本发明涉及一种新型二氢吡喃并嘧啶酮衍生物，其互变异构体，其立体异构体及它们的混合物，或其药学上可接受的盐；和一种用于预防或治疗与端锚聚合酶(tankyrase)相关的疾病的药物组合物，其含有作为活性成分的所述二氢吡喃并嘧啶酮衍生物，其互变异构体，其立体异构体及它们的混合物，或其药学上可接受的盐；以及其用途；和一种通过使用所述二氢吡喃并嘧啶酮衍生物，其互变异构体，其立体异构体及它们的混合物，或其药学上可接受的盐，治疗或预防与端锚聚合酶相关的疾病的方法。
背景技术：
人端锚聚合酶属于聚(adp-核糖)聚合酶(parp)蛋白质家族，其由共同具有催化parp结构域的17个成员组成。
parp家族蛋白质是有前途的治疗靶点。parp1和parp2在dna损伤应答中发挥作用，并且parp抑制剂使癌细胞对药物和放射疗法敏感。此外，parp1与其他疾病有关，包括炎症、神经元细胞死亡和局部缺血。与parp1共同具有高度序列相似性的端锚聚合酶(tnks1和tnks2)也是新兴的治疗靶点。端锚聚合酶起初被认为是端粒酶活性的调节剂，并且其涉及dna损伤应答和wnt信号传导(wahlbert等人,2012,nat.biotechnol.,30(3):283-288)。
parp家族蛋白质是有前途的治疗靶点。parp1和parp2在dna损伤应答中发挥作用，并且parp抑制剂使癌细胞对药物和放射疗法敏感。此外，parp1与其他疾病有关，包括炎症、神经元细胞死亡和局部缺血。与parp1共同具有高度序列相似性的端锚聚合酶(tnks1和tnks2)也是新兴的治疗靶点。端锚聚合酶起初被认为是端粒酶活性的调节剂，并且其涉及dna损伤应答和wnt信号传导(wahlbert等人,2012,nat.biotechnol.,30(3):283-288)。
同时，wnt/β-连环蛋白通路的关键特征为通过β-连环蛋白破坏复合体调节下游效应子β-连环蛋白的蛋白质水解。β-连环蛋白破坏复合体的主要构成为腺瘤性息肉病蛋白(adenomatouspolyposiscoli，apc)、轴蛋白(axin)和gsk3α/β。在不存在wnt通路活化的情况下，胞质β-连环蛋白被结构性磷酸化(constitutivelyphosphorylated)并靶向降解。在wnt刺激后，β-连环蛋白破坏复合体解离，导致β-连环蛋白在细胞核中的累积和wnt通路应答基因的转录。
近来已发现，在wnt/β-连环蛋白通路中，端锚聚合酶抑制剂通过稳定轴蛋白促进β-连环蛋白降解来选择性地抑制由β-连环蛋白介导的转录(huang等人,2009,nature,461(7264):614-620)。
已经在许多癌症(例如结肠癌、胃癌、肝细胞癌、乳腺癌、成神经管细胞瘤、黑素瘤、非小细胞肺癌、胰腺癌和前列腺癌)中观察到由wnt蛋白的过表达或影响β-连环蛋白破坏复合体组分的突变介导的通路的不恰当活化，从而导致β-连环蛋白的稳定化(waaler等人,2012,cancerres.,72(11):2822-2832)。特别地，肿瘤抑制因子apc的截短突变(truncatingmutation)是结直肠癌中最普遍的基因改变(miyaki等人,1994,cancerres.,54:3011-3020)。此外，已在肝癌和结直肠癌患者中确定axin1和axin2突变(taniguchi等人,2002,oncogene,21:4863-4871；liu等人,2000,nat.genet.,26:146-147)。这些体细胞突变导致β-连环蛋白的wnt非依赖性稳定化和β-连环蛋白介导的转录的结构性活化。此外，wnt通路活性的失调也与许多其他非癌症疾病有关，包括骨质疏松、骨关节炎、多囊肾病、肺纤维化、糖尿病、精神分裂症、血管疾病、心脏疾病、非致癌增殖性疾病、神经退行性疾病如阿尔茨海默病等。
针对并可以纠正wnt信号传导通路失调的治疗已经被用于病症如骨密度缺陷、冠心病、迟发性阿尔茨海默氏病、家族性渗出性玻璃体视网膜病变、视网膜血管生成、先天性四肢切断症(tetraamelia)、缪勒管退化(muellerian-ductregression)和女子男性化、serkal综合症、2型糖尿病、fuhrmann综合症、骨骼发育不良、局灶性真皮发育不良和神经管缺陷。尽管介绍集中于wnt信号传导在癌症中的相关性，但是wnt信号传导通路在许多人类疾病(不限于上面为说明目的而提供的示例)中具有根本的重要性。
同时，最近有报道称，细胞内轴蛋白水平受到聚(adp-核糖)聚合酶家族成员端锚聚合酶-1和端锚聚合酶-2(也被称为parp5a和parp5b)的影响(naturechemicalbiology,2009,5:100；nature,2009,461:614)。端锚聚合酶能够使轴蛋白聚-adp核糖基化(poly-adpribosylate，parsylate)，其标记该蛋白用于随后的泛素化和蛋白酶体降解。因此，预期在存在端锚聚合酶催化活性的抑制剂的情况下，轴蛋白浓度将增加，导致更高的破坏复合体浓度，未磷酸化的细胞内β-连环蛋白的浓度降低和wnt信号传导减少。端锚聚合酶-1和端锚聚合酶-2的抑制剂预期还作用于端锚聚合酶蛋白的其他生物学功能(例如，染色体末端(端粒)保护，胰岛素响应和有丝分裂期间的纺锤体组装)(chang等人,2005,biochem.j.,391:177-184；chi等人,2000,j.biol.chem.,275:38437-38444；bae等人,2003,j.biol.chem.,278:5195-5204)。
一种新型治疗剂，其可以用于癌症和过度增殖性病症。特别地，增加了对于开发调节wnt活性的端锚聚合酶抑制剂的需求。
技术实现要素：
技术问题
本发明的一个目的为一种抑制端锚聚合酶活性的新型化合物，其互变异构体，其立体异构体及它们的混合物，或其药学上可接受的盐。
本发明的另一个目的是提供它们的制备方法。
本发明的另一个目的是提供一种本发明的化合物，其互变异构体，其立体异构体及它们的混合物，或其药学上可接受的盐，和一种用于预防或治疗与端锚聚合酶相关的疾病的药物组合物，其含有作为活性成分的本发明的化合物，其互变异构体，其立体异构体及它们的混合物，或其药学上可接受的盐。
本发明的另一个目的是提供其在制备用于与端锚聚合酶相关的疾病的预防或治疗剂的药物中的用途。
本发明的另一个目的是提供一种用于与端锚聚合酶相关的疾病的预防或治疗剂的方法，其包括施用有效量的本发明的治疗药物组合物。
技术方案
因此，本发明人尝试研究以实现目的，并发现新设计和合成的二氢吡喃并嘧啶酮衍生物可以抑制或调节端锚聚合酶活性，并完成了本发明：
二氢吡喃并嘧啶酮衍生物
本发明提供一种由化学式1表示的化合物，其互变异构体，其立体异构体及它们的混合物，或其药学上可接受的盐：
[化学式1]
其中
x为chr4或c＝o；
y为n或c；
l为0、1或2；
r1为氢、羟基、氰基或c1-6烷基{在此处，如果y为n，则r1不存在}；
r2为
r4为氢、羟基、c1-6烷基或氨基；
m为0、1、2或3；
n为0、1、2、3、4或5；
每个r5独立地为-z-(ch2)p-r6、卤素、氰基、硝基、羧基、c1-6烷基、c1-6烷基氧代、c2-6烯基、c1-6烷氧基、c1-6烷氧羰基、c1-6羟烷基、c1-6二羟基烷基、未被取代的或任选被羟基或c3-7环烷基取代的c1-6卤代烷基；
z为-o-、-s(o)q-、-nr7-、-conr7-、-chr7-或不存在；
p为0、1、2、3、4、5或6；
q为0、1或2；
r6为氢、羟基、-or8、-o-(c＝o)-r8、-s(o)r-r8、氰基、-(c＝o)-r8、-(c＝o)or8、-(c＝o)nr9r10、-nr9r10、叠氮基、c1-6烷基、c1-6二羟基烷基、未被取代的或任选被羟基、c3-7环烷基、杂环基、c5-10芳基或杂芳基取代的c1-6卤代烷基；
r为0、1或2；
r7为氢、c1-6烷基、c1-6烷氧基、c3-7环烷基或c1-3烷基-c3-7环烷基；
r8为氢、c1-6烷基、c1-6烷基氧代、c1-6烷氧基、氨基、c1-6烷基氨基、c1-6氨基烷基、c3-7环烷基、c1-3烷基-c3-7环烷基或杂环基；
r9和r10彼此独立地为氢、c1-6烷基、c1-6烷氧基、c3-6环烷基、c1-3烷基-c3-6环烷基或-(so2)-c1-3烷基；
每个杂芳基为含有一个或多个选自n、o、s及其组合的杂原子的5至10元单环或稠环，每个杂环为含有一个或多个选自n、o、s及其组合的杂原子的3至10元单环或稠环；
每个环烷基和杂环基的一个或多个氢可以不被取代，或者被羟基、氧代、卤素、氰基、硝基、c1-6烷基、c1-6羟基烷基、c1-6卤代烷基、c1-6烷氧基、甲酰基、c1-6烷基甲酰基、羧基、c1-6烷基羧基、氨基、c1-6烷基氨基、二(c1-6烷基)氨基、氨基甲酰基、c1-6烷基氨基甲酰基或二(c1-6烷基)氨基甲酰基取代；和
每个芳基和杂芳基的一个或多个氢可以不被取代，或者被羟基、氧代、卤素、氰基、硝基、c1-6烷基、c1-6烷氧基、c1-6羟烷基、c1-6卤代烷基、吡嗪基、甲酰基、c1-6烷基甲酰基、羧基、c1-6烷基羧基、氨基、c1-6烷基氨基、二(c1-6烷基)氨基、氨基甲酰基、c1-6烷基氨基甲酰基、二(c1-6烷基)氨基甲酰基或c1-6烷基磺酰基取代。
根据本发明的一个实施方式，在上面的化学式中，
x为chr4；
y为n或c；
l为1或2；
r1为氢、羟基{在此处，如果y为n，则r1不存在}；
r2为
r4为氢；
m为0、1或2；
n为0、1、2或3；
每个r5独立地为-z-(ch2)p-r6、卤素或c1-6羟基烷基；
z为-o-或不存在；
p为0、1、2或3；
r6为氢、羟基、-or8、-nr9r10、c1-6二羟基烷基、杂环基或杂芳基；
r8为氢、c1-6烷基或杂环基；和
r9和r10彼此独立地为氢、c1-6烷基或c3-6环烷基；
在本发明中，每个芳基为苯基或萘基，优选苯基，但不限于此；
此外，每个杂芳基为四唑基、咪唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、三嗪基、吡咯基、吡唑基、三唑基、吡嗪基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、呋吖基(furazanyl)、噁唑基、吲哚基、异吲哚基、吲唑基、喹啉基、异喹啉基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并呋喃基、苯并咪唑基、苯并三唑基或氮杂吲哚基，优选四唑基或咪唑基，但不限于此。
此外，每个杂环基可以为四氢吡喃基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、二氢吡喃基、二噁烷基、二硫戊环基(dithianyl)、二氧戊环基、咪唑烷基、咪唑啉基、吡咯啉基、氧杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、二氧代硫代吗啉基、二氧代四氢噻吩基、二氧代硫杂环戊基(dioxothiolanyl)、氧代哌啶基、氧代吡咯烷基或氧代-噁唑烷基，优选四氢呋喃基、氧杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基或吗啉基，但不限于此。
根据本发明的一个实施方案，化合物可以选自：
1)2-(4-(2,6-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-7,8-二氢-3h-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5h)-酮；
2)2-(4-(2,6-二氟-4-(2-吗啉基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-7,8-二氢-3h-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5h)-酮；
3)2-(4-(2,6-二氟-4-(2-(哌啶-1-基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-7,8-二氢-3h-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5h)-酮；
4)2-(4-(2,6-二氟-4-(2-羟基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-7,8-二氢-3h-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5h)-酮；
5)2-(4-(4-(2,3-二羟基丙氧基)-2,6-二氟苯基)哌嗪-1-基)-7,8-二氢-3h-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5h)-酮；
6)2-(4-(2,6-二氟-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)哌嗪-1-基)-7,8-二氢-3h-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5h)-酮；
7)2-(4-(2,6-二氟-4-(1-羟乙基)苯基)哌嗪-1-基)-7,8-二氢-3h-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5h)-酮；
8)2-(4-(2,6-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)-7,8-二氢-3h-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5h)-酮；
9)2-(4-(2-甲基-2h-四唑-5-基)哌啶-1-基)-7,8-二氢-3h-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5h)-酮；
10)2-(4-(2,6-二氟-4-(2-氧代-2-(哌啶-1-基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-7,8-二氢-3h-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5h)-酮；
11)2-(4-(2,6-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌啶-1-基)-7,8-二氢-3h-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5h)-酮；
12)2-(4-(4-(2-(二乙基氨基)乙氧基)-2,6-二氟苯基)哌嗪-1-基)-7,8-二氢-3h-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5h)-酮；
13)2-(4-(4-(2-(1h-咪唑-1-基)乙氧基)-2,6-二氟苯基)哌嗪-1-基)-7,8-二氢-3h-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5h)-酮。
本发明的化学式1的化合物可以以药学上可接受的盐的形式存在。由药学上可接受的游离酸形成的酸加成盐可用作盐。在本发明中使用的术语“药学上可接受的盐”是指化学式1表示的化合物的任何有机或无机酸加成盐，其以对于病人是相对无毒性的，且具有无害的有效作用的浓度存在，并且盐的不利副作用不会抵消化合物的益处。
可以根据通常使用的方法制备酸加成盐，例如通过将化合物溶解于过量的酸水溶液中，并使用与水混溶的有机溶剂(例如甲醇、乙醇、丙酮或乙腈)使盐沉淀。在水中将化合物与等摩尔的酸或醇(例如乙二醇单甲醚)加热后，可以经由蒸发将混合物干燥，或者可以通过抽吸过滤沉淀的盐。
本文中，游离酸可以为有机酸或无机酸。可以使用盐酸、磷酸、硫酸、硝酸、锡酸等作为无机酸，并且可以使用甲磺酸、对甲苯磺酸、乙酸、三氟乙酸、马来酸、琥珀酸、草酸、苯甲酸、酒石酸、富马酸、扁桃酸、丙酸、柠檬酸、乳酸、乙醇酸、葡糖酸、半乳糖醛酸、谷氨酸、戊二酸、葡糖醛酸、天冬氨酸、抗坏血酸、碳酸、香草酸或氢碘酸等作为有机酸，但不限于此。
此外，可以使用碱制备药学上可接受的金属盐。可以例如通过将化合物溶解于过量的碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物溶液中，过滤未溶解的化合物盐，然后蒸发并干燥滤液来获得碱金属盐或碱土金属盐。优选地，作为金属盐，钠、钾或钙盐可以是药学上合适的，但不限于此。此外，可以通过将碱金属盐或碱土金属盐与合适的银盐(例如硝酸银)反应来获得相应的银盐。
除非另有说明，本发明的化合物的药学上可接受的盐包括化学式1的化合物的可能的(plausible)酸性或碱性盐。例如，药学上可接受的盐包括具有羟基的钠盐、钙盐和钾盐。此外，可以包括具有氨基的氢溴酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、乙酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐(甲磺酸盐(mesylate))和对甲苯磺酸盐(对甲苯磺酸盐(tosylate))作为其他药学上可接受的盐。可以通过本领域已知的盐制备方法制备它们。
本发明的二氢吡喃并嘧啶酮衍生物的药学上可接受的盐可以为二氢吡喃并嘧啶酮衍生物的任何药学上可接受的盐，其显示对端锚聚合酶1和/或端锚聚合酶2的抑制活性，其等价于二氢吡喃并嘧啶酮衍生物化合物的活性，但不限于此。
二氢吡喃并嘧啶酮衍生物的合成方法
可以由二氢-2h-吡喃-4(3h)-酮经由一系列反应合成本发明的化学式1的化合物。给出以下反应方案作为本发明化合物的示例性制备方法。然而，用于制备本发明化合物的方法不限于此，如果需要，可以采用适当修改的本领域已知的方法。
经由下面描述的反应方案1，可以合成4-(苄氧基)-2-(甲基磺酰基)-7,8-二氢-5h-吡喃并[4,3-d]嘧啶(8)作为中间体。
[反应方案1]
在碳酸二甲酯的存在下，在dmf中，将二氢-2h-吡喃-4(3h)-酮(1)与nah反应，以引入甲酯基团(2)。优选地，可以在0℃至室温进行反应3h。将产物(2)在meoh中与nh4oac反应，以形成引入了氨基的吡喃衍生物(3)。优选地，可以在室温进行反应3h。然后，与异氰酸苯甲酰酯在thf中反应，以形成硫脲基团(4)，与koh反应以引起环化反应。优选地，可以在80至90°进行反应1h。将产物(5)在纯化水中与koh和硫酸二甲酯反应，以选择性地在s位引入甲基(6)，在dmf中与k2co3和苄基溴反应，以引入保护基(7)。优选地，可以在室温进行反应1h。将产物(7)与mcpba在dcm中反应，从而氧化甲硫基。因此，可以获得二氢吡喃并嘧啶(8)(本发明化合物的母体结构的一部分)，作为二氢吡喃、苄基和被甲磺酰基取代的吡啶的稠合形式。
在如上所述合成构成本发明化合物的母体结构的中间体(8)之后，通过进一步进行本领域已知的一种或多种反应来引入替代甲磺酰基的取代基。
例如，当替代甲磺酰基的取代基为胺基团时，可以根据以下反应方案2通过胺化由中间体化合物(8)获得作为本发明的目标化合物的二氢吡喃并嘧啶酮衍生物化合物(10)，并且如果需要，任选地进行胺化然后脱保护。
[反应方案2]
优选地，可以在thf/etoh溶剂中，经由中间体与胺化合物的胺化反应来进行胺化，所述胺化合物含有适于所期望的目标化合物的取代基。优选地，可以在微波反应器中在120℃进行反应3h至4h。
包含二氢吡喃并嘧啶酮衍生物化合物的组合物，其用途及使用其的预防或治疗方法
本发明提供一种用于治疗或预防与端锚聚合酶相关的疾病的药物组合物，其含有作为活性成分的以下化学式1的化合物，其互变异构体，其立体异构体及它们的混合物，或其药学上可接受的盐。
[化学式1]
在一个方面，本发明提供一种由化学式1表示的化合物。
本发明的化学式1的化合物，其互变异构体，其立体异构体及它们的混合物，或其药学上可接受的盐可以表现出抑制端锚聚合酶1、端锚聚合酶2或两者活性的活性。
因此，含有作为活性成分的本发明的化学式1的化合物，其互变异构体，其立体异构体及它们的混合物，或其药学上可接受的盐的药物组合物可以通过抑制端锚聚合酶1和/或端锚聚合酶2的活性从而调节细胞死亡增殖和/或转移来预防或治疗与端锚聚合酶相关的疾病，其可以有效地用于预防或治疗由端锚聚合酶1和/或端锚聚合酶2的异常活性引起的疾病。
具体地，包含作为活性成分的本发明化合物的药物组合物可以有效地用于预防或治疗疾病，所述疾病选自癌症、多发性硬化症(ms)、心血管疾病、中枢神经系统损伤和炎性疾病。
所述癌症可以选自头部、颈部、眼睛、口腔、咽喉、食道、支气管、喉、咽、胸、骨、肺、结肠、直肠、胃、前列腺、膀胱、子宫、宫颈、乳房、卵巢、睾丸或其他生殖器官、皮肤、甲状腺、血液、淋巴结、肾脏、肝脏、胰腺、脑或中枢神经系统的癌症，实体瘤，血源性肿瘤等。优选地，可以使用本发明的药物组合物预防或治疗的与端锚聚合酶相关的疾病可以为结肠直肠癌(包括结肠癌和直肠癌)、乳腺癌、肺癌或血液恶性肿瘤，但不限于此。
在本发明中，术语“预防”是指通过施用本发明的组合物来抑制或延迟与端锚聚合酶相关的疾病的发生、发展和复发的任何行为，术语“治疗”是通过施用本发明的组合物来减轻或改善疾病症状的任何行为。
根据本发明的药物组合物可以含有基于组合物的总重量0.1wt％至75wt％，更优选1wt％至50wt％的作为活性成分的由化学式1表示的化合物，其互变异构体，其立体异构体及它们的混合物，或其药学上可接受的盐。
本发明的组合物可以进一步含有药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂，并且可以根据通常使用的方法被制备成不同的制剂，包括口服制剂如粉末剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂、气雾剂等，无菌注射液等。其可以口服施用，或经由不同的途径施用，包括静脉内、腹膜内、皮下、直肠和局部途径。可以被包含在组合物中的合适的载体、赋形剂或稀释剂的示例可以包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯树胶、褐藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石粉、硬脂酸镁、矿物油等。此外，本发明的组合物可以进一步含有填充剂、抗凝剂、润滑剂、润湿剂、芳香剂、乳化剂、防腐剂等。
用于口服施用的固体制剂可以包括片剂、丸剂、粉末剂、颗粒剂、胶囊剂等。可以通过在组合物中混合至少一种赋形剂(例如淀粉、碳酸钙、蔗糖、乳糖、明胶等)来制备这些固体制剂。除了简单的赋形剂以外，可以使用润滑剂，如硬脂酸镁和滑石粉。
用于口服施用的液体制剂可以例举混悬剂、内用溶液(solutionforinternalapplication)、乳剂、糖浆剂等。除了常用的简单稀释剂，如水和液体石蜡以外，可以包括各种赋形剂，如润湿剂、甜味剂、芳香剂、防腐剂等。
用于肠胃外施用的制剂可以包括无菌水性溶液、非水性溶液、混悬剂、乳剂、冻干剂和栓剂。对于非水性溶液或混悬剂，可以使用丙二醇、聚乙二醇、植物油(如橄榄油)、可注射酯(如油酸乙酯)等。作为栓剂的基剂，可以使用witepsol、聚乙二醇、吐温61、可可脂、月桂精脂(laurinbutter)、甘油明胶等。同时，可注射制剂可以含有常用的添加剂，如增溶剂、等渗剂、混悬剂、乳化剂、稳定剂、防腐剂等。
以药学上有效量施用本发明的组合物。在本发明中，术语“药学上有效量”是指足以以适用于医学治疗的合理的利益/风险比治疗疾病而不引起副作用的量。可以基于患者的健康状况、疾病的种类及其严重程度、药物活性、对药物的敏感性、施用方法、施用时间、施用途径、排泄速率、治疗时间、组合使用或同时使用的药物和医学领域中熟知的其他因素，确定有效剂量的水平。本发明的组合物可以作为独立的治疗剂施用，或者与其他治疗剂组合顺序或同时施用。此外，其可以以单剂量或多剂量的形式施用。考虑到所有上述因素，重要的是施用能够以最小量得到最大作用且无副作用的量，这可以由本领域技术人员可以容易地确定。
具体地，本发明的组合物中化合物的有效量可以根据患者的年龄、性别和体重而变化。通常，可以每天一次、两天一次或每天1至3次施用每kg体重1mg至100mg，优选5mg至60mg的量。然而，由于施用剂量可以根据施用途径、疾病的严重程度、性别、体重和年龄等而增加或减少，因此其不以任何方式限制本发明的范围。
本发明还提供一种用于预防或治疗受试者的与端锚聚合酶相关的疾病的方法，其包括将由化学式1表示的化合物，其互变异构体，其立体异构体及它们的混合物，或其药学上可接受的盐施用至需要其的受试者。
在本发明中，术语“受试者”是指已发生或可能发生与端锚聚合酶相关的疾病的动物，包括人、猴、牛、马、绵羊、猪、鸡、火鸡、鹌鹑、猫、狗、小鼠、大鼠、兔或豚鼠。通过向受试者施用本发明的药物组合物可以有效地预防或治疗疾病。本发明的药物组合物可以与现有的治疗剂组合施用。
在本发明中，术语“施用”是指以任何适当的方式将期望的物质给予患者。只要可以到达靶组织，可以经由任何一般施用途径施用本发明的组合物。例如，可以腹膜内、静脉内、肌内、皮下、皮内、口服、局部、鼻内、肺内或直肠施用组合物，但不限于此。此外，可以通过任何能够将活性物质递送至靶细胞的装置施用本发明的药物组合物。优选的施用方法和制剂包括静脉内注射、皮下注射、皮内注射、肌内注射、快速浓注等。可以使用水基溶液，如生理盐水、林格溶液等，或非水基溶液，如植物油、高级脂肪酸酯(例如油酸乙酯)，或醇(例如乙醇、苯甲醇、丙二醇、甘油等)，制备注射剂，并且其可以含有药用赋形剂，如用于防止变性的稳定剂(例如抗坏血酸、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、bha、生育酚、edta等)，乳化剂，用于ph控制的缓冲剂，用于抑制微生物生长的防腐剂(例如硝酸苯汞、硫柳汞、苯扎氯铵、苯酚、甲酚、苯甲醇等)等。
在本发明中，与活性成分组合使用的术语“治疗有效量”是指二氢吡喃并嘧啶酮衍生物化合物，其互变异构体，其立体异构体及它们的混合物，或其药学上可接受的盐的量，所述量有效预防或治疗目标疾病。
除了作为活性成分的二氢吡喃并嘧啶酮衍生物化合物，其互变异构体，其立体异构体及它们的混合物，或其药学上可接受的盐以外，根据待预防或待治疗的疾病的种类，本发明的药物组合物可以进一步包含已使用并已知用于预防或治疗特定疾病的药物。例如，当用于预防或治疗癌症时，除了作为活性成分的二氢吡喃并嘧啶酮衍生物化合物，其互变异构体，其立体异构体及它们的混合物，或其药学上可接受的盐以外，组合物可以进一步含有已知的抗癌剂。此外，可以组合使用其他疗法以治疗疾病，包括化学疗法、放射疗法、激素疗法、骨髓移植、干细胞替代疗法、其他生物疗法、免疫疗法等，但不限于此。
可以包含在本发明的药物组合物中的抗癌剂的示例包括dna烷化剂，如氮芥、苯丁酸氮芥、苯丙氨酸、芥子气、环磷酰胺、异环磷酰胺、卡莫司汀(bcnu)、洛莫司汀(ccnu)、链脲佐菌素、白消安、噻替派、顺铂和卡铂；抗癌抗生素，如更生霉素(放线菌素d)、多柔比星(阿霉素)、柔红霉素、伊达比星、米托蒽醌、普卡霉素、丝裂霉素c和博来霉素；和植物生物碱，如长春新碱、长春碱、紫杉醇、多西他赛、依托泊苷、替尼泊苷、拓扑替康和伊多替康(iridotecan)等，但不限于此。
本发明的有益效果
由于本发明的新型二氢吡喃并嘧啶酮衍生物可以抑制端锚聚合酶1和/或端锚聚合酶2，因此其可以有效地用于治疗或预防由端锚聚合酶过表达或过度活化诱导的疾病。
具体实施方式
在下文中，将通过实施例更详细地描述本发明的构成和作用。然而，以下实施例仅用于说明目的，并且本发明的范围不受这些实施例的限制。
制备例1：作为中间体的4-(苄氧基)-2-甲基磺酰基)-7,8-二氢-5h-吡喃并[4,3-d]嘧啶(i-7)
基于以下反应方案，制备4-(苄氧基)-2-甲基磺酰基)-7,8-二氢-5h-吡喃并[4,3-d]嘧啶(i-7)作为中间体用于合成二氢吡喃并嘧啶酮衍生物。
1.1.4-氧代四氢-2h-吡喃-3-甲酸甲酯(i-1)
在冰浴中，向nah(1.97g，44.96mmol)在thf(100ml)中的混合物中滴加二氢-2h-吡喃-4(3h)-酮(3g，29.96mmol)。在搅拌20min后，加入碳酸二甲酯(3.8ml，44.96mmol)。将反应混合物在室温搅拌3h。在搅拌下，向乙醚/1nhcl的混合物中倒入反应混合物。将有机层分离，用na2so4干燥，减压浓缩，并将残余物通过柱色谱法纯化，以得到作为黄色液体的期望产物i-1(1.5g)。
1hnmr(300mhz,cdcl3)δ11.752(s,1h),4.267(m,2h),3.863(m,2h),3.783(m,2h),3.758(s,3h),2.393(m,2h),1.851(m,2h).
1.2.4-氨基-5,6-二氢-2h-吡喃-3-甲酸甲酯(i-2)
向化合物i-1(4.75g，30.03mmol)的meoh(60ml)溶液中加入nh4oac(6.95g，90.10mmol)。在室温搅拌3h后，将反应混合物减压浓缩，并将残余物溶解于dcm(300ml)中。用水(75ml)洗涤所得的混合物，用na2so4干燥，过滤，并减压浓缩，以得到作为白色固体的期望产物i-2(4.72g)。
1hnmr(300mhz,cdcl3)δ7.610(brs,1h),6.856(brs,1h),4.126(s,3h),3.647(t,j＝5.7hz,2h),3.538(s,3h),2.249(t,j＝5.7hz,2h)。
1.3.4-(3-苯甲酰基硫脲基)-5,6-二氢-2h-吡喃-3-甲酸甲酯(i-3)
在0℃，向化合物i-2(4.72g，30.03mmol)的thf(100ml)溶液中滴加异硫氰酸苯甲酰酯(4.84ml，36.04mmol)。在室温搅拌4h后，将反应混合物减压浓缩，并将残余物用meoh(15ml)稀释。过滤所得的混合物，以得到作为黄色固体的期望产物i-3(4.33g)。
lc-ms(esi,m/z)＝319.1(m-h+)。
1.4.2-硫代-2,3,7,8-四氢-1h-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5h)-酮(i-4)
将化合物i-3(8.74g，27.28mmol)和koh(3.06g，54.56mmol)在50％etoh溶液(136ml)中的混合物加热至85℃，同时搅拌1h。然后，将反应混合物冷却至室温，并通过滴加6nhcl将ph调节到6至7。将沉淀过滤并干燥，以得到作为白色固体的期望产物i-4(3.8g)。
lc-ms(esi,m/z)＝183.1(m-h+)。
1.5.2-(甲硫基)-7,8-二氢-3h-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5h)-酮(i-5)
在0℃，经10min向化合物i-4(3.8g，20.63mmol)和koh(1.27g，22.69mmol)在水中的混合物中滴加硫酸二甲酯(1.88ml，20.63mmol)。在室温搅拌30min后，过滤沉淀，以得到作为白色固体的期望产物i-5(3.75g)。
lc-ms(esi,m/z)＝197.1(m-h+)。
1.6.4-(苄氧基)-2-(甲硫基)-7,8-二氢-5h-吡喃并[4,3-d]嘧啶(i-6)
向化合物i-5(2.6g，13.17mmol)和k2co3(2.73g，19.76mmol)的dmf(306ml)溶液中滴加苄基溴(1.64ml，13.83mmol)。在室温搅拌1h后，将混合物用etoac稀释，用盐水洗涤三次，用na2so4干燥，减压浓缩，并将残余物通过柱色谱法纯化，以得到作为白色固体的期望产物i-6(1.72g)。
lc-ms(esi,m/z)＝289.0(m+h+)。
1.7.4-(苄氧基)-2-(甲基磺酰基)-7,8-二氢-5h-吡喃并[4,3-d]嘧啶(i-7)
在0℃，向化合物i-6(2.46g，8.531mmol)的dcm(28ml)溶液中分批加入mcpba(4.42g，25.59mmol)。将反应混合物在室温搅拌1h，减压浓缩。将残余物用etoac稀释，用饱和nahco3水溶液洗涤。将有机层用na2so4干燥并浓缩，以得到作为白色固体的期望产物i-7(2.24g)。
lc-ms(esi,m/z)＝321.1(m+h+)。
制备例2：1-(2,6-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪盐酸盐(i-8a)和1-(2,6-二氟-4-(2-(哌啶-1-基)乙氧基)苯基)哌嗪二盐酸盐(i-8b)
2.1.4-(2,6-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
将在dmf中的4-(2,6-二氟-4-羟基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2g，6.363mmol)、1-溴-2-甲氧基乙烷(0.72ml，7.635mmol)和k2co3(2.64g，19.09mmol)加热至60℃至65℃。在搅拌16h后，将混合物冷却至室温，用etoac稀释，并用水洗涤三次。将有机层用na2so4干燥并减压浓缩，以得到作为黄色固体的期望产物(2.39g)。
lc-ms(esi,m/z)＝373.2(m+h+)。
2.2-1.1-(2,6-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪盐酸盐
向在制备例2.1中获得的化合物(2.39g，6.363mmol)的dcm(2ml)溶液中加入4mhcl(8ml)。在室温搅拌2h后，将反应混合物减压浓缩，将残余物用乙醚过滤，以得到作为白色固体的期望产物i-8a(1.96g)。
lc-ms(esi,m/z)＝273.2(m+h+).
2.2-2.1-(2,6-二氟-4-(2-(哌啶-1-基)乙氧基)苯基)哌嗪二盐酸盐
在如制备例1.1所描述进行烷基化后，通过制备例2.2-1中的相同方法去除保护基来制备期望的产物。
lc-ms(esi,m/z)＝326.2(m+h+)。
制备例3：3,5-二氟-4-(哌嗪-1-基)苯酚盐酸盐
通过去除4-(2,6-二氟-4-羟基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯的保护基，按照制备例2.2-1中所描述的类似方法制备期望的产物。
lc-ms(esi,m/z)＝215.1(m+h+)。
制备例4：4-(2-(3,5-二氟-4-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙基)吗啉二盐酸盐(i-9a)、2-(3,5-二氟-4-(哌嗪-1-基)苯氧基)-n,n-二乙基乙胺二盐酸盐(i-9b)和1-(4-(2-(1h-咪唑-1-基)乙氧基)-2,6-二氟苯基)哌嗪盐酸盐(i-9c)
4.1.4-(4-(2-(苄氧基)乙氧基)-2,6-二氟苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
将4-(2,6-二氟-4-羟基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1g，3.181mmol)、苄基-2-溴乙基醚(851mg，3.818mmol)和k2co3(1.32g，9.544mmol)溶解于dmf(6.4ml)中。在70至80搅拌2h后，将混合物冷却至室温。然后，将混合物用乙酸乙酯稀释，然后用饱和nacl水溶液洗涤3次。将有机层用na2so4干燥，减压浓缩，以得到作为黄色液体的期望产物(1.427g)。
lc-ms(esi,m/z)＝449.2(m+h+)。
4.2.4-(2,6-二氟-4-(2-羟基乙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
向在制备例4.1中获得的化合物(1.427g，3.181mmol)的meoh(10.6ml)溶液中加入10％pd/c(428mg)。在氢气中搅拌2h后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤。将滤液减压浓缩，以得到作为杏黄色固体的期望产物(1.14g)。
lc-ms(esi,m/z)＝359.1(m+h+)。
4.3.4-(2,6-二氟-4-(2-(对甲苯磺酰氧基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
将在制备例4.2中获得的化合物(1.14g，3.181mmol)、4-甲基苯-1-磺酰氯(909.8mg，4.722mmol)、tea(504mg，7.953mmol)和dmap(97.2mg，0.057mmol)在dcm(10.6ml)中的混合物在室温搅拌。在3h后，将混合物用etoac稀释，用0.5nhcl和饱和nahco3水溶液洗涤。将有机层用na2so4干燥，减压浓缩并用乙醚过滤，以得到作为白色固体的期望产物(1.44g)。
lc-ms(esi,m/z)＝513.2(m+h+)。
4.4.4-(2,6-二氟-4-(2-吗啉基乙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
将在制备例4.3中获得的化合物(700mg，1.366mmol)、吗啉(0.14ml，1.639mmol)和cs2co3(1.11g，3.414mmol)在dmf(4.6ml)中的混合物加热至65至70持续17h。在冷却至室温后，将混合物用etoac稀释，并用饱和盐水洗涤三次。将有机层用na2so4干燥并减压浓缩，以得到作为黄色液体的期望产物(583mg)。
lc-ms(esi,m/z)＝428.2(m+h+)。
4.5-1.4-(2-(3,5-二氟-4-(哌嗪-1-基)苯氧基)乙基)吗啉二盐酸盐(i-9a)
通过去除在制备例4.4中获得的化合物(583mg，1.366mmol)的保护基，按照在制备例2.2-1中所描述的类似方法制备作为白色固体的期望产物(518mg)。
lc-ms(esi,m/z)＝328.4(m+h+)。
4.5-2.2-(3,5-二氟-4-(哌嗪-1-基)苯氧基)-n,n-二乙基乙胺二盐酸盐(i-9b)
通过以下反应顺序制备作为白色固体的化合物i-9b(377mg)：在制备例4.4中使用的胺化反应，和在制备例2.2-1中使用的boc-基团脱保护。
lc-ms(esi,m/z)＝314.2(m+h+)。
4.5-3.1-(4-(2-(1h-咪唑-1-基)乙氧基)-2,6-二氟苯基)哌嗪盐酸盐(i-9c)
通过以下反应顺序制备作为白色固体的化合物i-9c(530mg)：在制备例4.4中使用的胺化反应，和在制备例2.2-1中使用的boc-基团脱保护。
lc-ms(esi,m/z)＝309.1(m+h+)。
制备例5：1-(4-(2-(苄氧基)乙氧基)-2,6-二氟苯基)哌嗪盐酸盐
通过去除在制备例4.1中获得的化合物(1.71g，3.818mmol)的保护基，按照在制备例2.2-1中所描述的类似方法制备作为白色固体的期望产物(1.34g)。
lc-ms(esi,m/z)＝305.3(m+h+)。
制备例6：2-(3,5-二氟-4-(哌嗪-1-基)苯氧基)-1-(哌啶-1-基)乙酮盐酸盐
6.1.4-(2,6-二氟-4-(2-氧代-2-(哌啶-1-基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
在0，经5min向哌啶(452.4mg，5.313mmol)的thf(2.5ml)溶液中滴加2-氯乙酰氯(300mg，2.656mmol)的thf(2.5ml)溶液。在室温搅拌15h后，将混合物用etoac稀释，并用水洗涤三次。将有机层用na2so4干燥并减压浓缩，以得到作为黄色液体的期望产物(507mg)。将所述黄色液体、2-氯-1-(哌啶-1-基)乙酮(432mg，2.67mmol)、4-(2,6-二氟-4-羟基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(700mg，2.227mmol)和k2co3(769mg，5.567mmol)在dmf(7.4ml)中的混合物加热至60至65持续2h。将混合物冷却至室温，用etoac稀释，并用水洗涤三次。将有机层用na2so4干燥，减压浓缩。将残余物通过柱色谱法纯化，以得到作为白色固体的期望产物(823mg)。
lc-ms(esi,m/z)＝440.2(m+h+)。
6.2.2-(3,5-二氟-4-(哌嗪-1-基)苯氧基)-1-(哌啶-1-基)乙酮盐酸盐
通过去除在制备例6.1中获得的化合物(800mg，1.820mmol)的保护基，按照在制备例2.2-1中所描述的类似方法制备期望产物(619mg)。
lc-ms(esi,m/z)＝340.1(m+h+).
制备例7：4-(2,6-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌啶-4-醇盐酸盐
7.1.4-(2,6-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯
在-78，经10min向2-溴-1,3-二氟-5-(2-甲氧基乙氧基)苯(600mg，2.246mmol)的乙醚(20ml)溶液中滴加2.5m正丁基锂的己烷溶液(0.98ml，2.47mmol)。在30min后，在相同温度，经20分钟滴加boc-哌啶酮(537mg，2.69mmol)的乙醚(4ml)溶液。在搅拌下，将反应混合物缓慢升温至室温持续1h。在反应完成后，加入水(15ml)，然后用乙醚萃取三次。将有机层用na2so4干燥并减压浓缩，以得到作为黄色液体的期望产物(1.01g)。
lc-ms(esi,m/z)＝388.2(m+h+)。
7.2.4-(2,6-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌啶-4-醇盐酸盐
使用在制备例7.1中获得的化合物(1.01g)，按照在制备例2.2-1中所描述的类似方法制备作为白色固体的期望产物(370mg)。
lc-ms(esi,m/z)＝288.1(m+h+)。
制备例8：4-(2-甲基-2h-四唑-5-基)哌啶盐酸盐
8.1.4-(1h-四唑-5-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-氰基哌啶-1-甲酸叔丁酯(1g，4.75mmol)、叠氮化钠(923mg，14.26mmol)、nh4cl(763mg，14.26mmol)在dmf(9.4ml)中的混合物在140搅拌20h。在反应完成后，将混合物冷却，并用etoac(200ml)稀释，然后用0.5nhcl和水洗涤。将有机层用na2so4干燥，减压浓缩，将残余物用乙醚稀释并过滤，以得到作为白色固体的期望产物(764mg)。
lc-ms(esi,m/z)＝254.1(m+h+)。
8.2.4-(2-甲基-2h-四唑-5-基)哌啶盐酸盐
按照在制备例4.4中所描述的类似方法，将在制备例8.1中获得的化合物(1g，3.95mmol)与mei反应。将混合物用etoac稀释，并用水洗涤三次。将有机层用na2so4干燥，减压浓缩。通过在制备例2.2-1中所描述的类似方法去除脱保护基团，将残余物通过柱色谱法纯化，以得到作为白色固体的期望产物(518mg)。
lc-ms(esi,m/z)＝168.1(m+h+)。
制备例9：1-(3,5-二氟-4-(哌嗪-1-基)苄基)-4-甲基哌嗪二盐酸盐
9.1.4-(2,6-二氟-4-甲酰基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
将3,4,5-三氟苯甲醛(2g，12.493mmol)、boc-哌嗪(2.33g，12.493mmol)和k2co3(3.45g，24.986mmol)在dmf(4ml)中的混合物在110至120搅拌18h。在冷却至室温后，将混合物用etoac(250ml)稀释，并用水洗涤三次。将有机层用na2so4干燥，减压浓缩，并将残余物通过柱色谱法纯化，以得到作为黄色固体的期望产物(2.7g)。
lc-ms(esi,m/z)＝327.1(m+h+)。
9.2.4-(2,6-二氟-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯
将在制备例9.1中获得的化合物(700mg，2.145mmol)、甲基哌嗪(0.48ml，4.29mmol)和ti(i-pro)4(1.27ml，4.29mmol)在meoh(6ml)中的混合物在室温搅拌17h，然后冷却至0℃。然后，在0℃将nacnbh3(270mg，4.29mmol)加入到反应混合物中。在室温搅拌5h后，将混合物减压浓缩，并使用dcm将残余物通过硅藻土垫过滤。将所得的混合物用dcm(200ml)稀释，用水洗涤三次，用na2so4干燥并减压浓缩。将残余物通过柱色谱法纯化，以得到作为无色液体的期望产物(435mg)。
lc-ms(esi,m/z)＝411.3(m+h+)。
9.3.1-(3,5-二氟-4-(哌嗪-1-基)苄基)-4-甲基哌嗪二盐酸盐
通过在制备例9.2中获得的化合物(435mg，1.060mmol)的反应，按照在制备例2.2-1中所描述的类似方法制备作为白色固体的期望产物(428mg)。
lc-ms(esi,m/z)＝311.1(m+h+)。
制备例10：1-(4-(1-(苄氧基)乙基)-2,6-二氟苯基)哌嗪盐酸盐
10.1.4-(2,6-二氟-4-(1-羟乙基)苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
在-78℃，向在制备例9.1中获得的化合物(600mg，1.839mmol)的thf(5ml)溶液中滴加1.6mmeli的乙醚(1.26ml，2.023mmol)溶液。将反应混合物缓慢升温至室温。在搅拌2h后，将混合物减压浓缩，将残余物用etoac(40ml)稀释，用水洗涤。将有机层用na2so4干燥，减压浓缩，并将残余物通过柱色谱法纯化，以得到作为黄色固体的期望产物(503mg)。
lc-ms(esi,m/z)＝342.2(m+h+).
10.2.4-(4-(1-(苄氧基)乙基)-2,6-二氟苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
在0，向在制备例10.1中获得的化合物(300mg，0.876mmol)的thf(3ml)溶液中加入nah(63mg，1.314mmol)。在搅拌10min后，将苄基溴(0.13ml，1.051mmol)的thf(0.5ml)溶液滴加至反应混合物中。将混合物在室温搅拌6h，用etoac稀释并用水洗涤。将有机层用na2so4干燥，减压浓缩，并将残余物通过柱色谱法纯化，以得到作为无色液体的期望产物(314mg)。
lc-ms(esi,m/z)＝433.2(m+h+)。
10.3.1-(4-(1-(苄氧基)乙基)-2,6-二氟苯基)哌嗪盐酸盐
通过在制备例10.2中获得的化合物(314mg，0.726mmol)的反应，按照在制备例2.2-1中所描述的类似方法制备作为杏黄色固体的期望产物(227mg)。
lc-ms(esi,m/z)＝333.2(m+h+)。
实施例1：2-(4-(2,6-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-7,8-二氢-3h-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5h)-酮
步骤1：向微波反应瓶中加入化合物i-7(200mg，0.624mmol)、化合物i-8a(231mg，0.749mmol)、etoh(1ml)、thf(1ml)和dipea(0.27ml，1.561mmol)。将反应混合物在微波加热条件下在120加热3h。将混合物用etoac稀释，用水洗涤，用na2so4干燥，减压浓缩，并将残余物通过柱色谱法纯化，以得到作为黄色液体的期望产物(70mg)。
lc-ms(esi,m/z)＝513.2(m+h+)。
步骤2：向在步骤1中获得的化合物(80mg，0.351mmol)的meoh(0.6ml)和dcm(0.6ml)溶液中加入10％pd/c(90mg)。将反应混合物在氢气中搅拌1h。在反应完成后，将混合物通过硅藻土垫过滤。将滤液减压浓缩，将残余物用ipa稀释并过滤，以得到作为白色固体的期望产物(88mg)。
lc-ms(esi,m/z)＝423.1(m+h+)。
实施例2：2-(4-(2,6-二氟-4-(2-吗啉基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-7,8-二氢-3h-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5h)-酮
以在实施例1中所描述的相同方式，将在制备例4.5中获得的化合物(i-9a)与化合物i-7反应，以得到期望产物。
lc-ms(esi,m/z)＝478.2(m+h+)。
实施例3：2-(4-(2,6-二氟-4-(2-(哌啶-1-基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-7,8-二氢-3h-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5h)-酮
以在实施例1中所描述的相同方式，将在制备例2.2-2中获得的化合物(i-8b)与化合物i-7反应，以得到期望产物。
lc-ms(esi,m/z)＝476.2(m+h+)。
实施例4：2-(4-(2,6-二氟-4-(2-羟基乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-7,8-二氢-3h-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5h)-酮
以在实施例1中所描述的相同方式，将在制备例5中获得的化合物与化合物i-7反应，以得到期望产物。
lc-ms(esi,m/z)＝409.1(m+h+)。
实施例5：2-(4-(4-(2,3-二羟基丙氧基)-2,6-二氟苯基)哌嗪-1-基)-7,8-二氢-3h-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5h)-酮
通过以下反应顺序制备期望产物：通过在实施例1步骤1中所描述的方法将在制备例1.7中获得的化合物i-7与在制备例3中获得的化合物反应，用(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)甲基4-甲基苯磺酸酯进行烷基化，使用tfa进行缩丙酮(acetonide)脱保护，和在实施例1步骤2中使用的脱苄基化。
lc-ms(esi,m/z)＝439.1(m+h+)。
实施例6：2-(4-(2,6-二氟-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)哌嗪-1-基)-7,8-二氢-3h-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5h)-酮
以在实施例1中所描述的相同方式，将在制备例9.3中获得的化合物与化合物i-7反应，以得到期望产物。
lc-ms(esi,m/z)＝461.2(m+h+)。
实施例7：2-(4-(2,6-二氟-4-(1-羟乙基)苯基)哌嗪-1-基)-7,8-二氢-3h-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5h)-酮
以在实施例1中所描述的相同方式，将在制备例10.3中获得的化合物与化合物i-7反应，以得到期望产物。
lc-ms(esi,m/z)＝393.1(m+h+)。
实施例8：2-(4-(2,6-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-4-羟基哌啶-1-基)-7,8-二氢-3h-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5h)-酮
以在实施例1步骤1中所描述的相同方式，将在制备例7.2中获得的化合物与化合物i-7反应，以得到期望产物，并且获得作为副产物的4-(苄氧基)-2-(4-(2,6-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2h)-基)-7,8-二氢-5h-吡喃并[4,3-d]嘧啶。按照在实施例1步骤2中所描述的类似方法制备期望产物。
lc-ms(esi,m/z)＝438.2(m+h+)。
实施例9：2-(4-(2-甲基-2h-四唑-5-基)哌啶-1-基)-7,8-二氢-3h-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5h)-酮
以在实施例1中所描述的相同方式，将在制备例8.2中获得的化合物与化合物i-7反应，以得到期望产物。
lc-ms(esi,m/z)＝318.1(m+h+)。
实施例10：2-(4-(2,6-二氟-4-(2-氧代-2-(哌啶-1-基)乙氧基)苯基)哌嗪-1-基)-7,8-二氢-3h-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5h)-酮
以在实施例1中所描述的相同方式，将在制备例6.2中获得的化合物与化合物i-7反应，以得到期望产物。
lc-ms(esi,m/z)＝490.2(m+h+)。
实施例11：2-(4-(2,6-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)哌啶-1-基)-7,8-二氢-3h-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5h)-酮
以在实施例1步骤2中所描述的相同方式，将在实施例8中获得的作为副产物的4-(苄氧基)-2-(4-(2,6-二氟-4-(2-甲氧基乙氧基)苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2h)-基)-7,8-二氢-5h-吡喃并[4,3-d]嘧啶与化合物i-7反应，以得到期望产物。
lc-ms(esi,m/z)＝422.1(m+h+)。
实施例12：2-(4-(4-(2-(二乙基氨基)乙氧基)-2,6-二氟苯基)哌嗪-1-基)-7,8-二氢-3h-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5h)-酮
以在实施例1中所描述的相同方式，将在制备例4.5-2中获得的化合物与化合物i-7反应，以得到期望产物。
lc-ms(esi,m/z)＝464.3(m+h+)。
实施例13：2-(4-(4-(2-(1h-咪唑-1-基)乙氧基)-2,6-二氟苯基)哌嗪-1-基)-7,8-二氢-3h-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5h)-酮
以在实施例1中所描述的相同方式，将在制备例4.5-3中获得的化合物与化合物i-7反应，以得到期望产物。
lc-ms(esi,m/z)＝459.1(m+h+)。
实施例14：端锚聚合酶1的活性的分析
使用trevigen试剂盒(目录号4700-096-k)分析根据实施例1至13合成的新型化合物对端锚聚合酶1的活性。使用聚par组蛋白包被的96孔板、抗par单克隆抗体和山羊抗小鼠igg-hrp以通过elisa方法测量吸光度。具体地，通过加入水将20xi-par测试缓冲液稀释至1x，并将50μl稀释的缓冲液加入至96孔板的每个孔中，然后在室温反应30min。然后，从每个孔中彻底去除上清液，并向每个孔中加入10μl1xi-par测试缓冲液和15μl测试底物，以及1μl50x待测试的抑制剂溶液，所述抑制剂为在实施例1至13中获得的化合物。将10毫单位/μl端锚聚合酶1用1xi-par测试缓冲液稀释50倍，并将25μl稀释的酶加入至每个孔中，并在室温搅拌反应30min。将不含任何本发明的化合物者用作阳性对照，并且将含有相同体积的1xi-par测试缓冲液代替端锚聚合酶1者用作阴性对照。在反应完成后，将200μlpbsx(通过将0.1％氚x-100加入至pbs中制备)加入并去除，并将该洗涤过程重复两次。使用pbs以相同方式重复洗涤两次。将5x抗体稀释液用蒸馏水稀释至1x浓度，向每个孔中加入50μl稀释至1/2000的山羊抗小鼠igg-hrp，并在室温搅拌反应30min。分别使用pbsx和pbs进行两次洗涤。向板的每个孔中加入50μltacs-宝蓝(tacs-sapphire)后，将板避光反应10min至15min，反应溶液的颜色变为蓝色。为了终止反应，加入50μl的0.2nhcl使溶液变黄。最后，在450nm测量所得溶液的吸光度。
[表1]