中将异源dna序列插入病毒基因组中，所述病毒基因组可经修饰以缺失一个或多个病毒基因或其部分。某些载体能够在宿主细胞中自主复制(例如，具有在宿主细胞中发挥功能的复制起点的载体)。其它载体可以稳定地整合到宿主细胞的基因组中，并因此与宿主基因组一起复制。如本文所用，术语“表达载体”将理解为意指能够表达本公开的rna分子的载体。如本文所用，术语“治疗”或“处理”及其变型是指设计为在临床病理过程期间改变所处理的个体或细胞的自然过程的临床干预。治疗的期望效果包括降低疾病进展的速率、改善或缓解疾病状态、和消退或改善的预后。因此，hbv感染的治疗包括降低感染hbv的受试者中的hbv病毒载量、降低与hbv感染相关的症状的严重性、降低受试者中的hbv感染性。例如，如果实现了上述一种或多种治疗结果，则成功“治疗”个体。“治疗有效量”至少是实现特定疾病(例如hbv感染)的可测量改善所需的最小浓度或量。本文的治疗有效量可以随因素，诸如患者的疾病状态、年龄、性别和重量，以及rna、ddrnai或表达构建体在个体中引起期望应答的能力而变化。治疗有效量也是治疗有益效果超出rna、ddrnai或表达构建体的任何有毒或不利效应的量。如本文所用，“受试者”或“患者”可以是感染hbv的人或非人动物。“非人动物”可以是灵长类、家畜(例如绵羊、马、牛、猪、驴)、伴侣动物(例如宠物，如狗和猫)、实验室测试动物(例如小鼠、兔、大鼠、豚鼠)、表演动物(例如赛马、骆驼、灰狗)或圈养野生动物。在一个实例中，受试者或患者是哺乳动物。在一个实例中，受试者或患者是灵长类。在一个实例中，受试者或患者是人。术语“降低的表达”、“表达降低”等是指来自靶基因，例如hbvpol基因或其它hbv基因的蛋白质和/或mrna产物水平的缺乏或可观察到的降低。降低不必须是绝对的，而是可以是由于本公开的rna所实现的rnai而足以产生可检测或可观察到的变化的部分降低。可以通过相对于缺乏rna、ddrnai构建体或表达构建体的细胞测定来自靶核酸的mrna和/或蛋白质产物的水平降低来测量降低，并且可以少至1％、5％或10％，或可以是绝对的，即100％抑制。减少的效应可以通过检查外在特性，即细胞或生物体的定量和/或定性表型来确定，并且还可以包括施用本公开的ddrnai构建体后的病毒载量的评估。用于rnai的药剂在一个实例中，本公开提供了rna，即能够引发rnai，其中rna包含长度为至少17个核苷酸的效应子序列和效应子补体序列，其中效应子序列与由表1中列出的hbv基因组的区域编码的rna转录物基本上互补。例如，本公开的rna将包含长度小于30个核苷酸的效应子序列。例如，合适的效应子序列的长度可以在17-29个核苷酸的范围内。在一个实例中，效应子序列与由表1中列出的区域1编码的rna转录物基本上互补。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域1编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有4个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域1编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有3个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域1编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有2个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域1编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有1个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域1编码的rna转录物是100％互补的。在一个实例中，效应子序列与由表1中列出的区域2编码的rna转录物基本上互补。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域2编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有4个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域2编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有3个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域2编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有2个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域2编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有1个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域2编码的rna转录物是100％互补的。在一个实例中，效应子序列与由表1中列出的区域3编码的rna转录物基本上互补。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域3编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有4个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域3编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有3个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域3编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有2个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域3编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有1个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域3编码的rna转录物是100％互补的。在一个实例中，效应子序列与由表1中列出的区域4编码的rna转录物基本上互补。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域4编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有4个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域4编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有3个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域4编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有2个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域4编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有1个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域4编码的rna转录物是100％互补的。在一个实例中，效应子序列与由表1中列出的区域5编码的rna转录物基本上互补。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域5编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有4个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域5编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有3个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域5编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有2个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域5编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有1个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域5编码的rna转录物是100％互补的。在一个实例中，效应子序列与由表1中列出的区域6编码的rna转录物基本上互补。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域6编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有4个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域6编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有3个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域6编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有2个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域6编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有1个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域6编码的rna转录物是100％互补的。在一个实例中，效应子序列与由表1中列出的区域7编码的rna转录物基本上互补。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域7编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有4个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域7编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有3个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域7编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有2个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域7编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有1个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域7编码的rna转录物是100％互补的。在一个实例中，效应子序列与由表1中列出的区域8编码的rna转录物基本上互补。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域8编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有4个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域8编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有3个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域8编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有2个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域8编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有1个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域8编码的rna转录物是100％互补的。在一个实例中，效应子序列与由表1中列出的区域9编码的rna转录物基本上互补。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域9编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有4个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域9编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有3个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域9编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有2个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域9编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有1个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域9编码的rna转录物是100％互补的。在一个实例中，效应子序列与由表1中列出的区域10编码的rna转录物基本上互补。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域10编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有4个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域10编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有3个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域10编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有2个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域10编码的rna转录物基本上互补，并且相对于所述rna转录物含有1个错配碱基。例如，效应子序列可以与由表1中列出的区域10编码的rna转录物是100％互补的。在一个实例中，本公开的rna包含rna，其包含与如本文所述的表1中列出的区域1、区域5、区域9、区域4或区域6编码的rna转录物基本上互补的效应子序列。在一个实例中，本公开的rna是短干扰rna(sirna)双链体或双链rna(dsrna)。在一个实例中，本公开提供了多种rna，即能够引发rnai，其中每种rna包含长度至少17个核苷酸的效应子序列和效应子补体序列，其中每种rna的效应子序列与由表1中列出的hbv基因组区域编码的rna转录物基本上互补。例如，多种中的每种rna包含长度小于30个核苷酸的效应子序列。例如，合适的效应子序列的长度可以在17-29个核苷酸的范围内。根据本公开的多种rna可以包含多达10种如本文所述的rna。在一个实例中，多种rna包含本文所述的2种rna。在另一个实例中，多种rna包含本文所述的3种rna。在一个实例中，多种rna包含本文所述的4种rna。在一个实例中，多种rna包含本文所述的5种rna。在一个实例中，多种rna包含本文所述的6种rna。在一个实例中，多种rna包含本文所述的7种rna。在一个实例中，多种rna包含本文所述的8种rna。在一个实例中，多种rna包含本文所述的9种rna。在一个实例中，多种rna包含本文所述的10种rna。因此，根据本公开的多种rna可以包含一种或多种本文所述的rna，其包含与由表1中列出的hbv基因组区域编码的rna转录物基本上互补的效应子序列。在一个实例中，本文所述的多种rna作为单一组合物一起提供。在另一个实例中，本文所述的多种rna作为多种组合物提供。例如，可以分开提供多种中的每种rna。或者，可以分开提供多种中的至少一种rna，并且在组合物中一起提供多种中的两种或更多种。在一个实例中，多种中的rna的效应子序列与由表1中的区域1编码的rna转录物基本上互补。在一个实例中，多种中的rna的效应子序列与由表1中的区域5编码的rna转录物基本上互补。在一个实例中，多种中的rna的效应子序列与由表1中的区域9编码的rna转录物基本上互补。在一个实例中，多种中的rna的效应子序列与由表1中的区域4编码的rna转录物基本上互补。在一个实例中，多种中的rna的效应子序列与由表1中的区域6编码的rna转录物基本上互补。在一个实例中，多种中的rna的效应子序列与由表1中的区域9编码的rna转录物基本上互补，并且多种中的另一种rna的效应子序列与由表1中的区域4编码的rna转录物基本上互补。在一个实例中，多种中的rna的效应子序列与由表1中的区域9编码的rna转录物基本上互补，并且多种中的另一种rna的效应子序列与由表1中的区域4编码的rna转录物基本上互补，并且多种中的另一种rna的效应子序列是由表1中的区域5编码的rna转录物。在一个实例中，本公开提供了多种rna，即能够引发rnai，其中：(i)至少一种rna包含长度至少17个核苷酸的效应子序列和效应子补体序列，其中每种rna的效应子序列与由表1中列出的hbv基因组区域编码的rna转录物基本上互补；并且(ii)至少一种rna包含效应子序列和效应子补体序列，其中每种rna的效应子序列包含表4中标记为“效应子”的栏中列出的序列或由表4中标记为“效应子”的栏中列出的序列组成。在一个实例中，rna的效应子补体序列包含表4中标记为“效应子互补物”的栏中列出的序列或由表4中标记为“效应子互补物”的栏中列出的序列组成。例如，每种rna包含长度为小于30个核苷酸的效应子序列。例如，合适的效应子序列的长度可以在17-29个核苷酸的范围内。在一个实例中，(i)处的rna包含与由表1中区域1编码的rna转录物基本上互补的效应子序列，并且(ii)处的rna包含由seqidno:57中列出的序列组成的效应子序列。在一个实例中，(ii)处的rna包含由seqidno:58中列出的序列组成的效应子补体序列。在一个实例中，(i)处的rna包含与表1中的区域5编码的rna转录物基本上互补的效应子序列，并且(ii)处的rna包含由seqidno:57中列出的序列组成的效应子序列。在一个实例中，(ii)处的rna包含由seqidno:58中列出的序列组成的效应子补体序列。在一个实例中，(i)处的rna包含与表1中的区域9编码的rna转录物基本上互补的效应子序列，并且(ii)处的rna包含由seqidno:57中列出的序列组成的效应子序列。在一个实例中，(ii)处的rna包含由seqidno:58中列出的序列组成的效应子补体序列。在一个实例中，(i)处的rna包含与表1中的区域4编码的rna转录物基本上互补的效应子序列，并且(ii)处的rna包含由seqidno:57中列出的序列组成的效应子序列。在一个实例中，(ii)处的rna包含由seqidno:58中列出的序列组成的效应子补体序列。在一个实例中，(i)处的rna包含与由表1中的区域6编码的rna转录物基本上互补的效应子序列，并且(ii)处的rna包含由seqidno:57中列出的序列组成的效应子序列。在一个实例中，(ii)处的rna包含由seqidno:58中列出的序列组成的效应子补体序列。在一个实例中，(i)处的rna包含与由表1中的区域9编码的rna转录物基本上互补的效应子序列，并且(i)处的另一种rna包含与由表1中的区域4编码的rna转录物基本上互补的效应子序列，并且(ii)处的rna包含由seqidno:57中列出的序列组成的效应子序列。在一个实例中，(ii)处的rna包含由seqidno:58中列出的序列组成的效应子补体序列。在一个实例中，(i)处的rna包含与由表1中的区域9编码的rna转录物基本上互补的效应子序列，并且(i)处的另一种rna包含与由表1中的区域4编码的rna转录物基本上互补的效应子序列，并且多种中的另一种rna的效应子序列是由表1中的区域5编码的rna转录物，并且(ii)处的rna包含由seqidno:57中列出的序列组成的效应子序列。在一个实例中，(ii)处的rna包含由seqidno:58中列出的序列组成的效应子补体序列。根据本公开的示例性rna包含效应子序列和效应子补体序列，其中效应子序列与表2中标记为“效应子互补物”的栏中描述的效应子补体序列基本上互补。在一个实例中，本公开提供了rna，即能够引发rnai，其包含除4个碱基错配之外与表2中标记为“效应子互补物”的栏中描述的序列基本上互补的效应子序列。在一个实例中，本公开提供了rna，即能够引发rnai，其包含除3个碱基错配之外与表2中标记为“效应子互补物”的栏中描述的序列基本上互补的效应子序列。在一个实例中，本公开提供了rna，即能够引发rnai，其包含除2个碱基错配之外与表2中标记为“效应子互补物”的栏中描述的序列基本上互补的效应子序列。在一个实例中，本公开提供了rna，即能够引发rnai，其包含除单一碱基错配之外与表2中标记为“效应子互补物”的栏中描述的序列基本上互补的效应子序列。在本公开的rna包含除1、2、3或4个错配之外与表2中标记为“效应子互补物”的栏中描述的序列基本上互补的效应子序列的情况下，效应子序列仍然能够与表2中相应的效应子补体序列形成双链体。在一个实例中，本公开提供了rna，即能够引发rnai，其包含效应子序列和效应子补体序列，其中效应子序列与表2中标记为“效应子互补物”的栏中所述的序列是100％互补的。在一个实例中，rna的效应子补体序列与其效应子序列基本上互补。例如，相对于关联效应子序列，rna的效应子补体序列可以包含1、2、3或4个错配，但仍然能够与其形成双链体。根据本公开的示例性rna包含如表2中所述的相应的效应子和效应子补体序列。在一个实例中，rna的相应效应子和效应子补体序列可以作为例如通过watson-crick碱基配对形成双链体的单独核酸(dsrna)提供。在一个实例中，本公开提供了rna，即能够引发rnai，其中rna包含效应子序列和效应子补体序列，其中效应子序列由表2中标记为“效应子”的栏中列出的序列组成。在一个实例中，效应子补体序列由表2中标记为“效应子互补物”的栏中列出的序列组成。本公开的示例性rna包含由seqidno:47中列出的序列组成的效应子序列和由seqidno:48中列出的序列组成的效应子补体序列。本公开的示例性rna包含由seqidno:27中列出的序列组成的效应子序列和由seqidno:28中列出的序列组成的效应子补体序列。本公开的示例性rna包含由seqidno:29中列出的序列组成的效应子序列和由seqidno:30中列出的序列组成的效应子补体序列。本公开的示例性rna包含由seqidno:11中列出的序列组成的效应子序列和由seqidno:12中列出的序列组成的效应子补体序列。本公开的示例性rna包含由seqidno:45中列出的序列组成的效应子序列和由seqidno:46中列出的序列组成的效应子补体序列。本公开的示例性rna包含由seqidno:35中列出的序列组成的效应子序列和由seqidno:36中列出的序列组成的效应子补体序列。本公开的示例性rna包含由seqidno:21中列出的序列组成的效应子序列和由seqidno:22中列出的序列组成的效应子补体序列。在一个实例中，本公开提供了多种rna，即能够引发rnai，其中每种rna包含效应子序列和效应子补体序列，其中每种rna的效应子序列与表2中标记为“效应子互补物”的栏中列出的效应子补体序列基本上互补。本文描述了包含与表2中标记为“效应子互补物”的栏中列出的效应子补体序列基本上互补的效应子序列的示例性rna。在一个实例中，每种rna的效应子序列由表2中标记为“效应子”的栏中列出的序列组成。在一个实例中，每种rna的效应子补体序列由表2中标记为“效应子互补物”的栏中列出的序列组成。在一个实例中，本公开提供了多种rna，即能够引发rnai，其中：(i)至少一种rna包含效应子序列和效应子补体序列，其中所述rna的效应子序列由表2中标记为“效应子”的栏中列出的序列组成(在一个实例中，每种rna的效应子补体序列由表2中标记为“效应子互补物”的栏中列出的序列组成)；并且(ii)至少一种rna包含效应子序列和效应子补体序列，其中所述rna的效应子序列由表4中标记为“效应子”的栏中列出的序列组成(在一个实例中，rna的效应子补体序列包含表4中标记为“效应子互补物”的栏中列出的序列或由表4中标记为“效应子互补物”的栏中列出的序列组成。本公开的示例性多种rna包含：(i)rna，其包含由seqidno:47中列出的序列组成的效应子序列和由seqidno:48中列出的序列组成的效应子补体序列；和(ii)rna，其包含由seqidno:27中列出的序列组成的效应子序列和由seqidno:28中列出的序列组成的效应子补体序列。本公开的示例性多种rna包含：(i)rna，其包含由seqidno:47中列出的序列组成的效应子序列和由seqidno:48中列出的序列组成的效应子补体序列；(ii)rna，其包含由seqidno:27中列出的序列组成的效应子序列和由seqidno:28中列出的序列组成的效应子补体序列；和(iii)rna，其包含由seqidno:29中列出的序列组成的效应子序列和由seqidno:30中列出的序列组成的效应子补体序列。本公开的示例性多种rna包含：(i)rna，其包含由seqidno:47中列出的序列组成的效应子序列和由seqidno:48中列出的序列组成的效应子补体序列；(ii)rna，其包含由seqidno:27中列出的序列组成的效应子序列和由seqidno:28中列出的序列组成的效应子补体序列；和(iii)rna，其包含由seqidno:57中列出的序列组成的效应子序列和由seqidno:58中列出的序列组成的效应子补体序列。本公开的rna可以包含合成的rna或dna定向的rna(ddrna)。合成rna可以通过本领域已知的方法制备，如通过典型的寡核苷酸合成，并且可以掺入化学修饰以增加sirna剂的半衰期和/或功效，和/或允许更稳健的递送制剂。寡核苷酸的许多化学修饰是已知的并且在本领域中充当描述的。在一个实例中，本公开的rna的基本上所有的核苷酸被修饰。在另一个实例中，本公开的rna的所有核苷酸都被修饰。“基本上所有核苷酸被修饰”的本公开的rna在很大程度上但不完全修饰并且可以包括不超过5、4、3、2或1个未修饰的核苷酸。在一个实例中，本公开的rna在双链体的一条或两条链的3’端、5’端或两端包含一个或多个突出端区域和/或帽化基团。突出端区域的长度可以是1-6个核苷酸，例如长度为2-6个核苷酸，长度为1-5个核苷酸，长度为2-5个核苷酸，长度为1-4个核苷酸，长度为2-4个核苷酸，长度为1-3个核苷酸，长度为2-3个核苷酸，或长度为1-2个核苷酸。突出端可以是一条链长于另一条的结果，或者相同长度的两条交错的结果。突出端可以与靶mrna形成错配，或者它可以与靶向的基因序列互补，或者可以是另一序列。第一和第二链也可以例如通过另外的碱基连接以形成发夹，或通过其它非碱基接头连接。在一个实例中，rna突出端区域中的核苷酸各自独立是经修饰的或未修饰的核苷酸，包括但不限于2’-糖修饰的，如2-f、2’-o-甲基、胸苷(t)、脱氧胸腺嘧啶(dt)、2’-o-甲氧基乙基-5-甲基尿苷(teo)、2’-o-甲氧基乙基腺苷(aeo)、2’-o-甲氧基乙基-5-甲基胞苷(m5ceo)以及其任何组合。例如，dtdt可以是任一条链上任一端的突出端序列。突出端可以与靶mrna形成错配，或者它可以与靶向的基因序列互补，或者可以是另一序列。rna的有义链、反义链或这两条链上的5’或3’突出端可被磷酸化。在一些实例中，突出端区域含有在两个核苷酸之间具有硫代磷酸酯的两个核苷酸，其中两个核苷酸可以相同或不同。在一个实例中，rna仅含有单个突出端，其可以增强rna的干扰活性，而不影响其整体稳定性。例如，单链突出端位于效应子序列的3’端末端，或者备选位于效应子补体序列的3’端末端。在一个实例中，rna还包含位于效应子补体序列的5’末端(或效应子序列的3’末端)的平端，或者反之亦然。修饰包括例如末端修饰，例如5’末端修饰(磷酸化、缀合、反向连接)或3’末端修饰(缀合、dna核苷酸、反向连接等)；碱基修饰，例如用稳定化碱基、脱稳定化碱基或与扩展的配偶体全集碱基配对的碱基替换、除去碱基(无碱基核苷酸)或缀合的碱基；糖修饰(例如在2’位或4’位)或糖的替换；和/或主链修饰，包括修饰或替换磷酸二酯连接。可用于本公开的rna的具体实例包括但不限于含有经修饰的主链或无天然核苷间连接的rna。具有修饰的主链的rna特别包括在主链中不具有磷原子的那些。为了本说明书的目的，并且如本领域中有时引用，也可以认为在其核苷间主链中不具有磷原子的修饰的rna是寡核苷酸。在一些实例中，修饰的rna将在其核苷间主链中具有磷原子。教导制备含磷连接的代表性美国专利包括但不限于美国专利号7,015,315、7,041,816、7,273,933、7,321,029和美国专利re39464。其中不含磷原子的修饰的rna主链具有由短链烷基或环烷基核苷间连接、混合杂原子和烷基或环烷基核苷间连接、或一个或多个短链杂原子或杂环核苷间连接形成的主链。这些包括具有吗啉代连接(部分由核苷的糖部分形成)的那些；硅氧烷主链；硫化物、亚砜和砜主链；甲酰乙酰基(formacetyl)和硫代甲酰乙酰主链；亚甲基甲酰乙酰基和硫代甲酰乙酰主链；含烯烃的主链；氨基磺酸酯主链；亚甲基亚氨基和亚甲基肼基主链；磺酸酯和磺胺主链；酰胺主链；和其它具有混合的n、o、s和ch2组分部分的主链。教导这些寡核苷酸的示例性形式的代表性的美国专利包括但不限于美国专利号5,663,312、5,633,360、5,677,437和5,677,439。在一个实例中，本公开的rna仅包含未修饰的或天然的碱基，例如下文所述。在其它实例中，本公开的rna包含或者是rna模拟物，例如主链的核苷酸单元被新的基团替换。维持碱基单元以与合适的核酸靶化合物杂交。一种此类寡聚化合物，即已经显示具有优异杂交性质的rna模拟物称为肽核酸(pna)。在pna化合物中，rna的糖主链被含酰胺的主链，特别是氨基乙基甘氨酸主链替换。核碱基得到保留并且直接或间接地结合到主链的酰胺部分的氮杂氮原子上。教导pna化合物制备的代表性美国专利包括但不限于美国专利号5,539,082；5,714,331；和5,719,262。经修饰的rna还可以含有一个或多个取代的糖部分。本文特征性的rna，例如dsrna可以包括在2’位处的以下之一：oh；f；o-、s-或n-烷基；o-、s-或n-烯基；o-、s-或n-炔基；或o-烷基-o-烷基，其中烷基、烯基和炔基可以是取代或未取代的c1至c10烷基或c2至c10烯基和炔基。示例性合适的修饰包括o[(ch2)no]mch3、o(ch2)noch3、o(ch1)nnh2、o(ch2)nch3、o(ch2)nonh2、和o(ch2)non[(ch2)nch3)]2，其中n和m为1至约10。rna还可以包括核碱基(在本领域中通常简称为“碱基”)修饰或取代。如本文所用，“未修饰”或“天然”核碱基包括嘌呤碱基腺嘌呤(a)和鸟嘌呤(g)，和嘧啶碱基胸腺嘧啶(t)、胞嘧啶(c)和尿嘧啶(u)。修饰的核碱基包括其它合成的和天然的核碱基，如脱氧胸腺嘧啶(dt)、5-甲基胞嘧啶(5-me-c)、5-羟甲基胞嘧啶、黄嘌呤、次黄嘌呤、2-氨基腺嘌呤、腺嘌呤和鸟嘌呤的6-甲基和其它烷基衍生物、腺嘌呤和鸟嘌呤的2-丙基和其它烷基衍生物、2-硫尿嘧啶、2-硫代胸腺嘧啶和2-硫代胞嘧啶、5-卤代尿嘧啶和胞嘧啶、5-丙炔基尿嘧啶和胞嘧啶、6-偶氮尿嘧啶、胞嘧啶和胸腺嘧啶、5-尿嘧啶(假尿嘧啶)、4-硫尿嘧啶、8-卤代、8-氨基、8-硫醇、8-硫代烷基、8-羟基和其它8-取代的腺嘌呤和鸟嘌呤、5-卤代，特别是5-溴代、5-三氟甲基和其它5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶、7-甲基鸟嘌呤和7-甲基腺嘌呤、8-氮杂鸟嘌呤和8-氮杂腺嘌呤、7-脱氮鸟嘌呤和7-脱氮腺嘌呤和3-脱氮鸟嘌呤和3-脱氮腺嘌呤。*也可以修饰rna以包括一个或多个锁定核酸(lna)。锁定核酸是具有修饰的核糖部分的核苷酸，其中核糖部分包含连接2’和4’碳的额外桥。这种结构以3’内部结构构象有效“锁定”核糖。已经显示对sirna添加锁定核酸增加血清中的sirna稳定性，并降低脱靶效应(elmen,j.等人,(2005)nucleicacidsresearch33(1):439-447)。对rna末端的潜在稳定化修饰可以包括n-(乙酰氨基己酰基)-4-羟基脯氨醇(hyp-c6-nhac)、n-(己酰基-4-羟基脯氨醇(hyp-c6)、n-(乙酰基-4-羟基脯氨醇(hyp-nhac)、胸苷-2’-o-脱氧胸苷(醚)、n-(氨基己酰基)-4-羟基脯氨醇(hyp-c6-氨基)、2-二十二烷酰基-尿苷-3”-磷酸酯，倒置碱基dt(idt)等。这种修饰的公开可以在pct公开号wo2011/005861中找到。在另一个实例中，本公开的示例性rna(例如，如表2和/或表4中列出)可以作为短发夹rna(shrna)提供，所述短发夹rna包含位于效应子序列和效应子补体序列之间的茎环序列，使得各个rna形成单个连续序列。茎环序列具有足够的长度以允许效应子序列和效应子补体序列彼此退火。合适的茎环序列例如可以选自本领域已知的茎环序列。例如，根据本公开的shrna可以包含如表3中列出的序列，任选地如本文所述的那样修饰。在一个实例中，本公开的rna是化学合成的。寡核苷酸(例如，某些修饰的寡核苷酸或缺乏核糖核苷酸的寡核苷酸的部分)使用本领域已知的方案合成，例如如记载于caruthers等人,1992,methodsinenzymology211,3-19，wo99/54459，wincott等人,1995,nucleicacidsres.23,2677-2684，wincott等人,1997,methodsmol.bio.,74,59,brennan等人,1998,biotechnolbioeng.,61,33-45,以及brennan，美国专利号6,001,311。寡核苷酸的合成使用常见的核酸保护和偶联基团，如5’末端的二甲氧基三苯甲基和3’末端的亚磷酰胺。使用如usman等人,1987,j.am.chem.soc.,109,7845；scaringe等人,1990,nucleicacidsres.,18,5433中描述的方案合成没有修饰的rna。这些合成使用常见的核酸保护和偶联基团，如可以用于本公开的某些rna的5’末端的二甲氧基三苯甲基，以及3’末端的亚磷酰胺。在某些实例中，根据美国专利号6,995,259、6,686,463、6,673,918、6,649,751、和/或6,989,442中描述的方法合成、脱保护和分析本公开的rna。在备选的实例中，将本公开的rna作为离散组分的合成，并且通过例如连接(moore等人,1992,science256,9923或wo93/23569)，或通过合成和/或脱保护后的杂交在合成后连接在一起。在一个实例中，示例性shrna包含seqidno:92中列出的序列或由seqidno:92中列出的序列组成。在一个实例中，示例性shrna包含seqidno:95中列出的序列或由seqidno:95中列出的序列组成。在一个实例中，示例性shrna包含seqidno:78中列出的序列或由seqidno:78中列出的序列组成。在一个实例中，示例性shrna包含seqidno:79中列出的序列或由seqidno:79中列出的序列组成。在一个实例中，示例性shrna包含seqidno:82中列出的序列或由seqidno:82中列出的序列组成。在一个实例中，示例性shrna包含seqidno:65中列出的序列或由seqidno:65中列出的序列组成。在一个实例中，示例性shrna包含seqidno:68中列出的序列或由seqidno:68中列出的序列组成。在一个实例中，示例性shrna包含seqidno:91中列出的序列或由seqidno:91中列出的序列组成。在一个实例中，示例性shrna包含seqidno:94中列出的序列或由seqidno:94中列出的序列组成。在一个实例中，示例性shrna包含seqidno:83中列出的序列或由seqidno:83中列出的序列组成。在一个实例中，示例性shrna包含seqidno:84中列出的序列或由seqidno:84中列出的序列组成。本公开还提供了多种rna，其中多种rna包含含有seqidno:92中列出的序列或由seqidno:92中列出的序列组成的shrna和本公开的至少一种其它rna。本公开还提供多种rna，其中多种rna包含含有seqidno:95中列出的序列或由seqidno:95中列出的序列组成的shrna和本公开的至少一种其它rna。本公开还提供多种rna，其中多种rna包含含有seqidno:78中列出的序列或由seqidno:78中列出的序列组成的shrna和本公开的至少一种其它rna。本公开还提供多种rna，其中多种rna包含含有seqidno:79中列出的序列或由seqidno:79中列出的序列组成的shrna和本公开的至少一种其它rna。本公开还提供了多种rna，其中多种rna包含含有seqidno:82中列出的序列或由seqidno:82中列出的序列组成的shrna和本公开的至少一种其它rna。本公开还提供了多种rna，其中多种rna包含含有seqidno:65中列出的序列或由seqidno:65中列出的序列组成的shrna和本公开的至少一种其它rna。本公开还提供了多种rna，其中多种rna包含含有seqidno:68中列出的序列或由seqidno:68中列出的序列组成的shrna和本公开的至少一种其它rna。本公开还提供了多种rna，其中多种rna包含含有seqidno:91中列出的序列或由seqidno:91中列出的序列组成的shrna和本公开的至少一种其它rna。本公开还提供了多种rna，其中多种rna包含含有seqidno:94中列出的序列或由seqidno:94中列出的序列组成的shrna和本公开的至少一种其它rna。本公开还提供了多种rna，其中多种rna包含含有seqidno:83中列出的序列或由seqidno:83中列出的序列组成的shrna和本公开的至少一种其它rna。本公开还提供了多种rna，其中多种rna包含含有seqidno:84中列出的序列或由seqidno:84中列出的序列组成的shrna和本公开的至少一种其它rna。本公开还提供了多种rna，其中多种rna包含：(i)包含seqidno:92中列出的序列或由seqidno:92中列出的序列组成的shrna；(ii)包含seqidno:78中列出的序列或由seqidno:78中列出的序列组成的shrna；和(iii)本公开的至少一种其它rna。在一个实例中，本公开的其它rna是包含seqidno:79、82、65、68、91、94、83或84中列出的序列的shrna。本公开还提供了多种rna，其中多种包括以下各项或由以下各项组成：(i)包含seqidno:92中列出的序列或由seqidno:92中列出的序列组成的shrna；(ii)包含seqidno:78中列出的序列或由seqidno:78中列出的序列组成的shrna；和(iii)包含seqidno:79中列出的序列或由seqidno:79中列出的序列组成的shrna。本公开还提供了多种rna，其中多种包括以下各项或由以下各项组成：(i)包含seqidno:92中列出的序列或由seqidno:92中列出的序列组成的shrna；(ii)包含seqidno:78中列出的序列或由seqidno:78中列出的序列组成的shrna；和(iii)包含seqidno:101中列出的序列或由seqidno:101中列出的序列组成的shrna。ddrnai本公开的rna可以从核酸转录。因此，在一个实例中，本公开提供了编码本公开的rna的核酸。在一个实例中，核酸是dna。在另一个实例中，本公开提供了编码本公开的多种rna的核酸。在另一个实例中，本公开提供编码本公开的多种rna的多种核酸。例如，多种中的每种核酸可以编码本文所述的单一rna。在另一个实例中，一种或多种核酸编码多种rna，例如多种核酸编码本公开的两种或更多种rna，并且另一种核酸编码本公开的一种或多种rna。在一个实例中，一起提供本文所述的多种核酸，例如在单一组合物中。在另一个实例中，本文所述的多种核酸作为多种成分，例如多种组合物提供。例如，可以分开提供多种中的每种核酸。或者，在提供本公开的至少三种核酸的实例中，可以分开提供至少一种核酸，并且一起提供多种中的两种或更多种。在一些实例中，本公开的核酸包含一种或多种另外的元件，例如以促进rna的转录。例如，核酸可以包含与编码本公开的rna的序列可操作连接的启动子。其它元件，例如转录终止子，是本领域已知的和/或本文所述的。在一个实例中，核酸是dna定向的rnai(ddrnai)构建体。在一个实例中，ddrnai构建体包含与启动子可操作连接的编码本公开的rna的序列。在一个实例中，ddrnai构建体包含编码包含本公开的效应子序列和效应子补体序列的rna的序列。示例性效应子序列和效应子补体序列列于表2。例如，序列可以与启动子可操作连接。在一个实例中，这两种序列可以与相同的启动子可操作连接。在一个实例中，这两种序列可以与不同的启动子可操作连接。在一个实例中，本公开提供了包含编码效应子序列的序列和编码效应子补体序列的序列的ddrnai构建体，其中效应子序列与表2中标记为“效应子互补物”的栏中所述的效应子补体序列基本上互补。例如，当与表2中标记为“效应子互补物”的栏中描述的效应子补体序列基本上互补的效应子序列在与表2中相应的效应子补体序列形成双链体时可以包含0、1、2、3或4个错配。在一个实例中，本公开提供了ddrnai构建体，其包含编码除4个碱基错配之外与表2中标记为“效应子互补物”的栏中所述的序列基本上互补的效应子序列的序列。在一个实例中，本公开提供了ddrnai构建体，其包含编码除3个碱基错配之外与表2中标记为“效应子互补物”的栏中所述的序列基本上互补的效应子序列的序列。在一个实例中，本公开提供了ddrnai构建体，其包含编码除2个碱基错配之外与表2中标记为“效应子互补物”的栏中所述的序列基本上互补的效应子序列的序列。在一个实例中，本公开提供了ddrnai构建体，其包含编码除单个碱基错配之外与表2中标记为“效应子互补物”的栏中所述的序列基本上互补的效应子序列的序列。在一个实例中，本公开提供了ddrnai构建体，其包含编码效应子序列和效应子补体序列的序列，其中效应子序列与表2中标记为“效应子互补物”的栏中所述的序列是100％互补的。在一个实例中，ddrnai构建体包含编码与由ddrnai构建体编码的效应子序列基本上互补的效应子补体序列的序列。本公开的示例性ddrnai构建体包含编码如表2所述的相应效应子和效应子补体序列的序列。在一个实例中，本公开提供了包含编码效应子序列的序列和编码效应子补体序列的序列的ddrnai构建体，其中效应子序列由表2中标记为“效应子”的栏中列出的序列组成。在一个实例中，效应子补体序列由表2中标记为“效应子互补物”的栏中列出的序列组成。本公开的示例性ddrnai构建体包含编码由seqidno:47中列出的序列组成的效应子序列的序列和编码由seqidno:48中列出的序列组成的效应子补体序列的序列。本公开的另一种示例性ddrnai构建体包含编码由seqidno:27中列出的序列组成的效应子序列的序列和编码由seqidno:28中列出的序列组成的效应子补体序列的序列。本公开的另外的示例性ddrnai构建体包含编码由seqidno:29中列出的序列组成的效应子序列的序列和编码由seqidno:30中列出的序列组成的效应子补体序列的序列。本公开的另一种示例性ddrnai构建体包含编码由seqidno:11中列出的序列组成的效应子序列的序列和编码由seqidno:12中列出的序列组成的效应子补体序列的序列。本公开的另外的示例性ddrnai构建体包含编码由seqidno:45中列出的序列组成的效应子序列的序列和编码由seqidno:46中列出的序列组成的效应子补体序列的序列。本公开的另外的示例性ddrnai构建体包含编码由seqidno:35中列出的序列组成的效应子序列的序列和编码由seqidno:36中列出的序列组成的效应子补体序列的序列。本公开的另外的示例性ddrnai构建体包含编码由seqidno:21中列出的序列组成的效应子序列的序列和编码由seqidno:22中列出的序列组成的效应子补体序列的序列。在另一个实例中，本公开提供了编码本公开的多种rna的ddrnai构建体，或包含编码本公开的rna的序列和能够引发rnai的至少一种其它rna。在一个实例中，本公开提供编码本公开的多种rna的ddrnai构建体，其中每种rna包含效应子序列和效应子补体序列，其中至少一个(或每个)rna的效应子序列与表2中标记为“效应子互补物”的栏中描述的序列基本上互补。已经描述了包含与表2中标记为“效应子互补物”的栏中描述的序列“基本上互补”的效应子序列的本公开的示例性rna，并且应该理解为在必要修改后适用于本公开的此实例。然而，在一个实例中，本公开提供编码本公开的多种rna的ddrnai构建体，其中每种rna包含效应子序列和效应子补体序列，其中至少一个(或每个)rna的效应子序列由表2中标记为“效应子”的栏中描述的序列组成。在一个实施例中，至少一种(或每种)rna的效应子补体序列由表2中标记为“效应子互补物”的栏中列出的序列组成。在一个实例中，本公开提供了编码本公开的多种rna的ddrnai构建体，其中：(i)至少一种rna包含效应子序列和效应子补体序列，其中rna的效应子序列由表2中标记为“效应子”的栏中列出的序列组成(在一个实例中，每种rna的效应子补体序列由表2中标记为“效应子互补物”的栏中列出的序列组成)；和(ii)至少一种rna包含效应子序列和效应子补体序列，其中rna的效应子序列由表4中标记为“效应子”的栏中列出的序列组成(在一个实例中，rna的效应子补体序列包含表4中标记为“效应子互补物”的栏中列出的序列或由表4中标记为“效应子互补物”的栏中列出的序列组成)。本文描述了rna的示例性组合，并且应当理解为在必要修改后适用于本公开的该实例。本公开的示例性ddrnai构建体包含：(i)编码rna的序列，所述rna包含由seqidno:47中列出的序列组成的效应子序列和由seqidno:48中列出的序列组成的效应子补体序列；和(ii)编码rna的序列，所述rna包含由seqidno:27中列出的序列组成的效应子序列和由seqidno:28中列出的序列组成的效应子补体序列。本公开的示例性ddrnai构建体包含：(i)编码rna的序列，所述rna包含由seqidno:47中列出的序列组成的效应子序列和由seqidno:48中列出的序列组成的效应子补体序列；(ii)编码rna的序列，所述rna包含由seqidno:27中列出的序列组成的效应子序列和由seqidno:28中列出的序列组成的效应子补体序列；和(iii)编码rna的序列，所述rna包含由seqidno:29中列出的序列组成的效应子序列和由seqidno:30中列出的序列组成的效应子补体序列。例如，本公开的ddrnai构建体可以在5’-3’方向上包含：(i)编码rna的dna序列，所述rna包含由seqidno:27中列出的序列组成的效应子序列和由seqidno:28中列出的序列组成的效应子补体序列；(ii)编码rna的dna序列，所述rna包含由seqidno:29中列出的序列组成的效应子序列和由seqidno:30中列出的序列组成的效应子补体序列；和(iii)编码rna的dna序列，所述rna包含由seqidno:47中列出的序列组成的效应子序列和由seqidno:48中列出的序列组成的效应子补体序列。在ddrnai构建体中(i)至(iii)处的编码rna的每种dna序列也可以在ddrnai构建体中与分开的启动子，例如u6或h1启动子可操作连接。本公开的另一个示例性ddrnai包含：(i)编码rna的序列，其包含由seqidno:47中列出的序列组成的效应子序列和由seqidno:48中列出的序列组成的效应子补体序列；(ii)编码rna的序列，其包含由seqidno:27中列出的序列组成的效应子序列和由seqidno:28中列出的序列组成的效应子补体序列；和(iii)编码rna的序列，其包含由seqidno:57中列出的序列组成的效应子序列和由seqidno:58中列出的序列组成的效应子补体序列。例如，本公开的ddrnai构建体可以在5’-3’方向上包含：(i)编码rna的dna序列，所述rna包含由seqidno:27中列出的序列组成的效应子序列和由seqidno:28中列出的序列组成的效应子补体序列；(ii)编码rna的dna序列，所述rna包含由seqidno:57中列出的序列组成的效应子序列和由seqidno:58中列出的序列组成的效应子补体序列；和(iii)编码rna的dna序列，所述rna包含由seqidno:47中列出的序列组成的效应子序列和由seqidno:48中列出的序列组成的效应子补体序列。在ddrnai构建体中(i)至(iii)处的编码rna的每种dna序列也可以在ddrnai构建体中与分开的启动子，例如u6或h1启动子可操作连接。在一个实例中，ddrnai构建体包含与启动子可操作连接的编码本公开的shrna的序列。例如，本公开的ddrnai构建体包含与启动子，例如u6或h1启动子可操作连接的编码shrna的序列，所述shrna包含表3中列出的序列或由表3中列出的序列组成。例如，ddrnai构建体可以包含编码包含seqidno:92中列出的序列或由seqidno:92中列出的序列组成的shrna的序列。在一个实例中，ddrnai构建体可以包含编码包含seqidno:95中列出的序列或由seqidno:95中列出的序列组成的shrna的序列。在一个实例中，ddrnai构建体可以包含编码包含seqidno:78中列出的序列或由seqidno:78中列出的序列组成的shrna的序列。在一个实例中，ddrnai构建体可以包含编码包含seqidno:79中列出的序列或由seqidno:79中列出的序列组成的shrna的序列。在一个实例中，ddrnai构建体可以包含编码包含seqidno:82中列出的序列或由seqidno:82中列出的序列组成的shrna的序列。在一个实例中，ddrnai构建体可以包含编码包含seqidno:65中列出的序列或由seqidno:65中列出的序列组成的shrna的序列。在一个实例中，ddrnai构建体可以包含编码包含seqidno:68中列出的序列或由seqidno:68中列出的序列组成的shrna的序列。在一个实例中，ddrnai构建体可以包含编码包含seqidno:91中列出的序列或由seqidno:91中列出的序列组成的shrna的序列。在一个实例中，ddrnai构建体可以包含编码包含seqidno:94中列出的序列或由seqidno:94中列出的序列组成的shrna的序列。在一个实例中，ddrnai构建体可以包含编码包含seqidno:83中列出的序列或由seqidno:83中列出的序列组成的shrna的序列。在一个实例中，ddrnai构建体可以包含编码包含seqidno:84中列出的序列或由seqidno:84中列出的序列组成的shrna的序列。本公开还提供了包含编码多种rna的序列的ddrnai构建体，所述多种包含含有表3中列出的序列或由表3中列出的序列组成的shrna和本公开的至少一种其它rna。例如，其它rna可以是shrna，例如包含表3或表5中列出的序列或由表3或表5中列出的序列组成。在一个实例中，本公开还提供了包含编码多种rna的序列的ddrnai构建体，所述多种包含含有seqidno:92中列出的序列或由seqidno:92中列出的序列组成的shrna和本公开的至少一种其它rna。本公开还提供了包含编码多种rna的序列的ddrnai构建体，所述多种包含含有seqidno:95中列出的序列或由seqidno:95中列出的序列组成的shrna和本公开的至少一种其它rna。本公开内容还提供了包含编码多种rna的序列的ddrnai构建体，所述多种包含含有seqidno:78中列出的序列或由seqidno:78中列出的序列组成的shrna和本公开的至少一种其它rna。本公开还提供了包含编码多种rna的序列的ddrnai构建体，所述多种包含含有seqidno:79中列出的序列或由seqidno:79中列出的序列组成的shrna和本公开的至少一种其它rna。本公开还提供了包含编码多种rna的序列的ddrnai构建体，所述多种包含含有seqidno:82中列出的序列或由seqidno:82中列出的序列组成的shrna和本公开的至少一种其它rna。本公开还提供了包含编码多种rna的序列的ddrnai构建体，所述多种包含含有seqidno:65中列出的序列或由seqidno:65中列出的序列组成的shrna和本公开的至少一种其它rna。在一个实例中，本公开还提供了包含编码多种rna的序列的ddrnai构建体，所述多种包含含有seqidno:68中列出的序列或由seqidno:68中列出的序列组成的shrna和本公开的至少一种其它rna。本公开还提供了包含编码多种rna的序列的ddrnai构建体，所述多种包含含有seqidno:91中列出的序列或由seqidno:91中列出的序列组成的shrna和本公开的至少一种其它rna。在一个实例中，本公开还提供了包含编码多种rna的序列的ddrnai构建体，所述多种包含含有seqidno:94中列出的序列或由seqidno:94中列出的序列组成的shrna和本公开的至少一种其它rna。本公开还提供了包含编码多种rna的序列的ddrnai构建体，所述多种包含含有seqidno:83中列出的序列或由seqidno:83中列出的序列组成的shrna和本公开的至少一种其它rna。在一个实例中，本公开提供了包含编码多种rna的序列的ddrnai构建体，所述多种包含含有seqidno:84中列出的序列或由seqidno:84中列出的序列组成的shrna和本公开的至少一种其它rna。本公开还提供了包含编码多种rna的序列的ddrnai，其中所述多种包含：(i)包含seqidno:92中列出的序列或由seqidno:92中列出的序列组成的shrna；(ii)包含seqidno:78中列出的序列或由seqidno:78中列出的序列组成的shrna；和(iii)本公开的至少一种其它rna。在一个实例中，由本公开的ddrnai构建体编码的其它rna是包含seqidno:79、82、65、68、91、94、83或84中列出的序列的shrna。本公开还提供了包含编码多种rna的序列的ddrnai构建体，所述多种包含：(i)包含seqidno:92中列出的序列或由seqidno:92中列出的序列组成的shrna；(ii)包含seqidno:78中列出的序列或由seqidno:78中列出的序列组成的shrna；和(iii)包含seqidno:79中列出的序列或由seqidno:79中列出的序列组成的shrna。本公开还提供了包含编码多种rna的序列的ddrnai构建体，所述多种包含：(i)包含seqidno:92中列出的序列或由seqidno:92中列出的序列组成的shrna；(ii)包含seqidno:78中列出的序列或由seqidno:78中列出的序列组成的shrna；和(iii)包含seqidno:101中列出的序列或由seqidno:101中列出的序列组成的shrna。如上文讨论，ddrnai构建体通常包含与启动子可操作连接的编码本公开的rna(例如，本公开的shrna)的序列。通常，ddrnai构建体在载体，例如质粒或微型质粒或病毒载体内。在一个实例中，ddrnai构建体中的编码多种rna(例如shrna)的序列与相同的启动子可操作连接。例如，构建体可以包含相同启动子的多个拷贝，每个拷贝与编码本公开的不同rna的序列可操作连接。在另一个实例中，与本公开的rna可操作连接的每个启动子是不同的。例如，在编码三种rna(例如三种shrna)的ddrnai构建体中，编码rna的三种序列各自与不同的启动子可操作连接。在另外的实例中，在编码三种或更多种rna(例如shrna)的ddrnai构建体中，编码rna的两种(或更多种)序列与相同的启动子连接，并且编码rna的一种(或多种)序列与不同的启动子连接。在一个实例中，启动子是组成性启动子。当提及启动子时，术语“组成性”意指启动子能够在没有特定刺激物(例如，热休克、化学品、光等)的情况下指导可操作连接的核酸序列的转录。通常，组成性启动子能够指导编码序列在基本上任何细胞和任何组织中表达。用于转录本公开的rna的启动子包括由rna聚合酶ii控制的泛素、cmv、β-肌动蛋白、组蛋白h4、ef-1α或pgk基因的启动子或由rna聚合酶i控制的启动子元件。在一个实例中，使用polii启动子，如cmv、sv40、u1、β-肌动蛋白或杂合polii启动子。在另一个实例中，使用由rna聚合酶iii控制的启动子，如u6启动子(u6-1、u6-8、u6-9)、h1启动子、7sl启动子、人y启动子(hy1、hy3、hy4(参见maraia等人，nucleicacidsres22(15):3045-52(1994))和hy5(参见maraia等人，nucleicacidsres24(18):3552-59(1994))、人mrp-7-2启动子、腺病毒va1启动子、人trna启动子或5s核糖体rna启动子。用于本公开的ddrnai构建体的合适的启动子记载于美国专利号8,008,468和美国专利号8,129,510中。在一个实例中，启动子是rnapoliii启动子。例如，启动子是u6启动子。在另一个实例中，启动子是h1启动子。在编码本公开的多种rna(例如，本公开的shrna)的ddrnai构建体的情况下，编码至少一种rna的序列与u6启动子可操作连接，并且编码至少一种其它rna的序列与h1启动子可操作连接。在编码本公开的三种rna(例如本公开的shrna)的ddrnai构建体的情况下，编码两种rna的序列各自与u6启动子可操作连接，并且编码另一种rna的序列与h1启动子可操作连接。例如，当以5’至3’方向考虑时，第一和第三序列与u6启动子可操作连接，并且第二序列与h1启动子可操作连接。在另一个实例中，编码两种rna的序列各自与h1启动子可操作连接，并且编码另一种rna的序列与u6启动子可操作连接。例如，当以5’至3’方向考虑时，第一和第三序列与h1启动子可操作连接，并且第二序列与u6启动子可操作连接。在一个实例中，构建体中的启动子是u6启动子。例如，启动子是u6-1启动子。例如，启动子是u6-8启动子。例如，启动子是u6-9启动子。在一些实例中，使用可变强度的启动子。例如，使用两种或更多种强启动子(如poliii型启动子)可以使细胞有负担，例如消耗转录需要的可用核苷酸或其它细胞成分的合并物。另外/或者，使用几种强启动子可以导致细胞中rnai剂的毒性表达水平。因此，在一些实例中，多启动子ddrnai构建体中的一个或多个启动子比构建体中的其它启动子弱，或者构建体中的所有启动子可以以小于最大速率表达rna。启动子也可以使用各种分子技术进行修饰，或者例如通过修饰各种调节元件以其它方式修饰，以获得转录的较弱水平或较强水平。实现减少转录的一个手段是修饰已知控制启动子活性的启动子内的序列元件。例如，已知近端序列元件(pse)招致人u6启动子的活性(参见domitrovich等人，nucleicacidsres31:2344-2352(2003))。用来自弱启动子，如人u6-7启动子的元件替换存在于强启动子，如人u6-1、u6-8或u6-9启动子中的pse元件降低了杂合u6-1、u6-8或u6-9启动子的活性。在本申请中描述的实例中已经使用了这种方法，但是实现该结果的其它手段是本领域已知的。在本公开的一些实例中有用的启动子可以是组织特异性或细胞特异性的。术语“组织特异性”在其适用于启动子时是指能够在不同类型的组织(例如肌肉)中相同的目标核苷酸序列的表达的相对缺乏的情况下指导目的核酸选择性转录到特定类型的组织(例如肝组织)的启动子。术语“细胞特异性”在适用于启动子时是指能够在相同组织内的不同细胞类型中相同的目标核苷酸序列的表达的相对缺乏的情况下指导目的核酸在特定类型的细胞中选择性转录的启动子。在一个实例中，本公开的ddrnai构建体可另外包含增加rna表达的一种或多种增强子。适用于本公开的实例的增强子包括apoehcr增强子、cmv增强子(xia等人，nucleicacidsres31-17(2003))和本领域技术人员已知的其它增强子。美国专利号8,008,468中描述了用于本公开的ddrnai构建体的合适的增强子。在另外的实例中，本公开的ddrnai构建体可以包含与编码本公开的rna的核酸连接的转录终止子。在编码多种rna的ddrnai构建体的情况下，与每种核酸连接的终止子可以相同或不同。在一个实例中，终止子是4个以上或5个以上或6个以上t残基的连续区段。在一些实例中，当使用不同的启动子时，终止子可以是不同的并且与来自衍生终止子的基因的启动子匹配。此类终止子包括sv40聚a、advva1基因、5s核糖体rna基因、和人t-rna的终止子。此外，可以混合并且匹配启动子和终止子，如通常用rnapolii启动子和终止子通常进行。在一个实例中，编码多种rna的ddrnai构建体中每个启动子/rna编码序列/终止子组分中的启动子和终止子都是不同的，以降低组分之间的dna重组事件的可能性。在一个实例中，本公开的ddrnai构建体包含与u6启动子可操作连接并且与包含至少四个胸苷残基，例如4或5或6个胸苷残基的终止子连接的编码本公开的rna的序列。在一个实例中，编码rna的序列也与包含单个鸟嘌呤的转录起始子连接。在一个实例中，本公开的ddrnai构建体包含与启动子，例如u6启动子可操作连接的编码由表3中列出的序列组成的shrna的序列。在一个实例中，编码shrna的序列与例如包含至少四个胸苷残基，如4或5或6个胸苷残基的终止子连接。在一个实例中，编码shrna的序列与例如包含单个鸟嘌呤残基的转录起始子连接。一个示例性的ddrnai构建体包含与u6启动子、包含单个鸟嘌呤残基的转录起始子序列和包含五个连续胸苷残基的终止子序列可操作连接的编码包含seqidno:92中列出的序列或由seqidno:92中列出的序列组成的shrna的序列。另一个示例性的ddrnai构建体包含与u6启动子和包含六个连续胸苷残基的终止子可操作连接的编码包含seqidno:78中列出的序列或由seqidno:78中列出的序列组成的shrna的序列。另一个示例性的ddrnai构建体包含与u6启动子、包含单个鸟嘌呤残基的转录起始子序列和包含六个连续胸苷残基的终止子可操作连接的编码包含seqidno:79中列出的序列或由seqidno:79中列出的序列组成的shrna的序列。在另一个实例中，本公开提供了包含编码多种rna的序列的ddrnai构建体，其中ddrnai构建体包含(i)与启动子，例如u6启动子可操作连接的编码shrna的序列，所述shrna包含表3中列出的序列或由表3中列出的序列组成，和(ii)与启动子可操作连接的编码本公开的至少一种其它rna的序列。在一个实例中，(i)处的序列与终止子(例如包含至少五个胸苷残基)连接。在一个实例中，(i)处的序列与转录起始子(例如包含单个鸟嘌呤残基)连接。在一个实例中，(i)处的序列与终止子(例如包含至少五个胸苷残基)连接，并且与转录起始子(例如包含单个鸟嘌呤残基)连接。在一个实例中，(ii)处的序列与终止子(例如包含至少五个胸苷残基)连接。在一个实例中，(ii)处的序列与转录起始子(例如包含单个鸟嘌呤残基)连接。在一个实例中，(ii)处的序列与终止子(例如包含至少五个胸苷残基)连接并且与转录起始子(例如包含单个鸟嘌呤残基)连接。在一个实例中，(i)和(ii)处的序列各自与终止子(例如包含至少五个胸苷残基)连接。在一个实例中，(i)和(ii)处的序列各自与转录起始子(例如包含单个鸟嘌呤残基)连接。在一个实例中，(i)和(ii)处的序列各自与终止子(例如包含至少五个胸苷残基)连接，并且与转录起始子(例如包含单个鸟嘌呤残基)连接。在一个实例中，本公开提供了包含编码多种rna的序列的ddrnai构建体，其中ddrnai构建体包含：(i)与u6启动子、包含单个鸟嘌呤残基的转录起始子序列和包含五个连续胸苷残基的终止子可操作连接的编码包含seqidno:92中列出的序列或由seqidno:92中列出的序列组成的shrna的序列；和(ii)与启动子和包含至少五个胸苷残基的终止子和任选地转录起始子序列可操作连接的编码本公开的至少一种其它rna的序列。在一个实例中，本公开提供了包含编码多种rna的序列的ddrnai构建体，其中ddrnai构建体包含：(i)与u6启动子、包含单个鸟嘌呤残基的转录起始子序列和包含六个连续胸苷残基的终止子可操作连接的编码包含seqidno:78中列出的序列或由seqidno:78中列出的序列组成的shrna的序列；和(ii)与启动子和包含至少五个胸苷残基的终止子和任选地转录起始子序列可操作连接的编码本公开的至少一种其它rna的序列。在一个实例中，本公开提供了包含编码多种rna的序列的ddrnai构建体，其中ddrnai构建体包含：(i)与u6启动子、包含单个鸟嘌呤残基的转录起始子序列和包含六个连续胸苷残基的终止子可操作连接的编码包含seqidno:79中列出的序列或由seqidno:79中列出的序列组成的shrna的序列；和(ii)与启动子和包含至少五个胸苷残基的终止子和任选地转录起始子序列可操作连接的编码本公开的至少一种其它rna的序列。本公开还提供了包含编码多种rna的序列的ddrnai构建体，其中ddrnai构建体包含：(i)与u6启动子、包含单个鸟嘌呤残基的转录起始子序列和包含五个连续胸苷残基的终止子可操作连接的编码包含seqidno:92中列出的序列或由seqidno:92中列出的序列组成的shrna的序列；(ii)与u6启动子和包含六个连续胸苷残基的终止子可操作连接的编码包含seqidno:78中列出的序列或由seqidno:78中列出的序列组成的shrna的序列；和(iii)与启动子和包含至少五个胸苷残基的终止子和任选地转录起始子序列可操作连接的编码本公开的至少一种其它rna的序列。在一个实例中，(iii)处的其它rna是表3或5中列出的shrna。本公开还提供了包含编码多种rna的序列的ddrnai，其中ddrnai构建体包含：(i)与u6启动子和包含六个连续胸苷残基的终止子可操作连接的编码包含seqidno:78中列出的序列或由seqidno:78中列出的序列组成的shrna的序列；(ii)与u6启动子、包含单个鸟嘌呤残基的转录起始子序列和包含六个连续胸苷残基的终止子可操作连接的编码包含seqidno:79中列出的序列或由seqidno:79中列出的序列组成的shrna的序列；和(iii)与u6启动子、包含单个鸟嘌呤残基的转录起始子序列和包含五个连续胸苷残基的终止子可操作连接的编码包含seqidno:92中列出的序列或由seqidno:92中列出的序列组成的shrna的序列。例如，本公开提供了包含编码多种rna的序列的ddrnai，其中ddrnai构建体在5’至3’方向上包含：(i)与u6启动子和包含六个连续胸苷残基的终止子可操作连接的包含seqidno:78中列出的序列或由seqidno:78中列出的序列组成的shrna的序列；(ii)与u6启动子、包含单个鸟嘌呤残基的转录起始子序列和包含六个连续胸苷残基的终止子可操作连接的包含seqidno:79中列出的序列或由seqidno:79中列出的序列组成的shrna的序列；和(iii)与u6启动子、包含单个鸟嘌呤残基的转录起始子序列和包含五个胸苷残基的终止子可操作连接的包含seqidno:92中列出的序列或由seqidno:92中列出的序列组成的shrna的序列。编码多种rna的本公开的示例性ddrnai构建体包含seqidno:105中列出的序列。本公开还提供了包含编码多种rna的序列的ddrnai，其中ddrnai构建体包含：(i)与u6启动子和包含六个连续胸苷残基的终止子可操作连接的包含seqidno:78中列出的序列或由seqidno:78中列出的序列组成的shrna的序列；(ii)与u6启动子、包含单个鸟嘌呤残基的转录起始子序列和包含五个连续胸苷残基的终止子可操作连接的包含seqidno:101中列出的序列或由seqidno:101中列出的序列组成的shrna的序列；和(iii)与u6启动子、包含单个鸟嘌呤残基的转录起始子序列和包含五个胸苷残基的终止子可操作连接的包含seqidno:92中列出的序列或由seqidno:92中列出的序列组成的shrna的序列。例如，本公开提供了包含编码多种rna的序列的ddrnai，其中ddrnai构建体在5’至3’方向上包含：(i)与u6启动子和包含六个连续胸苷残基的终止子可操作连接的包含seqidno:78中列出的序列或由seqidno:78中列出的序列组成的shrna的序列；(ii)与u6启动子、包含单个鸟嘌呤残基的转录起始子序列和包含五个连续胸苷残基的终止子可操作连接的包含seqidno:101中列出的序列或由seqidno:101中列出的序列组成的shrna的序列；和(iii)与u6启动子、包含单个鸟嘌呤残基的转录起始子序列和包含五个胸苷残基的终止子可操作连接的包含seqidno:92中列出的序列或由seqidno:92中列出的序列组成的shrna的序列。编码多种rna的本公开的示例性ddrnai构建体包含seqidno:106中列出的序列。在另一个实例中，本公开提供了包含编码多种rna的序列的ddrnai构建体，其中ddrnai构建体包含(i)与由启动子，例如u6启动子可操作连接的编码包含表3中列出的序列或由表3中列出的序列组成的shrna的序列，和(ii)与启动子可操作连接的编码本公开的至少一种其它rna的序列。在一个实例中，(i)处的序列与终止子(例如包含至少五个胸苷残基)连接。在一个实例中，(i)处的序列与转录起始子(例如包含单个鸟嘌呤残基)连接。在一个实例中，(i)处的序列与终止子(例如包含至少五个胸苷残基)连接，并且与转录起始子(例如包含单个鸟嘌呤残基)连接。在一个实例中，(ii)处的序列与终止子(例如包含至少五个胸苷残基)连接。在一个实例中，(ii)处的序列与转录起始子(例如包含单个鸟嘌呤残基)连接。在一个实例中，(ii)处的序列与终止子(例如包含至少五个胸苷残基)连接并且与转录起始子(例如包含单个鸟嘌呤残基)连接。在一个实例中，(i)和(ii)处的序列各自与终止子(例如包含至少五个胸苷残基)连接。在一个实例中，(i)和(ii)处的序列各自与转录起始子(例如包含单个鸟嘌呤残基)连接。在一个实例中，(i)和(ii)处的序列各自与终止子(例如包含至少五个胸苷残基)连接，并且与转录起始子(例如包含单个鸟嘌呤残基)连接。在一个实例中，本公开提供了包含编码多种rna的序列的ddrnai构建体，其中ddrnai构建体包含：(i)与u6启动子、包含单个鸟嘌呤残基的转录起始子序列和包含五个连续胸苷残基的终止子可操作连接的包含seqidno:92中列出的序列或由seqidno:92中列出的序列组成的shrna的序列；和(ii)与启动子和包含至少五个胸苷残基的终止子和任选地转录起始子序列可操作连接的编码本公开的至少一种其它rna的序列。在一个实例中，本公开提供了包含编码多种rna的序列的ddrnai构建体，其中ddrnai构建体包含：(i)与u6启动子、包含单个鸟嘌呤残基的转录起始子序列和包含六个连续胸苷残基的终止子可操作连接的包含seqidno:78中列出的序列或由seqidno:78中列出的序列组成的shrna的序列；和(ii)与启动子和包含至少五个胸苷残基的终止子和任选地转录起始子序列可操作连接的编码本公开的至少一种其它rna的序列。在一个实例中，本公开提供了包含编码多种rna的序列的ddrnai构建体，其中ddrnai构建体包含：(i)与u6启动子、包含单个鸟嘌呤残基的转录起始子序列和包含六个连续胸苷残基的终止子可操作连接的包含seqidno:79中列出的序列或由seqidno:79中列出的序列组成的shrna的序列；和(ii)与启动子和包含至少五个胸苷残基的终止子和任选地转录起始子序列可操作连接的编码本公开的至少一种其它rna的序列。在另一个实例中，本公开提供了多种ddrnai构建体，每种ddrnai构建体编码rna，即能够引发rnai，其中多种中的至少一种ddrnai构建体是包含编码本公开的rna的序列的ddrnai构建体。例如，多种中的至少一种ddrnai构建体包含与启动子例如u6启动子可操作连接的编码表3中描述的shrna的序列。在一个实例中，本公开提供了包含两种或更多种ddrnai构建体的多种ddrnai构建体，每种ddrnai构建体包含编码本公开的rna的序列。例如，多种中的每种ddrnai构建体可以包含与启动子例如u6启动子可操作连接的编码表3中所述的shrna的序列。在一个实例中，多种ddrnai构建体包含：(i)ddrnai构建体，其包含与u6启动子、包含单个鸟嘌呤残基的转录起始子序列和包含五个连续胸苷残基的终止子序列可操作连接的编码包含seqidno:92中列出的序列或由seqidno:92中列出的序列组成的shrna的序列；和(ii)ddrnai构建体，其包含与启动子和包含至少五个胸苷残基的终止子和任选地转录起始子序列可操作连接的编码本公开的至少一种其它rna的序列；或(iii)ddrnai构建体，其包含与u6启动子、包含单个鸟嘌呤残基的转录起始子序列和包含五个连续胸苷残基的终止子可操作连接的编码包含seqidno:101中列出的序列或由seqidno:101中列出的序列组成的shrna的序列。在一个实例中，多种ddrnai构建体包含：(i)ddrnai构建体，其包含与u6启动子和包含六个连续胸苷残基的终止子可操作连接的编码包含seqidno:78中列出的序列或由seqidno:78中列出的序列组成的shrna的序列；和(ii)ddrnai构建体，其包含与启动子和包含至少五个胸苷残基的终止子和任选地转录起始子序列可操作连接的编码本公开的至少一种其它rna的序列；或(iii)ddrnai构建体，其包含与u6启动子、包含单个鸟嘌呤残基的转录起始子序列和包含五个连续胸苷残基的终止子可操作连接的编码包含seqidno:101中列出的序列或由seqidno:101中列出的序列组成的shrna的序列。在另一个实例中，多种ddrnai构建体包含：(i)ddrnai构建体，其包含与u6启动子、包含单个鸟嘌呤残基的转录起始子序列和包含六个连续胸苷残基的终止子可操作连接的编码包含seqidno:79中列出的序列或由seqidno:79中列出的序列组成的shrna的序列；和(ii)ddrnai构建体，其包含与启动子和包含至少五个胸苷残基的终止子和任选地转录起始子序列可操作连接的编码本公开的至少一种其它rna的序列；或(iii)ddrnai构建体，其包含与u6启动子、包含单个鸟嘌呤残基的转录起始子序列和包含五个连续胸苷残基的终止子可操作连接的编码包含seqidno:101中列出的序列或由seqidno:101中列出的序列组成的shrna的序列。本公开还提供了多个ddrnai构建体，其中多个包括：(i)ddrnai构建体，其包含与u6启动子、包含单个鸟嘌呤残基的转录起始子序列和包含五个连续胸苷残基的终止子可操作连接的编码包含seqidno:92中列出的序列或由seqidno:92中列出的序列组成的shrna的序列；和(ii)ddrnai构建体，其包含与u6启动子和包含六个连续胸苷残基的终止子可操作连接的编码包含seqidno:78中列出的序列或由seqidno:78中列出的序列组成的shrna的序列；或(iii)ddrnai构建体，其包含与启动子和包含至少五个胸苷残基的终止子和任选地转录起始子序列可操作连接的编码本公开的至少一种其它rna的序列。本公开还提供了多种ddrnai构建体，其中所述多种包含：(i)ddrnai构建体，其包含与u6启动子、包含单个鸟嘌呤残基的转录起始子序列和包含五个连续胸苷残基的终止子可操作连接的编码包含seqidno:92中列出的序列或由seqidno:92中列出的序列组成的shrna的序列；(ii)ddrnai构建体，其包含与u6启动子和包含六个连续胸苷残基的终止子可操作连接的编码包含seqidno:78中列出的序列或由seqidno:78中列出的序列组成的shrna的序列；和(iii)ddrnai构建体，其包含与u6启动子、包含单个鸟嘌呤残基的转录起始子序列和包含六个连续胸苷残基的终止子可操作连接的编码包含seqidno:79中列出的序列或由seqidno:79中列出的序列组成的shrna的序列。本公开还提供了多种ddrnai构建体，其中所述多种包括：(i)ddrnai构建体，其包含与u6启动子、包含单个鸟嘌呤残基的转录起始子序列和包含五个胸苷残基的终止子可操作连接的编码包含seqidno:92中列出的序列或由seqidno:92中列出的序列组成的shrna的序列；(ii)ddrnai构建体，其包含与u6启动子和包含六个连续胸苷残基的终止子可操作连接的编码包含seqidno:78中列出的序列或由seqidno:78中列出的序列组成的shrna的序列；和(iii)ddrnai构建体，其包含与u6启动子、包含单个鸟嘌呤残基的转录起始子序列和包含五个连续胸苷残基的终止子可操作连接的编码包含seqidno:101中列出的序列或由seqidno:101中列出的序列组成的shrna的序列。此外，所述或每种ddrnai构建体可以包含一个或多个多克隆位点和/或独特的限制性位点，它们在策略上定位为使得容易除去或替换启动子、rna编码序列和/或终止子元件。可以使用策略定位的限制性位点和/或互补的粘性末端，从较小的寡核苷酸组分组装所述或每种ddrnai构建体。根据本公开的一种方法的碱基载体包含具有多接头的质粒，其中所有位点是独特的(尽管这不是绝对要求)。序贯地，将每个启动子插入在其指定的独特位点之间，导致具有一个或多个启动子的基本盒，所有所述启动子都可以具有可变取向。序贯地，再次将退火引物对插入每个单独启动子下游的独特位点中，产生单一、双重或多表达盒构建体。可以使用在单一、双重或多表达盒插入物侧翼的两个独特的限制酶位点(相同或不同位点)将插入物移入例如adv主链中。可以使用本领域已知的任何合适的遗传工程技术(包括但不限于pcr的标准技术、寡核苷酸合成、限制性内切核酸酶消化、连接、转化、质粒纯化和dna测序)来完成所述或每种构建体的产生。如果所述或每种构建体是病毒构建体，则构建体包含例如将ddrnai构建体包装到允许将ddrnai构建体整合到靶细胞基因组中的病毒颗粒和/或序列所必需的序列。在一些实例中，所述或每个病毒构建体还含有允许病毒复制和增殖的基因，然而此类基因将以反式供应。另外，所述或每种病毒构建体载体包含以天然形式掺入或修饰的来自任何已知生物体的基因组的基因或遗传序列。例如，病毒构建体可以包含可用于在细菌中复制构建体的序列。所述或每种构建体还可以含有额外的遗传元件。可以包括在构建体中的元件的类型不以任何方式限制，并且可以由本领域技术人员选择。例如，另外的遗传元件可以包括报告基因，如荧光标记蛋白如gfp或rfp的一个或多个基因；容易测定的酶，如β-半乳糖苷酶、荧光素酶、β-葡糖醛酸糖苷酶、氯霉素乙酰转移酶或分泌性胚胎碱性磷酸酶；或对于免疫测定易于获得的蛋白质，如激素或细胞因子。可用于本公开实施方案的其它遗传元件包括编码对细胞赋予细胞选择性生长优势的蛋白质如腺苷脱氨酶、氨基糖苷转移酶、二氢叶酸还原酶、潮霉素-b-磷酸转移酶、药物耐受性的那些遗传元件，或编码提供营养缺陷型缺少的生物合成能力的蛋白质的那些基因。如果与所述构建体或每种构建体一起包括报告基因，则可以包括内部核糖体进入位点(ires)序列。在一个实例中，另外的遗传元件与独立的启动子/增强子可操作连接并且由所述独立的启动子/增强子控制。此外，可以使用用于在细菌中增殖构建体的合适的复制起点。复制起点的序列通常与ddrnai构建体和其它遗传序列分开。此类复制起点是本领域已知的，并且包括puc、cole1、2μm或sv40复制起点。表达构建体在一个实例中，本公开的ddrnai构建体包含在表达构建体内。在一个实例中，表达构建体是表达载体。在一个实例中，表达载体是质粒，例如如本领域中已知。在一个实例中，合适的质粒表达载体是例如具有u6启动子和近端序列元件7(pse7)的pssh载体。在一个实例中，表达载体是微型环dna。美国专利公开号2004/0214329中描述了微型环dna。微型环dna可用于持续高水平的核酸转录。环状载体的特征在于没有表达沉默细菌序列。例如，微型环载体与细菌质粒载体不同之处在于它们缺乏复制起点，并且缺少通常存在于细菌质粒中的药物选择标志物，例如β-内酰胺酶、tet等。因此，微型环dna在大小上变得更小，允许更有效的递送。在一个实例中，表达载体是病毒载体。可以使用基于任何合适的病毒的病毒载体来递送本公开的ddrnai。此外，杂合病毒系统可以是有用的。病毒递送系统的选择将取决于各种参数，如对于递送靶向的组织、系统的转导效率、致病性，免疫学和毒性忧虑等。基因治疗中使用的病毒系统常用的类别可以根据其基因组是整合到宿主细胞染色质中(肿瘤转录病毒(oncoretroviruse)和慢病毒)还是主要作为染色体外附着体持续(腺相关病毒、腺病毒和疱疹病毒)而分成两组。在一个实例中，本公开的病毒载体整合到宿主细胞的染色质中。在另一个实例中，本公开的病毒载体在宿主细胞的核中作为染色体外附加体持续。在一个实例中，病毒载体是腺病毒(adv)载体。腺病毒是具有26-48kbp之间的线性基因组的中等大小的双链、非包膜的dna病毒。腺病毒通过受体介导的结合和内化进入靶细胞，穿透非分裂细胞和分裂细胞二者中的细胞核。腺病毒严重依赖于宿主细胞来存活和复制，并且能够使用宿主的复制机制在脊椎动物细胞的核中复制。在一个实例中，病毒载体来自细小病毒科(parvoviridae)。细小病毒科是具有约5000个核苷酸长的基因组的小单链、非包膜dna病毒家族。家族成员中包括腺相关病毒(aav)。在一个实例中，本公开的病毒载体是aav。aav是依赖性细小病毒，其通常需要与另一种病毒(通常为腺病毒或疱疹病毒)共感染以起始和维持生产性感染性循环。在没有此类辅助病毒的情况下，aav仍然有能力通过受体介导的结合和内化来感染或转导靶细胞，穿透非分裂细胞和分裂细胞二者中的细胞核。由于在没有辅助病毒的情况下后代病毒不是由aav感染产生的，转导的程度仅限于感染病毒的初始细胞。正是这一特征使aav成为本公开的期望载体。此外，与逆转录病毒、腺病毒和单纯疱疹病毒不同，aav似乎缺乏人致病性和毒性(kay等人，nature，424:251(2003))。由于基因组通常仅编码两种基因，作为递送载体，aav受4.5单链千碱基(kb)的包装能力限制并不令人惊讶。然而，虽然这种大小限制可以限制可以被提送用于替代基因疗法的基因，但是它不会不利影响较短的序列如shrna的包装和表达。与本公开的ddrnai构建体一起有用的另一种病毒递送系统是基于来自逆转录病毒科的病毒的系统。逆转录病毒包括以两个独特特征为特征的单链rna动物病毒。首先，逆转录病毒的基因组是二倍体，由rna的两个拷贝组成。其次，该rna由病毒相关酶逆转录酶转录成双链dna。然后，该双链dna或原病毒可以整合到宿主基因组中，并作为宿主基因组的稳定整合的组分从亲本细胞传递到后代细胞。在一些实例中，病毒载体是慢病毒。慢病毒载体通常用水泡性口炎病毒糖蛋白(vsv-g)假型化，并且已经源自人免疫缺陷病毒(hiv)；visan-maedi，其引起绵羊中的脑炎(维斯纳病(visna))或肺炎；马感染性贫血病毒(eiav)，其引起马中的自身免疫性溶血性贫血和脑病；猫免疫缺陷病毒(fiv)，其引起猫中的免疫缺陷；牛免疫缺陷病毒(biv)，其引起牛中的淋巴结病和淋巴细胞增多；和猿猴免疫缺陷病毒(siv)，其引起非人灵长类中的免疫缺陷和脑病。基于hiv的载体通常保留亲本基因组的<5％，而基因组的<25％被掺入包装构建体中，这使产生恢复复制能力的hiv的可能性最小化。通过开发含有下游长末端重复序列中调节元件缺失的自失活载体，消除载体动员所需要的包装信号转录，进一步增加了生物安全性。使用慢病毒载体的主要优点之一是，即使在转导细胞的细胞分裂之后，基因转移在大多数组织或细胞类型中是持续的。用于表达本公开rna的基于慢病毒的构建体包含来自慢病毒的5’和3’长末端重复序列(ltr)的序列。在一个实例中，病毒构建体包含来自慢病毒的失活或自失活的3’ltr。可以通过本领域已知的任何方法使3’ltr变为自失活。例如，3’ltr的u3元件含有其增强子序列的缺失，例如tata框、sp1和nf-κb位点。由于自失活3’ltr，整合到宿主基因组中的原病毒将包含失活的5’ltr。ltr序列可以是来自任何物种的任何慢病毒的ltr序列。基于慢病毒的构建体还可以掺入mmlv或mscv、rsv或哺乳动物基因的序列。此外，来自慢病毒5’ltr的u3序列可以用病毒构建体中的启动子序列替代。这可以增加从包装细胞系中回收的病毒的滴度。还可以包括增强子序列。可以使用本领域技术人员已知的其它病毒或非病毒系统将本公开的ddrnai或核酸递送到目的细胞中，包括但不限于缺失基因的腺病毒转座子载体(参见yant等人，naturebiotech.20:999-1004(2002))；源自辛德比斯病毒(sindbisvirus)或塞米利奇森林病毒(semlikiforestvirus)的系统(参见perri等人，j.virol.74(20):9802-07(2002))；源自新城疫病毒或仙台病毒的系统。测试本公开的rna或ddrnai构建体细胞培养模型hbv不感染培养中的细胞。然而，将hbvdna(作为头至尾二聚体或作为>100％”的“超长”基因组)转染到huh7或hepg2肝细胞中导致病毒基因表达，并且将hbv病毒体的产生释放到培养基中。此类细胞系的一个实例是hepg2.2.15，其是hepg2人肝细胞癌细胞系的亚细胞系，其稳定地含有完整的hbv基因组(血清型ayw，基因型d)。hepg2.2.15表达所有hbv病毒rna和蛋白质，产生病毒基因组，并且分泌病毒样颗粒。如本文中例示，通过将rna施用于细胞并随后测量由hbv基因组编码的rna或蛋白质的表达水平来确定本公开的rna的活性。可以通过用于hbvrna的taqmantm测定或其它实时pcr检测法或通过用于hbv蛋白的elisa测定胞内hbv基因表达。可以通过用于dna的pcr或用于蛋白质的elisa测定胞外病毒。抗体对于hbv表面抗原和核心蛋白是商品化的。用于归一化转染效率和样品回收差异的各种手段是本领域中已知的。使用原代人肝细胞的细胞培养系统的最新进展显示用于测定hbv治疗剂活性的前景。与不存在本公开的rna的情况下相比，将hbv基因组编码的rna或蛋白质的表达降低至少50％的本公开的rna认为在本公开的方法中是有用的。动物模型有几种可用于研究hbv复制的小动物模型。一种是将hbv感染的肝组织移植到照射的小鼠中。病毒血症(如通过pcr测量hbvdna证明)首先在移植后8天检测到，并在18-25天之间达到峰值(ilan等人，1999,hepatology,29,553-562)。表达hbv的转基因小鼠也被用作评估潜在的抗病毒药物的模型。在转基因小鼠的肝脏和血清两者中都检测到hbvdna(morrey等人，antiviralres.,42,97-108,1999)。另外的模型是用经hbv转染的hepg2细胞在裸鼠中建立皮下肿瘤。肿瘤在接种后约2周内形成，并表达hbv表面和核心抗原。在携带肿瘤的小鼠的循环中也检测到hbvdna和表面抗原(yao等人,j.viralhepat.,3,19-22,1996)。使用的另外的模型是pxb小鼠，即小鼠的嵌合组，其中具有肝脏疾病的免疫缺陷小鼠(upa/scid)已经用人肝细胞移植。由于upa/scid小鼠表现出显著的肝脏毒性，因此移植健康人细胞可导致具有健康和功能性肝脏的小鼠的产生，所述肝脏已被人肝细胞70-90％再增殖。由于pxb小鼠表现出肝脏中正常的组织学结构，并且表现出人肝细胞的许多标志，小鼠可以在嵌合肝组织中维持活动性hbv感染。另外的模型是使用quantumb模型，它是一种三维细胞培养平台，其中人肝细胞供应到模型中，以模仿人肝脏的结构和生理学的方式组装。由于该模型仅由肝的肝细胞构成，它被认为是乙型肝炎的第一个长期稳定的完全人完整病毒生命周期模型，并且重演了hbv感染生命周期的一些关键特征。任何上述动物模型可用于测定本公开的rna在治疗或减少hbv感染中的功效。载体在一些实例中，本公开的rna或ddrnai或表达构建体在具有载体的组合物中。在一些实例中，载体是基于脂质的载体、阳离子脂质或脂质体核酸复合物、脂质体、胶束、病毒体、脂质纳米颗粒或其混合物。在一些实例中，载体是基于聚合物的载体，如阳离子聚合物-核酸复合物。在另一个实例中，载体是基于环糊精的载体，如环糊精聚合物-核酸复合物。在另一个实例中，载体是基于蛋白质的载体，如阳离子肽-核酸复合物。在另一个实例中，载体是脂质纳米颗粒。示例性的纳米颗粒描述于例如us7514099中。在一些实例中，用包含阳离子脂质/胆固醇/peg-c-dma/dspc(例如，以40/48/2/10比率)、阳离子脂质/胆固醇/peg-dmg/dspc(例如，以40/48/2/10比率)或阳离子脂质/胆固醇/peg-dmg(例如，以60/38/2比率)的脂质纳米颗粒组合物配制本公开的rna或ddrnai或表达构建体。在一些实例中，阳离子脂质是辛基clindma、dlindma、l-278、dlinkc2dma、或mc3。在另一个实例中，用wo2010/021865；wo2010/080724；wo2010/042877；wo2010/105209或wo2011/022460中描述的任何阳离子脂质制剂配制本公开的rna或ddrnai或表达构建体。在另一个实例中，本公开的rna或ddrnai或表达构建体与另一种化合物缀合或复合，例如促进rna或ddrnai或表达构建体的递送。此类缀合物的非限制性的实例描述于us2008/0152661和us2004/0162260中(例如cdm-lba、cdm-pip-lba、cdm-peg、cdm-nag等)。在另一个实例中，将聚乙二醇(peg)共价连接到本公开的rna或ddrnai或表达构建体。连接的peg可以是任何分子量，例如约100至约50,000道尔顿(da)。在另一个实例中，用载体配制本公开的rna或ddrnai或表达构建体，所述载体包含含有聚(乙二醇)脂质(peg-修饰的或长循环脂质体或隐形脂质体)的表面改性脂质体，如例如公开在wo96/10391；wo96/10390；或wo96/10392。在一些实例中，本公开的rna或ddrnai或表达构建体也可以与/用聚乙烯亚胺或其衍生物，如聚乙烯亚胺-聚乙二醇-n-乙酰半乳糖胺(pei-peg-gal)或聚乙烯亚胺-聚乙二醇-三-n-乙酰半乳糖胺(pei-peg-trigal)衍生物配制或复合。在一个实例中，本公开的rna或ddrnai或表达构建体如美国专利申请公开号2003/0077829中所述进行配制。在其它实例中，本公开的rna或ddrnai或表达构建体与膜破坏剂，如美国专利申请公开号2001/0007666中描述的那些膜破坏剂复合。其它载体包括环糊精(参见例如gonzalez等人,1999,bioconjugatechem.,10,1068-1074；或wo03/46185)、聚(乳酸-共-乙醇酸)(plga)和plca微球(参见例如us2002130430)。组合物和治疗方法本公开的rna或ddrnai或表达构建体用于预防或治疗hbv感染的组合物中。本公开的治疗组合物可以单独使用或与一种或多种材料，包括其它抗病毒剂组合使用。目前，拉米夫定、阿德福韦二匹伏酯(adefovirdipivoxil)和干扰素α已被批准用于治疗hbv。由于本公开的rna或ddrnai或表达构建体通过与其它批准药物不同的机制对hbv起作用，本公开的药剂和其它抗病毒药的联合疗法预期将显著增加疗法的功效，同时显著减少药物抗性的形成，例如拉米夫定抗性的形成(长期拉米夫定疗法的主要担忧问题)。期望地，组合物将包括增加本公开的rna或ddrnai或表达构建体的生物学稳定性的物质和/或增加组合物选择性穿透肝细胞的能力的材料。本公开的治疗组合物可以在药学上可接受的载体(例如生理盐水)中施用，所述药学上可接受的载体基于施用的模式和途径以及标准药学实践来选择。本领域普通技术人员可以容易地配制包含本公开的rna或ddrnai或表达构建体的药物组合物。在某些情况下，使用等张制剂。通常，等张性的添加剂可以包括氯化钠、右旋糖、甘露糖醇、山梨糖醇和乳糖。在某些情况下，优选等张溶液，如磷酸盐缓冲盐水。稳定剂包括明胶和白蛋白。在一些实例中，将血管收缩剂加入制剂中。提供无菌且无热原的根据本公开的组合物。remington:thescienceandpracticeofpharmacy(先前为remington'spharmaceuticalsciences),mackpublishingco.(此领域的标准参照教科书)和usp/nf中描述了合适的药物载体以及用于药物制剂的药用必需品。施用途径包括但不限于肌内、腹膜内、皮内、皮下、静脉内、鞘内、动脉内、眼内和口腔以及透皮或通过吸入或栓剂。示例性的施用途径包括静脉内、肌肉内、口服、腹膜内、皮内，动脉内和皮下注射。用于递送本公开的rna或ddrnai或表达构建体的肝细胞的体内靶向转染可以通过用组合物的iv注射实现，所述组合物包含与乳糖基酰精胺(单或三乳糖基化)和胆固醇精胺的混合物(如，35％/65％比率)复合的如本文中所述的dna或rna表达载体(以0.8的装料比率包含精胺与dna)。此类组合物可用于药物应用，并且可以容易地在合适的无菌非热原载体，例如用于注射的缓冲盐水中配制，用于肠胃外施用，例如iv(包括iv输注)、im、sc和用于腹膜内施用。在某些组合物中，本公开的ddrnai构建体与内体裂解(endosomolytic)精胺如单独的胆固醇精胺复合而没有靶向精胺；一些施用途径，如腹膜内注射或输注，可以实现有效的肝脏递送和ddrnai构建体转染，以及rna表达。在特殊配制的递送载体中包含本公开的rna或ddrnai或表达构建体的无菌药物组合物的腹膜内施用(例如超声引导的腹膜内注射)可以是有利的递送途径，以促进包括肝细胞在内的肝脏细胞摄取。药物组合物的体积、浓度和配方以及给药方案可以专门调整以使细胞递送最大化，同时最小化诸如炎症反应的毒性。例如，如果想要的话，可以使用相对大体积(5、10、20、50ml或更多)及相应的低浓度活性成分，以及包含抗炎化合物如皮质类固醇。在hbv感染的个体中，预期本公开的rna或ddrnai或表达构建体与治疗性疫苗接种方案结合可用作预处理，所述治疗性疫苗接种方案设计用于加强针对病毒的免疫。还预期本公开的rna或ddrnai或表达构建体在对个体的定期施用的方案中可用于预防，所述个体由于暴露的职业或其它潜力而认为具有暴露于hbv的高风险。试剂盒本公开还提供了试剂盒中的本公开的rna或ddrnai或表达构建体。试剂盒可以包括容器。该试剂盒通常含有本公开的rna或ddrnai或表达构建体以及关于其施用的说明书。在一些实例中，试剂盒含有本公开的超过一种rna或ddrnai或表达构建体和/或本公开的另一种rna或ddrnai或表达构建体。实施例实施例1-用于设计ddrnai构建体的靶区域从全长hbv基因组中鉴定出代表用于ddrnai构建体设计的潜在靶标的序列。简而言之，从非专有的公共领域来源检索的序列编制了hbv序列数据库。最初的集合是从genbank的202.0版(2014年6月15日)，使用搜索词{乙型肝炎病毒完整基因组(hepatitisbviruscompletegenome)}和{乙型肝炎病毒完整基因组+基因型(hepatitisbviruscompletegenome+genotype)}编制的；只包括人hbv序列。使用sequenceassembly，clustal，muscle和sequencher，5.0.1/5.2版进行初始序列比对。手动辅助初始比对以消除格式化导出的序列差异(例如，序列起始位点的变异)、人工病毒序列(例如，基于hbv的构建体)、明显的异常值(例如，较差的比对或与ns的比对，指示质量差的序列)和不正确注释的序列，包括重复条目。剩下的序列，其中有4345条序列代表所有hbv基因型(a-h)，使用clustalw(快和慢两者)和megalign(lasergene，第12版)进行重新比对。对所有基因型间最高保守的区域(至少18/20个核苷酸)扫描比对。选择10个最高度保守的区域作为设计shrna的靶标。表1中呈现了鉴定的靶区域的序列。实施例2-sirna双链体设计了包含与表1中描述的靶区域基本上互补的效应子序列的sirna双链体，并呈现于表2中。合成具有两个核苷酸3’dtdt突出端的sirna双链体。实施例3-sirna在双重荧光素酶报告物测定中的活性为了测试本公开的sirna敲低hbv转录物表达的功效，在hek293细胞中进行了双重荧光素酶报告物测定。为靶向区域4、区域5或区域9的每个区域的hbvsirna构建基于pgl3荧光素酶报告物载体的质粒报告物构建体。通过将每个末端具有20bp侧翼序列的针对区域4、区域5或区域9的hbvshrna靶序列插入pgl3对照载体(promega，madison，wi)上产生荧光素酶报告物构建体。在荧光素酶报告物基因的3’utr内使用fsei和xbai限制酶位点亚克隆插入物。在hek293细胞中进行双重荧光素酶报告物测定。hek293细胞系购自atcc(manassas，va)。将hek293细胞在含有5％co2的37℃潮湿培养箱中，在含有10％胎牛血清、2mm谷氨酰胺、青霉素(100u/ml)和链霉素(100μg/ml)的dmem培养基中培养。简言之，在转染前一天以每孔2x104个细胞的密度将hek293细胞接种到96孔培养板中。根据制造商的说明书，使用lipofectamine2000试剂(lifetechnologies，carlsbad，ca)，将具有分别称为shrna9、shrna15和shrna27的shrna的反义和有义序列的hbvsirna及其相应的荧光素酶报告物构建体共转染到hek293细胞中。对于每个转染孔，使用0.3ul的lipotectamine2000将1或2pmol的hbvsirna之一、10ng相应的荧光素酶报告物构建体和1ng的海肾(renilla)报告物构建体(充当上样对照)共转染。转染后48小时，收集细胞裂解物并使用双荧光素酶报告物测定系统(promega，madison，wi)进行分析。对每个孔测定萤火虫/海肾活性比率，并且通过相对于无关sirna，即siglo对照归一化来计算sirna的抑制效率。相对于siglo对照，每种hbvsirna，即shrna9、shrna15和shrna27的有义链和反义链在hek293细胞中对hbv报告物构建体的抑制百分比呈现于表8并且显示于图2。表8.在双重荧光素酶报告物测定中具有shrna9、shrna15和shrna27的反义和有义序列的sirna的抑制活性如从表8和图2明显的是，即使在以低至1pmol的量存在时，具有分别称为shrna9、shrna15和shrna27的shrna的反义和有义序列的示例性sirna下调在hek293细胞中从pgl3荧光素酶报告物载体表达的荧光素酶水平。实施例4-sirna针对hepg2.2.15细胞中表达的hbv抗原的活性为了测试本公开的sirna敲低hbv基因表达的功效，用本公开的代表性sirna转染hepg2.2.15，并测定对hbv基因表达的抑制。hepg2.2.15是hepg2人肝细胞癌细胞系的亚细胞系，其稳定地含有完整的hbv基因组(血清型ayw，基因型d)。hepg2.2.15表达所有hbv病毒rna和蛋白质，产生病毒基因组，并分泌病毒样颗粒。hepg2.2.15细胞由乔治城大学(georgetownuniversity)的brentkorba博士提供。将hepg2.2.15细胞在补充有4％胎牛血清、4mm谷氨酰胺、青霉素(100u/ml)和链霉素(100μg/ml)的rpmi1640培养基中维持，并在37℃的潮湿培养箱中在5％co2的气氛中增殖。使用lipofectaminernaimax试剂(lifetechnologies，carlsbad，ca)在悬浮液中用具有分别称为shrna9、shrna15和shrna27的shrna的反义和有义序列的hbvsirna转染细胞。根据制造商的说明书进行转染。对于每次转染，将hepg2.2.15细胞以9x104个细胞/孔的密度接种到24孔培养板上，并使用1.5ullipotectaminernaimax用5pmol的hbvsirna之一转染。转染后72小时，收获细胞的rna。使用mirneasy微型试剂盒(mirneasyminikit)(qiagen，valencia，ca)分离总rna。使用nanodrop1000分光光度计(thermoscientific)对总rna进行定量，并稀释至10ng/μl的工作浓度。根据制造商的说明书，使用大容量cdna逆转录试剂盒(highcapacitycdnareversetranscriptionkit)(lifetechnologies，carlsbad，ca)，使用100纳克的总rna合成cdna。使用powersybr绿色pcr主体混合物(powersybrgreenpcrmastermix)(lifetechnologies)和表9中列出的以下引物组进行hbv抗原hbsag、hbcag、hbxag和gapdh内区域的定量pcr扩增。使用标准实时pcr条件：在95℃下初始变性10分钟，然后进行95℃15秒和60℃1分钟的40个循环。表9–rt-qpcr的引物组相对于gapdhmrna的水平，测定对应于hbv抗原hbsag、hbcag和hbxag的区域处hbv转录物的抑制水平。相对于阴性对照(在这种情况下是siglosirna(dharmacon))计算hbsag、hbcag、hbxamrna表达的抑制百分比。在对应于hbv抗原hbsag、hbcag和hbxag的区域处的hbv转录物的抑制水平呈现于表10并且显示于图3。图4显示hbvsirna相对于hbv聚合酶基因和相应hbv抗原hbsag、hbcag和hbxag的位置。表10.sirna对hepg2.2.15细胞中hbv抗原表达的抑制实施例5-双重荧光素酶报告物测定中ddrnai表达构建体的活性为了测试本公开的表达shrna的ddrnai表达构建体敲低hbv转录物的功效，在hek293细胞中进行双重荧光素酶报告物测定。进行初始筛选以确定本公开的以下26种shrna的链偏好：shrna1、shrna4、shrna15、shrna18、shrna35、shrna36、shrna39、shrna5、shrna6、shrna7、shrna8、shrna25、shrna26、shrna30、shrna40、shrna9、shrna10、shrna11、shrna12、shrna33、shrna34、shrna19、shrna20、shrna23和shrna24。针对26条shrna序列中每条的有义链和反义链，构建了基于pgl3荧光素酶报告物载体的质粒报告物构建体。通过将每个末端处具有20bp侧翼序列的各个shrna(适当时)的有义链序列或反义链序列插入pgl3对照载体(promega，madison，wi)中来产生荧光素酶报告物构建体。在荧光素酶报告物基因后使用fsei和xbai限制酶位点亚克隆插入物。hek293细胞系购自atcc(manassas，va)。将hek293细胞在具有5％co2的37℃潮湿培养箱中，在含有10％胎牛血清、2mm谷氨酰胺、青霉素(100u/ml)和链霉素(100μg/ml)的dmem培养基中培养。简言之，在转染前一天将hek293细胞以2x104个细胞/孔的密度接种到96孔培养板中。对于每种shrna，通过将相应的shrna序列插入具有u6启动子和近端序列元件7(pse7)的pssh载体中构建ddrnai表达构建体。u6启动子基于人u6-1、u6-8或u6-9序列。对于每个转染孔，根据制造商的说明书，使用0.3ul的lipofectamine2000试剂(lifetechnologies，carlsbad，ca)，以比率10:1(ddrnai表达构建体:荧光素酶报告物构建体)将相应的将ddrnai表达构建体和两种荧光素酶报告物构建体之一共转染到hek293细胞中。也用1ng的海肾报告物构建体(充当转染对照)转染细胞。转染后48小时，收集细胞裂解物，并使用双重荧光素酶报告物测定系统(promega，madison，wi)进行分析。测定每孔的萤火虫/海肾活性比率。相对于阴性对照(在这种情况下，使用u6-9启动子表达与人或小鼠序列没有同源性的随机非靶向序列的构建体，称为u6-9cont)计算报告物表达的抑制百分比。u6-9cont设计为表达序列cgtcggtaccacaagcaagagtcggcagtaagaagatggcgtatatattatgaaaggtaccgagattggccattcggagtgtttagtcgaccaaactgat。一式两份进行实验。在图5a-5f中显示了每种shrna抑制从相应的荧光素酶报告物构建体表达荧光素酶蛋白的能力。所测定的26种shrna中的7种基于其抑制荧光素酶蛋白从相应的荧光素酶报告物构建体表达的能力经选择用于进一步测试，即shrna1、shrna15、shrna36、shrna27、shrna30、shrna9和shrna20。对这7种shrna进行9点剂量响应曲线，以评估发夹的功能特性。进行两次剂量曲线实验：实验1：以范围为1:1至1:5000的shrna:靶标比率转染hek293细胞；和实验2：以范围为10:1至1:500的shrna:靶标比率转染hek293细胞。在实验1和2的每项中，针对设计用于检测由反义链对荧光素酶活性的抑制的荧光素酶报告物构建体测试七种shrna，即包括有义链序列。如上所述设计报告物构建体。相应的shrna的ddrnai表达构建体也如上所述。实验1在转染前一天，将hek293细胞以2.5x104个细胞/孔的密度接种到96孔培养板中。对于7种ddrnai表达构建体中的每种，使用0.3ul的lipofectamine2000试剂(lifetechnologies，carlsbad，ca)根据制造商的说明书，用50ng、25ng、10ng、2.5ng、0.83ng、0.28ng、0.09ng、0.03ng或0.01ng的相应ddrnai表达构建体和50ng相应的荧光素酶报告物构建体共转染含有hek293细胞的孔。还用1ng的海肾报告物构建体(充当上样对照)转染细胞。转染后48小时，收集细胞裂解物，并使用双重荧光素酶报告物测定系统(promega，madison，wi)进行分析。测定每个孔的萤火虫/海肾活性比，并计算ddrnai表达构建体的抑制效率。在图6a-6j中显示了每种ddrnai表达构建体以剂量依赖性方式抑制从相应的荧光素酶报告物构建体表达荧光素酶的能力。实验2在转染前一天，将hek293细胞以2.5x104个细胞/孔的密度接种到96孔培养板中。对于7种ddrnai表达构建体中的每种，使用0.3ul的lipofectamine2000试剂(lifetechnologies，carlsbad，ca)根据制造商的说明书，用100ng、50ng、20ng、5ng、1.67ng、0.56ng、0.19ng、0.06ng或0.02ng的相应ddrnai表达构建体和10ng相应的荧光素酶报告物构建体共转染含有hek293细胞的孔。还用1ng的海肾报告物构建体(充当上样对照)转染细胞。转染后48小时，收集细胞裂解物，并使用双重荧光素酶报告物测定系统(promega，madison，wi)进行分析。测定每个孔的萤火虫/海肾活性比，并计算ddrnai表达构建体的抑制效率。在图7a-7j中显示了每种ddrnai表达构建体以剂量依赖性方式抑制从相应的荧光素酶报告物构建体表达荧光素酶的能力。实施例6-用填充质粒共转染的ddrna的机能亢进特性然后，在hek293细胞中用u69-pse7fix-random100(pbl-153)填充质粒共转染时，评估实施例5中描述的七种前导ddrnai构建体的机能亢进(hyperfunctional)特性。对于ddrnai构建体的7条shrna序列中每条的有义链和反义链，制备基于pgl3荧光素酶报告物载体的质粒报告物构建体，如前所述。根据先前描述的方法培养hek293细胞，并在转染前一天以2.5x104个细胞/孔的密度接种到96孔培养板中。对于七种ddrnai表达构建体中的每种，使用0.3ul的lipofectamine2000试剂(lifetechnologies，carlsbad，ca)根据制造商的说明书，用(i)50ng、25ng、10ng、2.5ng、0.83ng、0.28ng、0.09ng、0.03ng或0.01ng相应的ddrnai表达构建体、(ii)各种量的填充质粒以将最终dna含量调节至50ng、和(iii)50ng相应的荧光素酶报告物构建体共转染含有hek293细胞的孔。还用1ng的海肾报告物构建体(充当上样对照)转染细胞。转染后48小时，收集细胞裂解物，并使用双重荧光素酶报告物测定系统(promega，madison，wi)进行分析。测定每个孔的萤火虫/海肾活性比，并计算ddrnai表达构建体的抑制效率。在图8a-8j中显示了当用填充质粒共转染时，每种ddrnai表达构建体以剂量依赖性方式抑制从相应的荧光素酶报告物构建体表达荧光素酶的能力。实施例7-变体shrna的hbv抑制活性对于称为shrna9(seqidno:73)和shrna20(seqidno:84)的shrna的每一种，设计并制备两种变体shrna。制备的变体如下：shrna13(seqidno:77)；shrna14(seqidno:78)；shrna21(seqidno:85)；和shrna22(seqidno:86)。通过将初始和变体shrna序列的每一种插入两种ppsh载体(一种包含u69-pse7-u68杂合启动子，而另一种包含u69-pse7启动子)中来制备ddrnai构建体。然后，在hek293细胞中进行双重荧光素酶报告物测定，以测试各种shrna敲低hbv基因表达的功效。根据先前描述的方法，针对每种ddrnai表达构建体中的shrna的有义链和反义链制备荧光素酶报告物构建体。在含有5％co2的37℃潮湿培养箱中，将hek293细胞在含有10％胎牛血清、2mm谷氨酰胺、青霉素(100u/ml)和链霉素(100μg/ml)的dmem培养基中培养。在转染前一天，将hek293细胞以2x104个细胞/孔的密度接种到96孔培养板中。对于每个转染孔，根据制造商的说明书，使用0.3ullipofectamine2000试剂(lifetechnologies，carlsbad，ca)，将10ng相应的ddrnai表达构建体和100ng两种荧光素酶报告物构建体之一共转染到hek293细胞中。还用5ng的海肾报告物构建体(充当上样对照)转染细胞。转染后48小时，收集细胞裂解物，并使用双重荧光素酶报告物测定系统(promega，madison，wi)进行分析。测定每孔的萤火虫/海肾活性比，并计算相应shrna的抑制效率。图9a-9b中显示了每种shrna抑制从相应荧光素酶报告物构建体表达荧光素酶蛋白的能力。实施例8-adv-shrna载体的制备合成称为shrna14、shrna15、shrna37和shrna28的shrna的hbvshrna序列，并且在修饰的u6-1、u6-8或u6-9启动子下游克隆。将整个表达盒亚克隆到来自vectorbiolabs(malvern，pa)的用于病毒生产的腺病毒(adv)构建体中。实施例9-hepg2.2.15细胞中hbv转录物的shrna敲低根据实施例8，为称为shrna14、shrna15、shrna37和shrna28的shrna制备hbvshrnaadv载体。根据实施例4中描述的方法制备hepg2.2.15细胞，随后用hbvshrnaadv载体转导。然后用细胞悬浮液中的hbvshrnaadv载体感染hepg2.2.15细胞，并在24孔板上培养。简言之，每孔含有1.0x105个hepg2.2.15细胞的悬浮液和以下moi的hbvshrnaadv载体之一：6、15、30、60、90或120。为了模拟用三重hbvshrna表达盒的处理，也以下列每种moi用三种hbvshrna腺病毒同时感染细胞培养物：2、5、10、20、30、40、60或90。模拟的三重hbvshrna表达盒为(i)shrna14/shrna15/shrna28和(ii)shrna14/shrna37/shrna28。转导后，在37℃，5％co2下培养细胞72小时，然后收获，以分别使用qiagenmirneasy微型试剂盒和qiampdna微型试剂盒(valencia，ca)进行rna和dna提取。使用mirneasy微型试剂盒(qiagen，valencia，ca)分离总rna。使用nanodrop1000分光光度计(thermoscientific)对总rna进行定量，并稀释至10ng/μl的工作浓度。使用qiagen的miscriptpcr系统(valencia，ca)测量adv载体的shrna产生。对于每个rt-qpcr分析，使用qiagen的miscriptiirt试剂盒将50ng总rna转化成cdna。然后使用含表11所示的定制引物的qiagenmiscriptsybr绿色pcr试剂盒和以下实时pcr条件进行shrna的定量pcr：95℃初始变性15分钟，然后94℃15秒，55℃30秒和70℃30秒的40个循环。表11.用于定量shrna表达的定制引物引物序列(5’–3’)shrna15_fwdacaaacgggcaacataccttgshrna37_fwdgggaaagccctacgaaccactgshrna28_fwdggattcagcgccgacgggacgshrna14_fwdttcttcttctaggggacctgc为了帮助确定各种shrna的表达水平，针对预测从shrna加工的前导rna序列(表12)开发了qpcr标准测定。表12.前导rna序列引物序列(5’–3’)shrna15_stdacaaacgggcaacauaccuugshrna37_stdgggaaagcccuacgaaccacugshrna28_stdggauucagcgccgacgggacgshrna14_stduucuucuucuaggggaccugc通过扩增已知量的这些前导rna产生这些测定的标准曲线，并在图10中显示。基于每个细胞中20ng总rna的估值，计算每个细胞的rna拷贝数。当在各种moi下单独表达时并且当在各种moi下在三重组合中同时表达时，测定shrna14、shrna15、shrna37和shrna28中每一种的每个细胞的shrna拷贝(图11a-11d)。总之，用三重hbvshrnaadv组合转导的细胞中的单独shrna表达比用相同剂量(例如moi30vsmoi30+30+30)的单个hbvshrnaadv载体转导的那些细胞低1.5-2.0倍。然后，对于每个样品，通过相对于gapdhmrna将hbvmrna转录物水平归一化来确定相对于gapdhmrna的水平，对应于hbv抗原hbsag、hbcag和hbxag的区域处hbv转录物的抑制水平。简言之，根据制造商的说明书，使用大容量cdna逆转录试剂盒(lifetechnologies，carlsbad，ca)，使用100ng总rna合成cdna。使用powersybr绿色pcr主体混合物(lifetechnologies)和表9中列出的引物组进行hbv抗原hbsag、hbcag、hbxag和gapdh内区域的定量pcr扩增。使用标准实时pcr条件：初始变性95℃10分钟，然后进行95℃15秒和60℃1分钟的40个循环。图12a-12f中显示了当单独表达时，并且在以各种moi在三重组合中同时表达时，对于shrna14、shrna15、shrna37和shrna28中每一种，相对于gapdhmrna的水平，对应于hbv抗原hbsag、hbcag和hbxag的区域处hbv转录物的抑制水平。如从图12a-12f明显的是，三重组合显示相对于单个shrna构建体显著更好的hbvrna敲低，特别是当作为较低等同剂量转导时。实施例10-hepg2.2.15细胞中hbv转录物的shrna敲低根据实施例8，针对分别称为shrna14、shrna15、shrna37和shrna28的shrna制备单个hbvshrnaadv载体。还制备了两种三重hbvshrnaadv载体，每种包含三重hbvshrna表达盒。三重hbvshrna表达盒分别包含编码(i)shrna14/shrna15/shrna28和(ii)shrna14/shrna37/shrna28的序列和三种修饰的u6启动子(即u6-1、u6-8或u6-9启动子)，一个紧挨在盒中每条shrna编码序列的上游。各自合成三重hbvshrna表达盒，并将其亚克隆到来自vectorbiolabs(malvern，pa)的用于病毒生产的腺病毒(adv)构建体中。根据实施例4中所述的方法制备hepg2.2.15细胞。然后用细胞悬浮液中的单一或三重hbvshrnaadv载体感染hepg2.2.15细胞，并在24孔板上培养。简言之，每个孔含有1.2x105个hepg2.2.15细胞的悬浮液和moi100的单一或三重hbvshrnaadv载体之一。转导后，在37℃，5％co2下培养细胞72小时、96小时、120小时和144小时，然后收获，以分别使用qiagenmirneasy微型试剂盒和qiampdna微型试剂盒(valencia，ca)进行rna和dna提取。根据实施例9中所述的方法分离并制备总rna。还根据实施例9中所述的方法测量adv载体的shrna产生。当从moi100的单一或三重hbvshrnaadv载体表达时，对shrna14、shrna15、shrna37和shrna28中每种测定每个细胞的shrna拷贝(图13a-d)。总体上，用三重hbvshrnaadv载体转导的细胞中在72小时的单独shrna表达与用单一hbvshrnaadv载体转导的细胞相当。即使在转导6天后，shrna15和shrna37继续积累，而shrna14和shrna28表达水平在第5天似乎达到稳定。然后根据实施例9中描述的方法，对于每个样品，通过相对于gapdhmrna将hbvmrna转录物水平归一化来测定相对于gapdhmrna的水平，对应于hbv抗原hbsag、hbcag和hbxag的区域处hbv转录物的抑制水平。图14a-f中显示了72小时、96小时、120小时和144小时时从moi100的单一或三重hbvshrnaadv载体表达时，对于shrna14、shrna15、shrna37和shrna28中每种，相对于gapdhmrna水平，对应于hbv抗原hbsag、hbcag和hbxag的区域处hbv转录物的抑制水平。如从图14a-14f明显的是，三重hbvshrnaadv载体在72小时(第3天)时相对于相应的单一shrna载体显示了显著更好的hbvrna敲低。所有单一hbvshrnaadv载体显示增加的敲低水平及延长的时程，并且在144小时(第6天)时与三重hbvshrnaadv载体相当。在144小时时，表达shrna14/shrna37/shrna28的三重hbvshrnaadv载体实现hbsag和hbxag区域中的超过90％敲低和hbcag区域中接近80％的敲低。实施例11-hbv转录物的体外抑制发明人确定了表达shrna14/shrna37/shrna28的三重hbvshrnaadv载体在用hbv接种物从头感染的细胞模型中对形成共价闭合环状dna(cccdna)的影响。根据实施例10制备表达shrna14/shrna37/shrna28的三重hbvshrnaadv载体。从phoenixbio小鼠模型中分离人肝细胞，该小鼠模型是具有用人肝细胞高度替换的肝脏(即，人源化肝脏)的嵌合小鼠。在接种前一天，将分离的人肝细胞(pxb细胞)以4.0x105个细胞/孔的密度接种到24孔培养板中。在第0天用hbv接种pxb-细胞。接种后，用(i)moi：10、30、60和100的三重hbvshrnaadv载体，或(ii)moi：10、30、60和100的adv载体主链处理细胞，或细胞(iii)不接受处理，然后在37℃，5％co2下培养6天、11天和16天，然后收获以使用qiagenmirneasy微型试剂盒和qiampdna微型试剂盒(valencia，ca)进行rna和dna提取。对于用三重hbvshrnaadv载体以moi10接种的pxb细胞，根据实施例9中描述的方法处理后第6天、11天和16天，对shrna14、shrna37和shrna28中的每一种测定每个细胞的shrna拷贝(图15a)。在用三重hbvshrnaadv载体处理后的第6天观察到hbv转录物的有效敲低(78-85％)，并且在处理后第16天观察到该敲低增加高达97-99％。发现在第6天和第16天之间hbv转录物的敲低的此种增加与adv载体产生的shrna伴随增加一致。根据实施例9中描述的方法，相对于仅用adv主链处理的那些细胞，对用三重hbvshrnaadv载体处理的细胞测量对应于hbv抗原hbsag、hbcag和hbxag的区域处的hbv转录物的抑制水平(图15b)。用三重hbvshrnaadv载体处理后的细胞内和细胞外hbvdna的水平也通过实时pcr测定测量，并在图15c中显示。处理后第11天分别观察到细胞内和细胞外hbvdna降低85％和1个对数。根据实施例9中描述的方法测量对应于hbv抗原hbsag和hbcag的区域处hbv转录物的水平，其结果示于图15d中。与adv主链对照相比，用三重hbvshrnaadv载体处理的细胞中，在第11天观察到细胞外hbcag和hbsag的水平下降约90％。在用三重hbvshrnaadv载体处理后，也在pxb细胞中测量cccdna水平，其结果在图15e中显示。在处理后11天，与用adv主链对照处理的hbv感染的pxb细胞和未处理的pxb细胞相比，在用三重hbvshrnaadv载体处理的hbv感染的pxb细胞中观察到cccdna的66％降低。实施例12-hbv转录物的体内抑制在用hbv接种物从头感染的pxb小鼠模型中测定表达shrna14/shrna37/shrna28的三重hbvshrnaadv载体对(i)hbv病毒转录物的表达，(ii)胞外hbsag和hbeag，(iii)胞外和胞内hbvdna，以及(iv)cccdna形成的体内影响。方法根据实施例10制备表达shrna14/shrna37/shrna28的三重hbvshrnaadv载体。从phoenixbio获得嵌合pxb小鼠所有小鼠分别在23±5℃和湿度55±25％的湿度下饲养，暴露于12小时光/暗循环，并在整个实验中随意喂养和喂水。简言之，将19-23周龄的雄性pxb小鼠接种hbv基因型c并孵育4周以允许建立基线hbv感染。为了确定基线hbv感染，在第-28、-21、-14和-7天(分别为接种后0、7、14和21天)从小鼠采集血液，从中测定人白蛋白(h-alb)浓度以及hbvdna、hbsag和hbeag的血清浓度。在每个时间点时使用intramedictm聚乙烯管(becton，dickinsonandcompany，nj，usa)，经由眶后丛/窦在异氟烷(mylan，osaka，japan)麻醉下从动物中收集血液。为了测量血液h-alb浓度，将2μl全血稀释于盐水中，并且使用临床化学分析仪(biomajestytm系列jca-bm6050，jeolltd.，tokyo，japan)以使用胶乳凝集免疫比浊法(lztest“eiken”u-alb，eikenchemicalco.，ltd.，tokyo，japan)测定血液h-alb浓度。将全血离心以分离血清，用于hbvdna定量、hbsag和hbeag分析。为了测量血清hbvdna，使用smitestex-r&d核酸提取试剂盒(smitestex-r&dnucleicacidextractionkit)(medical&biologicallaboratoriesco.,ltd.,nagoya,japan)从5μl血清中提取hbvdna。然后将纯化的dna溶于20μl无核酸酶水(ambion)中。使用来自hbv感染的pxb小鼠的血清作为hbvdna标准物。使用合成的hbvdna测定hbvdna标准物的浓度，然后将其用于血清hbvdna水平的定量。从hbvdna标准物中提取hbvdna，并且在适当稀释后用于实时pcr。对于本研究，所用标准物的范围在4.0e+04和2.0e+09个拷贝/ml之间。使用taqman快速高级主体混合物(taqmanfastadvancedmastermix)(appliedbiosystems，thermofisherscientificinc.)和abiprism7500序列检测器系统(appliedbiosystems)进行实时pcr来测量血清hbvdna浓度。将pcr反应混合物加入到5μl提取的dna中。在50℃下初始活化尿嘧啶-n-糖基化酶2分钟，继之以聚合酶在95℃活化20秒。随后的pcr扩增在abi7500序列检测器中由每个循环的95℃变性3秒和60℃退火和延伸32秒的53个循环组成。从两个分开的孔的数值计算平均血清hbvdna水平。用于实时pcr的引物和探针如下：该测定的最低定量限为4.0e+04个拷贝/血清ml。使用由abbott(system)开发的chemiluminescenceimmunoassay(clia)由srl，inc.(tokyo，japan)确定血清hbsag浓度。稀释因子为30，并且此测定的测量范围为0.05-250iu/ml。对于30倍稀释的样品，将测量范围调节至1.5至7500iu/ml。使用由abbottsystem)开发的chemiluminescenceimmunoassay(clia)由srl，inc.(tokyo，japan)确定血清hbeag浓度。稀释因子为30，并且该测定的最低定量限为0.5s/co。对于30倍稀释的样品，将最低量化限调节为15s/co。如果动物满足以下标准，则将它们纳入随后的处理实验中：(i)在第-1天(即hbv接种后第27天)称重为15g或更大；(ii)在第-7天(即hbv接种后第21天)具有至少1.0e+6个拷贝/ml的血清hbvdna浓度；和(iii)在第-7天(即hbv接种后第21天)具有10mg/ml或更大的h-alb测量值。将基线hbv感染得到建立并且满足上述标准的那些小鼠置于三个处理组中，即处理组1-3(每组n＝4)。为了使组间差异最小化，基于体重的算术平均值和血液h-alb浓度和血清hbvdna浓度的几何平均值将组的组合物随机化。处理组如下：组1：无处理；组2：单次推注，具有剂量体积10μl/体重g，含有2.00e+11vg/ml的三重hbvshrnaadv载体，通过iv注射递送至尾静脉；和组3：单次推注，具有剂量体积10μl/体重g，含有2.00e+12vg/ml三重hbvshrnaadv载体，通过iv注射递送至尾静脉。在施用处理(第0天)后，然后将动物再孵育56天。在此时间期间，每周采集血液达8周(处理后第7、14、21、28、35、42、49和56天)，并且通过实时pcr使用所描述的方法测定胞外hbsag、胞外hbeag和胞外hbvdna的血清浓度。在第56天完成血液取样后，将所有存活的动物置于异氟醚麻醉下，并通过心脏穿刺和驱血法处死。一旦处死，从小鼠收获整个肝脏并且称重。从左侧瓣获得厚度为3至5mm的切片，并将其切成一侧约1至2mm的立方体。将这些肝立方体转移到标记的管中并尽可能快地浸入溶液(ambion，thermofisherscientificinc.，waltham，ma，usa)。将肝样品在≥5体积的中在4℃下孵育过夜以使溶液穿透组织。孵育后，除去溶液，并将肝片储存在-80℃，以便以后定量肝脏hbvdna水平。为了确定处理后肝脏hbvdna的水平，使用血液和组织试剂盒(blood&tissuekits)(qiagenk.k.，tokyo，japan)从冷冻保存的肝组织中提取hbvdna。将dna溶解于200μl无核酸酶水中，然后使用biophotometer6131(eppendorfco.，ltd.，tokyo，japan)测定dna溶液的浓度。使用无核酸酶水将dna溶液的浓度调节至20ng/μl。然后使用taqman快速高级主体混合物和abiprism7500序列检测器系统进行实时pcr以测量肝脏hbvcccdna浓度。简言之，将pcr反应混合物加入5μl提取的dna中。pcr反应基于takkenberg条件进行。在50℃下初始活化尿嘧啶-n-糖基化酶2分钟，继之以在95℃下聚合酶活化20秒。随后在abi7500序列检测器中进行每个循环的95℃3秒和60℃32秒的55个循环的pcr扩增。从两个分开的孔的值计算平均hbvcccdna水平。使用含有hbv全基因组序列的质粒作为hbvcccdna定量的标准样品。所用标准物的范围为1.0e+02和1.0e+05个拷贝/100ngdna之间。用于实时pcr的引物和探针如下：此测定的最低定量限为提取的dna溶液中1.0e+02个拷贝/100ngdna。结果所有动物在整个处理期间维持初始水平超过80％的体重。此外，第2组和第3组中体重的最低平均值略低于不接受处理的对照组中的最低平均值。将从图16和17显而易见的是，接受三重hbvshrnaadv载体的处理组中的动物在整个实验过程中相对于接受对照处理的组1中的动物显示血清hbvdna的稳定降低。在第56天，接受中等剂量处理的动物(组2)显示血清hbvdna的0.59个对数和74.4％降低的平均值，并且接受高剂量处理的动物(组3)显示血清hbvdna的1.83个对数和98.5％降低的平均值。类似地，相对于接受对照处理的组1中的那些动物，三重hbvshrnaadv载体处理后，hbsag和hbeag的血清浓度稳定降低(图18和19)。在第56天，接受中等剂量处理的动物(组2)显示hbsag和hbeag血清水平分别平均降低78.4％和63.6％，并且接受高剂量处理的动物(组3)显示hbsag和hbeag血清水平分别平均降低97.6％和92.6％。相对于接受对照处理的动物(组1)，第56天的胞内hbvdna和cccdna的水平在中等剂量和高剂量处理的动物(分别为第2组和第3组)中也显示为降低。例如，如图20所示，中等剂量和高剂量的三重hbvshrnaadv载体的处理在第56天时在胞内hbvdna的拷贝数上分别减少了48.6％和94.9％。类似地，图21显示用中等剂量和高剂量的三重hbvshrnaadv载体的处理在第56天时在cccdna的拷贝数上分别减少36.9％和57.7％。通过实时pcr在第56天还测量了对应于由三重hbvshrnaadv载体表达的shrna(即shrna14、shrna37和shrna28)的hbv病毒转录物的抑制水平。如图22所示，相对于来自施用对照处理的组1的动物中的那些hbv病毒转录物的表达水平，对应于shrna14、shrna37和shrna28的病毒rna在用中等剂量处理的组2中的动物中降低了39.4％、39.2％和53.3％。同样，图y显示了相对于来自施用对照处理的组1的动物中的那些hbv病毒转录物的表达水平，对应于shrna14、shrna37和shrna28的病毒rna在用高剂量处理的组3中的动物中降低了86.2％、82.0％和89.1％。根据本研究结果，显示了在对hbv感染的具有人源化肝脏的pxb小鼠施用时，三重hbvshrnaadv载体对血清hbvdna、血清hbsag、血清hbeag和肝脏hbvdna的病毒参数均有明显的影响。在2.00e+12vg/kg(组2)和2.00e+13vg/kg(组3)的剂量下观察到这些抗病毒作用，证明了不同剂量的三重hbvshrnaadv载体的功效。本领域技术人员将理解，在不脱离本公开的较宽的通用范围的情况下，可以对上述实施方案进行许多变化和/或修改。因此，本实施方案在所有方面被认为是说明性的而不是限制性的。序列表<110>benitecbiopharmalimited<120>用于治疗乙型肝炎病毒(hbv)感染的试剂及其用途<130>173107<150>au2015901617<151>2015-05-06<150>us62/319,971<151>2016-04-08<160>106<170>patentin3.5版<210>1<211>20<212>dna<213>人工序列<220><223>区域1<400>1catcctgctgctatgcctca20<210>2<211>23<212>dna<213>人工序列<220><223>区域2<400>2tttgctgacgcaacccccactgg23<210>3<211>20<212>dna<213>人工序列<220><223>区域3<400>3aagcctccaagctgtgcctt20<210>4<211>31<212>dna<213>人工序列<220><223>区域4<400>4ggtcccctagaagaagaactccctcgcctca31<210>5<211>23<212>dna<213>人工序列<220><223>区域5<400>5caaggtatgttgcccgtttgtcc23<210>6<211>20<212>dna<213>人工序列<220><223>区域6<400>6ctcgtggtggacttctctca20<210>7<211>23<212>dna<213>人工序列<220><223>区域7<400>7ctcgtgttacaggcggggttttt23<210>8<211>30<212>dna<213>人工序列<220><223>区域8<400>8ccgtgtgcacttcgcttcacctctgcacgt30<210>9<211>21<212>dna<213>人工序列<220><223>区域9<400>9tacgtcccgtcggcgtgaatc21<210>10<211>19<212>dna<213>人工序列<220><223>区域10<400>10aaatgcccctatcttatca19<210>11<211>20<212>rna<213>人工序列<220><223>shrna1和shrna4的效应子序列<400>11ugaggcauagcagcaggaug20<210>12<211>20<212>rna<213>人工序列<220><223>shrna1和shrna4的效应子补体序列<400>12cauccugcugcuaugccuca20<210>13<211>20<212>rna<213>人工序列<220><223>shrna2的效应子序列<400>13gaugaggcauagcagcagga20<210>14<211>20<212>rna<213>人工序列<220><223>shrna2的效应子补体序列<400>14uccugcugcuaugccucauc20<210>15<211>20<212>rna<213>人工序列<220><223>shrna3的效应子序列<400>15gaggcauagcagcaggaugc20<210>16<211>20<212>rna<213>人工序列<220><223>shrna3的效应子补体序列<400>16gcauccugcugcuaugccuc20<210>17<211>20<212>rna<213>人工序列<220><223>shrna5和shrna6的效应子序列<400>17ccaguggggguugcgucagc20<210>18<211>20<212>rna<213>人工序列<220><223>shrna5和shrna6效应子补体序列<400>18gcugacgcaacccccacugg20<210>19<211>20<212>rna<213>人工序列<220><223>shrna7和shrna8的效应子序列<400>19aaggcacagcuuggaggcuu20<210>20<211>20<212>rna<213>人工序列<220><223>shrna7和shrna8的效应子补体序列<400>20aagccuccaagcugugccuu20<210>21<211>21<212>rna<213>人工序列<220><223>shrna9和shrna10的效应子序列<400>21gaguucuucuucuaggggacc21<210>22<211>21<212>rna<213>人工序列<220><223>shrna9和shrna10的效应子补体序列<400>22gguccccuagaagaagaacuc21<210>23<211>21<212>rna<213>人工序列<220><223>shrna11和shrna12的效应子序列<400>23gagggaguucuucuucuaggg21<210>24<211>22<212>rna<213>人工序列<220><223>shrna11和shrna12的效应子补体序列<400>24ccccuagaagaagaacucccuc22<210>25<211>21<212>rna<213>人工序列<220><223>shrna13的效应序列<400>25gcgaguucuucuucuagggga21<210>26<211>21<212>rna<213>人工序列<220><223>shrna13的效应补体序列<400>26uccccuagaagaagaacucgc21<210>27<211>21<212>rna<213>人工序列<220><223>shrna14的效应子序列<400>27uucuucuucuaggggaccugc21<210>28<211>21<212>rna<213>人工序列<220><223>shrna14的效应子补体序列<400>28gcagguccccuagaagaagaa21<210>29<211>21<212>rna<213>人工序列<220><223>shrna15和shrna18的效应子序列<400>29acaaacgggcaacauaccuug21<210>30<211>21<212>rna<213>人工序列<220><223>shrna15和shrna18的效应子补体序列<400>30caagguauguugcccguuugu21<210>31<211>21<212>rna<213>人工序列<220><223>shrna16的效应子序列<400>31ggacaaacgggcaacauaccu21<210>32<211>21<212>rna<213>人工序列<220><223>shrna16的效应子补体序列<400>32agguauguugcccguuugucc21<210>33<211>21<212>rna<213>人工序列<220><223>shrna17的效应子序列<400>33gacaaacgggcaacauaccuu21<210>34<211>21<212>rna<213>人工序列<220><223>shrna17的效应子补体序列<400>34aagguauguugcccguuuguc21<210>35<211>20<212>rna<213>人工序列<220><223>shrna19和shrna20的效应子序列<400>35ugagagaaguccaccacgag20<210>36<211>20<212>rna<213>人工序列<220><223>shrna19和shrna20的效应子补体序列<400>36cucgugguggacuucucuca20<210>37<211>20<212>rna<213>人工序列<220><223>shrna21的效应子序列<400>37auugagagaaguccaccacg20<210>38<211>20<212>rna<213>人工序列<220><223>shrna21的效应子补体序列<400>38cgugguggacuucucucaau20<210>39<211>20<212>rna<213>人工序列<220><223>shrna22的效应子序列<400>39agagaaguccaccacgaguc20<210>40<211>20<212>rna<213>人工序列<220><223>shrna22的效应子补体序列<400>40gacucgugguggacuucucu20<210>41<211>21<212>rna<213>人工序列<220><223>shrna23和shrna24的效应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