一种脯氨酸内切酶的制备方法与流程

文档序号:11899157阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种脯氨酸内切酶的制备方法,其特征在于,步骤包括黑曲霉种液制备、以脯氨酸为诱导表达底物培养发酵、发酵液提取处理。

2.根据权利要求1所述的脯氨酸内切酶的制备方法,其特征在于,所述种液制备具体步骤为:将黑曲霉菌种于培养基活化后,取菌种接入BMGY液体培养基中,28-35℃、200-250r/min摇瓶培养12-18h,至菌体OD600nm为2-3,得到种液。

3.根据权利要求2所述的脯氨酸内切酶的制备方法,其特征在于,所述培养发酵具体步骤为:将制得的种液离心收集菌体,接入黑曲霉高密度发酵培养基中,28-35℃,200-250r/min摇瓶培养发酵,每隔16-48h补加浓度为0.1-0.5mg/L的脯氨酸,发酵时长96-200h。

4.根据权利要求2所述的脯氨酸内切酶的制备方法,其特征在于,所述培养发酵具体步骤为:将制得的种液,接入黑曲霉高密度发酵培养基中,28-35℃、200-800r/min发酵罐培养发酵,根据发酵罐pH和溶氧的状态调整补加脯氨酸的流速,发酵时长96-200h。

5.根据权利要求3或4所述的脯氨酸内切酶的制备方法,其特征在于,所述发酵液提取处理步骤为:发酵液经过滤、浓缩、调配后,精滤或者干燥得到液体脯氨酸内切酶或固体脯氨酸内切酶。

6.根据权利要求3所述的脯氨酸内切酶的制备方法,其特征在于,所述黑曲霉高密度发酵培养基由下述重量百分比组分制成:蔗糖5-15%,玉米粉5-6%,豆饼粉1.5-2.5%,葡萄糖3-4%,酵母粉0.4-0.8%,玉米浆0.1-0.5%,硫酸铵0.05-0.4%,磷酸氢二钾0.05-0.4%,磷酸二氢钾0.05-0.4%,柠檬酸钠0.1-0.5%,消泡剂0.1-1mL,pH值5.0-7.0,121℃灭菌20min。

7.根据权利要求3所述的脯氨酸内切酶的制备方法,其特征在于,所述离心收集菌体采用的参数为离心速率为5000-10000r/min,离心5-10min。

8.根据权利要求3所述的脯氨酸内切酶的制备方法,其特征在于,所述摇瓶培养发酵终止时,以菌体湿重计菌种浓度为5-20g/L。

9.根据权利要求4所述的脯氨酸内切酶的制备方法,其特征在于,所述pH维持在5.0-7.0,溶氧维持在35-50%。

10.根据权利要求4所述的脯氨酸内切酶的制备方法,其特征在于,所述发酵罐培养发酵终止时,以菌体湿重计菌种浓度为100-300g/L。

当前第2页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1