用于产生腐胺或鸟氨酸的微生物和使用其产生腐胺或鸟氨酸的方法与流程

文档序号:14201527阅读:541来源:国知局
用于产生腐胺或鸟氨酸的微生物和使用其产生腐胺或鸟氨酸的方法与流程
本公开涉及产生腐胺或鸟氨酸的重组微生物,和使用该微生物产生腐胺或鸟氨酸的方法。
背景技术
:生物胺(ba)是主要通过氨基酸脱羧或醛和酮的胺化和转氨而产生的氮化合物。这些生物胺具有低分子量且是在微生物、植物和动物中于代谢过程期间合成,因此被视为频繁发现于其细胞中的构成成分。其中,腐胺是在革兰氏阴性细菌或真菌中发现且以高浓度存在于各种物种中,并因此预期腐胺在微生物的代谢中起重要作用。一般来说,腐胺是合成多胺尼龙-4,6(nylon-4,6)的重要原料且主要通过化学合成产生。所述化学合成是一种3步方法,包括催化氧化反应、使用氰化物化合物的反应和使用高压氢气的氢化反应。因此,需要开发涉及生物质利用的更环保且高能效的方法。在这些情况下,公开了通过转化大肠杆菌(e.coli)和棒状杆菌属(corynebacterium)的微生物,以高浓度产生腐胺的各种方法(国际专利公开第wo06/005603号;国际专利公开第wo09/125924号;钱zd(qianzd)等人,生物技术与生物工程学(biotechnol.bioeng.)104(4):651-662,2009;施奈德(schneider)等人,应用微生物学与生物技术(appl.microbiol.biotechnol.)88(4):859-868,2010;施奈德等人,应用微生物学与生物技术95:169-178,2012)。另一方面,鸟氨酸是广泛发现于植物、动物和微生物中的物质,且充当精氨酸、脯氨酸和多胺生物合成的前体。另外,鸟氨酸在高等生物体的体内代谢期间由氨基酸或氨产生尿素且通过鸟氨酸循环处理的途径中起重要作用。鸟氨酸在肌肉产生和减少体脂中有效,且因此其已经被用作营养补充物并且还用作改善肝硬化和肝功能障碍的药物。产生鸟氨酸的方法包括使用乳酪蛋白作为消化酶的方法和使用大肠杆菌或棒状杆菌属微生物的方法(韩国专利第10-1372635号;t.后藤(t.gotoh)等人,生物过程和生物系统工程(bioprocessbiosyst.eng.),33:773-777,2010)。大肠杆菌和棒状杆菌属微生物在用于产生腐胺或鸟氨酸的生物合成路径方面是类似的,但它们也展现如下差异。首先,棒状杆菌属微生物具有“环状途径”,其中通过argj(双功能鸟氨酸乙酰转移酶/n-乙酰谷氨酸合酶,ec2.3.1.35),谷氨酸转化成n-乙酰基-l-谷氨酸且n-乙酰基-l-鸟氨酸转化成l-鸟氨酸。相比之下,大肠杆菌通过“线性途径”参与腐胺或鸟氨酸的生物合成,其中arga(n-乙酰谷氨酸合酶,ec2.3.1.1)和arge(乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶,ec3.5.1.16)代替了argj在棒状杆菌属微生物中的作用。在棒状杆菌属微生物中,已知乙酰基在argj中的鸟氨酸与谷氨酸之间再循环。但是,在大肠杆菌中,arga将乙酰辅酶a的乙酰基连接到谷氨酸以产生n-乙酰基-谷氨酸,且argen-乙酰基-鸟氨酸分解n-乙酰基-鸟氨酸以产生鸟氨酸和乙酸(施奈德等人,应用微生物学与生物技术91,17-30.,2011)。具体来说,pta-acka(pta,磷酸转乙酰酶;acka,乙酸激酶)操纵子和乙酰辅酶a合成酶(acs)被视为使用乙酸合成乙酰辅酶a的基因。技术实现要素:技术问题本发明人已对于提高棒状杆菌属微生物产生鸟氨酸和腐胺的能力做出了许多努力,且因此他们已发现将大肠杆菌源性arga和arge引入至棒状杆菌属微生物中可提高其产生鸟氨酸和腐胺的能力,借此完成本发明。技术方案本发明的一个目标提供以高产量产生腐胺或鸟氨酸的重组微生物。本发明的另一目标提供使用以上微生物产生腐胺或鸟氨酸的方法。本发明的有利作用确认产生腐胺或鸟氨酸的本发明的棒状杆菌属微生物可在向微生物中引入大肠杆菌源性arga和大肠杆菌源性arge时,以及在乙酸利用途径得以增强时提高腐胺或鸟氨酸的产生量。因此,本发明的微生物可广泛用于产生腐胺或鸟氨酸,并且还可广泛用作供应用于产生各种聚合物产物的原料的从经济和环境方面来说有效且合乎需要的方式,其中腐胺或鸟氨酸用作原料。附图说明图1为说明用于在棒状杆菌属微生物中产生腐胺和鸟氨酸的生物合成途径(环形途径)的示意图(a)和用于在大肠杆菌中产生腐胺和鸟氨酸的生物合成途径(线性途径)的示意图(b)。图2为说明生物合成途径的示意图,所述生物合成途径通过将大肠杆菌源性arga和大肠杆菌源性arge引入至处于表达argj的状态下的棒状杆菌属微生物中而提高产生腐胺和鸟氨酸的能力。具体实施方式最佳模式本发明的一个方面提供产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物,其中引入来自大肠杆菌的n-乙酰谷氨酸合酶和来自大肠杆菌的乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶。本发明的示例性实施例提供产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物,其中大肠杆菌源性n-乙酰谷氨酸合酶由seqidno:1的氨基酸序列组成。本发明的另一示例性实施例提供产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物,其中大肠杆菌源性乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶由seqidno:3的氨基酸序列组成。本发明的另一示例性实施例提供产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物,其中棒状杆菌属微生物选自以下:谷氨酸棒状杆菌(corynebacteriumglutamicum)、产氨棒状杆菌(corynebacteriumammoniagenes)、产热氨棒状杆菌(corynebacteriumthermoaminogenes)、黄色短杆菌(brevibacteriumflavum)和乳酸发酵短杆菌(brevibacteriumlactofermentum)。本发明的另一示例性实施例提供产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物,其中磷酸转乙酰酶和乙酸激酶操纵子(pta-acka操纵子)的活性相比其内源活性进一步增强。本发明的另一示例性实施例提供产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物,其中磷酸转乙酰酶和乙酸激酶操纵子由seqidno:5或7的氨基酸序列组成。本发明的另一示例性实施例提供产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物,其中进一步引入大肠杆菌源性乙酰辅酶a合成酶(acs)的活性。本发明的另一示例性实施例提供产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物,其中大肠杆菌源性乙酰辅酶a合成酶(acs)由seqidno:9的氨基酸序列组成。本发明的另一示例性实施例提供产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物,其中进一步引入鸟氨酸脱羧酶(odc)的活性。本发明的另一示例性实施例提供产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物,其中i)鸟氨酸氨甲酰转移酶(argf)、ii)谷氨酸输出蛋白或ⅲ)鸟氨酸氨甲酰转移酶和谷氨酸的输出蛋白的活性相比其内源活性进一步减弱。本发明的另一示例性实施例提供产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物,其中选自以下的至少一个的活性相比其内源活性进一步增强:乙酰γ谷氨酰磷酸还原酶(argc)、乙酰谷氨酸合酶或鸟氨酸乙酰转移酶(argj)、乙酰谷氨酸激酶(argb)和乙酰鸟氨酸转氨酶(argd)。本发明的另一示例性实施例提供产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物,其中乙酰转移酶的活性相比其内源活性进一步减弱。本发明的另一示例性实施例提供产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物,其中乙酰转移酶由seqidno:30或31的氨基酸序列组成。本发明的另一示例性实施例提供产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物,其中腐胺输出蛋白的活性相比其内源活性进一步增强。本发明的另一示例性实施例提供产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物,其中腐胺输出蛋白由seqidno:26或28的氨基酸序列组成。本发明的另一方面提供一种用于产生腐胺或鸟氨酸的方法,包括:(i)在培养基中培养产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物;和(ii)从培养的微生物或培养基回收腐胺或鸟氨酸。在本发明的示例性实施例中,棒状杆菌属的经修饰微生物为谷氨酸棒状杆菌。在下文中,将详细描述本发明。本发明的一个实施例提供产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物,其中引入大肠杆菌源性n-乙酰谷氨酸合酶和大肠杆菌源性乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶的活性。如本文所用,术语“n-乙酰谷氨酸合酶”是指介导从谷氨酸和乙酰辅酶a产生n-乙酰谷氨酸的反应的酶,且由此产生的n-乙酰谷氨酸可用作鸟氨酸和精氨酸的前体。在本发明中,n-乙酰谷氨酸合酶可包括例如(但不限于)具有seqidno:1的氨基酸序列的蛋白质,和任何与以上氨基酸序列具有70%或更高、确切地说80%或更高、更确切地说90%或更高、更确切地说95%或更高、更确切地说98%或更高且最确切地说99%或更高的同源性的蛋白质,只要所述蛋白质具有n-乙酰谷氨酸合酶的大体活性。另外,展现以上活性的蛋白质可根据微生物的物种和品系在氨基酸序列中显示差异。因此,本发明的n-乙酰谷氨酸合酶可以是例如来自大肠杆菌的n-乙酰谷氨酸合酶,但其不限于此。由于序列与以上序列具有同源性,如果氨基酸序列为具有与seqidno:1的蛋白质基本上相同或对应的生物活性的氨基酸序列,那么显而易见的是在氨基酸序列的一部分中具有缺失、修饰、取代或添加的序列也应包含于本发明的范围内。编码本发明的n-乙酰谷氨酸合酶的多核苷酸可包括(但不限于)编码具有seqidno:1的氨基酸序列的多核苷酸,和任何与以上氨基酸序列具有70%或更高、确切地说80%或更高、更确切地说90%或更高、更确切地说95%或更高、更确切地说98%或更高且最确切地说99%或更高的同源性的蛋白质,只要所述多核苷酸具有与n-乙酰谷氨酸合酶类似的活性,且举例来说,可包括seqidno:2的多核苷酸序列。如本文所用,术语“乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶”是指通过介导乙酰鸟氨酸的水解而介导涉及产生乙酸和鸟氨酸的反应的酶。在本发明中,乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶可包括(但不限于)具有seqidno:3的氨基酸序列的蛋白质,和任何与以上氨基酸序列具有70%或更高、确切地说80%或更高、更确切地说90%或更高、更确切地说95%或更高、更确切地说98%或更高且最确切地说99%或更高的同源性的蛋白质,只要所述蛋白质具有从乙酰鸟氨酸分离的乙酰基和鸟氨酸的大体活性。另外,展现以上活性的蛋白质可根据微生物的物种和品系在氨基酸序列中显示差异。因此,本发明的乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶可以是来自大肠杆菌的脱乙酰基酶,但其不限于此。由于序列具有同源性,如果氨基酸序列为具有与seqidno:3的蛋白质基本上相同或对应的生物活性的氨基酸序列,那么显而易见的是在氨基酸序列的一部分中具有缺失、修饰、取代或添加的序列也应包含于本发明的范围内。编码本发明的乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶的多核苷酸可包括具有seqidno:3的氨基酸序列的多核苷酸,或编码蛋白质的多核苷酸,其与以上氨基酸序列具有70%或更高、确切地说80%或更高、更确切地说90%或更高、更确切地说95%或更高、更确切地说98%或更高且最确切地说99%或更高的同源性,例如seqidno:4的多核苷酸序列,只要所述多核苷酸具有与乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶蛋白质类似的活性。另外,编码本发明的n-乙酰谷氨酸合酶或乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶的多核苷酸可与seqidno:2或seqidno:4的多核苷酸序列或衍生自所述多核苷酸序列的探针在严格条件下杂交,且其可为正常起作用的经修饰类型的n-乙酰谷氨酸合酶或乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶。在上文中,术语“严格条件”是指实现多核苷酸之间的特异性杂交的条件。举例来说,严格条件确切地描述于参考文献(例如j.萨姆布鲁克(j.sambrook)等人,见上文)中。在上文中,术语“同源性”是指与给定氨基酸序列或多核苷酸序列的同一性程度,且可以百分比指示。如本文所用,可按照“同源性%”指示与给定多肽序列或多核苷酸序列具有相同或类似活性的同源序列。举例来说,可如下确认同源性%:使用标准软件,即blast2.0来计算如评分、同一性和相似性的参数,或通过经由蛋白质杂交实验比较序列,且待界定的适当杂交条件可通过所属领域的技术人员已知的方法确定(例如j.萨姆布鲁克等人,分子克隆实验指南(molecularcloning,alaboratorymanual),第2版,冷泉港实验室出版社(coldspringharborlaboratorypress),纽约冷泉港(coldspringharbor,newyork),1989;f.m.奥斯贝(f.m.ausubel)等人,现代分子生物学实验技术(currentprotocolsinmolecularbiology),纽约约翰·威利父子公司(johnwiley&sons,inc.,newyork))。另一方面,本发明的微生物可包括天然类型和经修饰类型,例如属于埃希氏杆菌属(escherichia)、志贺杆菌属(shigella)、柠檬酸杆菌属(citrobacter)、沙门氏菌属(salmonella)、肠杆菌属(enterobacter)、耶尔森氏菌属(yersinia)、克雷伯氏菌属(klebsiella)、欧文菌属(erwinia)、棒状杆菌属(corynebacterium)、短杆菌属(brevibacterium)、乳杆菌属(lactobacillus)、新月形单胞菌属(selenomanas)、弧菌属(vibrio)、假单胞菌属(pseudomonas)、链霉菌属(streptomyces)、隐秘杆菌属(arcanobacterium)、产碱杆菌属(alcaligenes)等的微生物。确切地说,本发明的微生物可为属于棒状杆菌属的微生物,更确切地说,选自以下的微生物:谷氨酸棒状杆菌、产氨棒状杆菌、产热氨棒状杆菌、黄色短杆菌和乳酸发酵短杆菌,且更确切地说谷氨酸棒状杆菌,但其不限于此。确切地说,如本文所用,术语“产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属微生物”是指呈天然状态的产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属微生物;或通过向其无法产生腐胺或鸟氨酸的亲本菌株提供产生腐胺或鸟氨酸的能力而制备的产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属微生物。具有产生腐胺或鸟氨酸的能力或可产生腐胺或鸟氨酸的微生物可具有提高的产生鸟氨酸的能力,所述微生物用作腐胺生物合成的原料,通过将乙酰谷氨酸合酶(其将谷氨酸转化为n-乙酰谷氨酸)、鸟氨酸乙酰转移酶(argj,其将乙酰鸟氨酸转化为鸟氨酸)、乙酰谷氨酸激酶(argb,其将乙酰谷氨酸转化为n-乙酰谷氨酰磷酸)、γ谷氨酰磷酸还原酶(argc,其将n-乙酰谷氨酰磷酸转化为n-乙酰谷氨酸半醛)和乙酰鸟氨酸转氨酶(argd,其将乙酰谷氨酸半醛转化为n-乙酰鸟氨酸)的活性修饰为相比其内源活性增加,以增加谷氨酸至鸟氨酸的生物合成途径,尽管不特定限制于此。另外,微生物可经修饰以使鸟氨酸氨甲酰转移酶(argf,其参与从鸟氨酸合成精氨酸)的活性相比其内源活性减弱,鸟氨酸氨甲酰转移酶为一种或多种参与谷氨酸导出的蛋白质,和/或一种或多种使腐胺乙酰化的蛋白质;和/或引入鸟氨酸脱羧酶(odc)的活性。如本文所用,术语“引入活性”可指在对应微生物中新引入或增强蛋白质的活性,所述活性在微生物中不存在或较弱。确切地说,其可包括将不存在于微生物中的编码蛋白质的基因插入或递送至待表达的微生物中,或诱导蛋白质的修饰以增强不表达或几乎不表达于微生物中的蛋白质的表达,但不限于此。另一方面,在本发明中,如引入活性、增强活性、减弱活性等的修饰可通过称作转化的过程进行。如本文所用,术语“转化”是指将包括编码具有强或弱活性的特定蛋白质或启动子序列等的多核苷酸的载体引入至宿主细胞中,借此实现由多核苷酸编码的蛋白质的表达或在宿主细胞中诱导染色体的修饰的过程。另外,多核苷酸包括编码靶蛋白的dna和rna。多核苷酸可在其可引入至宿主细胞中且在其中表达或诱导修饰的程度上以任何形式插入。举例来说,多核苷酸可以表达盒的形式引入至宿主细胞中,所述表达盒为包括自我表达所需的所有必需的元件的基因构建物。表达盒可常规地包括可操作地连接至多核苷酸的启动子、转录终止信号、核糖体结合域和翻译终止信号,且可呈能够自我复制的表达载体形式。另外,多核苷酸可按原样引入至宿主细胞中,且可操作地连接至对于其在宿主细胞中的表达来说必需的序列,但不限于此。另外,如本文所用,术语“可操作地连接”是指启动子序列与基因序列之间的功能连接,所述启动子序列起始和介导编码本发明的特定蛋白质的多核苷酸的转录。如本文所用,术语“载体”是指包括编码所关注蛋白质的多核苷酸的核苷酸序列的dna构建物,其中所关注蛋白质可操作地连接于适合的调节序列以使得所关注蛋白质可表达于适当宿主中。调节序列包括能够起始转录的启动子、用于调节转录的任何操纵序列、编码适合的mrna核糖体结合域的序列和用于调节转录与翻译的序列。在转化至适合的宿主细胞中之后,载体可无关于宿主基因组而复制或起作用,或可整合到宿主基因组自身中。用于本发明的载体可不特定受限,只要载体在宿主细胞中可复制,且可使用所属领域中已知的任何载体。载体的实例可包括天然或重组质粒、粘粒、病毒和噬菌体。举例来说,pwe15、m13、mbl3、mbl4、ixii、ashii、apii、t10、t11、charon4a、charon21a等可用作噬菌体载体或粘粒载体;且基于pbr、puc、pbluescriptii、pgem、ptz、pcl、pet等的那些可用作质粒载体。待用于本发明中的载体可不特定受限且可使用所属领域中已知的任何载体。确切地说,可使用pdztn、pacyc177、pacyc184、pcl、peccg117、puc19、pbr322、pmw118、pcc1bac载体等。因此,编码靶蛋白的多核苷酸可使用在细菌内插入染色体的载体被经修饰的多核苷酸取代。可使用所属领域中的已知方法进行将多核苷酸插入至染色体中,例如通过同源重组,但不限于此。由于本发明的载体可经由同源重组插入至染色体中,可另外包括用于确认插入至染色体中的选择标记物。选择标记物用于选择转化的细胞,即为了确认标靶多核苷酸是否已插入,且可使用提供如耐药性、养分需求、对细胞毒性剂的抗性和表面蛋白质的表达的可选表型的标记物。在处理选择性试剂的情况下,仅表达选择标记物的细胞可存活或表现其它表型特征,且因此可容易地选择转化的细胞。本发明的棒状杆菌属微生物可为产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物,其中磷酸转乙酰酶和乙酸激酶操纵子(pta-acka操纵子)的活性相比其内源性酶进一步增强。在本发明中,磷酸转乙酰酶和乙酸激酶操纵子(pta-acka操纵子)为包括基因的操纵子,所述基因可逆地介导代谢途径,其中产生自葡萄糖或丙酮酸的乙酰辅酶a经由乙酰磷酸转化为乙酸,和沿相反方向的代谢途径。在本发明中,磷酸转乙酰酶和乙酸激酶操纵子可包括(但不限于)包括seqidno:5或seqidno:7的氨基酸序列的蛋白质,或任何与以上氨基酸序列具有70%或更高、确切地说80%或更高、更确切地说90%或更高、确切地说,更确切地95%或更高、更确切地说98%或更高且最确切地说99%或更高的同源性的蛋白质,只要所述蛋白质基本上介导从乙酸产生乙酰辅酶a的反应。另外,由于展现活性的蛋白质的氨基酸序列可根据给定微生物的物种或品系变化,本发明中的磷酸转乙酰酶和乙酸激酶操纵子可不限于其所衍生的那些来源。显而易见的是与以上序列具有同源性且具有与seqidno:5或seqidno:7的蛋白质基本上相同或对应的生物活性的任何氨基酸序列也可属于本发明的范围内,尽管所述氨基酸序列可在序列的一部分中具有缺失、修饰、取代或添加。编码本发明的磷酸转乙酰酶和乙酸激酶操纵子的多核苷酸可包括编码seqidno:5或seqidno:7的氨基酸的多核苷酸,或编码与以上氨基酸序列具有70%或更高、确切地说80%或更高、更确切地说90%或更高、更确切地说95%或更高、更确切地说98%或更高且最确切地说99%或更高的同源性的蛋白质的多核苷酸,且最确切地说,可包括seqidno:6或seqidno:8的多核苷酸序列。如本文所用,术语“活性增强”不仅包括由于新引入活性或蛋白质自身的活性的增加而发挥高于初始功能的作用,而且还包括通过增加内源性基因的活性、从内部或外部因子扩增内源性基因、用于抑制基因表达的调节因子的缺失、基因拷贝数的增加、从外部引入基因、表达调节序列的修饰而增加其活性,且确切地说,由于启动子的置换或修饰和基因内的突变等而增加酶活性。确切地说,在本发明中,可如下进行活性的增加:1)增加编码酶的多核苷酸的拷贝数,2)修饰表达调节序列以增加多核苷酸的表达,3)修饰染色体上的多核苷酸序列以增强酶的活性,或4)通过其组合进行修饰,但方法不限于此。可以多核苷酸可操作地连接于载体的形式,或通过将多核苷酸插入至宿主细胞的染色体中而进行多核苷酸的拷贝数的增加(方法1),但方法不特定限制于此。确切地说,宿主细胞的染色体内的多核苷酸的拷贝数可通过引入可不管宿主细胞而复制且起作用并且编码本发明的蛋白质的多核苷酸可操作地连接到的载体而增加;或可通过将载体引入至宿主细胞中而增加,所述载体可将多核苷酸插入至宿主细胞的染色体中且多核苷酸可操作地连接到到所述载体。接着,可如下进行修饰表达调节序列以增加多核苷酸的表达(方法2):通过经由多核苷酸序列的缺失、插入、非保守或保守取代或其组合对序列诱发修饰以进一步增强表达调节序列的活性,或通过用具有较强活性的多核苷酸序列置换所述多核苷酸序列,但方法不特定限制于此。表达调节序列包括启动子、操纵序列、编码核糖体结合位点的序列和调节转录与翻译的终止的序列,但不特定限制于此。强外源启动子而不是原始启动子可连接至多核苷酸的表达单元的上游区域。强启动子的实例可为cj7启动子、lyscp1启动子、ef-tu启动子、groel启动子、acea或aceb启动子等,且更确切地说,表达速率可通过可操作地连接至棒状杆菌源性lyscp1启动子(wo2009/096689)或cj7启动子(韩国专利第10-0620092号和wo2006/065095)而提高,但强启动子不限于此。此外,可如下进行染色体上的多核苷酸序列的修饰(方法3):通过经由多核苷酸序列的缺失、插入、非保守或保守取代或其组合对表达调节序列诱发修饰以进一步增强多核苷酸序列的活性,或通过用具有较强活性的改进的多核苷酸序列置换所述多核苷酸序列,但方法不特定限制于此。确切地说,在本发明中,磷酸转乙酰酶和乙酸激酶操纵子(pta-acka操纵子)的活性可通过选自以下的任何一种方法而相比其内源活性得到增强:增加细胞中的操纵子的拷贝数的方法、对操纵子的表达调节序列引入修饰的方法、用具有较强活性的序列置换操纵子上的基因的表达调节序列的方法、用染色体上的突变基因置换编码酶的基因以增加构成操纵子的酶的活性的方法和对染色体上的基因引入修饰以增加构成操纵子的酶的活性的方法。确切地说,用具有较强活性的序列置换操纵子上的基因的表达调节序列的方法可通过用cj7启动子、lyscp1启动子、ef-tu启动子、groel启动子、acea或aceb启动子等置换乙酰酶和乙酸激酶操纵子的内源性启动子实现,但所述置换不限于此。如本文所用,术语“内源活性”是指处于微生物最初具有的未经修饰的状态下的酶的活性状态,且术语“相比其内源活性的增强”是指相比微生物在操纵之前具有的活性,微生物在操纵之后具有的酶活性的增加状态,所述操纵为例如引入展现活性或对应基因的拷贝数的增加的基因、基因表达的抑制调节因子的缺失或表达调节序列的修饰,例如使用改进的启动子。在本发明中,产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属微生物,可进一步向其中引入大肠杆菌源性乙酰辅酶a合成酶(acs)的活性。在本发明中,乙酰辅酶a合成酶(acs)为介导用于从atp、乙酸和coa产生乙酰辅酶a的反应的酶。在本发明中,乙酰辅酶a合成酶可包括(但不限于)具有seqidno:9的氨基酸序列的蛋白质,或任何与以上氨基酸序列具有70%或更高、确切地说80%或更高、更确切地说90%或更高、更确切地说95%或更高、更确切地说98%或更高且最确切地说99%或更高的同源性的蛋白质,只要蛋白质具有介导乙酰辅酶a的合成的大体活性。另外,由于展现活性的蛋白质的氨基酸序列可根据给定微生物的物种或品系变化,本发明中的乙酰辅酶a合成酶(acs)可不限于其所衍生的来源,且举例来说,其可来自大肠杆菌。显而易见的是与以上序列具有同源性且具有与seqidno:9的蛋白质基本上相同或对应的生物活性的任何氨基酸序列也可属于本发明的范围内,尽管所述氨基酸序列可在序列的一部分中具有缺失、修饰、取代或添加。编码本发明的乙酰辅酶a合成酶(acs)的多核苷酸可包括编码包括seqidno:9的氨基酸序列的蛋白质,或与以上氨基酸序列具有70%或更高、确切地说80%或更高、更确切地说90%或更高、更确切地说95%或更高、更确切地说98%或更高且最确切地说99%或更高的同源性的任何蛋白质的多核苷酸,且最确切地说,其可包括seqidno:10的多核苷酸序列。本发明的棒状杆菌属微生物可为产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物,其中进一步向其中引入鸟氨酸脱羧酶(odc)的活性。如本文所用,术语“鸟氨酸脱羧酶”是指通过介导鸟氨酸的脱羧而产生腐胺的酶。尽管棒状杆菌属微生物不含腐胺生物合成酶,但当从外部引入鸟氨酸脱羧酶(odc)时,腐胺在合成腐胺时导出到细胞外部。可从外部引入的鸟氨酸脱羧酶可用于本发明中,只要其具有以上活性,与衍生出微生物的来源无关,且确切地说,可引入来自大肠杆菌的鸟氨酸脱羧酶。本发明的棒状杆菌属微生物可为产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物,其中i)鸟氨酸氨甲酰转移酶(argf)、ii)谷氨酸输出蛋白或ⅲ)鸟氨酸氨甲酰转移酶和谷氨酸的输出蛋白的活性相比其内源活性进一步减弱。棒状杆菌属的谷氨酸输出蛋白可为ncgl1221。本发明的棒状杆菌属微生物可为产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物,其中选自以下的至少一个的活性相比其内源活性进一步增强:乙酰γ谷氨酰磷酸还原酶(argc)、乙酰谷氨酸合酶或鸟氨酸乙酰基转移酶(argj)、乙酰谷氨酸激酶(argb)和乙酰鸟氨酸转氨酶(argd)。另外,棒状杆菌属微生物可为产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物,其中乙酰转移酶的活性,确切地说ncgl1469的活性相比其内源活性进一步减弱。最后,棒状杆菌属微生物可为产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物,其中腐胺输出蛋白的活性,确切地说ncgl2522的活性相比其内源活性进一步增强。如本文所用,“活性减弱”不仅包括由于蛋白质自身的活性的减少或不活化而发挥低于初始功能的作用,而且还包括通过减少内源性基因的活性、用于抑制基因表达的调节因子的活化、拷贝数的减少、表达调节序列的修饰而减少其活性,且确切地说,由于启动子的置换或修饰和基因内的突变等而使酶活性不活化或减少。确切地说,在本发明中,可如下进行活性的减弱:1)使一部分或全部编码蛋白质的多核苷酸缺失,2)修饰表达调节序列以减少多核苷酸的表达,3)修饰染色体上的多核苷酸序列以减弱蛋白质的活性,和4)来自其组合的选择方法,但方法不限于此。确切地说,使一部分或全部编码蛋白质的多核苷酸缺失的方法可如下进行:通过使用在细菌内插入染色体的载体,用在多核苷酸序列或标记基因中具有部分缺失的多核苷酸置换编码染色体上的内源性靶蛋白的多核苷酸。如本文所用,术语“一部分”可取决于多核苷酸的种类,但其可确切地指1到300个,更确切地说1到100个,且甚至更确切地说1到50个。另外,修饰表达调节序列的方法可如下进行:通过经由多核苷酸序列的缺失、插入、非保守或保守取代或其组合诱发对表达调节序列的修饰以进一步减弱表达调节序列的活性,或通过用具有较弱活性的多核苷酸序列置换所述多核苷酸序列。表达调节序列包括启动子、操纵序列、编码核糖体结合位点的序列和调节转录与翻译的终止的序列。另外,修饰染色体上的多核苷酸序列的方法可如下进行:通过经由多核苷酸序列的缺失、插入、非保守或保守取代或其组合诱发对序列的修饰以进一步减弱酶的活性,或通过用具有较强活性的改进的多核苷酸序列置换所述多核苷酸序列。另外,使抑制酶的多核苷酸的表达的调节因子缺失的方法可通过用在多核苷酸序列中具有部分缺失的多核苷酸或标记基因置换用于表达抑制因子的多核苷酸来进行。如本文所用,术语“一部分”可取决于多核苷酸的种类,但其可确切地指1到300个,更确切地说1到100个,且甚至更确切地说1到50个。具体来说,乙酰γ谷氨酰磷酸还原酶(argc)、乙酰谷氨酸合酶或鸟氨酸乙酰转移酶(argj)、乙酰谷氨酸激酶(argb)、乙酰鸟氨酸转氨酶(argd)、鸟氨酸氨甲酰转移酶(argf)、参与谷氨酸和鸟氨酸脱羧酶(odc)的导出的蛋白质可分别包括seqidno:32、33、34、35、36、37或38的氨基酸序列,或任何氨基酸序列,该任何氨基酸序列确切地与以上氨基酸序列具有70%或更高、更确切地说80%或更高且更确切地说90%或更高的同源性,但不特定限制于此。另外,使腐胺乙酰化的蛋白质可包括seqidno:30或31的氨基酸序列,或任何氨基酸序列,该任何氨基酸序列确切地与以上氨基酸序列具有70%或更高、更确切地说80%或更高且更确切地说90%或更高的同源性,但氨基酸序列不特定限制于此。另外,在本发明中,腐胺输出蛋白可包括seqidno:26或28的氨基酸序列,或任何氨基酸序列,该任何氨基酸序列确切地与以上氨基酸序列具有70%或更高、更确切地说80%或更高且更确切地说90%或更高的同源性。在上文所述的蛋白质中,乙酰γ谷氨酰磷酸还原酶(argc)、乙酰谷氨酸合酶或鸟氨酸乙酰转移酶(argj)、乙酰谷氨酸激酶(argb)、乙酰鸟氨酸转氨酶(argd)、鸟氨酸脱羧酶(odc)和腐胺输出蛋白的活性增强可例如通过选自以下的方法实现:增加编码蛋白质的多核苷酸的拷贝数、修饰表达调节序列以增加多核苷酸的表达、修饰染色体上的多核苷酸序列以增强上述酶的活性、抑制上述酶的多核苷酸的表达的调节因子的缺失,或其组合。另外,鸟氨酸氨甲酰转移酶(argf)、参与谷氨酸导出的蛋白质和使腐胺乙酰化的蛋白质的减弱可通过选自以下的方法实现:使一部分或全部编码蛋白质的多核苷酸缺失、修饰表达调节序列以减少多核苷酸的表达、修饰染色体上的多核苷酸序列以减弱蛋白质的活性,和其组合。本发明的另一方面提供一种用于产生腐胺或鸟氨酸的方法,包括:(i)在培养基中培养产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属微生物;和(ii)从培养的微生物或培养基回收腐胺或鸟氨酸。在以上方法中,微生物可以所属领域中已知的分批培养、连续培养、分批进料培养等进行培养,但不特定限制于此。具体来说,关于培养条件,可使用碱性化合物(例如氢氧化钠、氢氧化钾或氨)或酸性化合物(例如磷酸或硫酸)维持恰当ph(即,5到9的最佳ph,确切地说ph6到8,且最确切地说ph6.8),但不特定限制于此。另外,可通过向细胞培养物添加氧气或含氧气体混合物来维持好氧条件。培养温度可维持于20℃到45℃,且确切地说25℃到40℃,且微生物可培养约10小时到160小时。通过以上培养产生的腐胺或鸟氨酸可分泌到培养基中或保持于细胞中。另外,在培养基中,可单独或组合地使用碳源,如糖和碳水化合物(例如葡萄糖、蔗糖、乳糖、果糖、麦芽糖、糖蜜、淀粉和纤维素)、油和油脂(例如大豆油、葵花籽油、花生油和椰子油)、脂肪酸(例如棕榈酸、硬脂酸和亚油酸)、醇(例如甘油和乙醇)和有机酸(例如乙酸),但不限于此;可单独或组合地使用氮源,如含氮有机化合物(例如蛋白胨、酵母提取物、肉汁、麦芽提取物、玉米浆、大豆粉和尿素),或无机化合物(例如硫酸铵、氯化铵、磷酸铵、碳酸铵和硝酸铵),但不限于此;且可单独或组合地使用钾源,如磷酸二氢钾、磷酸氢二钾,与其对应的含钠盐,但不限于此。另外,包括金属盐(例如硫酸镁或硫酸铁)、氨基酸和维生素的其它必需的生长刺激物质可另外包含于培养基中,但不限于此。回收在本发明的培养期间产生的腐胺或鸟氨酸的方法可通过所属领域中已知的适当培养方法进行,例如分批培养、连续培养或分批进料培养,且借此可从培养物回收目标氨基酸。本发明的模式在下文中,将参考以下实例更详细地描述本发明。但是,这些实例仅出于说明性目的,且本发明不打算受这些实例限制。实例1:将大肠杆菌源性arga和大肠杆菌源性arge引入至产生腐胺的菌株中且确认菌株产生腐胺的能力1-1.制备将大肠杆菌源性arga和大肠杆菌源性arge同时引入至基于atcc13032的产生腐胺的菌株的转座子基因中的菌株为了确认将大肠杆菌源性arga基因和大肠杆菌源性arge基因引入至基于atcc13032的产生腐胺的菌株中是否能够提高产生腐胺的能力,将arga和arge基因引入至菌株的转座子基因中。作为使得能够在染色体内引入棒状杆菌属微生物的转座子基因区域的转化的载体,使用pdztn(wo2009/125992),且lyscp1启动子(国际专利公开案第wo2009/096689号,seqidno:39)用作启动子。确切地说,基于编码n-乙酰谷氨酸合酶的大肠杆菌源性arga基因的多核苷酸序列(seqidno:2)制备用于在argaorf区域中获得同源重组片段的seqidno:11和12的引物对。另外,基于编码乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶的大肠杆菌源性arge基因的多核苷酸序列(seqidno:4)制备用于在argeorf区域中获得同源重组片段的seqidno:15和16的引物对,且基于lyscp1的多核苷酸序列(seqidno:39)制备用于在lyscp1区域中获得同源重组片段的seqidno:13和14的引物对(表1)。[表1]首先,大小为约1.6kb的基因片段使用作为模板的大肠杆菌w3110菌株的染色体连同seqidno:11和12的引物对进行扩增,以获得arga基因。具体来说,通过重复在95℃下变性30秒、在55℃下退火30秒和在72℃下延伸1分钟30秒的循环30次进行pcr。因此获得的片段在0.8%琼脂糖凝胶中经历电泳,且所需大小的带经洗脱和纯化。另外,lyscp1启动子区是通过使用作为模板的kccm10919p(国际专利公开案第wo2009/096689号)菌株的染色体连同seqidno:13和14的引物对进行pcr,其通过重复在95℃下变性30秒、在55℃下退火30秒和在72℃下延伸30秒的循环30次进行。pdztn载体用xhoi处理且接着对由此获得的pcr产物中的每一个进行融合克隆。使用hd克隆试剂盒(克隆科技公司(clontech))进行融合克隆且因此获得的质粒命名为pdztn-lyscp1-arga。接着,为了获得arge基因,通过使用作为模板的大肠杆菌w3110菌株的染色体连同seqidno:15和16的引物对,以与上文所述相同的方式扩增大小为约1.4kb的基因片段而获得pcr产物,且用lyscp1启动子区进行融合克隆。因此获得的质粒命名为pdztn-lyscp1-arge。接着,通过电穿孔将质粒pdztn-lyscp1-arga引入至kccm11240p(韩国专利申请公开案第10-2013-0082478号)菌株中以获得转化体,且将转化体涂铺于含有卡那霉素(kanamycin)(25μg/ml)和x-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚啉-d-半乳糖苷)的bhis平板培养基(脑心浸液(37g/l)、山梨糖醇(91g/l)和琼脂(2%))上且培养以形成菌落。在菌落中,选择蓝色菌落且进而选择引入有质粒pdztn-lyscp1-arga的转化菌株。在cm培养基(葡萄糖(10g/l)、多聚蛋白胨(10g/l)、酵母提取物(5g/l)、牛肉提取物(5g/l)、nacl(2.5g/l)、尿素(2g/l),ph6.8)中在振荡下培养所选菌株(30℃,8小时)且从10-4到10-10连续稀释,涂铺于含有x-gal的固体培养基上,且培养以形成菌落。在因此形成的菌落中,选择以相对较低比率出现的白色菌落且最后选择通过二次交换引入arga编码基因的菌株。使用seqidno:12和13的引物对对最后选择的菌株进行pcr且确认引入arga编码基因,且谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株命名为kccm11240ptn:lyscp1-arga。为了将引入有上文制备的arga的菌株引入,将上文制备的pdztn-lyscp1-arge以与上文所述相同的方式转化至kccm11240ptn:lyscp1-arga中,且通过使用seqidno:13和16的引物对进行pcr而在最后选择的菌株中确认向转座子中引入arge。因此选择的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株命名为kccm11240ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge。1-2.制备将大肠杆菌源性arga和大肠杆菌源性arge同时引入至基于atcc13869的产生腐胺的菌株的转座子基因中的菌株dab12-aδncgl1469(韩国专利申请公开案第10-2013-0082478号)为基于谷氨酸棒状杆菌atcc13869的产生腐胺的菌株,命名为dab12-b,且将arga和arge引入至转座子基因中以确认引入大肠杆菌源性arga和大肠杆菌源性arge基因是否能够与所得菌株产生腐胺的能力的提高相关。首先,以与实例1-1相同的方式将预先制备的pdztn-lyscp1-arga转化至谷氨酸棒状杆菌dab12-b中,且确认arga被引入至转座子中。因此选择的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株命名为dab12-btn:lyscp1-arga。接着,为了将arge引入至已引入有arga的菌株中,以与实例1-1相同的方式将先前制备的pdztn-lyscp1-arge转化至dab12-btn:lyscp1-arga中,且确认arge被引入至转座子中。因此选择的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株命名为dab12-btn:lyscp1-arge。1-3.评估引入有大肠杆菌源性arga基因和大肠杆菌源性arge基因的产生腐胺的棒状杆菌菌株的产生腐胺的能力在实例1-1与1-2中制备的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株之间比较产生腐胺的能力,以确认将大肠杆菌源性arga和大肠杆菌源性arge引入至产生腐胺的菌株中对腐胺产生的影响。确切地说,实例1-1和1-2中制备的两种不同种类的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株,即(kccm11240ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge;dab12-btn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge),和两种不同种类的亲本菌株(即kccm11240p和dab12-b)分别涂铺于含1mm精氨酸的cm平板培养基(1%葡萄糖、1%多聚蛋白胨、0.5%酵母提取物、0.5%牛肉提取物、0.25%nacl、0.2%尿素、100μl的50%naoh、2%琼脂,ph6.8,以1l计)上,且在30℃下培养24小时。将约一个铂金接种环(platinumloop)的量的由此培养的菌株各接种至25ml效价培养基(titermedia)(8%葡萄糖、0.25%大豆蛋白、0.50%固体玉米浆、4%(nh4)2so4、0.1%kh2po4、0.05%mgso4·7h2o、0.15%尿素、生物素(100μg)、盐酸硫胺素(3mg)、泛酸钙(3mg)、烟碱酰胺(3mg)、5%caco3,以1l计)中,且在30℃下在以200rpm的速率振荡下培养98小时。在所有菌株培养物中,将1mm精氨酸添加至培养基。在完成培养后,测量每一培养液中产生的腐胺的浓度且结果展示于下表2中。[表2]菌株腐胺(g/l)kccm11240p12.2kccm11240ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge13.4dab12-b13.3dab12-btn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge14.6如上表2中所示,同时引入有大肠杆菌源性arga和大肠杆菌源性arge基因的两个谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株均显示9.8%或更高的腐胺产量的增加。实例2:引入有大肠杆菌源性arga和大肠杆菌源性arge的产生腐胺的菌株中的pta-acka的增强和确认菌株产生腐胺的能力2-1.制备从基于atcc13032的产生腐胺的棒状杆菌菌株取代pta-acka启动子的菌株实例1中制备的引入有大肠杆菌源性arga和大肠杆菌源性arge基因的产生腐胺的菌株的磷酸转乙酰酶和乙酸激酶(pta-acka)的活性进一步增强且检查所述增强对菌株产生腐胺的能力的影响。出于此目的,染色体内的pta-acka操纵子的启动子经相比其内源性启动子具有更强活性的启动子取代,确切地说,将lyscp1启动子(国际专利公开案第wo2009/096689号)引入至pta-acka操纵子的起始密码子的上游。首先,获得同源重组片段,其包括lyscp1启动子且启动子的两端均具有染色体上的原始pta-acka序列。确切地说,通过使用谷氨酸棒状杆菌atcc13032的基因组dna连同seqidno:17和18的引物对进行pcr而获得lyscp1启动子的5'-端区。具体来说,通过重复在95℃下变性30秒、在55℃下退火30秒和在72℃下延伸30秒的循环30次进行pcr。另外,通过在相同条件下使用seqidno:14和19的引物对进行pcr而获得lyscp1启动子区,且通过使用作为模板的谷氨酸棒状杆菌atcc13032的基因组dna连同seqidno:20和21的引物对进行pcr而获得lyscp1启动子的3'-端区。用于获得lyscp1启动子的引物展示于上表1和下表3中。[表3]使用经xbai处理的pdz载体对上文获得的pcr产物中的每一个进行融合克隆。使用hd克隆试剂盒(克隆科技公司(clontech))进行融合克隆且因此获得的质粒命名为pdz-lyscp1-1'pta-acka。通过电穿孔将上文制备的质粒pdz-lyscp1-1'pta-acka分别引入至kccm11240p和kccm11240ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge菌株(其为实例1-1中制备的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株)中以获得转化体,且将所述转化体涂铺于含有卡那霉素(25μg/ml)和x-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚啉-d-半乳糖苷)的bhis平板培养基(脑心浸液(37g/l)、山梨糖醇(91g/l)和琼脂(2%))上且培养以形成菌落。在菌落中,选择蓝色菌落且进而选择引入有质粒pdz-lyscp1-1'pta-acka的转化菌株。在cm培养基(葡萄糖(10g/l)、多聚蛋白胨(10g/l)、酵母提取物(5g/l)、牛肉提取物(5g/l)、nacl(2.5g/l)、尿素(2g/l),ph6.8)中在振荡下培养所选菌株(30℃,8小时)且从10-4到10-10连续稀释,涂铺于含有x-gal的固体培养基上,且培养以形成菌落。在因此形成的菌落中,选择以相对较低比率出现的白色菌落且最后选择pta-acka启动子通过二次交换经lyscp1启动子取代的菌株。使用seqidno:19和21的引物对对最后选择的菌株进行pcr且确认lyscp1启动子被引入至染色体内的pta-acka的起始密码子的上游。具体来说,通过重复在95℃下变性30秒、在55℃下退火30秒和在72℃下延伸1分钟的循环30次进行pcr反应。因此选择的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株分别命名为kccm11240plyscp1-1'pta-acka和kccm11240ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-argelyscp1-1'pta-acka。2-2.制备从基于atcc13869的产生腐胺的棒状杆菌菌株取代pta-acka启动子的菌株为了通过实例2-1中公开的方法确认编码来源于谷氨酸棒状杆菌atcc13869的pta-acka的基因和自其表达的蛋白质的序列,使用作为模板的谷氨酸棒状杆菌atcc13869的基因组dna连同seqidno:17和22的引物对进行pcr(表3和4)。具体来说,通过重复在95℃下变性30秒、在55℃下退火30秒和在72℃下延伸3分钟的循环30次进行pcr反应。通过电泳分离因此获得的pcr产物且分析序列。因此,确认编码来源于谷氨酸棒状杆菌atcc13869的pta-acka的基因包括由seqidno:8描述的多核苷酸序列且由所述基因编码的蛋白质包括由seqidno:7描述的氨基酸序列。另一方面,由于来源于谷氨酸棒状杆菌atcc13032的pta-acka的氨基酸序列(seqidno:5)与来源于谷氨酸棒状杆菌atcc13869的pta-acka的氨基酸序列之间的比较,确认其具有99.4%的序列同源性。[表4]首先,获得同源重组片段,其包括lyscp1启动子且启动子的两端均具有染色体上的原始pta-acka序列。确切地说,通过使用谷氨酸棒状杆菌atcc13869的基因组dna连同seqidno:17和23的引物对进行pcr而获得lyscp1启动子的5'-端区。具体来说,通过重复在95℃下变性30秒、在55℃下退火30秒和在72℃下延伸30秒的循环30次进行pcr反应。另外,通过在相同条件下使用seqidno:14和19的引物对进行pcr而获得lyscp1启动子区,且通过使用作为模板的谷氨酸棒状杆菌atcc13869的基因组dna连同seqidno:20和21的引物对进行pcr而获得lyscp1启动子的3'-端区。用于启动子取代的引物展示于表1、3和4中。使用经xhoi处理的pdztn载体对由此获得的pcr产物中的每一个进行融合克隆。使用hd克隆试剂盒(克隆科技公司(clontech))进行融合克隆且因此获得的质粒命名为pdz-lyscp1-2'pta-acka。以与实例2-1相同的方式将上文制备的质粒pdz-lyscp1-2'pta-acka分别转化至dab12-b和dab12-btn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge(其为实例1-2中制备的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株)中。因此,确认lyscp1启动子被引入至染色体内的pta-acka的起始密码子的上游。谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株分别命名为dab12-blyscp1-2'pta-acka和dab12-btn:lyscp1-argatn:lyscp1-argelyscp1-2'pta-acka。2-3.评估具有增强型pta-acka的菌株产生腐胺的能力为了确认引入有大肠杆菌源性arga和大肠杆菌源性arge的产生腐胺的菌株中的pta-acka的增强的影响,在实例2-1与2-2中制备的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株之间比较产生腐胺的能力。确切地说,四类谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株(kccm11240plyscp1-1'pta-acka;kccm11240ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-argelyscp1-1'pta-acka;dab12-blyscp1-2'pta-acka;和dab12-btn:lyscp1-argatn:lyscp1-argelyscp1-2'pta-acka)和四类亲本菌株(kccm11240p;kccm11240ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge;dab12-b;和dab12-btn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge)分别涂铺于含1mm精氨酸的cm平板培养基(1%葡萄糖,1%多聚蛋白胨,0.5%酵母提取物,0.5%牛肉提取物,0.25%nacl,0.2%尿素,100μl的50%naoh,2%琼脂,ph6.8,以1l计)上,且在30℃下培养24小时。将约一个铂金接种环的量的由此培养的菌株各接种至25ml效价培养基(8%葡萄糖、0.25%大豆蛋白、0.50%固体玉米浆、4%(nh4)2so4、0.1%kh2po4、0.05%mgso4·7h2o、0.15%尿素、生物素(100μg)、盐酸硫胺素(3mg)、泛酸钙(3mg)、烟碱酰胺(3mg)、5%caco3,以1l计)中,且在30℃下在以200rpm的速率振荡下培养98小时。在所有菌株培养物中,将1mm精氨酸添加至培养基。在完成培养后,测量每一培养液中产生的腐胺的浓度且结果展示于下表5中。[表5]如表5中所示,当pta-acka分别在kccm11240p和dab12-b中增强时,腐胺产生量处于相同水平。但是,当pta-acka分别在两种不同种类的同时引入有大肠杆菌源性arga和大肠杆菌源性arge基因的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株(kccm11240ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge;dab12-btn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge)中增强时,相比亲本菌株,腐胺产生量增加了14.3%或更高。另外,基于经修饰菌株,腐胺产生量增加了4%或更高。因此,本发明人将具有改进的产生腐胺的能力的棒状杆菌属微生物(谷氨酸棒状杆菌kccm11240ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge:lyscp1-1'pta-acka,其通过向谷氨酸棒状杆菌kccm11240p菌株中引入大肠杆菌源性arga和大肠杆菌源性arge的活性且增强pta-acka的活性而由产生腐胺的谷氨酸棒状杆菌kccm11240p菌株制备)命名为cc01-1145且在2014年11月21日根据布达佩斯条约(budapesttreaty)以登录号kccm11606p保藏于韩国微生物保藏中心(koreanculturecenterofmicroorganisms;kccm)。实例3:将大肠杆菌源性acs引入至引入有大肠杆菌源性arga和大肠杆菌源性arge的产生腐胺的菌株中且确认所得菌株的产生腐胺的能力3-1.制备将大肠杆菌源性acs引入至基于atcc13032的产生腐胺的菌株的转座子基因中的菌株使用lyscp1启动子将acs引入至转座子基因中以确认将大肠杆菌源性乙酰辅酶a合成酶(acs)基因引入至已引入有大肠杆菌源性arga和大肠杆菌源性arge的基于atcc13032的产生腐胺的菌株中是否能够提高产生腐胺的能力。确切地说,基于由编码acs的基因的seqidno:10描述的多核苷酸序列,如上表1和下表6中所示地制备用于在acsorf区周围获得同源重组片段的seqidno:24和25的引物对和用于在lyscp1启动子区周围获得同源重组片段的seqidno:13和14的引物对。[表6]确切地说,为了获得acs基因,使用作为模板的大肠杆菌w3110菌株的染色体连同seqidno:24和25的引物对扩增大小为约2kb的基因片段。具体来说,通过重复在95℃下变性30秒、在55℃下退火30秒和在72℃下延伸1分钟30秒的循环30次进行pcr反应。接着,因此获得的pcr产物在0.8%琼脂糖凝胶中经历电泳且所需大小的带经洗脱和纯化。另外,通过使用作为模板的kccm10919p(国际专利公开案第wo2009/096689号)菌株的染色体连同seqidno:13和14的引物对进行pcr而获得lyscp1启动子区,所述pcr通过重复在95℃下变性30秒、在55℃下退火30秒和在72℃下延伸30秒的循环30次进行。pdz载体用xhoi处理且对因此获得的pcr产物中的每一个进行融合克隆。使用hd克隆试剂盒(克隆科技公司)进行融合克隆。因此获得的质粒命名为pdztn-lyscp1-acs。接着,通过电穿孔将质粒pdztn-lyscp1-acs引入至kccm11240p和kccm11240ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge(其分别为实例1-1中制备的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株)中以获得转化体,且将所述转化体涂铺于含有卡那霉素(25μg/ml)和x-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚啉-d-半乳糖苷)的bhis平板培养基(脑心浸液(37g/l)、山梨糖醇(91g/l)和琼脂(2%))上且培养以形成菌落。在菌落中,选择蓝色菌落且进而选择引入有质粒pdztn-lyscp1-acs的转化菌株。在cm培养基(葡萄糖(10g/l)、多聚蛋白胨(10g/l)、酵母提取物(5g/l)、牛肉提取物(5g/l)、nacl(2.5g/l)、尿素(2g/l),ph6.8)中在振荡下培养所选菌株(30℃,8小时)且从10-4到10-10连续稀释,涂铺于含有x-gal的固体培养基上,且培养以形成菌落。在因此形成的菌落中,选择以相对较低比率出现的白色菌落且最后选择通过二次交换引入acs编码基因的菌株。使用seqidno:13和25的引物对对最后选择的菌株进行pcr且确认引入编码acs的基因,且谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株分别命名为kccm11240ptn:lyscp1-acs和kccm11240ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-argetn:lyscp1-acs。3-2.制备将大肠杆菌源性acs引入至基于atcc13869的产腐胺菌株的转座子基因中的菌株与实例3-1中相同,以与实例3-1相同的方式将上文制备的pdztn-lyscp1-acs转化至dab12-b和dab12-btn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge中,其分别为实例1-2中制备的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株,且确认acs被引入至转座子基因中。由此选择的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株分别命名为dab12-btn:lyscp1-acs和dab12-btn:lyscp1-argatn:lyscp1-argetn:lyscp1-acs。3-3.评估引入有大肠杆菌源性acs的菌株产生腐胺的能力为了确认在引入了大肠杆菌源性arga和大肠杆菌源性arge的产腐胺菌株中引入acs的影响,比较在实例3-1与3-2中制备的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株的产生腐胺的能力。确切地说,将谷氨酸棒状杆菌的四类经修饰菌株(kccm11240ptn:lyscp1-acs;kccm11240ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-argetn:lyscp1-acs;dab12-btn:lyscp1-acs;和dab12-btn:lyscp1-argatn:lyscp1-argetn:lyscp1-acs)和四类亲本菌株(kccm11240p;kccm11240ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge;dab12-b;和dab12-btn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge)分别涂铺于含1mm精氨酸的cm平板培养基(1%葡萄糖、1%多聚蛋白胨、0.5%酵母提取物、0.5%牛肉提取物、0.25%nacl、0.2%尿素、100μl的50%naoh、2%琼脂,ph6.8,以1l计)上,且在30℃下培养24小时。将约一个铂金接种环量的由此培养的菌株各接种至25ml效价培养基(8%葡萄糖、0.25%大豆蛋白、0.50%固体玉米浆、4%(nh4)2so4、0.1%kh2po4、0.05%mgso4·7h2o、0.15%尿素、生物素(100μg)、盐酸硫胺素(3mg)、泛酸钙(3mg)、烟碱酰胺(3mg)、5%caco3,以1l计)中,且在30℃下,在以200rpm的速率振荡下培养98小时。在所有菌株培养物中,将1mm精氨酸添加至培养基。在完成培养后,测量每一培养液中产生的腐胺的浓度且结果展示于下表7中。[表7]菌株腐胺(g/l)kccm11240p12.2kccm11240ptn:lyscp1-acs12.2kccm11240ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge13.4kccm11240ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-argetn:lyscp1-acs13.9dab12-b13.3dab12-btn:lyscp1-acs13.2dab12-btn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge14.6dab12-btn:lyscp1-argatn:lyscp1-argetn:lyscp1-acs15.1如表7中所示,当acs分别引入至kccm11240p和dab12-b中时,腐胺产生量处于相同水平。但是,当acs分别引入两种不同种类的同时引入有大肠杆菌源性arga和大肠杆菌源性arge基因的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株(kccm11240ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge;dab12-btn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge)时,相比亲本菌株,腐胺产生量增加了13.5%或更高。另外,相比以上经修饰菌株,腐胺产生量增加了3.4%或更高。实例4:从具有提高的腐胺导出能力的产生腐胺的菌株引入大肠杆菌源性arga、大肠杆菌源性arge且取代pta-acka启动子的菌株,和所述菌株产生腐胺的能力4-1.制备从具有提高的腐胺导出能力的菌株引入大肠杆菌源性arga、大肠杆菌源性arge且取代pta-acka启动子的菌株基于具有提高的腐胺导出能力的kccm11401p(韩国专利申请公开案第10-2014-0115244号)菌株,制备菌株以检查引入大肠杆菌源性arga和大肠杆菌源性arge和增强棒状杆菌pta-acka的活性是否能够提高产生腐胺的能力。确切地说,以与实例1-1相同的方式将实例1-1中制备的pdztn-lyscp1-arga转化至kccm11401p中,且因此确认arga被引入至转座子基因中。因此选择的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株命名为kccm11401ptn:lyscp1-arga。另外,为了将arge引入至已引入有如实例1-1中制备的arga的菌株中,以与实例1-1相同的方式将实例1-1中制备的pdztn-lyscp1-arge转化至kccm11401ptn:lyscp1-arga中且确认arge被引入至转座子基因中。因此选择的经修饰菌株命名为kccm11401ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge。接着,以与实例2-1相同的方式将实例2-1中制备的pdz-lyscp1-1'pta-acka转化至kccm11401ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge中,且确认lyscp1启动子被引入至染色体内的pta-acka的起始密码子的上游。以上经修饰的谷氨酸棒状杆菌菌株命名为kccm11401ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-argelyscp1-1'pta-acka。4-2.评估从具有改进的腐胺导出能力的菌株引入大肠杆菌源性arga、大肠杆菌源性arge且取代pta-acka启动子的菌株为了确认引入大肠杆菌源性arga和大肠杆菌源性arge和增强pta-acka活性对具有提高的腐胺导出能力的产生腐胺的谷氨酸棒状杆菌菌株的影响,在实例4-1中制备的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株之间比较产生腐胺的能力。确切地说,谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株(kccm11401ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge、kccm11401ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-argelyscp1-1'pta-acka)和亲本菌株(kccm11401p)分别涂铺于含1mm精氨酸的cm平板培养基(1%葡萄糖、1%多聚蛋白胨、0.5%酵母提取物、0.5%牛肉提取物、0.25%nacl、0.2%尿素、100μl的50%naoh、2%琼脂,ph6.8,以1l计)上,且在30℃下培养24小时。将约一个铂金接种环的量的由此培养的菌株各接种至25ml效价培养基(8%葡萄糖、0.25%大豆蛋白、0.50%固体玉米浆、4%(nh4)2so4、0.1%kh2po4、0.05%mgso4·7h2o、0.15%尿素、生物素(100μg)、盐酸硫胺素(3mg)、泛酸钙(3mg)、烟碱酰胺(3mg)、5%caco3,以1l计)中,且在30℃下在以200rpm的速率振荡下培养98小时。在所有菌株培养物中,将1mm精氨酸添加至培养基。在完成培养后,测量每一培养液中产生的腐胺的浓度且结果展示于下表8中。[表8]如表8中所示,确认当具有增强的腐胺导出能力的kccm11401p引入有大肠杆菌源性arga基因和大肠杆菌源性arge基因时,腐胺产生量相比亲本菌株增加了11.9%,且当菌株进一步经pta-acka增强时,腐胺产生量相比亲本菌株增加了16.1%。实例5:将大肠杆菌源性arga和大肠杆菌源性arge引入至产生鸟氨酸的菌株中且确认菌株产生鸟氨酸的能力5-1.制备将大肠杆菌源性arga和大肠杆菌源性arge同时引入至基于kccm11137p的产生鸟氨酸的菌株的转座子基因中的菌株为了确认将大肠杆菌源性arga基因和大肠杆菌源性arge基因引入至kccm11137p(韩国专利申请公开案第10-1372635号)菌株(其为基于谷氨酸棒状杆菌atcc13032的产生鸟氨酸的菌株)中是否能够提高产生鸟氨酸的能力,使用实例1-1中制备的载体将arga基因和arge基因引入至菌株的转座子基因中。首先,通过电穿孔将质粒pdztn-lyscp1-arga引入至kccm11137p菌株中以获得转化体,且将转化体涂铺于含有卡那霉素(25μg/ml)和x-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚啉-d-半乳糖苷)的bhis平板培养基(脑心浸液(37g/l)、山梨糖醇(91g/l)和琼脂(2%))上且培养以形成菌落。在菌落中,选择蓝色菌落且进而选择引入有质粒pdztn-lyscp1-arga的菌株。在cm培养基(葡萄糖(10g/l)、多聚蛋白胨(10g/l)、酵母提取物(5g/l)、牛肉提取物(5g/l)、nacl(2.5g/l)、尿素(2g/l),ph6.8)中在振荡下培养所选菌株(30℃,8小时)且从10-4到10-10连续稀释,涂铺于含有x-gal的固体培养基上,且培养以形成菌落。在因此形成的菌落中,选择以相对较低比率出现的白色菌落且最后选择通过二次交换引入arga编码基因的菌株。使用seqidno:12和13的引物对对最后选择的菌株进行pcr且确认引入arga编码基因,且谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株命名为kccm11137ptn:lyscp1-arga。另外,为了将arge引入至已引入有如上文制备的arga的菌株中,以与实例1-1相同的方式将实例1-1中制备的pdztn-lyscp1-arge转化至kccm11137ptn:lyscp1-arga中,且借此确认arge被引入转座子基因内。因此选择的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株命名为kccm11137ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge。5-2.评估引入有大肠杆菌源性arga和大肠杆菌源性arge的产生鸟氨酸的棒状杆菌菌株的产生鸟氨酸的能力为了确认引入大肠杆菌源性arga和大肠杆菌源性arge对产生鸟氨酸的菌株中的鸟氨酸产生的影响,在实例5-1中制备的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株之间比较产生鸟氨酸的能力。确切地说,一类谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株(kccm11137ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge)和一类亲本菌株(kccm11137p)分别涂铺于含1mm精氨酸的cm平板培养基(1%葡萄糖、1%多聚蛋白胨、0.5%酵母提取物、0.5%牛肉提取物、0.25%nacl、0.2%尿素、100μl的50%naoh、2%琼脂,ph6.8,以1l计)上,且在30℃下培养24小时。将约一个铂金接种环的量的由此培养的菌株各接种至25ml效价培养基(8%葡萄糖、0.25%大豆蛋白、0.50%固体玉米浆、4%(nh4)2so4、0.1%kh2po4、0.05%mgso4·7h2o、0.15%尿素、生物素(100μg)、盐酸硫胺素(3mg)、泛酸钙(3mg)、烟碱酰胺(3mg)、5%caco3,以1l计)中,且在30℃下在以200rpm的速率振荡下培养98小时。在所有菌株培养物中,将1mm精氨酸添加至培养基。在完成培养后,测量每一培养液中产生的腐胺的浓度且结果展示于下表9中。[表9]菌株鸟氨酸(g/l)kccm11137p7.8kccm11137ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge8.9如表9中所示,确认相比亲本菌株,谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株在引入有大肠杆菌源性arga基因和大肠杆菌源性arge基因时显示14.1%的鸟氨酸产生量增加。实例6:增强引入有大肠杆菌源性arga和大肠杆菌源性arge的菌株中的pta-acka且确认菌株产生鸟氨酸的能力6-1.制备从基于atcc13032的产生鸟氨酸的菌株取代pta-acka启动子的菌株为了确认引入有大肠杆菌源性arga和大肠杆菌源性arge的基于atcc13032的产生鸟氨酸的菌株中的pta-acka活性的增强是否能够提高产生鸟氨酸的能力,将lyscp1启动子(wo2009/096689)引入至染色体内的pta-acka操纵子的起始密码子的上游。首先,通过电穿孔将实例2-1中制备的质粒pdz-lyscp1-1'pta-acka分别引入至kccm11137p和kccm11137ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge菌株中以获得转化体且将转化体涂铺于含有卡那霉素(25μg/ml)和x-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚啉-d-半乳糖苷)的bhis平板培养基(脑心浸液(37g/l)、山梨糖醇(91g/l)和琼脂(2%))上且培养以形成菌落。在菌落中,选择蓝色菌落且进而选择引入有质粒pdz-lyscp1-1'pta-acka的转化菌株。在cm培养基(葡萄糖(10g/l)、多聚蛋白胨(10g/l)、酵母提取物(5g/l)、牛肉提取物(5g/l)、nacl(2.5g/l)、尿素(2g/l),ph6.8)中在振荡下培养所选菌株(30℃,8小时)且从10-4到10-10连续稀释,涂铺于含有x-gal的固体培养基上,且培养以形成菌落。在因此形成的菌落中,选择以相对较低比率出现的白色菌落且最后选择pta-acka启动子通过二次交换经lyscp1启动子取代的菌株。使用seqidno:19和21的引物对对最后选择的菌株进行pcr且确认lyscp1启动子被引入至染色体内的pta-acka操纵子的起始密码子的上游。具体来说,通过重复在95℃下变性30秒、在55℃下退火30秒和在72℃下延伸1分钟的循环30次进行pcr反应。因此选择的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株分别命名为kccm11137plyscp1-1'pta-acka和kccm11137ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-argelyscp1-1'pta-acka。6-2.评估具有增强型pta-acka活性的菌株产生鸟氨酸的能力为了确认pta-acka活性的增强对引入有大肠杆菌源性arga和大肠杆菌源性arge的产生鸟氨酸的菌株的影响,在实例6-1中制备的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株之间比较产生鸟氨酸的能力。确切地说,两种不同种类的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株(kccm11137plyscp1-1'pta-acka;kccm11137ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-argelyscp1-1'pta-acka)和两种不同种类的亲本菌株(kccm11137p;kccm11137ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge)分别涂铺于含1mm精氨酸的cm平板培养基(1%葡萄糖、1%多聚蛋白胨、0.5%酵母提取物、0.5%牛肉提取物、0.25%nacl、0.2%尿素、100μl的50%naoh、2%琼脂,ph6.8,以1l计)上,且在30℃下培养24小时。将约一个铂金接种环的量的由此培养的菌株各接种至25ml效价培养基(8%葡萄糖、0.25%大豆蛋白、0.50%固体玉米浆、4%(nh4)2so4、0.1%kh2po4、0.05%mgso4·7h2o、0.15%尿素、生物素(100μg)、盐酸硫胺素(3mg)、泛酸钙(3mg)、烟碱酰胺(3mg)、5%caco3,以1l计)中,且在30℃下在以200rpm的速率振荡下培养98小时。在所有菌株培养物中,将1mm精氨酸添加至培养基。在完成培养后,测量每一培养液中产生的鸟氨酸的浓度且结果展示于下表10中。[表10]如表10中所示,确认当kccm11137p菌株的pta-acka活性增强时,鸟氨酸产生量不增加,而在kccm11137ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge菌株(其为同时引入有大肠杆菌源性arga基因和大肠杆菌源性arge基因的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株)时,鸟氨酸产生量相比kccm11137p菌株增加了20.5%,并且还相比kccm11137ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge菌株增加了5.6%。实例7:在引入有大肠杆菌源性arga和大肠杆菌源性arge的菌株中引入大肠杆菌源性acs且确认菌株产生鸟氨酸的能力7-1.制备将大肠杆菌源性acs引入至来自基于kccm11137的产生鸟氨酸的菌株的转座子基因中的菌株使用lyscp1启动子将acs引入至转座子基因中以确认将大肠杆菌源性acs引入至kccm11137p(韩国专利第10-1372635号)菌株(其为基于谷氨酸棒状杆菌atcc13032的产生鸟氨酸的菌株)中是否能够提高产生鸟氨酸的能力。首先,通过电穿孔将实例3-1中制备的质粒pdztn-lyscp1-acs分别引入至kccm11137p和kccm11137ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge菌株中以获得转化体,且将转化体涂铺于含有卡那霉素(25μg/ml)和x-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚啉-d-半乳糖苷)的bhis平板培养基(脑心浸液(37g/l)、山梨糖醇(91g/l)和琼脂(2%))上且培养以形成菌落。在菌落中,选择蓝色菌落且进而选择引入有质粒pdztn-lyscp1-acs的转化菌株。在cm培养基(葡萄糖(10g/l)、多聚蛋白胨(10g/l)、酵母提取物(5g/l)、牛肉提取物(5g/l)、nacl(2.5g/l)、尿素(2g/l),ph6.8)中在振荡下培养所选菌株(30℃,8小时)且从10-4到10-10连续稀释,涂铺于含有x-gal的固体培养基上,且培养以形成菌落。在因此形成的菌落中,选择以相对较低比率出现的白色菌落且最后选择通过二次交换引入acs编码基因的菌株。使用seqidno:13和25的引物对对最后选择的菌株进行pcr且确认引入acs编码基因。因此选择的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株分别命名为kccm11137ptn:lyscp1-acs和kccm11137ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-argetn:lyscp1-acs。7-2.评估引入有大肠杆菌源性acs的菌株产生鸟氨酸的能力为了确认引入acs对引入有大肠杆菌源性arga和大肠杆菌源性arge的产生鸟氨酸的菌株的影响,在实例7-1中制备的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株之间比较产生鸟氨酸的能力。确切地说,两种不同种类的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株(kccm11137ptn:lyscp1-acs;kccm11137ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-argetn:lyscp1-acs)和两种不同种类的亲本菌株(kccm11137p;kccm11137ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge)分别涂铺于含1mm精氨酸的cm平板培养基(1%葡萄糖、1%多聚蛋白胨、0.5%酵母提取物、0.5%牛肉提取物、0.25%nacl、0.2%尿素、100μl的50%naoh、2%琼脂,ph6.8,以1l计)上,且在30℃下培养24小时。将约一个铂金接种环的量的由此培养的菌株各接种至25ml效价培养基(8%葡萄糖、0.25%大豆蛋白、0.50%固体玉米浆、4%(nh4)2so4、0.1%kh2po4、0.05%mgso4·7h2o、0.15%尿素、生物素(100μg)、盐酸硫胺素(3mg)、泛酸钙(3mg)、烟碱酰胺(3mg)、5%caco3,以1l计)中,且在30℃下在以200rpm的速率振荡下培养98小时。在所有菌株培养物中,将1mm精氨酸添加至培养基。在完成培养后,测量每一培养液中产生的鸟氨酸的浓度且结果展示于下表11中。[表11]菌株鸟氨酸(g/l)kccm11137p7.8kccm11137ptn:lyscp1-acs7.8kccm11137ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge8.9kccm11137ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-argetn:lyscp1-acs9.2如表11中所示,确认当kccm11137p菌株引入有acs时,鸟氨酸产生量不增加,而在kccm11137ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge菌株(其为同时引入有大肠杆菌源性arga基因和大肠杆菌源性arge基因的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株)时,鸟氨酸产生量相比kccm11137p菌株增加了17.9%,并且还相比kccm11137ptn:lyscp1-argatn:lyscp1-arge菌株增加了3.4%。综上所述,确认将大肠杆菌源性arga和大肠杆菌源性arge引入至棒状杆菌菌株中可增加腐胺和鸟氨酸产生量,且另外确认增强棒状杆菌菌株内的pta-acka基因的活性或引入大肠杆菌源性acs可进一步增加腐胺和鸟氨酸产生量。由上可知,本发明涉及的领域的技术人员将能够理解本发明可在不修改本发明的技术构思或基本特征的情况下以其它特定形式实施。就此而言,本文公开的示例性实施例仅出于说明性目的且不应被理解为限制本发明的范围。相反,本发明不仅意图涵盖示例性实施例,而且还涵盖可包含于由所附权利要求书界定的本发明的精神和范围内的各种替代方案、修改、等效物和其它实施例。序列表<110>cj第一制糖株式会社<120>用于产生腐胺或鸟氨酸的微生物和使用其产生腐胺或鸟氨酸的方法<130>opa16079<150>kr10-2015-0102624<151>2015-07-20<160>39<170>kopatentin2.0<210>1<211>443<212>prt<213>大肠杆菌n-乙酰谷氨酸合酶<400>1valvallysgluarglysthrgluleuvalgluglyphearghisser151015valprotyrileasnthrhisargglylysthrphevalilemetleu202530glyglyglualailegluhisgluasnpheserserilevalasnasp354045ileglyleuleuhisserleuglyileargleuvalvalvaltyrgly505560alaargproglnileaspalaasnleualaalahishishisglupro65707580leutyrhislysasnileargvalthraspalalysthrleugluleu859095vallysglnalaalaglythrleuglnleuaspilethralaargleu100105110sermetserleuasnasnthrproleuglnglyalahisileasnval115120125valserglyasnpheileilealaglnproleuglyvalaspaspgly130135140valasptyrcyshisserglyargileargargileaspgluaspala145150155160ilehisargglnleuaspserglyalailevalleumetglyproval165170175alavalservalthrglygluserpheasnleuthrserglugluile180185190alathrglnleualailelysleulysalaglulysmetileglyphe195200205cysserserglnglyvalthrasnaspaspglyaspilevalserglu210215220leupheproasnglualaglnalaargvalglualaglngluglulys225230235240glyasptyrasnserglythrvalargpheleuargglyalavallys245250255alacysargserglyvalargargcyshisleuilesertyrglnglu260265270aspglyalaleuleuglngluleupheserargaspglyileglythr275280285glnilevalmetgluseralagluglnileargargalathrileasn290295300aspileglyglyileleugluleuileargproleugluglnglngly305310315320ileleuvalargargserarggluglnleuglumetgluileasplys325330335phethrileileglnargaspasnthrthrilealacysalaalaleu340345350tyrpropheprogluglulysileglyglumetalacysvalalaval355360365hisproasptyrargserserserargglygluvalleuleugluarg370375380ilealaalaglnalalysglnserglyleuserlysleuphevalleu385390395400thrthrargserilehistrppheglngluargglyphethrproval405410415aspileaspleuleuprogluserlyslysglnleutyrasntyrgln420425430arglysserlysvalleumetalaaspleugly435440<210>2<211>1332<212>dna<213>大肠杆菌n-乙酰谷氨酸合酶<400>2gtggtaaaggaacgtaaaaccgagttggtcgagggattccgccattcggttccctatatc60aatacccaccggggaaaaacgtttgtcatcatgctcggcggtgaagccattgagcatgag120aatttctccagtatcgttaatgatatcgggttgttgcacagcctcggcatccgtctggtg180gtggtctatggcgcacgtccgcagatcgacgcaaatctggctgcgcatcaccacgaaccg240ctgtatcacaagaatatacgtgtgaccgacgccaaaacactggaactggtgaagcaggct300gcgggaacattgcaactggatattactgctcgcctgtcgatgagtctcaataacacgccg360ctgcagggcgcgcatatcaacgtcgtcagtggcaattttattattgcccagccgctgggc420gtcgatgacggcgtggattactgccatagcgggcgtatccggcggattgatgaagacgcg480atccatcgtcaactggacagcggtgcaatagtgctaatggggccggtcgctgtttcagtc540actggcgagagctttaacctgacctcggaagagattgccactcaactggccatcaaactg600aaagctgaaaagatgattggtttttgctcttcccagggcgtcactaatgacgacggtgat660attgtctccgaacttttccctaacgaagcgcaagcgcgggtagaagcccaggaagagaaa720ggcgattacaactccggtacggtgcgctttttgcgtggcgcagtgaaagcctgccgcagc780ggcgtgcgtcgctgtcatttaatcagttatcaggaagatggcgcgctgttgcaagagttg840ttctcacgcgacggtatcggtacgcagattgtgatggaaagcgccgagcagattcgtcgc900gcaacaatcaacgatattggcggtattctggagttgattcgcccactggagcagcaaggt960attctggtacgccgttctcgcgagcagctggagatggaaatcgacaaattcaccattatt1020cagcgcgataacacgactattgcctgcgccgcgctctatccgttcccggaagagaagatt1080ggggaaatggcctgtgtggcagttcacccggattaccgcagttcatcaaggggtgaagtt1140ctgctggaacgcattgccgctcaggcgaagcagagcggcttaagcaaattgtttgtgctg1200accacgcgcagtattcactggttccaggaacgtggatttaccccagtggatattgattta1260ctgcccgagagcaaaaagcagttgtacaactaccagcgtaaatccaaagtgttgatggcg1320gatttagggtaa1332<210>3<211>408<212>prt<213>大肠杆菌乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶<400>3metasplysleuleugluargpheleuasntyrvalserleuaspthr151015glnserlysalaglyvalargglnvalproserthrgluglyglntrp202530lysleuleuhisleuleulysgluglnleugluglumetglyleuile354045asnvalthrleuserglulysglythrleumetalathrleuproala505560asnvalproglyaspileproalaileglypheileserhisvalasp65707580thrserproaspcysserglylysasnvalasnproglnilevalglu859095asntyrargglyglyaspilealaleuglyileglyaspgluvalleu100105110serprovalmetpheprovalleuhisglnleuleuglyglnthrleu115120125ilethrthraspglylysthrleuleuglyalaaspasplysalagly130135140ilealagluilemetthralaleualavalleuglnglnlyslysile145150155160prohisglyaspileargvalalaphethrproaspglugluvalgly165170175lysglyalalyshispheaspvalaspalapheaspalaargtrpala180185190tyrthrvalaspglyglyglyvalglygluleugluphegluasnphe195200205asnalaalaservalasnilelysilevalglyasnasnvalhispro210215220glythralalysglyvalmetvalasnalaleuserleualaalaarg225230235240ilehisalagluvalproalaaspgluserproglumetthrglugly245250255tyrgluglyphetyrhisleualasermetlysglythrvalgluarg260265270alaaspmethistyrileileargasppheasparglysglnpheglu275280285alaarglysarglysmetmetgluilealalyslysvalglylysgly290295300leuhisproaspcystyrilegluleuvalilegluaspsertyrtyr305310315320asnmetargglulysvalvalgluhisprohisileleuaspileala325330335glnglnalametargaspcysaspilegluprogluleulysproile340345350argglyglythraspglyalaglnleuserphemetglyleuprocys355360365proasnleuphethrglyglytyrasntyrhisglylyshisgluphe37037538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