1.一种脯氨酸内切酶的制备方法,其特征在于,步骤包括黑曲霉种液制备、以脯氨酸为诱导表达底物培养发酵、发酵液提取处理。
2.根据权利要求1所述的脯氨酸内切酶的制备方法,其特征在于,所述种液制备具体步骤为:将黑曲霉菌种于培养基活化后,取菌种接入BMGY液体培养基中,28-35℃、200-250r/min摇瓶培养12-18h,至菌体OD600nm为2-3,得到种液。
3.根据权利要求2所述的脯氨酸内切酶的制备方法,其特征在于,所述培养发酵具体步骤为:将制得的种液离心收集菌体,接入黑曲霉高密度发酵培养基中,28-35℃,200-250r/min摇瓶培养发酵,每隔16-48h补加浓度为0.1-0.5mg/L的脯氨酸,发酵时长96-200h。
4.根据权利要求2所述的脯氨酸内切酶的制备方法,其特征在于,所述培养发酵具体步骤为:将制得的种液,接入黑曲霉高密度发酵培养基中,28-35℃、200-800r/min发酵罐培养发酵,根据发酵罐pH和溶氧的状态调整补加脯氨酸的流速,发酵时长96-200h。
5.根据权利要求3或4所述的脯氨酸内切酶的制备方法,其特征在于,所述发酵液提取处理步骤为:发酵液经过滤、浓缩、调配后,精滤或者干燥得到液体脯氨酸内切酶或固体脯氨酸内切酶。
6.根据权利要求3所述的脯氨酸内切酶的制备方法,其特征在于,所述黑曲霉高密度发酵培养基由下述重量百分比组分制成:蔗糖5-15%,玉米粉5-6%,豆饼粉1.5-2.5%,葡萄糖3-4%,酵母粉0.4-0.8%,玉米浆0.1-0.5%,硫酸铵0.05-0.4%,磷酸氢二钾0.05-0.4%,磷酸二氢钾0.05-0.4%,柠檬酸钠0.1-0.5%,消泡剂0.1-1mL,pH值5.0-7.0,121℃灭菌20min。
7.根据权利要求3所述的脯氨酸内切酶的制备方法,其特征在于,所述离心收集菌体采用的参数为离心速率为5000-10000r/min,离心5-10min。
8.根据权利要求3所述的脯氨酸内切酶的制备方法,其特征在于,所述摇瓶培养发酵终止时,以菌体湿重计菌种浓度为5-20g/L。
9.根据权利要求4所述的脯氨酸内切酶的制备方法,其特征在于,所述pH维持在5.0-7.0,溶氧维持在35-50%。
10.根据权利要求4所述的脯氨酸内切酶的制备方法,其特征在于,所述发酵罐培养发酵终止时,以菌体湿重计菌种浓度为100-300g/L。